CC BY
0
DOI: 10.24412/2074-5036-2024-363-63-68 УДК: 619: 616. 993. 192. 1: 611]: 636. 92 ГРНТИ
Ключевые слова: эймериоз, кролики, хроническое течение, патоморфологические изменения, кишечник, желудок Key words: eimeriosis, rabbits, chronic course, pathomorphological changes, intestinal, stomach
Ясинская А. Ю., Луцук С. Н., Михайленко В. В.
ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ТЕЧЕНИИ
ЭЙМЕРИОЗА У КРОЛИКОВ
PATHOMORPHOLOGICAL CHANGES IN THE CHRONIC COURSE OF EIMERIOSIS IN RABBITS
ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный аграрный университет». Адрес: 355017, г. Ставрополь, Зоотехнический пер., 12
Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education«Stavropol State Agrarian University». Address: 355017, 12, Zootekhnichesky Lane, Stavropol, Russia
Ясинская Ангелина Юрьевна, аспирант кафедры паразитологии и ветсанэкспертизы, анатомии и патанатомии им. профессора С. Н. Никольского, E-mail: AngelaYasinskaya@mail.ru
Yasinskaya Angelina Yur 'evna, Post-Graduate Student of Department of Parasitology and Veterinary and Sanitary Inspections, Anatomy and Pathological Anatomy named after professor S.N. Nikolsky. E-mail: AngelaYasinskaya@mail.ru Луцук Светлана Николаевна, доктор ветеринарных наук, профессор кафедры паразитологии и ветсанэкспертизы, анатомии и патанатомии им. проф. С.Н. Никольского. E-mail: s.lutsyk@mail.ru Lutsuk Svetlana Nikolaevna, Doctor of Veterinary Scientes, Professor of Department of Parasitology and Veterinary and Sanitary Inspections, Anatomy and Pathological Anatomy named after prof. S.N. Nikolsky, E-mail: s.lutsyk@mail.ru
Михайленко Виктор Васильевич, кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры паразитологии и ветсанэкспертизы, анатомии и патанатомии им. проф. С.Н. Никольского, E-mail: viktor.mihaylenKO@yandex.ru Mikhailenko Victor Vasil'evich, PhD of Veterinary Sciences, Associate Professor, of Department of Parasitology and Veterinary and Sanitary Inspections, Anatomy and Pathological Anatomy named after prof. S.N. Nikolsky,
E-mail: viktor.mihaylenKO@yandex.ru
Аннотация. Хроническое течение эймериоза у кроликов при слабой степени инвазии (от 1111 до 4444 ооцист в 1 грамме фекалий) не всегда сопровождается изменениями в клиническом статусе. При паразитировании эймерий у кроликов можно обнаружить поражения не только в тонком и толстом кишечнике, но и в желудке. Патоморфоло-гическая картина при хроническом течении эймериоза характеризуется подострым катаральным гастроэнтеритом и очаговым колитом; полной или частичной десквамацией эпителия в тонком кишечнике и желудке; гиперплазией лимфоидных узелков с атрофией крипт в толстом кишечнике.
Summary. Chronic course of eimeriosis in rabbits with low-intensity infections (from 1111 to 4444 oocysts per gram of faeces) is not always due to alterations in clinical status. Also, at necropsy, lesions can be found in stomach, not only in small and large intestine of infected rabbits. Pathomorphology pattern in chronic course of eimeriosis is characterized by subacute catarrhal gastroenteritis and focal colitis; desquamation of the epithelial lining in small intestine and stomach; hyperplasia of lymphoid nodules and atrophy of crypts in large intestine.
Введение
Кроликов подразделяют на восемь разных родов, в том числе Oryctolagus. Вид Oryctolagus cuniculi - единственный одомашненный кролик (Nowland et al., 2015) [10]. Эймериоз - заболевание, вызываемое простейшими и являющееся причиной высокой заболеваемости и смертности домашних кроликов (J. J. Lim et al., 2012) [9]. Существует по меньшей мере 14 видов эймерий, паразитирующих в кишечнике (Li & Ooi, 2009 [8]; Pakandl, 2009 [12]), однако достоверно известно, что только вид Eimeria stiedai поражает печень
этих животных (Hofing & Kraus, 1994 [7]). Жизненный цикл эймерий представлен последовательно мерогонией (шизогонией), гаметогонией и спорогонией (Nowland et al., 2015 [10]; Pakandl, 2009 [12]). Патоморфологические изменения печени кроликов при разных течениях эймериоза исследовали P. O. Okumu et al., 2014 [11]; D. Bochynska et al., 2022 [4]; L. V. Athanasiou et al., 2023 [3] и другие. В 2012 году S. Al-Quraishy [2] исследовал жизненный цикл вида Eimeria perforons у естественно инфицированных кроликов. Изучение тощей кишки у кроликов,
экспериментально зараженных эймериозом, проводили Х. Yuan et al. в 2022 году [12]. В работе И. В. Безруковой с коллегами (2014) [1] описывались патоморфологические изменения желудка кроликов. При обобщении литературных данных нами было отмечено, что патологоанатомические изменения желудочно-кишечного тракта при эй-мериозе у кроликов описаны только в печени и фрагментарно в желудочно-кишечном тракте в основном при остром течении. Поэтому целью наших исследований стало изучение патомор-фологических изменений желудочно-кишечного тракта естественно инфицированных кроликов при хроническом течении эймериоза.
