CC BY
32УДК 575.1: 618.39-021.3
Н. Г. Седляр, И. Б. Моссэ, Л. А. Кундас, А. Л. Гончар, М. Д. Амельянович
ОЦЕНКА РИСКА НЕВЫНАШИВАНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ НА ОСНОВЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
Государственное научное учреждение «Институт генетики и цитологии Национальной академии наук Беларуси» Республика Беларусь, 220072, г. Минск, ул. Академическая, 27 e-mail: [email protected]
Исследована ассоциация 31 полиморфного варианта генов систем гемостаза, регуляции артериального давления, ангиогенеза и фолатного цикла с невынашиванием беременности. В исследовании приняло участие 2938 женщин с невыясненными причинами невынашивания беременности и 646 женщин без патологий беременности. Определены частоты генотипов изученных полиморфных вариантов генов, проведено сравнение частот аллельных вариантов между группой пациенток и контрольной группой. В ходе поиска комбинаций генов риска выявлено 11 комплексов генов, ассоциированных с невынашиванием беременности, которые позволят оценить уровень риска и дадут возможность врачам назначить соответствующую терапию, в результате которой беременность сохранится вплоть до успешных родов, что имеет огромное и социальное, и экономическое значение, а также позволит улучшить демографическую ситуацию в стране.
Ключевые слова: невынашивание беременности, генетическое тестирование, ПЦР, ангиогенез, фолатный цикл, гемостаз, оценка риска, профилактика.
Введение
Известно, что наличие генетической предрасположенности к невынашиванию беременности сопряжено с нарушениями в системе фибринолиза, что часто приводит к нарушению процесса прикрепления плода и, как следствие, раннему прерыванию беременности [1]. Генетические нарушения системы гемостаза часто проявляются только при дополнительных условиях, одним из которых является беременность. При этом обычная коагулограмма дает результаты без отклонений, но при развитии беременности проявляются генетически заложенные свойства организма — образуются микротромбы в плаценте, и беременность прерывается.
На сегодняшний день существует большое количество данных, подтверждающих роль полиморфизма тромбофилических факторов в развитии гестационных осложнений, в том числе и невынашивания [1, 2]. В то же время полиморфизм генов других генетических систем (гены системы регуляции артериального давления, ангиогенеза, фолатного цикла) может не принимать непосредственного участия в патогенезе привычного невынашивания беременности, однако оказывать косвенное, хотя и не менее значи-
мое, влияние на предрасположенность к формированию патологического симптомокомплекса. В связи с этим целесообразность исследования генов различных систем, ассоциированных с процессами беременности, у женщин с привычными выкидышами является несомненно актуальной, поскольку выявление высокого генетического риска потери беременности позволяет врачам назначать соответствующую терапию, в результате которой беременность сохраняется вплоть до успешных родов.
Большое значение в формировании генетического риска потери беременности имеет не только носительство отдельных аллелей риска, но и их взаимодействие друг с другом. В связи с этим совершенно очевидна необходимость исследований комплексов генов, которые могут расширить представления о вкладе генетического полиморфизма в патогенез беременности. Это обеспечит новый подход к диагностике данной патологии, более корректное определение уровня генетического риска репродуктивных потерь, а также эффективную профилактику патологии и соответствующее ведение беременности у женщин с высоким генетическим риском потери беременности.
Материалы и методы
В ходе анализа опубликованных результатов исследований зарубежных и отечественных авторов были отобраны гены-кандидаты, ассоциированные с процессами развития беременности. К ним относятся гены белков системы гемостаза, тромбоцитарных рецепторов, белков, вовлеченных в патогенез эндотелиальной дисфункции, а также белков, принимающих участие в регуляции артериального давления и ростовых факторов. Особое внимание уделено
информации о полиморфизмах генов коагуля-ционного каскада.
Нами отобраны наиболее информативные полиморфные варианты генов в количестве 31 шт. (гены системы гемостаза, системы регуляции артериального давления, системы ангиогенеза, системы фолатного цикла), которые могут использоваться в качестве маркеров предрасположенности к невынашиванию беременности, составлена панель генов (табл. 1).
