CC BY
72
HayKOBMM BiCHMK ^tBiBCtKoro Ha^OHa^tHoro yHiBepcMTeTy
BeTepMHapHoi Megw^HM Ta öioTexHO^oriw iMeHi C.3. I^M^Koro
Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies
ISSN 2518-7554 print doi: 10.32718/nvlvet9220
ISSN 2518-1327 online http://nvlvet.com.ua
UDC 579.67
PCR-test system specific identification Parachlamydia acanthamoebae
V.K. Zezekalo1, S.B. Peredera1, T.V. Buslik2, K.F. Pochemyaev2
1Poltava State Agrarian Academy, Poltava, Ukraine
2Institute of pig breeding and agroindustrial production NAAS, Poltava, Ukraine
Article info
Received 18.10.2018 Received in revised form 21.11.2018 Accepted 22.11.2018
Poltava State Agrarian Academy, Skovorody Str., 1/3, Poltava, 36003, Ukraine. Tel.: +38-095-645-56-26 E-mail: [email protected]
Institute of pig breeding and agroindustrial production National Academy of Agricultural Science of Ukraine, Shvedska Mohyla 1, 36013, Poltava, Ukraine.
Zezekalo, V.K., Peredera, S.B., Buslik, T.V., & Pochernyaev, K.F. (2018). PCR-test system specific identification Parachlamydia acanthamoebae. Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies, 20(92), 101-104. doi: 10.32718/nvlvet9220
Chlamydia-like bacteria Parachlamydia acanthamoebae belongs to the phylum Chlamydiae, class Chlamydiia, order Chlamydiales, family Parahlamydiaceae, genus Parachlamydia. The following terms were introduced to designate Chlamydiales bacteria that are not members of the Chlamydia genus: Chla-mydia-related bacteria - CRB, Chlamydia-like bacteria and Chlamydia-like organisms - CLOs. Parachla-mydia acanthamoebae is associated with respiratory diseases in humans and ruminants, as well as diseases of the reproductive organs leading to abortions, or the birth of weak or non-viable offspring. Unfortunately, there are no such test systems in the arsenal of humane and veterinary medicine of Ukraine, which could identify and differentiate Chlamydia-related organisms, Parachlamydia acanthamoebae in particular. In this regard, PCR test system has been developed for the identification and species differentiation of Parach-lamydia acanthamoebae, the bacteria of the Parachlamydiaceae family, which is the causative agent of chlamydiosis in ruminants and humans. Conducted bioinformatics studies revealed species-specific regions of the Parachlamydia acanthamoebae genome, which were used to develop the nucleotide structure of oligonucleotide primers, which allow to amplify the DNA fragment of the 16S rRNA gene specific for the bacterium Parachlamydia acanthamoebae, the size of 88 base pairs. Verification of the analytical specificity of the PCR test system was confirmed by amplifying 9 control DNA of members of the order Chlamydiales: Waddlia chrondophila, Clavochlamydia salmonicola, Piscichlamydia salmonis, Chlamydia avium, Chla-mydia pecorum, Chlamydia abortus, Chlamydia psittaci, Chlamydia suis, Chlamydia caviae. The demand for such test systems is due not only to their use in scientific research to isolate and study individual strains, to conduct epizootic monitoring, but also for the purpose of effective treatment, since distinct species have diverse sensitivity or even insensitivity to different types of antibiotics and vary in the source of infection and mode of transmission.
Key words: Parachlamydiaceae, Parachlamydia, Chlamydia, amplification, primers, Chlamydia-like bacteria, chlamydia, zoonoses.
