CC BY
34
Михайлова Е.А., Воронина Л.Г., Перунова Н.Б.,
Кузнецова Е.К., Генелес Л.Н., Михайлова О.О.
Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, Оренбург
ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МИКРОФЛОРЫ ЭЯКУЛЯТА В ФОРМИРОВАНИИ ХРОНИЧЕСКОЙ ГОНОРЕИ У МУЖЧИН
Выявлены особенности видового состава вирулентных и персистентных свойств микрофлоры эякулята мужчин при различных формах гонококковой инфекции. У больных свежей гонореей происходит снижение видового разнообразия по сравнению со здоровыми, тогда как у больных хронической формой инфекции высеваются различные виды микробов-ассоциантов гонококка, обладающих также высоким персистентным потенциалом. Обсуждается значение выявленных особенностей патологического биоценоза в хронизации процесса.
Ключевые слова: гонококковая инфекция, эякулят, персистенция, микрофлора.
Введение
В структуре инфекционной патологии человека значительное место занимают инфекции, передаваемые половым путем (ИППП) [11].
Г онорея - одна из часто диагностируемых ИППП, распространенность которой имеет тенденцию к дальнейшему росту [2]. Более 60% болеющих гонореей - молодые люди репродуктивного возраста, при этом число болеющих мужчин в 2,2 раза превышает число больных женщин [13]. Отмечается изменение клинического течения заболевания: увеличение доли асимптомных и торпидных форм, хронизация и частое рецидивирование процесса, развитие осложнений, в частности постгонорейных негонококковых уретритов [1, 12]. Затяжное течение воспалительного процесса в мочеполовом тракте мужчин является причиной выраженных труднообратимых трофических изменений слизистой урогенитального тракта, формирования патоспермии, что негативно сказывается на репродуктивном здоровье [5, 6]. Социальная и медицинская значимость проблемы гонококковой инфекции указывает на актуальность совершенствования методов современной диагностики и лечения гонореи.
Принимая во внимание то, что клиническое течение гонореи во многом объясняется изменением биологических свойств N. gonorrhoeae [2], а также тот факт, что колонизация биотопа возбудителем и его последующая персистенция в микробиоценозе во многом определяется присутствующей нормофло-рой [4], представляется важным выявить особенности микробиоценозов урогенитального тракта больных мужчин.
Цель
Изучение состава и биологических свойств факультативно- и облигатно-анаэробной мик-
рофлоры урогенитального тракта мужчин при гонококковой инфекции.
Материалы и методы
Нами было обследовано 46 мужчин в возрасте 19-26 лет. Из них 25 человек составляли группу здоровых лиц (1 группа), 12 пациентов - со свежими формами заболевания (2 группа) и 9 больных - с хронической гонореей (3 группа).
Диагностику гонококковой инфекции, хламидиоза, трихомониаза и их ассоциаций осуществляли в соответствии с методическими материалами по этиологии, клинике и диагностике, лечению и профилактике болезней, передаваемых половым путем М3 РФ (1995). В дальнейшее исследование включались только пациенты с гонококковой моноинфекцией. Клинико-лабораторное обследование также исключало у обследуемых наличие выраженных соматических и эндокринных заболеваний, гепатитов и ВИЧ-инфекции. Для микробиологического исследования делали посев эякулята на элективные питательные среды с последующей идентификацией культур на основе тест-систем EN-COCCUStest, STREPTOtest 16, STAPHYtest 16, ANAEROtest 23, ENTEROtest 24 (Lachema, Чехия), APIR20CAUX (вiomerieux, Франция).
Определяли частоту выделения (%) и количественное содержание - показатель микробной обсемененности (ПМО, КОЕ/мл) отдельных видов микроорганизмов, их биологические свойства. Гемолиз эритроцитов учитывали на кровяном агаре. Липолитическую активность определяли на агаре с Твином-80, ДНК-азную активность - на агаризованных средах DNASETESTAGAR (BBL, США). Лизоцим-ную (ЛА), антилизоцимную (АЛА), антикомп-лементарную (АКА) активности определяли по методикам О.В. Бухарина с соавторами [4].
Результаты
В эякуляте здоровых мужчин (рис. 1) в 59,3 % случаев были обнаружены Micrococcus spp.; у
31.7 % обследованных этой же группы - стрептококки (Str. agalactiae, Str. sanguis), у 8,9 % - энтерококки (E. faeciun, E. faecalis). Коагулазоотрица-тельные стафилококки выделялись в 98,0 % случаев и были представлены видами: S. saprophyticus, S. epidermidis, S. capitis, S. haemolyticus. Энтеробактерии (Е. coli, Citrobacter freundii, E. cloacae) изолировались у
4.7 % обследуемых. Анаэробные и микроаэро-фильные микроорганизмы (Bacteroides dictasonis, Fusobacterium nucleatum, Eggerthella lenta) высевались в 16 % случаев. Интенсивность бактери-оспермии была довольно низкой и находилась в диапазоне 102 - 104 КОЕ/мг. Кроме того, у 8 % здоровых мужчин были выявлены грибы рода Candida (ПМО 10-102 КОЕ/мл). Среднее количество видов микроорганизмов, выделенных из одного биоценоза, составило 3,6 ± 0,7.
