Оценка связи экспрессии рецепторов стероидных гормонов методом ОТ-ПЦР с уровнем пролиферации и апоптоза в ткани рака молочной железы

Троценко Иван Дмитриевич; Рожкова Надежда Ивановна; Харченко Наталья Владимировна; Кудинова Елена Александровна; Запиров Гаджимурад Магомедович; Боженко Владимир Константинович

Перейти в содержание Вестника РНЦРР МЗ РФ N12.

Текущий раздел: Молекулярная медицина

Оценка связи экспрессии рецепторов стероидных гормонов методом ОТ-ПЦР с уровнем пролиферации и апоптоза в ткани рака молочной железы.

Троценко И.Д.2,, Рожкова Н.В.1, Харченко Н.В.2, Кудинова Е.А.1, Запиров Г.М.2, Боженко В.К.1

1 - ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздравсоцразвития России

2 - кафедра онкологии и рентгенорадиологии РУДН

Адрес документа для ссылки: http://vestnik.rncrr.ru/vestnik/v12/papers/trots1_v12.htm Статья опубликована 29 июня 2012 года.

Сведения об авторах:

Рабочий адрес: 117997, Москва, ГСП-7, ул. Профсоюзная, д. 86, ФГБУ «РНЦРР» Рожкова Надежда Ивановна - д.м.н., проф., зам. директора по научной работе ФГБУ РНЦРР

Кудинова Елена Александровна - к.м.н., зав. клинико-диагностической лабораторией ФГБУ РНЦРР, e-mail: ekudinova@mail.ru

Боженко Владимир Константинович - д.м.н., проф., руководитель клиникодиагностической лаборатории ФГБУ РНЦРР, моб.тел. +7(903)7996484, e-mail: vbojenko@mail.ru

Рабочий адрес: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая ул., 6, г. ФГБУ РУДН Троценко Иван Дмитриевич - аспирант кафедры онкологии и рентгенорадиологии РУДН, 117198, 89035101359, e-mail: trotsenkoivan@mail.ru Харченко Наталья Владимировна - д.м.н., проф., зав. кафедрой онкологии и рентгенорадиологии РУДН, nkharchenko@mail.ru

Запиров Гаджимурад Магомедович - к.м.н., доц. онкологии и рентгенорадиологии РУДН, e-mail: zapirov@mail.ru

Контактное лицо:

Троценко Иван Дмитриевич, +7(903)510-1359, e-mail: trotsenkoivan@mail.ru

Резюме

В проведенном исследовании установлено, что в ткани рака молочной железы экспрессия мРНК рецепторов эстрогена и прогестерона может как повышаться, так и снижаться относительно значений окружающей морфологически неизмененной ткани. Повышение экспрессии мРНК рецептора прогестерона отмечается в опухолях с пониженной пролиферативной и антиапоптотической активностью.

Ключевые слова: экспрессия, рецепторы стероидных гормонов, прогестерон, ОТ-ПЦР

Investigation of estrogen and progesterone receptors expression estimated by RT-PCR connection with proliferation and apoptotic activity in breast cancer tissue.

Trotsenko I.D.2, Rozhkova N.I.1, Kharchenko N.V2, Kudinova E.A.1, Zapirov G.M.2, Bojenko V.K.1

1 - Federal State Budget Establishment Russian Scientific Center of Roentgenoradiology (RSCRR) of Ministry of Health and Social Development of Russian Federation, Moscow

2 - Oncology department of People Friendship University of Russia

Resume

Expression of estrogen and progesterone receptors mRNA in breast cancer tissue may either rise or fall as compared to surrounding morphologically intact tissue. Increased expression of progesterone receptor mRNA observed in tumors with low proliferative and antiapoptotic activity.

Key words: expression, steroid receptors, progesterone, RT-PCR

Оглавление:

Введение

Материалы и методы Обсуждение Заключение Список литературы

Введение

Рак молочной железы является наиболее распространенным заболеванием в женской популяции. Прогноз на ранних стадиях заболевания (I-II стадия) благоприятный. Классическими факторами прогноза традиционно считаются: размер опухоли, наличие регионарных метастазов, степень злокачественности опухоли и т.д. [5]. Также

традиционным является определение экспрессии рецепторов стеродных гормонов (эстрогена и прогестерона) [9] и эпидермального фактора роста (HER2/neu) и других маркеров дифференцировки [1] с использованием методов иммуногистохимического

анализа [2], которые имеют не только прогностическое значение, но и определяют выбор адьювантной терапии [6].