ПЛР-тест-система видовоУ щентифжаци Parachlamydia acanthamoebae
В.К. Зезекало1, С.Б. Передера1, Т.В. Буслик2, К.Ф. Почерняев2
1Полтавська державна аграрна академiя, м. Полтава, Украгна
21нститут свинарства i агропромислового виробництва НААН, м. Полтава, Украта
Хламiдienодiбний оргатзм Parachlamydia acanthamoebae належить до типу Chlamydiae, класу Chlamydiia, порядку Chlamydiales, родини Parahlamydiaceae, роду Parachlamydia. Термти: хламiдieсnорiдненi бактери (Chlamydia-related bacteria - CRBs), хлами дi£-nодiбнi бактери (Chlamydia-like bacteria,) та хламiдienодiбнi оргашзми (Chlamydia-like organisms - CLOs) ввели для позначення бактерш, що входять до порядку Chlamydiales, але не е представниками роду Chlamydia. Parachlamydia acanthamoebae пов 'язують з рестраторними захворюваннями людини i жуйних, а також хворобами репродуктивних оргатв, що призводять до абортiв або ж до народження кволого чи нежиттездатного потомства. На жаль, в арсеналi гуманноi та ветеринарног медицини Украгни не кнуе таких тест-систем, як1 б могли виявити i диференцтвати хламiдiе-сnорiдненi оргашзми, зокрема Parachlamydia acanthamoebae. У зв 'язку з цим, було розроблено ПЛР-тест-систему для iдентифiкацii та видовог диференщаци Parachlamydia acanthamoebae, бактери родини Parachlamydiaceae, збудника хламiдiозiв жуйних та людини. Бютформацшт до^дження виявили видосnецифiчнi дтянки геному Parachlamydia acanthamoebae, як1 було використано для розроблення нуклеотидног структури
олконуклеотидних npaÜMepie, що дозволяють амтлiфiкуваmu фрагмент ДНК гену 16S рРНК, специфiчний для бактерп Parachla-mydia acanthamoebae, po3MipoM 88 пар ^Kneomudie. nepeeipKa аналтичног специфiчностi ПЛР-тест-системи тдтверджена шляхом амnлiфiкацii контрольног ДНК 9 eudie бактерш, що входять до порядку Chlamydiales: Waddlia chrondophila, Clavochlamydia salmonicola, Piscichlamydia salmonis, Chlamydia avium, Chlamydia pecorum, Chlamydia abortus, Chlamydia psittaci, Chlamydia suis, Chlamydia caviae. Нeoбхiднiсmь таких тест-систем обумовлена не ттьки можливктю гх використання в наукових до^дженнях з метою видшення i вивчення окремих шmамiв, проведення етзоотичного монторингу, а й з метою ефективного л^вання, оскльки рiзнi види мають рiзну чутливкть або навШь нечутлив^ть до рiзнuх вuдiв антибютимв та рiзняmься джере-лом тфекцп i шляхами пeрeдачi.
Ключовi слова: Parachlamydiaceae, Parachlamydia, Chlamydia, амтлiфiкацiя, праймери, хламiдieпoдiбнi бактерп, хламiдioзu, зо-онози
Вступ
Хламщози - група шфекцшних захворювань, що завдае значних економ1чних збиттав вичизняному тваринництву. Збитки полягають у недоотриманш приплоду, високш летальносп серед новонароджених, а також втрап репродуктивно! здатносп племшних тварин у неблагополучних щодо ще! шфекцп госпо-дарствах. Також важливою проблемою е зооантропо-нозний характер хламщозу (Ksonz and Yukhno, 2009; Ksonz, 2011).
Серед вид1в порядку Chlamydiales найбшьш детально охарактеризована родина Chlamydiaceae, до яко! належить единий рщ - Chlamydia. Систематика роду до останнього часу складалася з 9 добре вщомих, чггко визначених таксоном1чно вид1в: C. trachomatis, C. muridarum, C. suis, C. psittaci, C. abortus, C. caviae, C. felis, C. pneumoniae i C. pecorum (Sachse et al., 2015). Сьогодш до роду приедналися два нових види Chlamydia: C. avium, C. gallinacea та два новi кандидата: Ca.C. ibidis (Vorimore et al., 2013; Sachse et al., 2014), видшений вщ iбiсiв Threskiornis aethiopicus та Ca.C. sanzinia, видшений вщ змiй, що утримувались в серпентарiях (Taylor-Brown et al., 2016).