Материалы и методы
Исследования проводились на базе кафедры паразитологии и ветсанэкспертизы, анатомии и па-танатомии имени профессора С. Н. Никольского и вивария факультета ветеринарной медицины Ставропольского государственного аграрного университета в 2022-2023 годах. Объектом исследования послужили 6 умерщвленных кроликов в возрасте 5-6 месяцев с хроническим течением эймериоза. Животные в течение всей жизни содержались группами в клетках. Кормление осуществляли зерном и сеном, доступ к воде не ограничивали.
Лабораторную диагностику осуществляли согласно ГОСТ 25383-82. Так, от каждого из кроликов при жизни было отобрано по 10 грамм фекалий. Затем изготавливали солевой раствор кипячением в течение получаса 350 грамм поваренной соли в литре горячей воды, после чего фильтровали через марлю в чистую посуду для дальнейшего использования.
Из каждой пробы отбирали навеску фекалий в количестве 3 грамм и, тщательно смешав в ступке с вышеупомянутым раствором, процеживали через ситечко в стакан и отстаивали в течение часа. Петлей из поверхностного слоя
жидкости формировали на предметном стекле 3 капли (0,15 см3). Подсчет ооцист осуществляли без использования камер Горяева ввиду их малого количества. Полученное число, умноженное на 1111, представляло собой количество ооцист в 1 грамме фекалий. При этом наличие до 10 000 на 1 грамм обозначало низкую степень инвазии, до 100 тысяч - высокую степень инвазии, свыше 100 тысяч - очень высокую степень инвазии.
Для гистологических исследований отбирали образцы желудка, тонкого и толстого кишечника. Материал фиксировали в течение семи дней в 8 %-ном нейтральном водном растворе формалина. Парафиновые блоки изготавливали по общепринятой методике. Гистологические срезы изготавливали при помощи санного микротома МПС-П, окрашивали гематоксилином и эозином. Фотографии полученных препаратов создавали с помощью микроскопа «Микромед®» и Microscope Color Digital Camera Levenhuk C510 NG (окуляр х10; объектив х4; х10; х40). Последующие пояснительные изменения вносились в программе Paint 3D.
Результаты исследования
При жизни, наблюдая за подопытными животными, мы заметили, что у четырех кроликов из шести не было отклонений в клинической картине, тогда как еще у двух наблюдали незначительную степень угнетения при полном сохранении аппетита. Фекалии сохраняли свою форму.
Пробы от всех подопытных животных были исследованы по методу Фюллеборна. Результаты подсчета ооцист в исследуемых пробах представлены в Таблице 1.
Как следует из данных таблицы, количество ооцист на 1 грамм фекалий соответствовало слабой инвазии у всех подопытных животных (100 %), что указывает на хроническое течение эймериоза у кроликов.
Таблица 1
Результаты опыта
№ животного Клинические признаки Количество ооцист в каплях, шт. Количество ооцист в грамме фекалий
1 капля 2 капля 3 капля
1 Без изменений 1 1 - 2222
2 Угнетение 2 1 1 4444
3 Без изменений - - 2 2222
4 Без изменений 2 - - 2222
5 Угнетение 1 3 - 4444
6 Без изменений - 1 - 1111
Примечание: «-» - отсутствие ооцист в капле.