В клинической практике повышение экспрессии рецепторов эстрогена по данным иммуногистохимического исследования определяет показания для назначения адьювантной гормонотерапии [8, 4], а оценка экспрессии прогестерона имеет

дополнительное значение [3] как маркер активности гормонопосредованных молекулярных каскадов в злокачественной клетке [10].

В настоящем исследовании мы обнаружили, что при сравнении экспрессии мРНК рецепторов стероидных гормонов в клетках рака молочной железы ее уровень может не только повышаться, но и снижаться относительно значений в морфологически неизмененной ткани. Мы сравнили активность процессов пролиферации и апоптоза в зависимости от направленности изменения экспрессии мРНК рецепторов стероидных гормонов в ткани опухоли.

Перейти в оглавление статьи >>>

Материалы и методы:

Всего было исследовано 74 образца ткани молочной железы, из них 37 образцов рака молочной железы (РМЖ) I-II стадии и 37 образцов морфологически неизмененной ткани молочной железы в качестве контрольной группы. В группу больных раком молочной железы вошли больные в возрасте от 36 до 87 лет, средний возраст составил 57,2±11,6 лет. По гистологическому строению в 63% случаев опухоль представляла собой инфильтративный протоковый рак. Регионарные метастазы отсутствовали в 81% случаях.

В исследовании проводилась оценка экспрессии генов контроля пролиферации (KI67, STK15, CCNB1), апоптоза (BCL2,BIRC5, TERT), а также рецепторов эстрогена-альфа (ESR), прогестерона-А (PGR) и HER2/neu в образцах рака молочной железы и морфологически неизмененной ткани тех же больных. Выделение РНК проводили согласно инструкции с помощью наборов реагентов RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, USA). Реакцию обратной транскрипции и определения уровня экспрессии проводили, используя наборы НПО «ДНК Технология» согласно инструкции. Уровень экспрессии генов определялся в относительных единицах по сравнению с уровнем экспрессии референсных генов, которыми в исследовании являлись GUSB, B2M, HPRT, TBP и ABL.

Статистическую обработку результатов исследования проводили в программе StatSoft Statistica 6.0 с использованием методов непараметрического анализа. В таблице ниже представлены основные клинико-морфологические характеристики больных РМЖ.

Таблица 1. Клинико-морфологическая характеристика исследуемых групп

Средний возраст больных 57 лет

Т

Т1 18 48,6%

Т2 17 45,9%

Т3 2 5,4%

N

Нет (N0) 30 81,08%

Есть (N1) 8 18,98%

Экспрессия рецепторов эстрогена

Есть 26 70,3%

Нет 11 29,7%

Экспрессия рецепторов прогестерона

Есть 23 63,2%

Нет 14 37,8%

Перейти в оглавление статьи >>>

Результаты

Повышение экспрессии мРНК рецепторов эстрогена в образцах РМЖ относительно морфологически неизмененной ткани наблюдалось в 64,8%, повышение экспрессии мРНК рецепторов прогестерона в 54% случаев. При сравнении экспрессии мРНК генов-маркеров пролиферации и апоптоза в зависимости от направленности экспрессии мРНК рецепторов эстрогена в ткани опухоли статистически значимых отличий получено не было. По результатам сравнительного анализа экспрессии генов-маркеров пролиферации и апоптоза в зависимости от направленности экспрессии мРНК рецепторов прогестерона отмечено статистически значимое снижение экспрессии маркеров пролиферации Ш67, CCNB1, STK15, а также антиапоптотической (снижение экспрессии BIRC5, TERT) активности в клетках опухоли.

Таблица 2. Сравнительный анализ экспрессии генов в зависимости от уровня экспрессии рецепторов прогестерона, оцениваемого по данным ОТ-ПЦР.

Среднее Среднее п п Ст.О. Ст.О.

P

PGR- PGR+ PGR- PGR+

KI67 56,4 155,97 0,00037* 20 17 45,4 102,1

STK15 120,6 327,17 0,03347* 20 17 96,8 404,8

CCNB1 27,5 60,11 0,00511* 20 17 14,5 46,3

BCL2 50,1 27,64 0,02675* 20 17 30,1 28,6

BIRC5 50,1 131,13 0,00081* 20 17 40,9 88,7

TERT 11,8 48,94 0,080212 16 12 7,9 81,7

ESR 516,2 148,83 0,00750* 20 17 498,6 203,8

PRG 6440,6 740,50 0,00030* 20 17 5780,2 1018,5

HER-2/neu 16,9 52,69 0,062147 20 17 12,8 82,2

PGR+ обозначены образцы, в которых экспрессия мРНК PGR в ткани РМЖ выше по сравнению со значениями в морфологически неизмененной ткани; PGR-, соответственно, образцы РМЖ, в которых уровень экспрессии ниже, чем морфологически неизмененной ткани. *-отмечены значения Р<0,05.