Таблица 1
Панель генов для тестирования генетического риска невынашивания беременности
№ пп. Название гена Полиморфный вариант Полное название гена Источник
Гены системы гемостаза
1 FI ТИг312А1а ген а-цепи фибриногена I фактора свертывания крови 6050 [3-5]
2 FII G20210А мутация G20210А гена II фактора свертывания крови (протромбина) 1799963 [6, 7]
3 КГ G1691A мутация гена V фактора свертывания крови (Лейденская мутация) 6025
4 КХШ Val34Leu ген XIII фактора свертывания крови 5985 [8, 9]
5 КХ1 С/Т ген XI фактора свертывания крови 2289252 [10, 11]
6 КХ1 Т/С 2036914
7 КGG С10034Т ген гамма-цепи фибриногена 2066865 [12, 13]
8 1ША2 ^Р1а) С807Т ген белка интегрин альфа-2 1126643 [14]
9 1тВ3 ^рШа) Т1565С (Ь33Р) ген белка интегрин бета-3 5918 [15]
10 Gp6 в/Т ген рецептора гликопротеина VI 1671153 [16, 17]
11 Gp6 А/в 1654419
12 Gp6 А/в 1613662
13 GP1BA С/Т ген тромбоцитарного гликопротеина !Ь 2243093 [18, 19]
Гены системы регуляции артериального давления
14 АСЕ А1и 1шЮе1 ген ангиотензин-превращающего фермента 4646994 [20, 21]
15 еЫОБ 4а/4Ь ген эндотелиальной синтазы окиси азота 61722009 [22, 23]
16 еЫОБ G894T 1799983 [24]
17 PPARG Рго12А1а ген гамма-рецептора, активируемого пролифератором пероксисом 1801282 [25, 26]
18 PPARGC1A G1564A ген коактиватора ядерных рецепторов генов семейства PPAR 8192678 [26, 27]
19 PPARD +294Т/С ген ядерных рецепторов типа дельта, активирующих пролиферацию пероксисом 2016520 [26, 28]
20 РРАМ G2528C 4253778 [26]
Продолжение таблицы 1
№ пп. Название гена Полиморфный вариант Полное название гена rs Источник
21 AGTR1 А1166С ген сосудистого рецептора I типа ангиотензина-2 5186 [29, 30]
22 BDKRB2 I/D ген рецептора брадикинина Р2 5810761 [31]
23 APOE Cys112Arg + Arg158Cys ген аполипопротеина Е 429358 + 7412 [32-34]
Гены системы ангиогенеза
24 PAI-1 4G/5G ген ингибитора активатора плазминогена 1799889 [21]
25 VEGF G634C ген фактора роста эндотелия сосудов 2010963 [35]
26 HIF1A С1772Т ген фактора, индуцируемого гипоксией 11549465 [36]
27 EPO G3876T ген рецептора эритропоэтина 1617640 [37]
28 CYBA C/T ген цитохрома Ь 4673 [38]
Гены системы фолатного цикла
29 MTHFR С677Т ген метилентетрагидрофолатредуктазы 1801133 [39, 40]
30 MTHFR А1298С 1801131
31 MTR A2756G ген метионинсинтазы 1805087 [40, 41]
Проведено генотипирование 2938 женщин с невыясненными причинами невынашивания беременности (2 и более потерянные беременности, нет детей), которые составили группу пациенток, и 646 женщин без патологий беременности, имеющих не менее двух благополучно выношенных и рожденных детей, — группа контроля. От каждого человека получено информированное добровольное согласие на участие в исследовании.
В качестве биологического материала для исследования использовали ДНК, выделенную из клеток буккального эпителия или лейкоцитов периферической крови. Концентрацию образцов ДНК измеряли с помощью флюори-метра Qubit (Invintrogen, USA).
Для идентификации полиморфных вариантов использовалась амплификация специфических последовательностей ДНК методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени или с разделением продуктов в полиакриламидном геле.
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью F-критерия Фишера в среде R. Оценку влияния полиморфных вариантов на риск развития заболевания проводили с помощью отношения шансов (OR). Результаты анализа считали статистически
значимыми при уровне р < 0,05. Характер распределения наблюдаемых частот генотипов в популяции оценивали на соответствие уравнению Харди-Вайнберга.
При сравнении количества факторов риска невынашивания беременности в генотипах пациенток и в генотипах женщин контрольной группы проводилась проверка нулевой гипотезы с помощью теста Манна-Уитни для независимых выборок.
Для поиска комплексов генов, связанных с развитием невынашивания беременности, были проанализированы все возможные комбинации из 31 гена по парам, триплетам и квартетам (табл. 2).
При этом 30 генов из 31 отобранных были представлены максимум тремя аллельны-ми вариантами, а один (АРОЕ Cys112Arg + Arg158Cys) — девятью вариантами. В сумме выявлено 99 аллельных вариантов генов, комбинации между которыми следует проанализировать по парам, триплетам и квартетам (табл. 3).
С целью автоматизации процесса поиска комплексов была разработана специальная компьютерная программа, которая позволила значительно сократить время на поиск сочетаний факторов риска. Программа составляла
комбинации из двух, трех и четырех генов, для каждой из которых подбирались все возможные аллельные варианты. Затем для каждой аллельной комбинации подсчитывались частоты ее встречаемости в контрольной группе и в группе пациенток. Пример такой таблицы со случайными данными представлен ниже (табл. 4).
Для каждой аллельной комбинации строилась таблица 2х2, где в первой строке частоты встречаемости данной комбинации в группе
пациенток и в контрольной группе, а во второй строке — сумма частот встречаемости остальных комбинаций в этих же группах (табл. 5).