Крiм ще! родини, до порядку Chlamydiales, входять таш родини, як Ca. Clavochlamydiaceae, Waddli-aceae, Parachlamydiaceae, Criblamydiaceae, Simkania-ceae, Ca. Rhabdochlamydiaceae, Ca. Piscichlamydia, Ca. Parilichlamydiaceae (Taylor-Brown et al., 2015; Taylor-Brown and Polkinghorne, 2017). Для позначення бактерш, що входять до порядку Chlamydiales, але не е представниками роду Chlamydia ввели так термши: хламщеспорщнеш бактери (Chlamydia-related bacteria - CRBs) хламiдiеподiбнi бактери, Chlamydia-like bacteria), та хламiдiеподiбнi органiзми (Chlamydia-like organisms - CLOs) (Horn, 2011) Також для позначення цього ж поняття iнодi використову-ють термiн "еколопчш хламщ!'", або "хламщ! до-вкшля" (environmental chlamydiae), на противагу "па-тогенним бактерiям", тобто таким, що викликають захворювання (Taylor-Brown et al., 2015). Слад зазна-чити, що термши: "патогенш хламщ!" для Chlamydia i "екологiчнi хламщ!'" для решти хламiдiй не зовсiм вщповщають дщсносп (Horn, 2008). Деякi з хламщш, якi вважалися "екологiчними хламiдiями" викликають хламщози тварин i людини (Ammerdorffer et al., 2017). М. Barkallah et al. (Barkallah et al., 2014) знайш-ли Waddlia chondrophila серед дослщженого абортивного патматерiалу вiд велико! рогато! худоби в Афри-цi, а (Wheelhouse, et al., 2014) пов'язують Waddlia chondrophila з абортами у овець. Pawlikowska-Warych
та Deptula W. (Pawlikowska-Warych and Deptula, 2015) видiляють 11 видiв хламiдieподiбних органИзмИв, що e причиною захворювання бшьш нИж з 90 видiв прИсно-водних i морських риб у всьому свт (Taylor-Brown et al., 2015), включаючи як дикИ види, так i Ti, що e об'ектом аквакультури.
Parachlamydia acanthamoebae належить до типу Chlamydiae, класу Chlamydiia, порядку Chlamydiales, родини Parahlamydiaceae, роду Parachlamydia. Parachlamydia acanthamoebae, викликае ресшраторш захворювання людини i жуйних, а також хвороби репродуктивних органИв, що призводять до втрати приплоду або ж народження кволого чи нежиттездат-ного потомства (Baud et al., 2007; 2014). Parachlamydia acanthamoebae була виявлена у бшьш нИж 20% випадкИв дослiджень, пов'язаних з абортами велико! рогато! худоби, за Иншими даними - у бшьш нИж 60% випадк1в (Borel et al., 2007; Wheelhouse et al., 2012). Також було щдтверджено нaявнiсть Parachlamydia acanthamoebae у виглядi змiшaних iнфекцiй з бактерИями родини Chlamydiaceae або з шшими хламще-спорИдненими оргaнiзмaми у жуйних. Parachlamydia acanthamoebae були виявленi в питнш водi, що вказуе на можливе джерело iнфекцi! i спосИб передaчi цього патогенна як тваринам, так i людинi (Maurin et al., 2002; Blumer et al., 2011; Wheelhouse et al., 2012).
На жаль, в aрсенaлi гуманно! i ветеринарно! меди-цини Укра!ни не iснуe таких тест-систем, якИ б могли виявити i диференцИювати хлaмiдie-спорiдненi оргаш-зми, зокрема Parachlamydia acanthamoebae. НеобхИд-нiсть таких тест-систем обумовлена не тИльки можли-вИстю !х використання в наукових дослИдженнях з метою видiлення i вивчення окремих штaмiв, проведення етзоотичного мониторингу, а й з метою ефективного лИкування, оскшьки рИзнИ види мають рИзну чутливИсть або навить нечутливИсть до рИзних видИв антибютишв (Maurin et al., 2002) та рИзняться джере-лом збудника шфекцп i шляхами його передачи. Метою нашо! роботи було розробити ПЛР-тест-систему для щдикацд i видово! диференщацп Parachlamydia acanthamoebae.
Матерiал i методи дослiджень
ДослИдження проводились в умовах лабораторий здоров'я тварин та генетики 1нституту свинарства та АПВ НААН, що сертифИкована для проведення гене-тичного аналИзу на рИвнИ ДНК (СвИдоцтво про атеста-цИю № 168-15 вИд 30.11.2015 р.).
