CC BY
60
Thyroid status was estimated with measurements of the level of anti-thyroid antibodies, aspiration cytology, ultrasonography and Doppler studies. BTS in volume
0,05—0,06 ml put on glass plate by the fine film. Then the plate put in the zone of projection of lobes and isthmus of the thyroid during the 5—7 minutes. Preparation was dry in thermostat in T=+35— 40o C during 2— 3 minutes, then its structure estimates in polarized light. In microscopic investigation of preparation the micro types inherent in healthy and pathological thyroid gland
were determined. The structures of BTS in healthy people were characterized by orientated polygonal chambers. In AT existence of small degraded polygonal and cratershaped chambers was typical.
The data of instrumental investigations and aspiration cytology confirms received results.
So, employment of BTS allows revealing the structures disorders in thyroid gland.
Key words: biological indicator, micro type, structure of thyroid gland.
О. А. ТЕРЕЩЕНКО, Э. А. ПЕТРОСЯН, А. А. СУХИНИН, М. С. КУПРЕЕВА
ОЦЕНКА НАРУШЕНИЙ БЕЛКОВОГО МЕТАБОЛИЗМА ПРИ ЖЕЛЧНОМ ПЕРИТОНИТЕ
Кафедра оперативной хирургии и топографической анатомии КГМУ, лаборатория экспериментальной гастроэнтерологии РЦ ФХГ
Несмотря на достижения современной хирургии, желчный перитонит (ЖП) и в настоящее время остается одной из актуальнейших проблем современной абдоминальной хирургии [3, 16]. Широкое внедрение лапароскопических методов в хирургию гепатобилиарной зоны, увеличение количества больных с травматическими повреждениями печени, а также с осложненными формами желчнокаменной болезни сопровождаются развитием желчного перитонита, что обуславливает необходимость поиска новых способов его эффективного лечения [3, 17]. Летальность при ЖП согласно данным некоторых авторов составляет 10^34% [7, 15].
Известно, что развитие ЖП сопровождается синдромом системной воспалительной реакции. Перенапряжение и срыв компенсации детоксицирующих систем, несбалансированность на биомолекулярном уровне ведут к структурно-метаболическим изменениям, служащим причиной развития эндогенной интоксикации (ЭИ) в организме [9].
Одним из проявлений ЭИ является токсическое поражение печени, приводящее к уменьшению концентрации белков крови и изменению их нормального соотношения. Снижение наиболее характерно для группы транспортных протеинов: альбумина, преаль-бумина и некоторых других. Уменьшение концентрации альбумина происходит из-за развития патологического метаболизма и выхода его из внутрисосудистого пространства при нарушении проницаемости через гломерулярную мембрану и стенки сосудов [6].
Состояние пула альбумина крови может быть охарактеризовано несколькими параметрами. Первый - общая концентрация альбумина в сыворотке или плазме (ОКА). Второй - эффективная концентрация альбумина (ЭКА) [2, 11]. На ЭКА могут влиять три фактора: потеря альбумина (снижение ОКА), загрузка альбумина метаболитами и изменение конформации молекулы альбумина. В отличие от ОКА ЭКА чрезвычайно чувствительна к наличию различных патологических процессов и зависит не только от концентрации белка, но и от состояния его молекулы [2].
Третий параметр - резерв связывания альбумина (РСА) или его связывающая способность отражает из-
менения структуры связывающих центров и является отношением эффективной концентрации альбумина к общей, соответствуя отношению свободных связей пула молекул альбумина к общему количеству его связей [2]. В норме показатель близок к 100%. Чем больше изменена молекула альбумина при нарушениях функций организма, тем больше он снижается.
В клинической практике оказался удобным индекс токсичности (Т), являющийся показателем количества конформационно измененных молекул альбумина. В норме Т близок к нулю и возрастает по мере изменения молекулы альбумина. Оба расчетных показателя (РСА и Т) зависят только от состояния молекулы альбумина, но не от его концентрации [12].
