CC BY
28
УДК 615.355:616.381-002.3
Э.Э. Кузнецова, В.Г. Горохова, А.Г. Горохов, Л.Б. Корякина, В.В. Садах, Л.Д. Зубарева,
С.А. Колмаков, А.С. Коган
ЭНДОЛИМФАТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ИМОЗИМАЗЫ ДЛЯ ДЕТОКСИКАЦИИ ИНТЕРСТИЦИАЛЬНОГО ПРОСТРАНСТВА ПРИ РАСПРОСТРАНЕННОМ ГНОЙНОМ ПЕРИТОНИТЕ
ГУ НЦ РВХ ВСНЦ СО РАМН (Иркутск)
Эндолимфатическое введение имозимазы усиливает процессы детоксикации, способствует удалению токсических продуктов, о чем. свидетельствует, снижение уровней альдегидов и. фенола в биосубстратах, общего содержания веществ низкого и. среднего молекулярного веса, улучшение сорбционной способности альбумина, появление пептидов с позитивными свойствами, уменьшение коэффициента интоксикации, а также вязкости лимфы, снижение содержания фибриногена и. растворимых фибрин-мономерных комплексов.
Ключевые слова: имозимаза, эндолимфатическое введение, перитонит
ENDOLYMPHATIC APPLICATION OF IMOZIMAZA FOR DETOXICATION OF INTERSTITIAL SPACE AT DISSEMINATED PURULENT PERITONITIS
E.E. Kuznetsova, V.G. Gorokhova, A.G. Gorokhov, L.B. Koryakina, V.V. Sadakh,
L.D. Zubareva, S.A. Kolmakov, A.S. Kogan
SC RRS ESSC SB RAMS, Irkutsk
Endolymphatic introduction, of imozimaza strengthens processes of detoxication, contributes to elimination of toxic products, which is testified by lowered, levels of aldehydes and phenol in biosubstrates, lowered, content of substances of low and middle molecular weight, improving of sorption ability of albumin, appearance of peptides with, positive features, decrease of intoxication, coefficient, lymph, viscosity, lowering of fibrinogen. and. dissoluble fibrin-monomeric complexes content.
Key words: imozimaza, endolymphatic introduction, peritonitis
По мере развития перитонита в брюшной полости в течение короткого времени нарастает содержание высокоактивных токсических веществ, таких как микробные эндотоксины, продукты воспалительной реакции и деструкции тканей и лейкоцитов, нарушенного метаболизма, а также кишечных ядов. Известно, что основным путем резорбции коллоидов и бактерий является эндолимфатический.
Целью нашего исследования было изучение метаболического пула крови и лимфы, сорбционной способности альбумина и показателей гемостаза при эндолимфатическом введении имозимазы.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Под наблюдением находилось 6 больных распространенным гнойным перитонитом (РГП). Методами спектрофотометрии, высокоэффективной жидкостной, газожидкостной и тонкослойной хроматографии оценивали метаболический статус пациентов
по содержанию низко- и среднемолекулярных веществ в сыворотке крови и лимфе [1, 6, 7]. Одним из универсальных механизмов реакции организма на увеличение концентрации продуктов метаболизма является образование комплексов различных соединений с белками плазмы крови. Уникальной способностью к комплексообразованию обладает сывороточный альбумин, молекула которого имеет активные центры с высоким сродством к низкомолекулярным соединениям различного химического строения [5]. Для определения концентрации альбумина использовали флуоресцентный метод [4] и анализатор АКЛ-01 «Зонд» с набором реактивов. Исследовали общую концентрацию альбумина (ОКА) и эффективную концентрацию альбумина (ЭКА), т.е. величину, характеризующую концентрацию и состояние связывающих центров в молекуле альбумина. Определяли также сорбционную способность альбумина (или его резервную емкость — РЕА), как от-
ношение ЭКА/ОКА. В норме РЕА близка к 1, а чем больше изменена молекула альбумина, тем больше эта величина сдвигается в сторону снижения. Изучали также параметры лимфограммы и гемостази-ограммы стандартными методами [2]. Исследование периферической крови и лимфы грудного лимфатического протока, после радикального оперативного вмешательства, проводили до и через сутки после первого и второго эндолимфатического введения имозимазы.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В исходном периоде экссудированная лимфа представляла собой мутную жидкость различной окраски от светло-желтой до серой. Через 5 — 10 мин. в пробирке образовывался двухслойный субстрат, состоящий из плотного осадка и надоса-дочной жидкости. Плотный осадок был представлен, в основном, фибрином. На основании этого можно было полагать, что лимфообеспечивающий эндогенный дренаж интерстициального пространства в связи с изменением физико-химических и реологических свойств лимфы при распространенном гнойном перитоните, может явиться фактором, препятствующим эффективной эндолим-фатической резорбции продуктов воспаления из брюшной полости. В работах, выполненных в нашей клинике [3, 8], было показано, что имозима-за, наряду с лизированием денатурированных белков, обладает выраженными фибринолитически-ми свойствами. Исходя из этого, представлялось патогенетически обоснованным эндолимфатичес-кое введение имозимазы с целью восстановления лимфодренажного механизма детоксикации.