Построенная таблица 2х2 анализировалась с помощью F-критерия Фишера, рассчитывалось значение р и ОК Предварительно исключались из анализа те аллельные комбинации, которые состояли из аллельных вариантов, не ассоциированных с риском невынашивания беременности. Аналогичным образом проводился поиск комплексов из трех и четырех генов.
Таблица 2
Количество возможных комбинаций 2-4 из 31 гена в зависимости от размерности модели
Размерность модели, предикторов Количество возможных комбинаций, штук
2 465
3 4495
4 31 465
Размерность модели, предикторов Количество возможных комбинаций, штук
2 4851
3 156 849
4 3 764 376
Таблица 4
Пример построения таблицы со всеми возможными аллельными комбинациями для пары
генов АСЕ + Г5
АСЕ К5 Частота встречаемости, раз
Аллельная комбинация Пациентки Контрольная группа
II + GG 5 23
II + GA 0 0
II + АА 0 0
Ю + GG 12 3
Ю + GA 4 1
Ю + АА 0 0
DD + GG 8 5
DD + GA 3 0
DD + АА 0 0
Сумма 32 32
Таблица 3
Количество возможных комбинаций 2-4 из 99 аллельных вариантов генов в зависимости от
размерности модели
Таблица 5
Пример построения таблицы 2х2 для аллельной комбинации II + GG генной комбинации
АСЕ + Г5
Аллельная комбинация Аллельные варианты
Пациентки Контрольная группа
II + GG 5 23
Другие комбинации 27 9
Результаты и обсуждение
Проведено генотипирование отобранных образцов ДНК в группе пациенток и контрольной группе согласно разработанной панели генов. Определены частоты генотипов изученных полиморфных вариантов генов, проведено сравнение частот аллельных вариантов между группой пациенток и контрольной группой.
При анализе частот генов системы гемостаза выявлено статистически значимое превышение частот лишь двух полиморфизмов из 13 проанализированных в группе пациенток по сравнению с контрольной группой (табл. 6). По нашим данным наличие аллельного варианта T/C полиморфного варианта T/C (rs5918) гена ITGB3 в генотипе статистически значимо (p = 0,031) увеличивает риск невынашивания беременности в 1,7 раз (OR = 1,7; 95% CI = 1,03-2,82). Понятно, что и гомозигота C/C также является фактором риска, хотя данные и недостоверны из-за малых значений частот этого минорного аллеля.
Также обращает на себя внимание факт повышенных (хотя статистически и недостоверных) частот аллельных вариантов Т/Т гена ITGA2 C/T, C/C гена ITGB3 T/C и Т/Т гена F11 T/C в генотипах пациенток по сравнению с контрольной группой.
Аналогичные результаты получены и при сравнении частот полиморфизмов генов системы ангиогенеза в исследуемых группах — было выявлено статистически значимое превышение частот лишь одного полиморфизма из 5 проанализированных (табл. 7).
Среди генов системы ангиогенеза можно также выделить полиморфные варианты EPO G3876T и CYBA C/T (rs4673), аллель-ные варианты которых с участием минорных аллелей (G/T + T/T и С/Т + Т/Т соответственно) преобладают в генотипах пациенток по срав-
нению с контрольной группой. Распределение частот аллельных вариантов G/T + Т/Т (ЕРО G3876T) статистически значимо отличается в группе пациентов по сравнению с контрольной группой (р = 0,034; OR = 1,82; 95% С1 = 1,03-3,27). Тем не менее не удалось достигнуть требуемого уровня значимости в распределении частот аллельных вариантов полиморфизма CYBA С/Т, аллелей обоих полиморфных вариантов — G и Т(р = 0,085), С и Т (р = 0,1058).
При сравнении частот аллельных вариантов генов системы метаболизма фолатного цикла в группе пациенток и в контрольной группе статистически значимые различия выявлены не были, несмотря на достаточно большие объемы исследованных выборок (табл. 8).
При сравнении частот аллельных вариантов генов системы артериального давления в исследуемых группах не было выявлено статистически значимых превышений частот 10 полиморфизмов, проанализированных в группе пациенток по сравнению с контрольной группой (табл. 9). Однако были выявлены гены, частоты аллельных вариантов которых в генотипах пациенток превышают (хотя и не достоверно) таковые в контрольной группе — это 4а/4а гена eNOS 4а/4Ь и все аллельные сочетания с участием минорных аллелей гена АРОЕ Cys112Arg + Arg158Cys.
В ходе дополнительно проведенного анализа распределения частот аллелей Е4, Е3 и Е2 полиморфизма Cys112Arg + Arg158Cys гена АРОЕ удалось выявить статистически значимые различия — аллели Е4 + Е2 встречались значимо чаще в группе пациенток по сравнению с контрольной группой (р = 0,0146), а их наличие в генотипе женщин, согласно полученным данным, может увеличивать риск невынашивания беременности в 1,25 раз (OR = 1,25; 95% С1 = 1,05-1,51).