Из репродуктивного тракта мужчин со свежей гонореей высевали в 30 % случаев стафилококки (чаще всего S. haemolyticus, S. saprophyticus, S. epidermidis, ПМО 101-102 КОЕ/мл), у 7,9 % - стрептококки (Str. agalactiae, ПМО 101 КОЕ/мл), у 15 % обследуемых - энтерококки (E. Faecalis, ПМО 101 КОЕ/мл), а также выделяли облигатные анаэробы и микроаэ-рофилы (Bacteroides dictasonis, Fusobacterium nucleatum, Propionibacterium granulosum, Actinomyces israelii, ПМО 101 КОЕ/мл). Дрожжеподобные грибы изолировали в 8,3 % случаев (ПМО 102 КОЕ/мл). Среднее количество микроорганизмов, выделенных от одного пациента данной группы, было 1,7± 0,5.
Изучение микрофлоры эякулята мужчин с хронической гонореей показало, что в 91,1 %
случаев выделялись стафилококки (чаще виды: S. epidermidis S. haemolyticus, S. aureus, ПМО 103-105 КОЕ/мл), в 44,4% - стрептококки (чаще виды: Str. agalactiae, Str. Pyogenes, ПМО 103 КОЕ/мл), в 22 % - энтерококки (чаще виды: E. faecalis, E. Faecium, ПМО 103 КОЕ/мл) и в 66 % - грамотрицательные палочки (Е. coli, E. cloacae, M. morganii, K. pneumoniae, P. Vulgaris, ПМО 103-104 КОЕ/мл). Наряду с этим наблюдалось увеличение видового разнообразия облигатно-анаэробных бактерий. Кроме видов, присутствующих у пациентов 1 и 2 групп, были изолированы штаммы Eubacterium contortum, Peptococcus niger, Petptostreptococcus anaerobius. Анаэробные микроорганизмы высевались у 55,5 % пациентов (ПМО 102-103 КОЕ/мл). У пациентов 3 группы отмечалось значительное увеличение частоты высеваемости (в 77 % случаев) и ПМО (102-103 КОЕ/мл) грибов рода Candida по сравнению с 1 и 2 группами лиц. В среднем из одного биоценоза выделялось 2,5 ± 0,3 вида микроорганизмов.
Штаммы, выделенные от здоровых, обладали гемолитической, лизоцимной, ДНК-азной, липолитической, антилизоцимной и антиком-плементарной активностями - в 23,4 %, 42,1 %, 28,0 %, 30,4 %, 20,2 % и 23,2 % случаев соответственно. Средние значения АЛА не превышали 0,5 ± 0,2 мкг/мл * ОП, АКА - 3,8 ± 0,9 анти-СН50.
Микроорганизмы, сопутствующие гонококку в биоценозе пациентов со свежей гонококковой инфекцией, характеризовались способностью к продукции гемолизинов - (23,2 % штаммов), деградации лизоцима в среднем 1,3 мг/мл * ОП (у 55 % штаммов), комплемента - 5,1± 1,2 антиСН50 (у 28 % штаммов). Ли-зоцимная, ДНК-азная и липолитическая активности выявлены у 30 %, 22 % и 44 % культур соответственно.
Микрофлора репродуктивного тракта мужчин с хронической гонореей обладала в среднем АЛА -2,0 ± 0,3 мкг/мл * ОП (77,8 % штаммов), АКА - 7,8 ± 1,2 анти- СН50 (443 % штаммов), а также гемолитической, ли-зоцимной, ДНК-азной, липо-литической активностями в
40,8 %, 39,7 %>, 28,4 % и 41,3 % случаев соответственно.
Частота встречаемости (%) микроорганизмов различных групп в эякуляте здоровых мужчин (а), больных свежей (б) и хронической (в) гонореей
а б в
Грибы рода Candida, выделенные из биоценозов 1, 2, 3 групп обследуемых лиц, проявляли антилизоцимную активность. Инактивация комплемента грибами наблюдалась в 73,4 %, липо-литическая активность - в 82,7 % случаев. Уровень факторов персистенции дрожжевых грибов достоверно не отличался у разных групп пациентов и в среднем составил для АЛА - 1,1 ± 0,09 мкг/мл * ОП, для АКА - 2,5 ± 0,9 анти-СН50.
Выделенные штаммы рода Candida проявляли также гемолитическую, лизоцимную и ДНК-азную активности (28,9 %, 17,2 %, 5,8 % соответственно). Следует отметить, что дрожжевые грибы, выделенные из эякулята больных хронической гонореей (3 группа), зачастую обладали двумя (56,8 % штаммов) и более факторами вирулентности и персистенции (31,8 % штаммов) по сравнению с изолятами грибов у пациентов других групп.
Обсуждение
Микрофлора репродуктивного тракта здоровых мужчин и мужчин с гонококковой инфекцией имеет существенные количественные и качественные отличия. Характер микробиоценоза значительно меняется и при переходе свежей формы инфекции в хроническую.