Проведенное исследование показало, что в исходном периоде в лимфе и в сыворотке крови больных обнаружены летучие газообразные продукты: альдегиды, уксусная и пропионовая кислоты, фенол, уровень которых превышал показатели клинического контроля в 5—10 раз. Общий пул веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) в лимфе составлял 9,6 ± 1,8, в сыворотке крови — 8,84 ± 1,67 у.е. В пептидном компоненте ВНСММ преобладала пептидная фракция до 20000 — 25000 D в исследуемых средах. Через сутки после первого введения имозимазы в лимфе увеличилось содержание токсичных газообразных продуктов в 1,4 раза, в крови — в 1,2 раза. В лимфе концентрация ВНСММ составляла
11,28 ± 2,1 (р <0,05), в сыворотке крови — 7,58 ± 1,9 у.е (р < 0,05). Через сутки после второго введения имозимазы уровень ВНСММ в лимфе достигал 13,53 ± 3,0, в сыворотке крови — 16,3 ± 4,1 у.е. В этот же срок исследования в лимфе и в крови уменьшилось содержание альдегидов и фенола на 30 %. На пептидограммах снизился пул 20 кЭ, преобладали пептиды м.м. 10 — 15 кЭ, обладающие иммуномодулирующими и гемостатическими свойствами.
Большие изменения найдены и в характеристиках альбумина у наблюдаемых больных (табл. 1).
Из таблицы следует, что у больных РГП была исходно снижена общая и эффективная концентрация альбумина и особенно его резервная емкость в сыворотке крови и ЭКА и РЕА в лимфе. После первого введения имозимазы в лимфе ОКА и ЭКА уменьшились в 1,6 — 1,7 раза, а РЕА практически не изменилась. В сыворотке крови все показатели альбумина увеличились в 1,2 раза. После второго введения имозимазы показатели альбумина улучшились, за исключением РЕА в сыворотке крови. К 5 суткам наблюдения после окончания введения фермента на 30 % возросла и резервная емкость альбумина.
Исследования параметров гемостазиограммы и лимфограммы показали, что у больных до введения имозимазы наблюдалась гипервязкость лимфы (1,6 ± 0,1), высокий уровень растворимых фиб-рин-мономерных комплексов (РФМК) — 9,3 ± 0,4 г/л, повышенная активность факторов протромбинового комплекса — 100 ± 4,9 %. В системе свертывания крови отмечено увеличение концентрации фибриногена — 4,9 ± 0,2 г/л и высокий уровень РФМК — 21,8 ± 0,9 г/л.
Под воздействием имозимазы у больных наблюдалось снижение гемостатического потенциала в крови и лимфе. Вязкость лимфы уменьшилась в 2 раза, активность факторов протромбино-вого комплекса до 50 ± 5,0 %, уровень РФМК — до 7,0 ± 0,8 г/л. В системе гемостаза также наблюдалась положительная динамика: уменьшилась концентрация фибриногена до 3,5 ± 0,2 г/л, снизился уровень РФМК до 14 г/л.
Следовательно, основной фармакологический эффект при эндолимфатическом введении имозимазы проявляется в лизисе белков — продуктов острого воспаления. Учитывая низкий молекулярный вес продуктов протеолиза и их высокую резорбтив-ную способность можно было ожидать усиления
Таблица 1
Изменение показателей альбумина в лимфе и сыворотке крови у больных распространенным
гнойным перитонитом
Показатель Сыворотка крови донора Лимфа Сыворотка крови больного
до введения 1-е введение 2-е введение до введения 1-е введение 2-е введение 5 сутки
ОКА, г/л 45 24 14* 30* 29 34 40* 40*
ЭКА, г/л 41 13 8 22* 17 23 22 30*
РЕА 0,91 0,54 0,57 0,73* 0,58 0,67* 0,55 0,75*
Примечание: * - p < 0,05 (значимость различий данных до начала лечения со сроками введения имозимазы).