Некоторые авторы предлагают в качестве показателя, отражающего потенциальные возможности альбумина к иммобилизации, использовать разность общей и эффективной концентраций альбумина - резерв альбумина (РА) [14]. Мотивировка состоит в том, что этот показатель отражает количественную сторону заблокированного альбумина (т. е. его возможный резерв) и является критерием целесообразности проведения детоксикацион-ных мероприятий для деблокирования его центров. Чем больше разница, тем больше резерв, и если резерв резко снижается, то нет смысла пытаться их деблокировать активными детоксикационными мероприятиями.
Одним из традиционно использующихся показателей, отражающих интенсивность белкового обмена и эндогенной интоксикации, являются вещества низкой и средней молекулярной массы (ВНСММпл), растворенные в плазме. Поскольку большая часть ВНСММпл имеет гидрофобную природу и элиминируется из организма в комплексе с альбумином, практическое значение имеет отношение содержания ВНСММпл к ЭКА.
Целью настоящего исследования является оценка метаболизма белков при развитии желчного перитонита.
Методика исследования
Работа была проведена на белых крысах-самцах весом 160-220 г (п=39). Для решения поставленной задачи животные были разделены на 2 группы: 1-я группа- интактные животные (п=24); 2-я группа - животные,
УДК 616.381-002-008-9.001.6
у которых исследования проводили через 24 часа после создания модели экспериментального желчного перитонита (n=15). В работе была использована экспериментальная модель жёлчного перитонита, разработанная в лаборатории Российского центра функциональной хирургической гастроэнтерологии (патент РФ № 2175784 от 20.11.01, БИМП, № 31). Суть модели состоит в создании асептического очага воспаления в области задней конечности животного и в последующем трехкратном введении желчи через каждые 8 часов из расчета 1,5 мл на 1 кг веса животного [10].
В качестве критериев состояния животного изучали показатели белкового метаболизма: общий белок (ОБ), общий (ОКА) и эффективный альбумин (ЭКА), вещества низкой и средней молекулярной массы плазмы (ВНСММпл).
Определение концентрации общего белка проводили унифицированным методом биуретовой реакции, используя стандартизованные наборы Total Protein «FL-Е» (Vital Diagnostics СПб, Россия). Определение концентрации общего альбумина с учетом видовой специфичности проводили по методу Л. И. Слуцкого (1964) с использованием биуретового реактива [4]. Определение концентрации эффективного альбумина проводили с помощью набора реактивов «ЗОНД-АЛЬБУМИН» (серия ОП-0893 НИМВЦ ЗОНД, Россия) на аппарате АКЛ-01 в соответствии с инструкцией к набору.
Расчётные коэффициенты, характеризующие состояние молекулы альбумина, рассчитывали по формулам:
резерв связывания альбумина:
PCA=ir100;
резерв альбумина (РА):
РА=ОКА-ЭКА, г/л;
индекс токсичности (Т) рассчитывали по формуле:
Т=
ОКА
ЭКА
Исследование ВНСММ в плазме крови проводили на аппарате СФ-2000 по методике М. Я. Малаховой [8]. Расчет конечного результата производился путем интегрального измерения площади фигуры, образованной осью абсцисс и полученными значениями экстинций.
ВНСММ(пл) - (Е238+Е250+Е260+Е270+Е280+Е290+ Е300+Е310)х10, усл. ед.
Для оценки соотношения количества продуктов белкового катаболизма в плазме и возможностей связывающей системы альбумина использовали коэффициент интоксикации:
КИ - ВНСММ(пл)/ЭКА Результаты работы и их обсуждение
Как видно из таблицы, концентрация ОБ у животных с жёлчным перитонитом снижается в 1,6 раза по сравнению с интактными животными. Снижение ОКА еще более выражено: в 2,25 раза. Более интенсивное снижение концентрации альбумина по сравнению с общим белком подтверждается литературными данными о более высокой скорости катаболизма альбумина при гипоальбуминемии [14]. Снижение концентрации ОБ и ОКА обусловлено несколькими причинами. Во-первых, снижается синтез альбумина печенью в пользу «позитивных» белков острой фазы. Во-вторых, изменение проницаемости сосудов, наблюдаемое при воспалении, приводит к переходу низкомолекулярных белков из кровотока в межклеточное пространство, и часть альбумина теряется с выпотом в перитонеальную полость [8].
