CC BY
26
(Ші
&
ІлеШ, і
УДК 616 - 006.442:616 - 097] - 053.2 (571.61 - 25)
Г.А. Ермаков, Г.И. Чубенко
ПАРАМЕТРЫ КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА У ДЕТЕЙ АМУРСКОЙ ОБЛАСТИ, БОЛЬНЫХ ЛИМФОГРАНУЛЕМАТОЗОМ
Амурская государственная медицинская академия, г. Благовещенск
Гемобластозы достоверно преобладают в структуре детской онкологической патологии и в ряде регионов России составляют почти 50%. Так, по данным А.Г. Румянцева и соавт. (1996 г.), в г. Москве детские онкологические заболевания имеют следующую структуру: гемобластозы — 48,5 %, опухоли ЦНС — 19,8%, нейробластомы — 8,0%, опухоли почек — 6,5%, саркомы мягких тканей и костей — 2,4 и 4,6% соответственно. По данным ряда источников, лимфогранулематоз (Л ГМ) составляет около 14% среди лимфоидных нео-плазий, при этом чаще заболевают лица мужского пола [1,3, 4].
По результатам статистических данных последних десятилетий, отмечается увеличение заболеваемости детей ЛГМ как в целом по России, так и в Амурской области. В течение последних лет ЛГМ является вторым по частоте онкогематологическим заболеванием у детей Амурской области после острого лимфобластного лейкоза [2].
ЛГМ относится к злокачественным лимфомам и составляет 12-15% среди всех злокачественных заболеваний у детей [3]. Субстрат опухоли происходит из Т-зависимых участков лимфоидной ткани. В патогенезе заболевания придается большое значение нарастающему иммунодефициту. В связи с этим, исследование клеточного звена иммунной защиты представляется нам весьма актуальным [3].
Целью данного исследования явилась оценка изменений параметров клеточного звена иммунитета у детей Амурской области, больных лимфогранулематозом, на этапах терапии и в связи с гистологическим вариантом.
Материалы и методы
Исследование проводилось у 11 детей (3 девочки и 8 мальчиков) в возрасте от 9 до 18 лет с диагнозом “лимфогранулематоз” за период 2004-2006 гг., находящихся в отделении гематологии Амурской областной детской клинической больницы (г. Благовещенск). В качестве контроля использовались данные иммунологических исследований практически здоровых детей (п=10). Полихимиотерапия проводилась по протоколам АВУО и СОРР, количество курсов составляло 4-6. Материалом для исследования служила кровь пациентов.
Подсчет лейкоцитов и лейкоцитарной формулы проводился на гемоанализаторе “РЕЫТКА-бО”. Субпопуляции лимфоцитов определяли методом поверхностной непрямой иммунофлуоресценции с использованием коммерческих панелей моноклональных антител (МКА) ООО “Сорбент” (Регистрационное удостоверение М3 РФ № ФС 012а1104/2778-06).
Резюме
Целью данного исследования явилась оценка изменений параметров клеточного звена иммунитета у детей Амурской области, больных лимфогранулематозом, на этапах терапии и в связи с гистологическим вариантом.
Исследование проводилось у 11 детей в возрасте от 9 до 18 лет с диагнозом “лимфогранулематоз” за период 2004-2006 гг. Анализу были подвергнуты результаты гемограмм и иммунограмм.
Преобладающим гистологическим вариантом ЛГМ являлся смешанно-клеточный вариант, на втором месте ЛГМ с модулярным склерозом. Выявлены различия в показателях клеточного звена иммунитета у детей, больных ЛГМ, по сравнению со здоровыми детьми. Зарегистрированы различия иммунологических показателен у детей, больных ЛГМ, в зависимости от гистологического варианта данного заболевания.
G.A. Yermakov, G.I. Chubenko
PARAMETERS OF CELLULAR IMMUNITY OF CHILDREN WITH HODGKIN'S DISEASE OF THE AMUR REGION
Amur State Medical Academy, Blagoveschensk Summary
The aim of this study was to examine cellular immunity of children with Hodgkin's disease (HD) of the Amur region during the period 2004-2006 according to stage of therapy and histological type of HD.
11 children with de novo diagnosed HD, comprised test group. Hemograms and immunograms were examined.
Predominant histological type of Hodgkin's lymphomas (HL) of children was mixed cellular HL. Nodular sclerosis HL is a second histological type. We observed a significant increase in the mean level of leucocytes and lymphocytes counts in patients with HD when compared with normal controls. Tbere are parameters deviations in cellular immunity of children with different histological types of Hodgkin's disease in the Amur region.
Исследование включало в себя оценку клеточного звена иммунитета с определением числа лейкоцитов, лимфоцитов и субпопуляций лимфоцитов (СВЗ+,С019+,С04\СЬ8+,С016+,С025+) и подсчетом иммунорегуляторного индекса (ИРИ). Окрашенные клетки анализировали с помощью флуоресцентного микроскопа (рис. 1,2).