Таблица 6
Частоты полиморфизмов генов системы гемостаза в группе пациенток и контрольной группе
№ пп. Ген, полиморфный вариант Аллельный вариант Частота Р
Пациентки, n1 Контрольная группа, п2
1 F1 Thr312Ala n1 = 2457 n2 = 510 Thr/Thr 55,39 54,90 0,85
Thr/Ala 37,65 38,04 0,88
Ala/Ala 6,96 7,06 0,92
2 F2 G20210A n1 = 2938, n2 = 646 G/G 98,13 98,30 0,87
G/A 1,87 1,70 0,87
3 F5 Arg506Gln n1 = 2938, n2 = 646 G/G 97,45 94,89 0,001
G/A 2,55 5,11 0,001
4 F13 Val34Leu n1 = 2897 n2 = 613 Val/Val 47,81 49,76 0,40
Val/Leu 43,36 41,44 0,39
Leu/Leu 8,84 8,81 1,00
5 FGG C/T rs2066865 n1 = 157 n2 = 177 C/C 60,51 58,19 0,74
C/T 33,12 34,46 0,82
T/T 6,37 7,34 0,83
6 ITGA2 C/T rs1126643 n1 = 157 n2 = 179 C/C 31,85 35,75 0,49
C/T 52,23 54,75 0,66
T/T 15,92 9,50 0,10
7 Gp6 A/G rs1613662 n1 = 157 n2 = 179 A/A 76,43 78,77 0,69
A/G 21,66 18,99 0,59
G/G 1,91 2,23 1,00
8 Gp6 A/G rs1654419 n1 = 157 n2 = 178 A/A 3,18 2,81 1,00
A/G 26,11 23,60 0,61
G/G 70,70 73,60 0,63
9 Gp6 G/T rs1671153 n1 = 157 n2 = 179 T/T 70,70 74,86 0,46
G/T 26,75 22,35 0,37
G/G 2,55 2,79 1,00
10 ITGB3 T/C rs5918 n1 = 157 n2 = 179 T/T 62,42 74,86 0,02
T/C 35,03 24,02 0,03
C/C 2,55 1,12 0,42
11 Fil T/C rs2036914 n1 = 157 n2 = 179 T/T 22,93 20,11 0,59
T/C 46,50 50,84 0,45
C/C 30,57 29,05 0,81
12 Fil С/T rs2289252 n1 = 157 n2 = 179 C/C 43,31 31,84 0,03
C/T 39,49 55,87 0,003
T/T 17,20 12,29 0,22
13 GP1BA C/T rs2243093 n1 = 157 n2 = 179 C/C 0,00 1,12 0,50
C/T 24,20 16,76 0,10
T/T 75,80 82,12 0,18
Таблица 7
Частоты полиморфизмов генов системы ангиогенеза в группе пациенток и контрольной группе
№ пп. Ген, полиморфный вариант Аллельный вариант Частота Р
Пациентки, n1 Контрольная группа, п2
14 PAI-1 40/5в п1 = 2928 п2 = 638 5G/5G 17,93 20,06 0,21
5G/4G 48,94 48,12 0,73
4G/4G 33,13 31,82 0,55
15 VEGF в-634С п1= 1389 п2 = 394 G/G 56,95 51,02 0,04
G/C 36,57 41,62 0,08
C/C 6,48 7,36 0,57
16 HIF1A С1772Т п1= 1378 п2 = 386 C/C 86,72 86,53 0,93
C/T 12,99 12,69 0,93
T/T 0,29 0,78 0,18
17 EPO в3876Т п1 = 166 п2 = 204 G/G 14,46 23,53 0,03
G/T 48,19 43,14 0,35
T/T 37,35 33,33 0,45
18 CYBA С/Т ге4673 п1 = 157 п2 = 179 C/C 36,31 45,25 0,12
C/T 50,32 44,69 0,33
T/T 13,38 10,06 0,40
Таблица 8
Частоты полиморфизмов генов системы фолатного цикла в группе пациенток и контрольной
группе
№ пп. Ген, полиморфный вариант Аллельный вариант Частота Р
Пациентки, n1 Контрольная группа, п2
19 MTHFR А1298С n1 = 2952 n2 = 633 A/A 47,05 43,44 0,10
A/C 42,75 44,39 0,45
C/C 10,2 12,16 0,15
20 MTHFR С677Т n1 = 2952 n2 = 633 C/C 47,97 50,71 0,22
C/T 42,11 41,23 0,69
T/T 9,93 8,06 0,16
21 MTR A2756G n1= 1948 n2 = 433 A/A 60,99 56,12 0,07
A/G 33,47 36,72 0,20
G/G 5,54 7,16 0,21
Полученные результаты свидетельствуют о невысоком вкладе отдельных генных вариантов в риск потери беременности, а эффект, очевидно, зависит от количества факторов риска и их взаимодействия. Поэтому мы
сравнили количества генетических факторов риска в генотипах двух групп женщин. Ни в одном из генотипов не было более 14 факторов риска (из исследованных 31). В генотипах пациенток таких факторов оказалось
значимо больше, чем в генотипах контрольной группы (рис.; Манна-Уитни р^а1ие = 0,0002): в контрольной группе преобладают генотипы с количеством факторов риска от 3 до 6, а у пациенток — от 6 до 11. Очевидно, чем больше в генотипе неблагоприятных аллельных вариантов, ассоциированных с нарушениями течения беременности, тем выше риск невынашивания.