Падение отношения а1/д1 у животных с перитонитом в два раза является типичным для воспалительных процессов. Необходимо отметить, что, несмотря на снижение общего белкового пула, концентрация глобулинов не меняется (таблица), что является показателем сохранения синтетической функции печени, обеспечивающей синтез позитивных белков острой фазы, относящихся большей частью к глобулинам.
Эффективная концентрация альбумина у животных второй группы снижается более чем в 4 раза (таблица). Более выраженное снижение ЭКА по сравнению с ОКА является не столько следствием общего падения концентрации альбумина из-за уменьшения синтеза и потерь с выпотом, сколько следствием загруженности активных центров альбумина токсинами и изменения конформации молекулы. Образование комплексов токсинов с альбумином меняет физико-химические характеристики молекулы альбумина, что приводит впоследствии к ее быстрому разрушению [1, 4, 13] и к прогрессированию интоксикации.
Показатели интоксикации имеют несколько различающуюся динамику. РСА снижается почти в два раза,
Динамика изменений показателей белкового обмена крови
1
Изучаемые группы ОБ, г/л ОКА, г/л ОКГ, г/л а1/д1 ЭКА, г/л РСА, % А, /л Рг Т КИ
Интактные животные 58,07±4,18 36,16±2,67 22,08±3,05 1,63 26,54±2,24 73,76±5,11 9,62 0,37±0,09 0,30±0,07
24-часовой перитонит 36,14±3,11 15,81±2,31* 19,27±2,93 0,83* 6,33±1,20* 39,74±4,21* 9,48 1,44±0,20* 4,50±0,79*
Примечание: * - р<0,05 по сравнению с группой интактных животных.
что является показателем загруженности альбумина и дисфункции транспортной составляющей детоксицирующей системы. Резкий рост индекса токсичности плазмы Т у животных с перитонитом - в 3,9 раза - также говорит в пользу высокого напряжения в системах организма и о развитии декомпенсации системы детоксикации.
У животных с экспериментальным желчным перитонитом наблюдается увеличение концентрации ВНиСММПЛ в 3,6 раза по сравнению с интактными животными: с 7,90±1,05 до 28,52±3,01 усл. ед. соответственно (р<0,05). Рост растворенных в плазме ВНСММ объясняется резким повышением катаболических процессов и всасыванием с брюшины токсических продуктов. При этом коэффициент интоксикации растет более чем в 15 раз. Появление в крови большого количества токсичных метаболитов на фоне роста разрушения альбумина приводит к развитию порочного круга: интоксикация ^ разрушение альбумина ^ ухудшение функционирования детоксикационных систем ^ дальнейший рост интоксикации.
На фоне резких изменений показателей эффективности функционирования транспортной системы альбумина резерв альбумина (РА) практически не меняется. Это позволяет говорить об обратимости изменений при применении специальных средств терапии, направленных на поддержку и разблокирование естественных систем детоксикации.
Выводы
1. У животных с желчным перитонитом наблюдается рост катаболических процессов, проявляющийся развитием диспротеинемии: падением концентрации общего белка, общего альбумина, а также падением отношения а1/д1.
2. Развивающаяся диспротеинемия приводит к нарушению функции транспортной системы альбумина, на что указывает резкое падение эффективной концентрации альбумина и резерва связывания альбумина, а также рост ВНСММпл.
3. Нарушение транспортной системы альбумина является одной из причин работы дезинтоксикационной системы на пределе компенсационных возможностей, на что указывает резкий рост индекса токсичности и коэффициента интоксикации.
4. Лечение должно быть направлено на разрыв порочного круга и включать в себя мероприятия, направленные как на удаление из крови токсинов, так и на разблокирование естественных детоксикационных систем.
Поступила 25.01.2008
ЛИТЕРАТУРА
1. Андреева О. Л., Цвиренко С. В., Вишницкий Д. А. Сравнительный анализ альбумина, исследованного флюоресцентным методом, и других клинико-лабораторных показателей при гнойном перитоните // Клин. лаб. диагн. 2003. № 8.С. 19-21.