Количество антиген-позитивных клеток определяли как процент флуоресцирующих клеток при про-
Рис. 1. Лимфоциты, Рис. 2. “Ореол” лимфоцита
окрашенные МКА, при непрямой
конъюгированными с ФИТЦ иммунофлуоресценции
сматривании 200 лимфоцитов за вычетом процентов флуоресцирующих клеток, наблюдаемых в препарате отрицательного контроля. В качестве отрицательного контроля использовали препараты, подготовленные аналогичным образом, за исключением того, что вместо моноклональных антител клетки обрабатывали раствором Хенкса или нормальными иммуноглобулинами мыши.
Иммунологическое исследование проводилось в 3 этапа: 1) исследование на момент диагностики заболевания, п,-11;2) исследование на этапах полихимиотерапии, п2= 11;3) исследование в течение 1 мес. после завершения полихимиотерапии, п.,=11.
Кроме того, оценка иммунных параметров проводилась в связи с гистологическим вариантом ЛГМ. Статистическая обработка результатов осуществлялась с использованием программного комплекса 81аи$иса 6.0. При этом рассчитывались средние значения и доверительный интервал с использованием критерия (I) Стыодента.
Результаты и обсуждение
По морфологии наиболее распространенным гистологическим вариантом ЛГМ является нодулярный склероз (70%) [1, 3]. В результате наших исследований установлено, что у 63,6% (п=7) обследованных детей имел место смешанно-клеточный вариант ЛГМ, и лишь 36,3% (п=4) обследованных имели гистологический вариант, обозначаемый как нодулярный склероз. Гистологических вариантов ЛГМ с лимфоидным преобладанием и лимфоидным истощением в нашем исследовании не зафиксировано.
Стадийность заболевания определяется распространенностью поражений среди одной или нескольких групп лимфоузлов, наличием внелимфатических очагов.
В результате исследования выявлены различия иммунологических показателей у детей, больных ЛГМ (табл. 1), а также при различных гистологических вариантах ЛГМ (табл. 2). На момент диагностики заболевания у детей отмечались повышение лейкоцитов более чем в 1,5 раза, а также абсолютный лимфоцитоз в сравнении с контрольной группой условно здоровых детей Амурской области, На втором этапе исследования эти показатели существенно снижались: лейкоци-тыдо1,8±0,1 10н/л, лимфоциты до 0,75±0,02 109/л,по завершении курсов химиотерапии отмечался незначительный лимфоцитоз, лейкоциты восстанавливались до границ нормы.
Таблица 1
Динамика показателей клеточного звена иммунитета у детей Амурской области на этапах лечения в сравнении со здоровыми детьми
Показатель Контроль I этап II этап III этан
Лейкоциты, 10!1/л 6,0±0,26 9,6±0,3 1,8±0,1 6,0±0,1
Лимфоциты, % 39,5±0,07 54,69±1,12 57,22±2,0 70,0±2,1
Лимфоциты, 10"/л 3,5±0,3 5,25+0,4 0,75±0,04 4,2±0,3
(СОЗ+) Т-лимфоциты, % 71,0+1,0 29,14+1,1 19,43±0,8 20,24±0,8
(СОЗ+) Т-лимфоциты Юул 1,7±0,06 1,53+0,03 0,34+0,02 0,85+0,06
(С019+) В-лимфоциты, % 12,5±!,0 7,62+1,0 4,57±0,7 5,71 ±0,7
(С019+) В-лимфоциты, 109/л 0,4±0,02 0,4±0,02 0,08+0,003 0,24±0,03
(Сй4+) Т-хелперы, % 37,0±0,8 47,65±1,1 42,35±1,5 42,35± 1,2
(С04+) Т-хелиеры 10'1/л 0,9+0,04 0,73±0,03 0,14±0,01 0,36±0,02
(С08+) Т-супрес-соры /цтл, % 31,0±0,8 40,69±0,9 88,24±2,1 79,4±1,8
(С08+)Т-супрее-соры /цтл 10'Ул 0,75±0,03 0,62±0,03 0,3±0,01 0,68±0,05
(СШ6+) КК-клеткн, % 12,5± 1,3 49,02±1,1 44,12±1,3 44,12±1,4
(СО 16+) КК-клеткн 10'1/л 0,25+0,01 0,75+0,02 0,15±0,01 0,38+0,02
ИРИ (СБ4+/С08+) 1,25+0,1 1,17+0,06 0,48±0,04 0,53±0,03
Таблица 2
Параметры клеточного звена иммунитета при гистологических вариантах ЛГМ в сравнении со здоровыми детьми
Показатель Конт- роль ЛГМ (нодулярный склероз) ЛГМ (смешанно-клеточный вариант)
(СОЗ+) Т-лимфоциты, 109/л 1,7 ±0,06 1,2 ±0,06 0,21 ±0,02 0,85 ±0,02 1,8 ±0,03 0,34 ±0,05 1,2 ±0,08
(С019+) В-лимфоцнты, ЮУл 0,4 ±0,02 0,8 ±0,03 0,12 ±0,01 0,6 ±0,02 0,4 ±0,03 0,08 +0,03 0,24 ±0,02
(СЭ4+) Т-хелперы, ЮУл 0,9 ±0,04 0,73 ±0,06 0,14 ±0,01 0,36 ±0,01 1,1 ±0,02 0,14 ±0,01 0,6 ±0,01