Перейти в оглавление статьи >>>

Обсуждение

В проведенном исследовании мы установили, что изменения направления экспрессии мРНК рецепторов прогестерона позволяет дифференцировать опухоли с пониженной пролиферативной и антиапоптотической активностью. ОТ-ПЦР оценка направления изменения экспрессии рецепторов прогестерона позволила в образцах РМЖ I-II стадии выделить подгруппы, в которых отмечалось повышение (в случае снижения экспрессии мРНК прогестерона относительно уровня морфологически неизмененной ткани) или снижение (в случае повышения экспрессии мРНК прогестерона относительно уровня морфологически неизмененной ткани) экспрессии генов, обладающих пролиферативной и антиапоптотической активностью, что может свидетельствовать о различной биологической природе этих опухолей. При сравнении экспрессии генов-маркеров пролиферации и апоптоза относительно изменения направления экспрессии мРНК рецепторов эстрогена подобных закономерностей отмечено не было. Возможно, данные отличия могут объяснить относительно больший прогностический вес экспрессии рецепторов прогестерона по сравнению с эстрогеном, наблюдаемый в ряде исследований [7]. Для определения прогностической ценности данных закономерностей необходимо проведение дополнительных исследований.

Перейти в оглавление статьи >>>

Заключение

Направление изменения уровня гормонов в ткани опухоли относительно

неизмененной ткани молочной железы может быть использовано в качестве маркера

низкой пролиферативной и антиапоптотической активности злокачественной опухоли.

Работа проводилась при финансовой поддержке Министерства образования и науки

Российской Федерации ГК№16.512.11.2095

Перейти в оглавление статьи >>>

Список литературы:

1. Боженко В.К.., Кудинова Е.А.., Мельникова Н.В., Близнюков О.П. Анализ пролиферативной активности и апоптоза при гиперпластических процессах молочной железы//Вестник РНЦРР, 2010, Т. 10, URL:

http://www.vestnik.rncrr.ru/vestnik/v10/papers/bozhe1_v10.htm (дата обращения 18.06.2012)

2. Burnett R. Guichard Y., Barale E. Immunohistochemistry for light microscopy in safety evaluation of therapeutic agents: an overview//Toxicology, 1997, V. 119, P. 83-93.

3. Cianfrocca M., Goldstein L.J. Prognostic and predictive factors in early-stage breast cancer.// Oncologist, 2004, V. 9, P. 606-616.

4. Donegan W.L. Prognostic factors. Stage and receptor status in breast cancer.//Cancer 1992, V. 70, P. 1755-1764.

5. Fisher B., Redmond C., Fisher E.R., Caplan R. Relative worth of estrogen or progesterone receptor and pathologic characteristics of differentiation as indicators of prognosis in node negative breast cancer patients: findings from National Surgical Adjuvant Breast and Bowel Project Protocol B-06.//J. Clin. Oncol., 1988, V. 6, P. 10761087.

6. Francisco J., Esteva Gabriel N., Hortobagyi. Prognostic molecular markers in early breast cancer// Breast Cancer Res., 2004, V. 6, P. 109-118.

7. J. Salmen P. G. M., Hepp, J. K., JueckstockM. Interaction of the progesterone receptor expression with other prognostic factors in primary breast cancer// J. Clin. Oncol. 2011,

V. 29, P. 65-75.

8. Lethaby A.E., Mason B.H., Harvey V.J., Holdaway I.M. Survival of women with node negative breast cancer in the Auckland region.//N. Z. Med. J., 1996, V. 109, P. 330-333.

9. Parl F.F., Schmidt B.P., Dupont W.D., Wagner R.K. Prognostic significance of estrogen receptor status in breast cancer in relation to tumor stage, axillary node metastasis, and histopathologic grading.//Cancer 1984, V. 54, P. 2237-2242.

10. S. K. Mohsin, H. Weiss, T. Havighurst. Progesterone receptor by immunohistochemistry and clinical outcome in breast cancer: a validation study// Modern Pathology, 2004, V.

17, P. 1545-1554.

Перейти в оглавление статьи >>>