В этой связи представляло несомненный интерес оценить эффективность влияния на риск потери беременности комплексов различных генов, тем более что в целом ряде публикаций приведены факты о значимой роли взаимодействия генов — эффект совместного влияния генов во много раз превосходит сумму их отдельных эффектов. Мы проанализировали все возможные комбинации из 31 гена по парам, триплетам и кварте-
там (табл. 2). В результате статистического анализа выявлено 11 наиболее информативных комплексов генов риска потерь беременности (табл. 10).
Как видно, частоты встречаемости данных комплексов факторов риска в сравниваемых группах статистически значимо различаются, что доказывает связь риска потери беременности с генотипом женщины (OR от 1,75 до 4,46). При этом полиморфный вариант GT (eNOS G894T) присутствует в 5 из 11 выявленных комплексах риска, CC (F11 T/C) и ID (ACE) — в 4 комплексах, ValLeu (F13) и TC (ITGB3) — в 3, что может свидетельствовать о существенном вкладе этих генных полиморфизмов в нарушение процесса беременности, несмотря на отсутствие статистически значимых различий частот этих полимофиз-мов генов в генотипах сравниваемых групп.
№ пп. Ген, полиморфный вариант Аллельный вариант Частота P
Пациентки, n1 Контрольная группа, n2
22 ACE Alu Ins/Del n1 = 2873 n2 = 609 I/I 26,07 23,15 0,14
I/D 50,40 51,40 0,69
D/D 23,53 25,45 0,32
23 eNOS 4a/4b n1 = 2876 n2 = 605 4b/4b 63,73 64,46 0,75
4b/4a 32,02 32,56 0,81
4a/4a 4,24 2,98 0,17
24 eNOS G894T n1 = 1866 n2 = 470 G/G 53,86 53,83 1,00
G/T 39,12 37,87 0,63
T/T 7,02 8,30 0,37
25 PPARA G2528C n1 = 169 n2 = 207 G/G 67,46 62,32 0,33
G/C 30,77 32,37 0,82
C/C 1,78 5,31 0,10
26 PPARD +294T/C n1 = 167 n2 = 207 T/T 68,86 66,67 0,66
T/C 28,14 29,47 0,82
C/C 2,99 3,86 0,78
27 PPARG Pro12Ala n1 = 170 n2 = 212 Pro/Pro 69,41 68,87 1,00
Pro/Ala 29,41 27,83 0,73
Ala/Ala 1,18 3,30 0,31
Таблица 9
Частоты полиморфизмов генов системы артериального давления в группе пациенток и
контрольной группе
Продолжение таблицы 9
№ пп. Ген, полиморфный вариант Аллельный вариант Частота Р
Пациентки, ni Контрольная группа, п2
28 PPARGC1A G1564A п1 = 168 п2 = 215 G/G 48,81 55,81 0,18
G/A 41,67 32,56 0,07
A/A 9,52 11,63 0,62
29 AGTR1 Л/С ге5186 п1 = 157 п2 = 179 A/A 54,14 49,72 0,45
A/C 36,94 42,46 0,32
C/C 8,92 7,82 0,84
30 BDKRB2 Ю п1 = 166 п2 = 211 I/I 33,73 31,75 0,74
I/D 55,42 49,29 0,25
D/D 10,84 18,96 0,03
31 APOE Cys112Arg; Arg158Cys п1 = 2314 п2 = 523 E3/E3 64,48 69,41 0,03
E2/E4 2,16 0,96 0,08
E3/E2 13,66 11,85 0,29
E2/E2 0,78 0,57 0,78
E3/E4 18,06 16,63 0,49
E4/E4 0,86 0,57 0,79
Рис. Распределение частот генотипов (в %) с разным количеством факторов риска невынашивания беременности в контрольной группе и группе пациенток
Таблица 10
Наиболее информативные комплексы генов риска потерь беременности
№ пп. Комплекс генов Доля P OR 95% CI
пациенток контроля
1 CC (F11 T/C) + GT (eNOS G894T) 17,83 8,99 0,023 2,19 1,09-4,54
2 ID (ACE) + GT (eNOS G894T) 29,30 19,66 0,031 1,75 1,03-3,00
3 TC (ITGB3) + GA (PPARGC1A) 15,29 7,87 0,037 2,15 1,02-4,70
4 TC (ITGB3) + TC (PPARD) 10,19 3,93 0,029 2,78 1,05-8,22
5 ValLeu (F13) + 4G4G (PAI-1) 20,38 11,80 0,025 1,98 1,05-3,81
6 E3E4 (APOE) + 4G4G (PAI-1) 8,92 2,81 0,017 3,49 1,15-12,68
7 ValLeu (F13) + TC (ITGB3) 15,29 6,74 0,013 2,50 1,15-5,71
8 ID (ACE) + ValLeu (F13) + GT (eNOS G894T) 14,01 7,30 0,048 2,13 0,98-4,78
9 TT (EPO) + CC (F11 T/C) + GT (eNOS G894T) 8,28 2,81 0,030 3,11 1,01-11,42
10 ID (ACE) + CC (F11 T/C) + GT (eNOS G894T) 11,46 2,81 0,002 4,46 1,55-15,77