Рис. 1. Десквамация эпителиальных клеток желудка (черные стрелки). Окраска гематоксилином и эозином; х60
Рис. 2. Гомогенизация стенки артерии и пролиферация клеток эндотелия желудка (красная стрелка). Окраска гематоксилином и эозином; х600
Рис. 3. Десквамация эпителия желез желудка (черные стрелки). Окраска гематоксилином и эозином, х600
Рис. 5. Тонкий кишечник. Разные стадии развития эймерий (черные стрелки). Окраска гематоксилином и эозином, х150
Рис. 4. Мерогония в просвете железок желудка (меронты - Ме, черные стрелки; паразитиформные вакуоли - РУ, красные стрелки). Окраска гематоксилином и эозином, х600
Рис. 6. Тонкий кишечник. Паразитиформные вакуоли (РУ; черные стрелки). Окраска гематоксилином и эозином, х150
Рис. 7. Тонкий кишечник. Скопления лимфоцитов, макрофагов и эпителиоидных клеток, сдавливающие крипты (черные стрелки). Паразитиморфные вакуоли (РУ; красные стрелки). Окраска гематоксилином и эозином, х600
Рис. 8. Толстый кишечник. Один слой крипт, часть из которых атрофирована (черные стрелки). Окраска гематоксилином и эозином, ><60
Рис. 9.Толстый кишечник. Гиперплазия лимфоид-ных узелков (красные стрелки) и зона из лимфоцитов (черная стрелка). Окраска гематоксилином и эозином, х150
Рис. 10. Толстый кишечник. Эндогенные стадии эймерий (РУ; черные стрелки). Очаговые скопления лимфоцитов, макрофагов и фибробластов (красные стрелки). Окраска гематоксилином и эозином, ><600
Рис. 11. Толстый кишечник. Паразитиформные вакуоли (РУ; черные стрелки). Окраска гематоксилином и эозином, х600
Для изучения патоморфологических изменений подопытные кролики были умерщвлены. При вскрытии нами было проведено исследование желудка, тонкого и толстого кишечника.
При исследовании желудка нами была выявлена умеренная наполненность, представленная кашицеобразной массой. Стенки желудка были покрыты густой и вязкой серовато-белой массой, напоминающей слизь, практически несмываемой. Слизистая оболочка была розоватой и набухшей. Выявленные нами изменения при макроскопическом исследовании были характерными для подострого катарального гастрита.
При гистологическом исследовании стенки желудка визуализировалась полная десквама-ция эпителиальных клеток (Рис. 1). В подслизи-стом слое и между желёзками обнаруживались клеточные инфильтраты, состоящие преимущественно из макрофагов, лимфоцитов и эпители-оидных клеток. В донной части желудка ближе к мышечной пластине в криптах сохранено до 50 % эпителия, цитоплазма однородная, а отдельные клетки имеют четкие границы.
Сами железы расположены ближе к просвету и по большей части практически лишены железистого эпителия (Рис. 3); в просвете видны не-кротизированные и слущенные эпителиальные клетки («клетки-тени»). Вокруг желёзок наблюдаются очаговые скопления макрофагов, гистео-цитов, лимфоцитов и эпителиоидных клеток.
В просвете желёзок была обнаружена эндогенная стадия развития эймерий - мерогония: меронты в паразитиформных вакуолях (Рис. 4).
Микроскопические изменения, обнаруженные в желудке, также соответствовали подостро-му катаральному гастриту.
Макроскопический осмотр тонкого кишечника выявил полужидкое содержимое, подобное слизи. Мы наблюдали гиперемирование и набухание отдельных участков. Цветовая гамма слизистой оболочки, в большинстве своем была розовая и становилась тем бледнее, чем дальше находилась от желудка. Нами также было отмечено газообразование тощей кишки и бледно-розовый цвет в концевой части этой и подвздошной кишках.
При гистологическом исследовании в тонком кишечнике эпителий ворсинок был частично де-сквамирован. На поверхности эпителиального слоя визуализировались скопления слущенных клеток с незначительным количеством слизи. В клетках самого эпителия обнаруживались разные стадии развития эймерий (Рис. 5 и 6).
В собственно-слизистом слое вокруг крипт тонкого отдела кишечника были видны скопления
лимфоцитов, макрофагов, эпителиоидных клеток, частично их сдавливающих, в результате чего крипты подвергаются атрофии. Над мышечной пластиной обнаруживаются гиперплазированные лимфоидные узелки. Визуализируются множественные паразитиформные вакуоли (Рис. 7).
В подслизистом слое видны клеточные инфильтраты, также состоящие из лимфоцитов, макрофагов, эпителиоидных клеток и гистеоцитов, особенно множественные вокруг кровеносных сосудов. Вены умеренно кровенаполнены; изменения артерий сходны с таковыми в желудке.
