CC BY
35
УДК 636.52/.58:611.3[619:616.9] Т.И. Лапина, Е.Н. Крашенинникова,
О.И. Токарев
ПАТОГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ Е КУР
T.I. Lapina, E.N. Krasheninnikova, O.I. Tokarev
PATHOGYSTOLOGIC RESEARCHE
Лапина Т.И. - д-р биол. наук, проф. каф. терапии и пропедевтики Донского государственного аграрного университета, Ростовская обл., Октябрьский р-н, п. Персиановский. E-mail: [email protected] Крашенинникова Е.Н. - асп. каф. терапии и пропедевтики Донского государственного аграрного университета, Ростовская обл., Октябрьский р-н, п. Персиановский. E-mail: viktor.mihaylenko @yandex.ru
Токарев О.И. - канд. биол. наук, врач-эпизоотолог ФГУ «Приволжская районная станция по борьбе с болезнями животных», Астраханская обл., Приволжский р-н, п. Начало. E-mail: [email protected]
: OF CHICKEN HEPATITIS E VIRUS
Lapina T.I. - Dr. Biol. Sci., Prof., Chair of Therapy and Propaedeutics, Don State Agrarian University, Rostov Region, Oktyabrsky District, S. Per-sianovsky. E-mail: viktor .mihaylenko@ yandex.ru
Krasheninnikova E.N. - Post-Graduate Student, Chair of Therapy and Propaedeutics, Don State Agrarian University, Rostov Region, Oktyabrsky District, S. Persianovsky. E-mail: viktor [email protected]
Tokarev O.I. - Cand. Biol. Sci., Epizootologist, Volga FSI 'Regional Station on Fight against Animals Diseases', Astrakhan Region, Privolzhsky District, S. Nachalo. E-mail: viktor.mihaylenko @yandex.ru
Целью исследования являлось изучение морфофункционального состояния некоторых органов пищеварения и иммунной системы при вирусном гепатите Е кур. Диагноз на BlSd (синдром «большой печени и селезенки») был поставлен в результате проведенных вирусологических исследований в Clinic for Avian, Reptile and Fish Medicine (Венгрия). Парафиновые срезы желудка и селезенки окрашивали для обзорных исследований гематоксилином и эозином по Ван-Гизон, Маллори, Вейгерту, Браше на плазматические клетки, ставили ШиК-реакцию для выявления углеводсодержа-щих биополимеров, проводили окраску по Jones a. Reid (Jones a. Reid, 1973) для дифференци-ровки кислых и нейтральных углеводсодержа-щих биополимеров. Для выделения субпопуляций лимфоидных клеток использовались лек-тины арахиса, сои и виноградной улитки, меченые пероксидазой хрена. При вскрытии выявили сплено- и гепатомегалию. Гистологические результаты исследования показали, что в железистом желудке кур наблюдается инфильтрация лимфоцитами и плазматизация слизистой оболочки, появление кислого секрета в полости поверхностных желез, де-сквамация эпителия стенки поверхностных
желез, жировое перерождение мышечной оболочки. В селезенке выявлен апоптоз лимфоцитов, амилоидоз и некроз лимфоидных узелков, активная плазматизация красной пульпы. В области нахождения лимфоидных узелков белой пульпы имеют место очаги некроза. Наблюдаются глубокие изменения стенки кровеносных сосудов - десквамация эндотелия, гомогенизация и частичный лизис медии. Таким образом, при вирусном гепатите Е в железистом желудке кур наблюдается инфильтрация лимфоцитами и плазматизация слизистой оболочки, появление кислого секрета в полости поверхностных желез, десквамация эпителия стенки поверхностных желез, жировое перерождение мышечной оболочки. В селезенке выявлен апоптоз лимфоцитов, амилоидоз и некроз лимфоидных узелков, активная плаз-матизация красной пульпы, гомогенизация и частичный лизис стенки кровеносных сосудов.
Ключевые слова: куры, гепатит Е, желудок, селезенка.