интоксикации. Однако после проведенного лечения имозимазой все исследуемые показатели изменились в положительную сторону. Баланс между накоплением и элиминацией токсических лигандов, рассчитанный как КИ, представляющий отношение суммарного содержания токсических продуктов к эффективной концентрации альбумина (ЭКА), показал, что в крови не происходит их достоверного накопления. Наоборот, имеет место их снижение. Так до введения имозимазы КИ составлял 0,54; после первого введения — 0,48; после второго введения
— 0,59; через 5 суток — 0,25 (при норме 0,5).
Таким образом, эндолимфатическое введение имозимазы усиливало процессы детоксикации, способствовало удалению продуктов нарушенного обмена, о чем свидетельствовало снижение уровня альдегидов и фенола в биосубстратах, общего содержания ВНСММ, улучшение сорбционной способности альбумина, появление пептидов с позитивными свойствами, уменьшение коэффициента интоксикации, а также вязкости и дебета лимфы, снижение содержания фибриногена и уровня РФМК.
Детоксикационная активность имозимазы, в определенной мере, обусловлена ее фармакологическими свойствами. Протеолитические ферменты Bac. subtilis, входящие в состав имозимазы и составляющие ее активный компонент, повышают про-теолитическую активность сыворотки крови и обеспечивают энзиматический лизис денатурированных белков [9]. Протеазы Bac. subtilis, обладая киненазной активностью, гидролизуют пептидные медиаторы воспаления (брадикинин, калидин), тем самым уменьшают сосудистую проницаемость и снижают проявление экссудативных реакций. Кроме того, эндолимфатическое введение имозимазы способствует очищению лимфы от токсичных продуктов тканевого распада, удаляет из нее агрегаты клеток, активированные факторы свертывания и растворимые фибрин-мономерные комплексы.
Учитывая, что 70 % лимфы, поступающей в грудной лимфатический проток, имеет абдоминальное происхождение, есть основание полагать, что такие методы как лимфодренирование с эндо-лимфатическим введением имозимазы могут вне-
сти существенный вклад в комплексное лечение распространенного гнойного перитонита.
ЛИТЕРАТУРА
1. Байерман К. Определение следовых количеств органических веществ / К. Байерман. — М.: Мир, 1987. - 462 с.
2. Баркаган З.С. Основы диагностики нарушений гемостаза / З.С. Баркаган, А.П. Момот. — М.: «Ньюдиамед-АО», 1999. — 217 с.
3. Бельков Ю.А. Влияние иммобилизованных бактериальных протеаз на динамику показателей системы гемостаза у больных с окклюзирующими заболеваниями сосудов нижних конечностей / Ю.А. Бельков, В.Н. Князева, В.И. Марченко // Бюл. НЦССХ им. А.Н. Бакулева, сборник «Сердечно-сосудистые заболевания», VI Всероссийский съезд сердечно-сосудистых хирургов, Москва, 5 — 8 декабря 2000 г. — М., 2000. — С. 114.
4. Грызунов Ю.А. Проведение измерений параметров ЭКА и ОКА на анализаторе АКЛ-0 / Ю.А. Грызунов // Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. — М., 1998. — С. 104—107.
5. Использование углеродных адсорбентов для получения высоко эффективного препарата сывороточного альбумина / Н.П. Метальникова, В.П. Пономарев, С.И. Ханюченко и др. // Хим.-фарм. журн.
— 1998. — № 12. — С. 1482—1485.
6. Исследование состава белково-пептидного комплекса фетальных тканей человека и ювенильных тканей кролика / В.Г. Горохова, Э.Э. Кузнецова, А.Г. Горохов и др. // Бюл. экспер. биол. и мед.
— 2004. — № 4. — С. 423 — 425.
7. Митрука Б.М. Применение газовой хроматографии в микробиологии и медицине / Б.М. Митрука. — М.: Медицина, 1978. — 607 с.
8. Нечаев Е.В. Сочетанное применение физических и химических методов санации брюшной полости в лечении разлитого гнойного перитонита: Авто-реф. дис. ... канд. мед. наук. — Иркутск, 1998. — 24 с.
9. Троицкий А.В. Разработка способа получения лекарственных препаратов на основе иммобилизованных протеиназ Bac subШis: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. — Новосибирск, 1998. — 23 с.