АмплИфИкацИю ДНК за допомогою ПЛР проводили з використанням рекомбИнантно! Taq DNA Polymerase
(Thermo Fisher Scientific), вщповвдно до рекомендацш виробника. Олпонуклеотидш праймери прямий -PCHAF:CAAGGTAGCCCTATCGGAAG, та зворотний - PCHAR:CTTGCCCAACCTCGGAAGAT було синте-зовано (Metabion international AG, ФРН). Зразки конт-рольних ДНК Parachlamydia acanthamoebae штами -"Berg17" та "Bn9" люб'язно надаш Dr. Michel Rolf, (Central Military Hospital Koblenz, Germany, Dept. Pathology), ДНК Parachlamydia acanthamoebae штам Hall одержат ввд Prof. Gilbert GREUB (l'Institut de Microbiologie Médecin chef des laboratoires de microbiologie diagnostique Institut de microbiologie de l'Université de Lausanne), зразки ДНК Waddlia chrondophila, Chlamydia avium, Chlamydia pecorum, Chlamydia abortus, Chlamydia psittaci, Chlamydia suis, Chlamydia caviae були отримат вщ Dr. Christiane Schnee (Institut für molekulare Pathogenese, Jena, Germany), 2 види хламiдieподiбних бактерш: Clavochlamydia salmonicola та Piscichlamydia salmonis, отримано вщ PD, Dr med vet, Dipl. ECVP, Heike Schmidt-Posthaus, (Centre for Fish and Wildlife Health Bern). Амплiфiка-цш проводили на програмованому термостап ТЕР-ЦИК-2 (ДНК-Технологии, РФ) за умов синтезу 70 °С 60 сек.
Продукти ПЛР роздали за допомогою 2% агаро-зного гель-електрофорезу у 1х Трис-боратному елект-родному буферi (TBE) упродовж 2 год за сили струму 50 мА в електрофоретичнш камерi (Cleaver Scientific Ltd. UK). Як маркер молекулярно! маси використову-вали ДНК плазмщи pUC19, гiдролiзованоï ендонукле-азою Msp I. Пiсля закiнчення електрофорезу гель фарбували розчином бромистого етидш (10 мг/см3) та документували результати електрофорезу цифровою камерою на трансшюмшаторг
Результати дослвджень
решкоджав максимальному викорiненню хламщозу сiльськогосподарських тварин в Украшг
Обговорення
Останшм часом почастiшало виявлення нових ви-дiв патогенних мiкроорганiзмiв, зросла i шльшсть iнфекцiйних захворювань загалом. Причинами цього, з одного боку, були: поява тварин-компаньошв, штен-сифшашя сiльськогосподарського виробництва, збь льшення площi орних земель, популяризация широкого використання антибютишв, збiльшення густоти населення, з шшого ж - розвиток дiагностичних методик i розширення епiдемiологiчного нагляду та монiторингом за етзоотичною ситуацieю.
Стосовно хламiдie-спорiднених органiзмiв, якi не-щодавно вважалися "еколопчними", тобто такими, якi не спричиняють захворювань, на сьогоднi iснуe ряд переконливих доказiв того, що вони вщграють знач-ну роль у виникненш хвороб тварин та людини.
Висновки
В результатi наших дослвджень була отримана ПЛР-тест-система, для вдентифшацп та видовоï дифе-ренцiацiï Parachlamydia acanthamoebae. Олпонуклео-тиднi праймери, що входять до складу ПЛР-тест-системи, дозволяють амплiфiкувати фрагмент ДНК гена 16S рРНК, розмiром 88 пар нуклеотидiв специфь чним для бактерп Parachlamydia acanthamoebae.
Перспективи подальших дослгджень. Розроблена ПЛР тест-система тсля апробаци на кттчному мате-рiалi може бути впроваджена у лабораторну практику, використана у наукових дослвдженнях, а також з метою полшшення лшування та профiлактики хламщо-зiв тварин i людини.
Для дизайну праймерiв ПЛР-тест-системи було проаналiзовано 111 первинних послщовностей гена 16S рРНК, 36 видiв бактерiй порядку Chlamydiales. Вирiвнювання нуклеотидних послiдовностей гена 16S рРНК з використанням програми MEGA7 дозволило знайти специфiчнi дiлянки нуклеотидних послщовно-стей виду Parachlamydia acanthamoebae та розробити олiгонуклеотиднi праймери, що фланкують фрагмент ДНК гена 16S рРНК, розмiром 88 пар нуклеотидiв (п. н.). Амплiфiкацiя контрольноï ДНК Parachlamydia acanthamoebae за допомогою ПЛР та наступний гель-електрофорез продуктiв ПЛР визначив розмiр ампль фiкованого фрагменту ДНК у 88 п. н., що вщповвдав очiкуваному розмiру фрагменту ДНК гена 16S рРНК Parachlamydia acanthamoebae.