The aim of the research was to study morpho-functional state of some organs of digestive and immune system in chickens with Hepatitis E virus. The diagnosis BLSD (syndrome of "big liver and
spleen" was made as a result of virological studies in Clinic for Avian, Reptile and Fish Medicine (Hungary). Paraffin sections of the stomach and spleen were stained for observational studies with hematoxylin and eosin, according to Van Gison, Mallory, Weygert, Brache on plasma cells, put the SHIC-reaction for the detection of carbohydrate-containing biopolymers, and stained using Jones a. Reid (Jones a.Read, 1973) for the differentiation of acidic and neutral carbohydrate-containing biopolymers. To isolate subpopulations of lymphoid cells lectins peanut, soybean and snail labeled with horseradish peroxidase were used. The autopsy revealed spleno- and hepatomegalia. Histological result of research showed that in glandular stomach of the chickens infiltration by lymphocytes and plasmatization mucosa, acidic secret in the cavity of the superficial glands, desquamation of the epithelium of the wall of the superficial glands, fatty degeneration of the muscularis tunica were observed. In the spleen there were apoptosis of lymphocytes, amyloidosis and necrosis of lymphoid nodules, active plasmatization red pulp. In the area of finding the lymphoid nodules of white pulp, foci of necrosis took place. Profound changes of blood vessel walls, - endothelial desquamation, homoge-nization and partial lysis media were observed. Thus, in hepatitis E virus in the glandular stomach of the chickens there were infiltration of lymphocytes and plasmatization mucosa, acidic secret in the cavity of the superficial glands, desquamation of the epithelium of the wall of the superficial glands, fatty degeneration of the muscularis tunica. In the spleen the apoptosis of lymphocytes, amyloidosis and necrosis of lymphoid nodules, active plasmatization red pulp, homogenization and partial lysis of blood vessel wall were revealed.
Keywords: chicken, hepatitis E, stomach, spleen.
Введение. В последнее время птицеводческое хозяйство стало все более подвержено приносимым из стран дальнего и ближнего зарубежья инфекциям, которые ранее не регистрировались на территории Российской Федерации, что вызывает затруднения в диагностике [1, 2]. В частности, серьезной проблемой птицеводческих хозяйств становится вирусный гепатит Е кур. Обнаружение антител ВГЕ среди животных, обитающих в России, свидетельствует о
циркуляции ВГЕ на этой территории [4]. Болезнь обнаруживается у взрослых птиц. Гепатит Е характеризуется понижением яйценоскости, большой летальностью. При вскрытии обращает на себя внимание спленомегалия и гепатомегалия. Для получения правильного представления о болезни необходимо особенно тщательно изучать местные органные поражения и сформулировать патогенез данного заболевания.
Цель исследования: изучение морфофунк-ционального состояния некоторых органов пищеварения и иммунной системы при вирусном гепатите Е кур.
Задачи исследования: рассмотреть основные патолого-анатомические изменения органов пищеварения и иммунной системы при вирусном гепатите Е кур.
Материал и методы исследования. С целью диагностического исследования проведено вскрытие трупов павших кур. На исключение лейкоза во ВНИИЗЖ г. Владимира был направлен материал, получен отрицательный результат. Проведены вирусологические исследования в Clinic for Avian, Reptile and Fish Medicine (Венгрия). Результат положительный на BLSD (синдром «большой печени и селезенки»). Для гистологических исследований были взяты кусочки желудков и селезенки кур. Парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм изготавливали по общепринятой методике с последующей окраской гематоксилином и эозином по Ван-Гизон, Малл-ори, Вейгерту. Для выявления плазматических клеток срезы окрашивали по Браше. Для определения гликогена и нейтральных углеводсо-держащих биополимеров ставили ШИК-реакцию. Для дифференциации от других ШИК-положительных компонентов срезы перед окраской подвергали обработке амилазой слюны в течение 20 мин при 37 °С. Одновременное выявление кислых и нейтральных углеводсо-держащих биополимеров проводили по Jones a. Reid (Jones a.Reid, 1973). Для выделения субпопуляций лимфоидных клеток использовались лектины арахиса, сои и виноградной улитки, меченые пероксидазой хрена. Лектин сои предназначен для выявления в периферических лимфоидных органах - В-лимфоцитов. При помощи лектина арахиса определяют функционально незрелые, кортикальные тимоциты и Т-лимфоциты в периферических лимфоидных
органах. Лектин виноградной улитки определяет зальной мембраны. Слизистая оболочка бедна
зрелые медуллярные тимоциты. Для выявления ШИК-положительными веществами. При оценке
активности пероксидазы использовали а- срезов, окрашенных альциановым синим в по-
нафтол с последующей докраской метиловым лости поверхностных желез отмечается обиль-
зеленым [3]. Клетки, имеющие рецепторы к тому ный пенистый секрет кислой реакции. В сосоч-
или иному лектину, окрашиваются в зеленый ках подслизистой основы выявляется очаговое
цвет. Остальные клетки - бесцветные или расширение трубчатых желез. В апикальной
бледно- зеленые. части желез происходит десквамация эпителия.