11 ID (ACE) + TT (EPO) + CC (F11 T/C) 9,55 2,81 0,011 3,66 1,23-13,20
Заключение
Приведенные данные свидетельствуют о том, что генетический риск невынашивания беременности обусловлен наличием как отдельных неблагоприятных вариантов генов разных биологических систем, так и взаимодействием различных сочетаний этих генов в генотипе женщины.
Каждый из описанных в работе генных полиморфизмов может вносить не слишком существенный вклад в нарушение физиологического процесса беременности, но существующее взаимодействие генов может многократно усиливать вызываемые этими полиморфизмами эффекты. Например, показано, что сочетание в одном генотипе даже двух-трех неблагоприятных аллельных вариантов генов статистически достоверно увеличивает риск потери беременности. Понятно, что чем больше неблагоприятных факторов в генотипе, тем выше предрасположенность к невынашиванию беременности.
Поэтому недостаточно оценивать вклад каждого отдельного фактора риска в развитие невынашивания беременности. Для корректного выявления величины риска следует использовать комплексный подход и ориентироваться на поиск комбинаций аллельных вариантов риска, а также учитывать общее количество генетических нарушений, ассоциированных
с развитием данной патологии. Чем больше потенциальных факторов риска будет протестировано, тем корректнее будет определена генетическая предрасположенность к невынашиванию беременности.
Выявленные в ходе данной работы наиболее информативные комплексы генов риска репродуктивных потерь позволят количественно оценить уровень генетического риска невынашивания беременности. Такая ДНК-диагностика является, несомненно, актуальной, поскольку неблагоприятные эффекты генов можно корректировать. Выявление высокого генетического риска потери беременности позволит врачам назначать соответствующую терапию для сохранения беременности, что имеет огромное и социальное, и экономическое значение, а также позволит улучшить демографическую ситуацию в стране.
Список использованных источников
1. Баранов, В. С. Цитогенетика эмбрионального развития человека / В. С. Баранов, Т. В. Кузнецова. - Изд-во Н-Л, 2007. - 640 с.
2. Неотложные состояния в акушерстве / В. Н. Серов [и др.] // М ГЭОТАР-Медиа. -2011. - С. 168-175.
3. Hypofibrinogenemia and the a-Fibrinogen Thr312Ala Polymorphism may be Risk Factors for Early Pregnancy Loss / Yuki Kamimoto
[et al.] // Clin. Appl. Thromb. - 2017. - Vol. 23, № 1. - P. 52-57.
4. Carter, A. M. Association of the a-fibrinogen Thr312Ala polymorphism with poststroke mortality in subjects with atrial fibrillation / A. M. Carter, A. J. Catto, P. J. Grant // Circulation. - 1999. - Vol. 99, № 18. - P. 2423-2426.
5. The alpha fibrinogen T/A312 polymorphism in the ECTIM study / J. M. Curran [et al.] // Thromb. Haemost. - 1998. - Vol. 79, № 5. -P. 1057-1058.
6. Can Factor V Leiden and prothrombin G20210A testing in women with recurrent pregnancy loss result in improved pregnancy outcomes? Results from a targeted evidence-based review / L. A. Bradley [et al.] // Genet. Med. Off. J. Am. Coll. Med. Genet. - 2012. - Vol. 14, № 1. - P. 39-50.
7. Тромбофилия как важнейшее звено патогенеза осложнений беременности / В. О. Би-цадзе [и др.] // Практическая медицина. - 2012. - № 9 (65). - С. 22-29.
8. Sharief, L. T. Congenital factor XIII deficiency in women: a systematic review of literature / L. T. Sharief, R. A. Kadir // Haemophilia. -2013. - Vol. 19, № 6. - P. e349-e357.