При исследовании толстого кишечника слизистая оболочка была бледно-розовой и гладкой. Отмечалась умеренная наполненность в слепой и большой ободочной кишках; обнаруживалась полужидкая кашицеобразная масса с пузырьками газов. В прямой и малой ободочной кишках -сформированные каловые массы.
Микрокартина толстого кишечника была следующей: эпителиальный слой клеток полностью десквамирован; собственно слизистый слой неоднородной толщины, в отдельных участках виден только один слой крипт. Последние сдавливают обширные скопления лимфоцитов, местами заметные в собственно слизистом слое. Крипты подвергаются атрофии, в местах с большим количеством клеточных инфильтратов полностью отсутствуют (Рис. 8).
Над мышечной пластинкой визуализируется гиперплазия лимфоидных узелков диаметром 550-600 мкм с расширенным реактивным центром, над которыми видна зона из лимфоцитов шириной 600-650 мкм. В месте скопления лимфоцитов поверх узелков крипты полностью атрофированы (Рис. 9).
В собственно слизистом слое в криптах обнаруживаются эндогенные стадии развития эйме-рий в отчетливых паразитиформных вакуолях. Вокруг крипт визуализируются очаговые скопления лимфоцитов, макрофагов, фибробластов (Рис. 10 и 11).
По результатам исследований клиническая картина у большинства подопытных животных соответствовала хроническому течению и субклинической форме (Nowland et al., 2015); еще у двух кроликов отмечали только угнетение.
Количество ооцист на 1 грамм фекалий соответствовало слабой инвазии у всех подопытных животных. В то же время по данным В. Pilarczyk et al. (2020) [11] у кроликов, больных эймерио-зом, даже с высокой степенью инвазии клиническая картина может быть не выражена, так как в этом случае играет роль патогенность разных видов эймерий.
В нашем исследовании у кроликов 5-6 месяцев при хроническом течении эймериоза были выявлены изменения, характерные для подо-строго катарального гастроэнтерита, что отчасти согласуется с данными, отображенными в работе И. В. Безруковой и других (2014) [1].
Гистологическое исследование выявило как десквамацию эпителиального слоя желудка, так и железистого эпителия, вызванными мерогонией. Обнаруженные нами возбудители были схожи с таковыми, описанными S. Al-Quraishy (2012) [2] и S. Fang et al. (2023) [6] в тонком кишечнике у спонтанно больных и экспериментально зараженных кроликов. По данным наших исследований, при эймериозе кроликов патоморфологические изменения затрагивали не только тонкий и толстый кишечник, но и желудок. Мы считаем, что необходимо продолжить изучение в этом направлении и определить, начинается ли жизненный цикл всех видов эймерий в желудке хозяина.
Патоморфологические изменения, обнаруженные в тонком кишечнике, и макроскопически, и микроскопически были характерны для подострого катарального энтерита. Частичная десквамация эпителия и наличие скоплений слу-щенных клеток, мы полагаем, вызваны обнаруженными в клетках эпителия разными стадиями развития эймерий. Схожие выводы были получены Elshahawy & Elgoniemy в 2018 году [5].
Макроскопически патоморфологические изменения толстой кишки не визуализировались, за исключением газообразования в слепой и большой ободочной кишках. Микрокартина демонстрировала очаговый колит: над мышечной пластинкой обнаруживалась гиперплазия лимфоидных узелков; скопления лимфоцитов поверх последних сдавливали крипты вплоть до полной их атрофии в отдельных местах. Крипты собственно слизистого слоя обнаруживали паразитиформные вакуоли.
Таким образом, на основании проведённых исследований можно сделать следующие выводы:
1. Хроническое течение эймериоза у кроликов при слабой степени инвазии (от 1111 до 4444 ооцист в 1 грамме фекалий) не всегда сопровождается изменениями в клиническом статусе.
2. При паразитировании эймерий у кроликов можно обнаружить поражения не только в тонком и толстом кишечнике, но и в желудке.
3. Патоморфологическая картина при хроническом течении эймериоза характеризуется подо-стрым катаральным гастроэнтеритом и очаговым колитом; полной или частичной десквамацией эпителия в тонком кишечнике и желудке; гиперплазией лимфоидных узелков с атрофией крипт в толстом кишечнике.
Список литературы
I.. Безрукова И. В. Морфологические изменения при эймериозе кроликов / И. В. Безрукова, В. В. Михайленко, С. Н. Луцук, А. А. Водянов // Вестник АПК Ставрополья. 2014. № 4(16). С. 99-103.