Результаты исследования. При вскрытии Встречаются сосочки, в полости которых нахо-выявили сплено- и гепатомегалию (рис. 1), жи- дится значительное скопление клеток. По перовую дистрофию печени, септическую селе- риферии сосочков, в собственно-слизистом зенку, серозно-катаральный эзофагит, гастроэн- слое располагаются лимфоидные узелки раз-терит, застойную гиперемию и белковую дис- личной формы. В подслизистой основе имеет трофию почек, отек легких, у некоторых кур - место скопление круглоклеточного инфильтра-фибринозно-геморрагический перитонит. та, выявляются в значительном количестве
При гистологическом исследовании стенки плазмоциты. В мышечной оболочке наблюдает-железистого желудка отмечается гиперемия и ся расслоение мышечных слоев, лизис миоци-инфильтрация собственной пластинки, подсли- тов, очаговое перерождение мышечной ткани в зистой основы и межмышечной соединительной жировую. Выявляются ШИК-положительные ткани круглоклеточными лейкоцитами. В слизи- вещества в незначительном количестве. стой оболочке имеет место появление значи- Наблюдается инфильтрация лимфоцитами метельного количества плазматических клеток, жмышечных слоев. Соединительная ткань се-васкулит (рис. 2). Наблюдается десквамация розной оболочки инфильтрирована лимфоци-эпителия стенки поверхностных желез от ба- тами.
Рис. 1. Печень курицы при вирусном гепатите Е
Рис. 2. Появление значительного количества плазматических клеток и васкулит в слизистой оболочке железистого отдела желудка кур при вирусном гепатите Е. Окраска гематоксилином
и эозином. Ув. х 1000
При оценке срезов селезенки кур выявлено, что в капсуле гладкомышечные клетки большей частью гомогенизированы. Под капсулой со стороны выходящих кровеносных сосудов содержится значительное количество лимфоцитов на разных стадиях некроза (имеется как кариолизис, так и кариорексис), макрофаги, а также плазмо-циты. В лимфоидных узелках имеет место бесструктурная ШИК-позитивная масса (рис. 3). При окраске конго красным эти очаги окрашиваются в цвет красного дерева, характеризующий амилоид. Сохранившиеся лимфоидные узелки имеют самую разнообразную форму - овальную, округлую, неправильно треугольную и др. В разных лимфоидных узелках зоны выражены неодинаково. При окраске по Браше выявляют-
ся плазмоциты. От красной пульпы лимфоидные узелки отграничены нечетко. Наблюдаются глубокие изменения стенки кровеносных сосудов, в центральной артериоле медия гомогенизирована и частично лизирована. Эндотелий интимы десквамирован. В красной пульпе выявляется значительное количество лейкоцитов, причем большое количество в состоянии дистрофии, а также очагово и диффузно расположенных плазмоцитов. При ШИК-реакции здесь обнаружены макрофаги-амилоидобласты.
У некоторых кур выявляются обширные очаги некроза. При большом увеличении определяется, что очаги некроза находятся в области нахождения лимфоидных узелков белой пульпы. Здесь происходит накопление амилоида.
ШжБтШ
Рис. 3. ШИК-положительные вещества на месте белой пульпы селезенки.
ШИК-реакция. Ув. х 400
Выводы. Таким образом, при вирусном гепатите Е в железистом желудке кур наблюдается инфильтрация лимфоцитами и плазматиза-ция слизистой оболочки, появление кислого секрета в полости поверхностных желез, десквамация эпителия стенки поверхностных желез, жировое перерождение мышечной оболочки.
В селезенке выявлен апоптоз лимфоцитов, амилоидоз и некроз лимфоидных узелков, активная плазматизация красной пульпы, гомогенизация и частичный лизис стенки кровеносных сосудов.
Литература
1. Ирза В.Н., Спрыгин А.В. Синдром большой печени и селезенки — новая вирусная болезнь кур в России // Сельскохозяйственная биология. - 2012. - № 4. - С. 73-77.
2. Лапина Т.И. и др. Вирусный гепатит Е кур // Докл. РАСХН. - 2014. - № 1. - С. 69-71.
3. Луцик М.Д., Детюк Е.С. Применение лек-тинов в светооптической гистохимии (мето-
дические аспекты) // Архив АГЭ. - 1987. -№ 6. - С. 74-89.
4. Спрыгин А.В. и др. Распространение и генетическая вариабельность вируса гепатита Е на птицефабриках в странах бывшего СССР // Сельскохозяйственная биология. -2014. - № 6. - С. 59-66.
Literatura
1. Irza V.N., Sprygin A.V. Sindrom bol'shoj pecheni i selezenki — novaja virusnaja bolezn' kur v Rossii // Sel'skohozjajstvennaja biologija. -2012. - № 4. - S. 73-77.
2. Lapina T.I. i dr. Virusnyj gepatit E kur // Dokl. RASHN. - 2014. - № 1. - S. 69-71.
3. Lucik M.D., Detjuk E.S. Primenenie lektinov v svetoopticheskoj gistohimii (metodicheskie aspekty) // Arhiv AGJe. - 1987. - № 6. -S. 74-89.
4. Sprygin A.V. i dr. Rasprostranenie i genetich-eskaja variabel'nost' virusa gepatita E na pticefabrikah v stranah byvshego SSSR // Sel'skohozjajstvennaja biologija. - 2014. -№ 6. - S. 59-66.