9. Genetic association between FXIII and P-fibrinogen genes and women with recurrent spontaneous abortion: a meta- analysis / J. Li [et al.] // J. Assist. Reprod. Genet. - 2015. - Vol. 32, № 5. - P. 817-825.
10. The association of F11 genetic variants with the risk of incident venous thrombosis among women, by statin use / L. B. Harrington [et al.] // Thromb. Haemost. - 2016. - Vol. 115, № 3. -682 p.
11. Association of F11 polymorphism rs2289252 with deep vein thrombosis and related pheno-types in population of Latvia / V. Rovite [et al.] // Thromb. Res. - 2014. - Vol. 134, № 3. -P. 659-663.
12. Genetic Variations Associated With Recurrent Venous Thrombosis / A. van H. Vlieg [et al.] // Circ. Cardiovasc. Genet. - 2014. - Vol. 7, № 6. -P. 806-813.
13. The fibrinogen gamma (FGG) 10034C>T polymorphism is associated with venous thrombosis / G. Grunbacher [et al.] // Thromb. Res. -2007. - Vol. 121, № 1. - P. 33-36.
14. Polymorphism in integrin ITGA2 is associated with ischemic stroke and altered serum
cholesterol in Chinese individuals / J.-X. Lu [et al.] // Balk. Med. J. - 2014. - Vol. 31, № 1. - 55 p.
15. Фаритовна, М. Э. Ассоциация полиморфизмов генов NOS3 и ITGB3 c риском развития ишемической болезни сердца / М. Э. Фаритов-на // Сибирский медицинский журнал. - Томск. -2016. - Т. 31, № 2. - С. 22-25.
16. Platelet aggregation abnormalities in patients with fetal losses: the GP6 gene polymorphism / J. Sokol [et al.] // Fertil. Steril. - 2012. -Vol. 98, № 5. - P. 1170-1174.
17. Platelet-specific collagen receptor glycopro-tein VI gene variants affect recurrent pregnancy loss / A. Siddesh [et al.] // Fertil. Steril. - 2014. -Vol. 102, № 4. - P. 1078-1084.
18. Correlation of coronary heart disease with multiple genes, gene polymorphisms and multiple risk factors in old Chinese Han patients / Y.-F. Sun [и др.] // Zhongguo Ying Yong Sheng Li Xue Za Zhi Zhongguo Yingyong Shenglixue Zazhi Chin. J. Appl. Physiol. - 2012. - Т. 28, № 5. - С. 411-417.
19. Platelet glycoprotein Ibalpha Kozak polymorphism is associated with an increased risk of ischemic stroke / R. I. Baker [и др.] // Blood. -2001. - Т. 98, № 1. - С. 36-40.
20. Генетические маркеры прогнозирования преэклампсии / И. П. Халфорд-Князева [и др.] // Доктор Ру. - 2013. - № 7-1. - С. 58-66.
21. Polymorphisms in the ACE and PAI-1 genes are associated with recurrent spontaneous miscarriages / T. Buchholz [et al.] // Hum. Reprod. -2003. - Vol. 18, № 11. - P. 2473-2477.
22. Анализ полиморфизма генов нейро-нальной (nNOS) и эндотелиальной (eNOS) NO-синтаз при плацентарной недостаточности и задержке внутриутробного развития плода / Беспалова О.Н. [и др.] // Журнал акушерства и женских болезней. - 2006. - Т. 55, № 1. - С. 57-62.
23. Мальцева Л. И. Генетические факторы риска развития гестоза у первородящих женщин / Мальцева Л. И., Павлова Т. В. // Практическая медицина. - 2011. - № 48. - С. 113-116.
24. El-Sherbiny, W. S. Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) (Glu298Asp) and urotensin II (UTS2 S89N) gene polymorphisms in preeclampsia: prediction and correlation with severity in Egyptian females / W. S. El-Sherbiny, A. S. Nasr, A. Soliman // Hypertens. Pregnancy. - 2013. -Vol. 32, № 3. - P. 292-303.
25. Semple, R. K. PPARy and human metabolic disease / R. K. Semple, V. K. K. Chatterjee, S. O'Rahilly // J. Clin. Invest. - 2006. - Т. 116, № 3. - С. 581-589.
26. Cresci, S. PPAR genomics and pharmacoge-nomics: Implications for cardiovascular disease / S. Cresci. - 2008.
27. PPARGC1A sequence variation and cardiovascular risk-factor levels: a study of the main genetic effects and gene x environment interactions in children from the European Youth Heart Study / E. C. Brito [et al.] // Diabetologia. - 2009. -Vol. 52, № 4. - P. 609-613.
28. Gene-gene interactions among the peroxi-some proliferator-activated receptor polymorphisms for hypertriglyceridemia / S. Gu [et al.] // Zhonghua Yu Fang Yi Xue Za Zhi. - 2012. -Vol. 46, № 10. - P. 916-921.
