CC BY
20
УДК 577.121: 636.2
И.П. СТЕПАНОВА И.В. КОНЕВА В.В. МУГАК
Омский государственный аграрный университет
НОВЫЙ ПОДХОД К ОЦЕНКЕ
ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ
СИСТЕМ ДЕТОКСИКЛЦИИ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА_
Разработан новый подход к оценке функционирования систем детоксикации крупного рогатого скота на основе показателей крови, характеризующих интенсивность процессов свободнорадикального окисления, состояние антиоксидантной системы, содержание веществ низкой и средней молекулярной массы в плазме и эритроцитах, эффективную концентрацию и связывающую способность альбуминов.
Значительные стрессовые нагрузки в современных условиях на организм сельскохозяйственных животных, в том числе крупного рогатого скота, могут понижать эффективность системы естественной детоксикации и, в свою очередь, устойчивость организма к влиянию токсикантов. Поэтому для сохранения продуктивного здоровья животных необходим постоянный контроль над функционированием системы детоксикации с учетом возрастных и других факторов. Кроме того, сведения об особенностях ее деятельности в зависимости от возраста и физиологического состояния следует учитывать при организации системы адаптационных мероприятий по ветеринарной защите здоровья животных,
В настоящее время для оценки системы детоксикации организма крупного рогатого скота используют в основном метаболические показатели, характеризующие функциональное состояние печени и почек, однако они не всегда обладают высокой диагностической надежностью. Совершенствованию этой оценки препятствует недостаточная изученность метаболических реакций, обеспечивающих детоксикацию, с помощью современных биохимических методов (с учетом возраста и физиологического состояния).
К универсальной биологической системе детоксикации относится антиоксидантная система (АОС), для характеристики которой в последнее время все шире используется метод биохемилюминесценции [1,6]. Однако с его помощью у крупного рогатого скота в физиологических условиях не изучались возрастные изменения и особенности свободнорадикальных реакций при разных физиологических состояниях. Малочисленными являются сведения о показателях биохемилюминесценции крови животных при патологических состояниях
Интегральный показатель на основе данных о содержании веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) считается универсальным биохимическим маркером, отражающим уровень патологического метаболизма, а следовательно, и деятельность системы детоксикации [4). Но в литературе отсутствуют сведения об уровне ВНСММ и об его соотношении с состоянием свободнорадикальных процессов в крови крупного рогатого скота в пост-натальном онтогенезе и при разных физиологических состояниях.
Недостаточно сведений о взаимосвязи интенсивности свободнорадикальных реакций с процессами катаболизма белков и энергетическим состоянием клетки при острой химической интоксикации.
Конъюгированйе ксенобиотика с альбуминами является первым безопасным и эффективным механизмом детоксикации при окислении веществ в печени [3]. В то же время практически отсутствуют сведения об эффективной концентрации (ЭКА) и связывающей способности сывороточных альбуминов (ССА) у крупного рогатого скота разного возраста в норме и при патологии.
Одним из интегральных показателей функционирования системы детоксикации животных является сорбционная способность эритроцитов (ССЭ). Однако данных об этом показателе у крупного рогатого скота в физиологических условиях в постнаталь-ном онтогенезе до сих пор не имеется. Недостаточно сведений о сорбционной способности эритроцитов животных при патологических состояниях.