(СР8+) Т-супрессоры, ЮУл 0,75 ±0,03 0,62 ±0,02 0,3 ±0,02 0,68 ±0,02 0,7 ±0,04 0,3 +0,01 0,68 ±0,02
(С016+) ХК-клстки ЮУл 0,25 ±0,01 0,5 ±0,02 0,12 ±0,01 0,4 ±0,01 0,8 ±0,02 0,15 ±0,01 0,5 ±0,01
ИРИ (СО4+/С08+) 1,25 1,18 0,47 0,53 1,57 0,47 0,88
(СИ25+) Акт. Т-,В- лимф, % 4,0 ±2 2,4 ±0,07 2,1 ±0,05 2,1 ±0,04 4,1 ±0,08 3,1 ±0.12 3,0 ±0,23
Т:В соотношение 4,25 1,50 1,75 1.42 4,50 4,25 5,00
Анализируя популяционный состав лимфоцитов у детей на этапе диагностики, отмечено снижение СБЗ+, СП4', С08' фракций лимфоцитов, что подтверждается исследованиями авторов. Популяция В- лимфоцитов (С019+) практически не страдала. Отмечено трехкратное увеличение популяции натуральных
киллеров. Последующее закономерное снижение абсолютных показателей всех популяций и субпопуляций лимфоцитов на этапах полихимиотерапии обусловлено агрессивным действием химиопрепаратов на все ростки кроветворения, в том числе и на лимфоидный росток.
В течение первого месяца после завершения ПХТ не наступало полного восстановления абсолютных показателей популяционного состава лимфоцитов, за исключением CD8+ лимфоцитов (супрессоры / ци-тотоксические лимфоциты) и натуральных киллеров.
Нами отмечен тот факт, что во время проведения химиотерапии иммунорехуляторный индекс — соотношение CD4+/CD8+ лимфоцитов — было ниже единицы, хотя на момент диагностики заболевания данный параметр находился на уровне нижней границы нормы. Таким образом, CD8+ лимфоциты менее, чем CD4+, подвержены действию химиопрепаратов при терапии ЛГМ у детей.
Проводя оценку параметров клеточного звена иммунитета у детей с ЛГМ, имеющим разные гистологические варианты, нами установлено следующее. Имеются различия иммунологических показателей при ЛГМ с нодулярным склерозом и ЛГМ со смешанно-клеточным гистологическим вариантом. Во время всех трех этапов исследования отмечены достоверно высокие показатели CD3+ (Т-лимфоцитов) в основном за счет увеличения С04+-лимфоцитов-хелперов и, в меньшей степени, за счет CD8+- лимфоцитов при смешанно-клеточном варианте ЛГМ. Кроме того при смешанно-клеточном гистологическом варианте ЛГМ показатели В- лимфоцитов ниже, чем при ЛГМ с нодулярным склерозом — 0,4±0,03 109/л и 0,8±0,03 109/л соответственно. Этим обусловлено высокое соотношение Т: В лимфоцитов — 4,50±0,09 при данном гистологическом варианте. При ЛГМ с нодулярным склерозом соотношение Т : В лимфоцитов приближалось к единице— 1,50±0,06.
Субпопуляция CD25* (активированных) Т- и В-лимфоцитов преобладала при смешанно-клеточном варианте ЛГМ, превышая соответствующие показатели у детей, страдающих ЛГМ с нодулярным склерозом, почти в два раза на всех этапах исследования.
Выводы
Таким образом, в ходе проведенного исследования нами установлено;
1. Преобладающим гистологическим вариантом ЛГМ в течение 2004-2006 гг. у детей Амурской области являлся смешанно-клеточный вариант.
2. Различия в показателях клеточного звена иммунитета у детей Амурского региона, больных ЛГМ, по сравнению со здоровыми, проявлялись в выраженном лейко- и лимфоцктозе, снижении CD3+, CD4+, CD8+-субпопуляций лимфоцитов и трехкратном увеличении натуральных киллеров.
3. В ходе лечения CD8+ лимфоциты менее, чем CD4, подвержены действию химиопрепаратов при терапии ЛГМ у детей.
4. Зарегистрированы различия иммунологических показателей у детей Амурского региона, больных ЛГМ, в зависимости от гистологического варианта данного заболевания.
Литература
1. Блинова Н.Н., Веснина А.Г, Пучкова Ю.Г. Диагностика злокачественных опухолей при диспансеризации населения. СПб., 1994. 224 с.
2. Ермаков Г. А. // Молодежь 21 века, шаг в будущее: Мат-лы VI регион, науч.-практ. конф. Благовещенск, 2005. С. 64-65.
3. Кобец Т.В., Бассалыго Г.А. Курс лекций по детской гематологии. Симферополь, 2000.77. с.
4. Румянцев А.Г., Владимирская Е.Б. // Гематология и трансфузиолошя. 1996. №2. С. 3-7.
□ □□