2. Добрецов Г. Е. Степень заполнения организма токсическими
веществами: Определение флюоресцентным методом //
Альбумин сыворотки крови в клинической медицине / Под ред. Ю. А. Грызунова и Г. Е. Добрецова. М.: Ириус, 1994. С. 28-33.
3. Журавлев В. Н, Евдокимов А. П., Гришаев В. В., Соколов А. Н. Оптимизация хирургической тактики при травме печени // Анналы хирургической гепатологии. 2003. № 2. С. 142-143.
4. Камышников В. С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: Беларусь, 2000. Т. 1. 495 с.
5. Карякина Е. В., Белова С. В. Молекулы средней массы как интегральный показатель метаболических нарушений (обзор литературы) // Клин. лаб. диагн. 2004. № 3. С. 3-8.
6. Коткина Т. И., Волкова Е. И., Титов В. Н. Диагностическое значение исследования альбумина сыворотки крови // Лаб. дело. 1997. № 7. С. 6-12.
7. Кригер А. Г., Ржебаев К. Э., Воскресенский П. К., Суходулов А. М., Череватенко А. М. Опасности, ошибки, осложнения при лапароскопических операциях на желчных путях // Анн. хир. гепат. 2000. № 1. С. 90-98.
8. Лопухин Ю. М., Добрецов Г. Е., Гоызунов Ю. А. Конформационные изменения молекулы альбумина: новый тип реакции на патологический процесс // Бюл. эксп. биол. и мед. 2000. № 7. С. 4-9.
9. Малахова М. Я. Эндогенная интоксикация как отражение компенсаторной перестройки обменных процессов в организме // Эфферент. тер. 2000, том 6, № 4.
10. Петросян Э. А, Каде А. Х, Петровский А. Н., Погосян А. Э., Бабаева Г. А, Оганесян С. С., Любавин А. Н. Новая модель желчного перитонита // Бюл. экспер. биол. и мед. 2002, прил. 3. С. 122-124.
11. Родоман Г. В., Шалаева Т. Н., Добрецов Г. Е., Коротаев А. Л. Концентрация и свойства альбумина в сыворотке крови и выпоте брюшной полости у больных с перитонитом // Вопросы мед. химии. 1999. № 5. С. 407-415.
12. Родоман Г. В., Добрецов Г. Е., Шалаева Т. И., Наумов Е. К. Альбуминовый флюоресцентный тест при операционном стрессе // Бюл. экспер. биол. и мед. 2001. № 3. С. 357-359.
13. Титов В. Н. Альбумин, транспорт насыщенных жирных кислот и метаболический стресс-синдром (обзор литературы) // Клин. лаб. диагн. 1999. № 4. С. 3-11.
14. Федоровский Н. М., Каперская К. С., Куренков Д. В., Смоляр А. В. Связывающая способность альбумина в оценке эндотоксемии // Вестник интенсивной терапии. 1998. № 4. С. 21.
15. Amorotti C., Mosca D., Di Blasio P. Spontaneous and postoperative bile peritonitis. Surgical technique // Minerva Chir. 2002. Vol. 57. № 1. P. 41-49.
16. Kang S.-B., Han H.-S., Min S. K., Lee H. K. Nontraumatic Perforation of the Bile Duct in Adults // Arch. Surg. 2004. Vol. 139. P. 1083-1087.
17. Numata M., Nakayama M., Nimura S., et al. Association between an increased surface area of peritoneal microvessels and a high peritoneal solute transport rate // Perit. Dial. Int. 2003. Vol. 23, № 2. P. 116-122.
O. A. TERETSCHENKO, E. A. PETROSJAN, A. A. SUKHININ, M. S. KUPREEVA
ESTIMATION OF THE PROTEIN'S
METABOLISM ABNORMALITIES DURING BILIOUS PERITONITIS
Systemic Inflammation Response Syndrome at a bilious peritonitis it is accompanied by growth catabolic processes. Developing endogenous intoxication leads to an exhaustion compensatory systems of the organism. Pathogenetic treatment should be directed on break of a vicious circle and should include the actions directed directly on removal from the blood of toxins and on deblocking of natural detoxication systems.
Key words: Systemic Inflammation Response Syndrome, catabolic processes, protein, bilious peritonitis, intoxication.