29. Затейщиков, Д. А. Изучение антикоагу-лянтных свойств эндотелия с помощью стандартного веноокклюзивного теста / Д. А. Затейщиков, А. Б. Добровольский, О. В. Аверков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1992. - № 12. - С. 605-608.
30. Целуйко, В. И. Генетические аспекты инфаркта миокарда / В. И. Целуйко, Е. И. Попова // Сердце и сосуды. - 2008. - № 1. - С. 47-53.
31. Genetic associations of bradykinin type 2 receptor, alpha-adrenoceptors and endothelial nitric oxide synthase with blood pressure and left ventricular mass in outpatients without overt heart disease / R. A. B. Nunes [et al.] // IJC Heart Vasc. - 2018. - Vol. 21. - P. 45-49.
32. Apolipoprotein E alleles in women with severe preeclampsia. / B. Nagy [et al.] // J. Clin. Pathol. - 1998. - Vol. 51, № 4. - P. 324-325.
33. Davignon, J. Apolipoprotein E polymorphism and atherosclerosis / J. Davignon, R. E. Gregg, C. F. Sing // Arterioscler. Dallas Tex. - 1988. - Vol. 8, № 1. - P. 1-21.
34. Исследование ассоциации полиморфизма генов APOE, LPL и NOS3 с риском
сосудистой патологии у детей и беременных женщин / Г. А. Сергеевич [и др.] // Экологическая генетика. - 2011. - Т. 9, № 4. - С. 25-34.
35. Vascular endothelial growth factor (VEGF)-634G/C polymorphism was associated with severe pre-eclampsia and lower serum VEGF level /
5. Salimi [et al.] // J. Obstet. Gynaecol. Res. -2015. - Vol. 41, № 12. - P. 1877-1883.
36. Dynamic HIF1A Regulation During Human Placental Development / F. Ietta [et al.] // Biol. Reprod. - 2006. - Vol. 75, № 1. -P. 112-121.
37. Khabour, O. F. Association between polymorphisms in erythropoietin gene and upper limit haematocrit levels among regular blood donors /
0. F. Khabour, M. A. Bani-Ahmad, N. M. Ham-mash // Transfus. Clin. Biol. J. Soc. Francaise Transfus. Sang. - 2012. - Т. 19, № 6. - С. 353-357.
38. Роль системных нарушений в формировании гестационных осложнений и их генетическая составляющая / О. Н. Садекова [и др.] // Акушерство и гинекология. - 2012. - № 4-2. -С. 21-28.
39. Распространенность тромбофилических полиморфизмов у женщин с привычным невынашиванием беременности в анамнезе / Буштырева И.О. [и др.] // Акушерство, гинекология и репродукция. - 2015. - Т. 9, № 2. -С. 13-18.
40. Mamedalieva, N. The role of polymorphisms in genes of folate metabolism and hyperhomocys-teinemia in realization of missed abortion in the 1st trimester / N. Mamedalieva, A. Aimbetova, G. Svyatova // Med. Health Sci. J. - 2011. - Vol.
6, № 2. - P. 17-22.
41. Bushtireva, I. O. Genetic Polymorphisms Associated with Impaired Folate Cycle and the Risk of Thrombophilia in Patients with Retrochorial Hematoma in the First Trimester of Pregnancy /
1. O. Bushtireva, N. B. Kuznetsova, E. I. Pelogei-na // Modern Technologies in Medicine. - 2015. -Vol. 7, № 3. - P. 84-88.
N. G. Sedlyar, I. B. Mosse, L. A. Kundas, A. L. Gonchar, M. D. Ameliyanovich
ASSESSMENT OF A MISCARRIAGE RISK BASED ON THE MOLECULAR GENETIC ANALYSIS
State Scientific Institution "Institute of Genetics and Cytology of the National Academy of Sciences of Belarus" 27, Akademicheskaya St., 220072 Minsk, the Republic of Belarus e-mail: [email protected]
An association of 31 polymorphic gene variants of the following systems was investigated: hemostasis, regulation of blood pressure, angiogenesis and folate cycle with a miscarriage. The study involved 2938 women with the unknown causes of a miscarriage and 646 women without pregnancy pathologies. The frequencies of the investigated polymorphic gene variants were determined, the rates of allelic variants between the group of patients and the control group were compared. In the search for combinations of risk genes, 11 complexes of genes associated with a miscarriage were identified, which will allow us to assess the level of a genetic risk. The data will allow medical doctors to prescribe appropriate therapy as a result of which the pregnancy will continue until a successful delivery, which is of great social and economic importance, and will also improve the demographic situation in the country.
Keywords: miscarriage, genetic testing, PCR, angiogenesis, folate cycle, hemostasis, risk assessment, prevention.
Дата поступления статьи: 16 июня 2020 г.