2. Al-Quraishy S. Exogenous and endogenous stages of Eimeria perforans naturally infected domestic rabbit (Oryctolagus cuniculus) in Saudi Arabia: Light microscopic study. / S. Al-Quraishy // Saudi Journal of Biological Sciences, 2012. 19(1), 31-34. doi:10.1016/j.sjbs.2011.09.003
3. Athanasiou L. V. Hepatic Coccidiosis in Wild Rabbits in Greece: Parasite Detection on Liver Imprints and the Associated Biochemical Profile. / L. V. Athanasiou,
C. N. Tsokana, D. Doukas, M. C. Kantere, P. D. Katsoulos, G. I. Papakonstantinou, E. G. Katsogiannou, A. Dedousi // Vet Sci. 2023 Mar 26;10(4):248. doi: 10.3390/vetsci10040248. PMID: 37104403; PMCID: PMC10143969.
4. Bochynska D. Eimeria stiedae causes most of the white-spotted liver lesions in wild European rabbits in Cambridgeshire, United Kingdom. / D. Bochynska, S. Lloyd, O. Restif, K. Hughes // J Vet Diagn Invest. 2022 Mar;34(2):199-205. doi: 10.1177/10406387211066923. Epub 2022 Jan 24. PMID: 35073810; PMCID: PMC8915231.
5. Elshahawy I. An epidemiological study on endoparasites of domestic rabbits (Oryctolagus cuniculus) in Egypt with special reference to their health impact. / I. Elshahawy, A. Elgoniemy // Sains Malaysiana, 2018, 47 (1). pp. 9-18. ISSN 0126-6039
6. Fang S. Study on the pathogenicity, immunogenicity, endogenous development and drug sensitivity of Eimeria kongi. / S. Fang, Y. Shi, P. Wang, C. Guan, X. Gu, L. Guan, P. Cui, X. Suo // Front Vet Sci. 2023 Mar 6;10:1134193. doi: 10.3389/fvets.2023.1134193. PMID: 36950537; PMCID: PMC10025568.
7. Li M. Fecal occult blood manifestation of intestinal Eimeria spp. infection in rabbit. / M. Li, H. Ooi // Vet. Parasitol. 2009. 161, 327-329.
8. Lim J. J. Prevalence of Lawsonia intracellularis, Salmonella spp. and Eimeria spp. in healthy and diarrheic pet rabbits. / J. J. Lim, D. H. Kim, J. J. Lee, D. G. Kim, S. H. Kim, W. Min, H. H. Chang, M. H. Rhee, S. Kim // J Vet Med Sci. 2012 Feb;74(2):263-5. doi: 10.1292/jvms.11-0389. Epub 2011 Sep 30. PMID: 21959895.
9. Nowland M. H. Biology and Diseases of Rabbits. / M. H. Nowland, D. W. Brammer, A. Garcia, H. G. Rush // Laboratory Animal Medicine. 2015:411-61. doi: 10.1016/ B978-0-12-409527-4.00010-9. Epub 2015 Jul 10. PMCID: PMC7150064.
10. Okumu P. O. Prevalence, Pathology and Risk Factors for Coccidiosis in Domestic Rabbits (Oryctolagus cuniculus) in Selected Regions in Kenya. / P. O. Okumu, P.K. Gathumbi,
D. N. Karanja, J. D. Mande, M. M. Wanyoike, C. K. Gachuiri, N. Kiarie, R. N. Mwanza, D. K. Borter // Vet. Q. 2014;34:205-210. doi: 10.1080/01652176.2014.978044.
II. Pilarczyk B. The effect of the sex, age, and breed of farmed rabbits and the choice of management system on the extensity and intensity of Eimeria infection. / B. Pilarczyk,
A. Tomza-Marciniak, R. Pilarczyk, E. Janus, P. Stanek,
B. Seremak, P. Sablik // Vet World. 2020 Aug;13(8):1654-1660. doi: 10.14202/vetworld.2020.1654-1660. Epub 2020 Aug 20. PMID: 33061241; PMCID: PMC7522946.
12. Yuan X. Alterations in the jejunal microbiota and fecal metabolite profiles of rabbits infected with Eimeria intestinalis. / X. Yuan, J. Liu, X. Hu, S. Yang, S. Zhong, T. Yang, Y. Zhou, G. Zhao, Y. Jiang, Y. Li // Parasit Vectors. 2022 Jun 26;15(1):231. doi: 10.1186/s13071-022-05340-5. PMID: 35754027; PMCID: PMC9233780.