Полученные результаты свидетельствуют о доминировании в эякуляте здоровых мужчин грамположительной кокковой флоры с низким уровнем вирулентного и персистентного потенциала подтверждается данными других исследований [5, 14]. Отличия в исследуемых биоценозах пациентов со свежей гонореей выраже-
ны в снижении уровня бактериоспермии и уменьшении видового разнообразия высеваемой микрофлоры по сравнению со здоровыми (рис.), что, возможно, связано с максимальным проявлением вирулентного потенциала специфического возбудителя в начальной стадии инфекционного процесса [2].
Микрофлора эякулята мужчин с хронической гонореей характеризовалась видовым разнообразием (в том числе облигатно-анаэробного звена), повышением уровня бактериоспер-мии и степени высеваемости дрожжеподобных грибов, а также усилением их вирулентных и персистентных свойств. Одной из причин селекции высеваемых штаммов мог послужить ятро-генный фактор - нерациональная или неквалифицированная антибиотикотерапия [7]. Вместе с тем следует отметить, что наличие в микробиоценозе микроорганизмов-ассоциантов, выступающих в роли синергистов, может усиливать успешность колонизации слизистой патогенными нейссериями и способствовать их пер-систенции. С этой точки зрения представляют интерес дрожжеподобные грибы, которые, как известно [8, 9], могут повышать персистентные свойства энтеробактерий, деградировать белки - бактериоцины нормальной микрофлоры и иммуноглобулины слизистых, создавая предпосылки к развитию гонококковой инфекции. Симбиотическая связь между гонококком и грибами рода Candida может облегчать реализацию патогенетических механизмов взаимодействия специфического возбудителя с макроорганизмом и способствовать хронизации процесса.
Список использованной литературы:
1. Абуауев Н.К. Оценка состояния антибактериальной защиты организма у мужчин с инфекционно-воспалительными заболеваниями мочеполовых органов/Н.К. Абуауев//Вестн.дерм.и венер. - 2001. - №4. - С.35-38.
2. Бенжамин А. Изменение чувствительности Neisseria gonorrhoeae в зависимости от факторов микро- и макроорганизма: Автореф.дис... канд. биол. Наук /А. Бенжамин; Алматинск. гос. мед. ин-т., Алматы, 1995. - 21 с.
3. Борисов С.Д. Смешанная урогенитальная инфекция в контексте проблемы сохранения репродуктивного здоровья населе-ния/С.Д. Борисов, Д.Г. Дерябин, А.А. Минаков, С.В. Михайленко, А.М. Окшин, И.А. Лапина//Среда обитания и здоровье населения: Материалы Всероссийской научно-практической конференции/под ред. В.М. Боева, А.А. Стадникова. - Оренбург, 2001. - Т. 1. - С.73-76.
4. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. - М.: Медицина, 1999. - 367 с.
5. Бухарин О.В. Характеристики изменений в микробиоценозе у пациентов с хроническим неспецифичным уретритом/О.В. Бухарин, Ю.В. Иванов, М.Д. Кузьмин, С.В. Михайленко//Журн.микробиол., эпидемиол, иммунол. - 2001. - №4. - С.86-90.
6. Калинина С.Н. Роль заболеваний, передающихся половым путем, в бесплодном браке/С.Н. Калинина, О.Л. Тиктинский, В.В. Михайличенко//Урол. и нефр. - 1997. - №1. - С.37-39.
7. Кисина В.И. Лечение гонорейной и хламидийной инфекций препаратами различных фармакологических групп/В.И. Киси-на, О.В. Дорохина, Г.Л. Колиева, Е.Ю. Каншиева//Вестн.дерматол. и венерол. - 2003. - №5. - С.8-16.
8. Перунова Н.Б. Характеристика биологических свойств микроорганизмов в бактериально-грибковых ассоциациях кишечника: Автореф. дис... канд. мед. наук /Н.Б. Перунова; Оренбургск. гос. мед. акад., Оренбург, 2003. - 25 с.
9. Реброва Р.Н. Грибы рода Candida при заболеваниях негрибковой этиологии. - М.: Медицина. 1989. - 123 с.
10. Скрипкин Ю.К. Болезни, передающиеся при половых контактах /Ю.К. Скрипкин, Г.Я. Шарапова, Г.Д. Селисский - Л.: Медицина, 1985. - 286 с.
11. Fetners K. Is bacterial vaginosis a sexually transmitted infection//Sex. Transm.Infect. - 2001. - V. 77, №5. - P.390.
12. Kanahara M. Asymptomatic inflammatory prostatitis/M. Kanahara, T. Kitagana, M. Nakagana//Nippon. Rinsho. - 2002. -V. 60, №11. - P. 452-455.
13. Keane F.E. An association between nongonococcal urethritis and bacterial vaginosis and the implications for patients and their seхual partners/ F.E. Keane, B.I. Thomas, L. Whitaker et al.//Genitourin. Med. - 1997. - V. 73, №5. - P. 373-377.
14. Kunin C.M. The antimicrobial defense mechanism of the female urethra: a reassessment/C.M. Kunin, C. Evans, D. Bartholomen, D.G. Bates//J.Urol. - 2002. - V.168, №2. - P. 413-419.