Перевiрка аналiтичноï специфiчностi виконана шляхом амплiфiкацiï контрольно!' ДНК 9 видiв, що входять до порядку Chlamydiales показала ввдсутшсть ПЛР продуклв.
До цього часу в Укршш не юнувало таких тест-систем, якi б могли виявити i диференцшвати хламь дie-спорiдненi органiзми, зокрема Parachlamydia acanthamoebae, вщомого збудника хламiдiозiв жуйних та людини. Такий стан ускладнював контроль та пе-
nogHKH
XoueMo bhc-obhth cbom Haumnpimy BgaumcTb thm, 6e3 _ kotphx garni jooi,X/KeHH;i 6y-ih 6 HeMo^-uBHMu:
Kcboroy Iropro M hko-1c1hobhliy|. goKTopy BeTepnHa-pHHx HayK iHCTHTyTy CBHHapcTBa i arponpoMHC-OBoro BHpo6HHnTBa HAAH. mo He mKogyBaB ch- i uacy. Ha-gnxaB i 3aB®gn cnpaMOByBaB CBiu Ta-aHT Ha gocaraeHHH ycnixy B Hamiu cni-bHm cnpaBi. ^,npo gaKyeMO Bue-hhm, ari BigryKHy-nca: Dr. Michel Rolf. (Central Military Hospital Koblenz. Germany. Dept. Pathology. Professeur); Gilbert GREUB - MD-PhD (Chef de Service et Directeur de l'Institut de Microbiologie Médecin chef des laboratoires de microbiologie diagnostique Institut de microbiologie de l'Université de Lausanne. Switzerland); Dr. Christiane Schnee. (Arbeitsgruppenleiterin. Institut für molekulare Pathogenese. Jena. Germany); Heike Schmidt-Posthaus. PD. Dr med vet. Dipl. ECVP. (Centre for Fish and Wildlife Health Bern) - 3a Ty HeomHemiy gonoMory. aKy Bh HaM Haga-n. b Bnr-agi 3pa3KiB koht-po-bHHx flHK. 3aBgaKH uoMy CTa-o mo^-hbhm bhko-HaHHH nocTaB-eHHx nepeg HaMH 3agau.
HayKOBHH bîchhk .nHYBME iMeHi C.3. iW^Koro, 2018, T 20, № 92
References
Ammerdorffer, A., Stojanov, M., Greub, G., & Baud, D. (2017). Chlamydia trachomatis and chlamydia-like bacteria. Current Opinion in Infectious Diseases, 30(3), 289-296. doi: 10.1097/qco.0000000000000369.
Barkallah, M., Gharbi, Y., Hassena, A. B., Slima, A. B., Mallek, Z., Gautier, M., et al. (2014). Survey of Infectious Etiologies of Bovine Abortion during Mid-to Late Gestation in Dairy Herds. PLoS ONE, 9(3), e91549. doi: 10.1371/journal.pone.0091549.
Baud, D., Goy, G., Osterheld, M.-C., Croxatto, A., Borel, N., Vial, Y., Pospischil, A., & Greub, G. (2014). Role of Waddlia chondrophila Placental Infection in Miscarriage. Emerging Infectious Diseases, 20(3), 460-464. doi: 10.3201/eid2003.131019.
Baud, D., Thomas, V., Arafa, A., Regan, L., & Greub, G. (2007). Waddlia chondrophila, a Potential Agent of Human Fetal Death. Emerging Infectious Diseases, 13(8), 1239-1243. doi: 10.3201/eid1308.070315.
Blumer, S., Greub, G., Waldvogel, A., Hässig, M., Thoma, R., Tschuor, A., et al. (2011). Waddlia, Parachlamydia and Chlamydiaceae in bovine abortion. Veterinary Microbiology, 152(3-4), 385-393. doi: 10.1016/j.vetmic.2011.05.024.
Borel, N., Ruhl, S., Casson, N., Kaiser, C., Pospischil, A., & Greub, G. (2007). Parachlamydiaspp. and RelatedChlamydia-like Organisms and Bovine Abortion. Emerging Infectious Diseases, 13(12), 1904-1907. doi: 10.3201/eid1312.070655.
Horn, M. (2011). Phylum XXIV. Chlamydiae Garrity and Holt 2001. In: Krieg NR, Staley JT, Brown DR, Hedlund BP, Paster BJ, et al editors. Bergey's manual of systematic bacteriology. New York: Bergey's Manual Trust, 843-844.
Horn, M. (2008). Chlamydiae as Symbionts in Eukaryotes. Annual Review of Microbiology, 62(1), 113-131. doi: 10.1146/annurev.micro.62.081307.1628.
Ksonz, I.M. (2011). Ozdorovchi zakhody vid khlamidiozu svyney. Veterynarna biotekhnolohiya, 19, 108-113. (in Ukrainian).
Ksonz, I.M., & Yukhno, V.M. (2009). Diahnostyka ta zakhody profilaktyky i borotby z khlamidiozamy silskohospodarskykh tvaryn. [posibnyk] PDAA (in Ukrainian).
Maurin, M., Bryskier, A., & Raoult, D. (2002). Antibiotic Susceptibilities of Parachlamydia acanthamoeba in Amoebae. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 46(9), 3065-3067. doi: 10.1128/aac.46.9.3065-3067.2002.
Pawlikowska-Warych, M., & Deptula, W. (2015). Characteristics of chlamydia-like organisms pathogenic to fish. Journal of Applied Genetics, 57(1), 135-141. doi: 10.1007/s13353-015-0303-8.
Sachse, K., Bavoil, P. M., Kaltenboeck, B., Stephens, R. S., Kuo, C.-C., Rossello-Mora, R., & Horn, M. (2015). Emendation of the family Chlamydiaceae: Proposal of a single genus, Chlamydia, to include all currently recognized species. Systematic and Applied Microbiology, 38(2), 99-103. doi: 10.1016/j.syapm.2014.12.004.
Sachse, K., Laroucau, K., Riege, K., Wehner, S., Dilcher, M., Creasy, H. H. et al. (2014). Evidence for the existence of two new members of the family Chlamydiaceae and proposal of Chlamydia avium sp. nov. and Chlamydia gallinacea sp. nov. Systematic and Applied Microbiology, 37(2), 79-88. doi: 10.1016/j.syapm.2013.12.004.
Taylor-Brown, A., Bachmann, N. L., Borel, N., & Polkinghorne, A. (2016). Culture-independent genomic characterisation of Candidatus Chlamydia sanzinia, a novel uncultivated bacterium infecting snakes. BMC Genomics, 17(1), 710. doi: 10.1186/s12864-016-3055-x.
Taylor-Brown, A., & Polkinghorne, A. (2017). New and emerging chlamydial infections of creatures great and small. New Microbes and New Infections, 18, 28-33. doi: 10.1016/j.nmni.2017.04.004.
Taylor-Brown, A., Vaughan, L., Greub, G., Timms, P., & Polkinghorne, A. (2015). Twenty years of research into Chlamydia-like organisms: a revolution in our understanding of the biology and pathogenicity of members of the phylum Chlamydiae. Pathogens and Disease, 73(1), 1-15. doi: 10.1093/femspd/ftu009.
Vorimore, F., Hsia, R., Huot-Creasy, H., Bastian, S., Deruyter, L., Passet, A., et al. (2013). Isolation of a New Chlamydia species from the Feral Sacred Ibis (Threskiornis aethiopicus): Chlamydia ibidis. PLoS ONE, 8(9), e74823. doi: 10.1371/journal.pone.0074823.
Wheelhouse, N., Coyle, C., & Barlow, P.G. (2014). Waddlia chondrophila infects and multiplies in ovine trophoblast cells stimulating an inflammatory immune response. PLoS One. 2014;9:e102386. doi: 10.1371/journal.pone.0102386.
Wheelhouse, N., Howie, F., Gidlow, J., Greub, G., Dagleish, M., & Longbottom, D. (2012). Involvement of Parachlamydia in bovine abortions in Scotland. The Veterinary Journal, 193(2), 586-588. doi: 10.1016/j.tvjl.2012.01.008.