Это показывает необходимость в разработке нового более совершенного методологически обоснованного подхода к оценке функционирования системы детоксикации организма крупного рогатого скота, что явилось целью исследования.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследования выполнялись на крупном рогатом скоте красной степной породы в ряде хозяйств Омской области. Схема проведения исследований представлена на рис. 1. В первой серии исследований изучалась группа клинически здоровых телок в разные возрастные периоды (по п = 15) и коров в возрасте 3-4 лет с аналогичными показателями массы, молочной продуктивности (средней) и количеством лактаций (2-3) при разных физиологических состояниях (по п = 30). Продолжительность сухостойного периода составляла 60, раздоя - 100 суток после отела. Кроме того, обследовалась группа животных с клиническими признаками сдвигов в обмене веществ. У телок наблюдались отставание в росте, снижение массы тела, потеря шерстного покрова в области живота и шеи и т.д. Группа коров делилась на две подгруппы (поп = 10): с 1-й (слабой) и 2-й (явной) степенью выраженности метаболических нарушений (названия - условные). Животные
Группа крупного рогатого с
Клинически здоровая
С клиническими признаками нарушенного метаболизма
Коровы: Телки:
— раздой, - 2-15
— начальный этап сут.,
сухостоин ости, — 1 мес.,
заключительный — 2 мес.,
этап — 3 мес.,
сухостойности. — 6 мес.,
— новотельность. - 9 мес.,
- 12 мес.,
- 1В мес.,
— 24 мес.
Коровы периода
ртдоя - слабо
выраженные
признаки:
- явно
выраженные
признаки
Телки.
- 6 мес.
- У мес.,
- 12 мес
Изучаемые показатели
СРО АОС и ВНСММ ССА ЭКА
ССЭ
Общепринятые бнохнмиические показатели: общий белок, альбумины, мочевина, общий билирубин, креатчнин, АсАТ. АлАТ. тимоловая реакция
Корреляция показателей
Рис. 1. Схема проведения исследований
1-й подгруппы характеризовались снижением молочной продуктивности, 2-й — снижением массы тела, потерей шерстного покрова в области живота и шеи и т.д. Вторая серия исследований проводилась на группах-аналогах крупного рогатого скота по 15 голов в каждой. Общепринятые биохимические показатели сыворотки крови: общий белок, мочевина, креатинин, общий билирубин, аспартатаминотран-сфераза (АсАТ), аланинаминотрансфераза (АлАТ), тимоловаю реакция определялись унифицированными методами с помощью наборов реактивов фирмы «Клини-Тест» (Россия).
Сорбционная способность эритроцитов крови оценивалась по методу A.A. Тогойбаева и др. (1988), основанного на фотометрии плотности окраски комплекса эритроцитов с красителем метиленовым синим. Общая концентрация альбуминов (ОКА) определялась с помощью метода, основанного на фотометрии плотности окраски комплекса альбуминов скрасителем бромкрезоловым пурпурным. Оценка связывающей способности альбуминов проводилась по методу, основанному на фотометрии плотности окраски комплекса альбуминов с красителем конго-ротом [2]. Содержание ВНСММ определялось по -методу М.Я. Малаховой (1989), принцип которого состоит в осаждении белков плазмы крови и эритроцитов раствором трихлоруксусной кислоты с последующей регистрацией спектра водного раствора супернатантов в ультрафиолетовой области с помощью спектрофотометра СФ-46. Уровень ВНСММ оценивался по площади фигуры (S), ограниченной спектральной кривой и осью абсцисс в диапазоне длин волн 238 - 298 нм. Площадь рассчитывалась по формуле:
S=4-iD , (1)
^ (238-298)
где D — оптическая плотность (ед ); 4 - шаг измерения.
Свободнорадикальные процессы изучались методом железоиндуцированной биохемилюминесцен-ции с помощью биохемилюминометра БХЛ-06М. Интенсивность реакций свободнорадикального окисления оценивалась по светосумме вспышки хе-милюминесценции сыворотки крови за 30 с (показатель СРО), а активность антиоксидантной системы - относительными единицами тангенса угла наклона кинетической кривой хемилюминесценции
(показатель АОС).
Рис. 2. Значения показателя АОС сыворотки крови
клинически здоровых телок Примечание: здесь и далее **, *** - достоверность различий по сравнению с контролем (соответственно р ^ 0,05; р < 0,01; р £ 0,001).
Контроль - 1 месяц
Эффективность разработанных в работе показателей функционирования системы детоксикации изучалась на коровах с послеродовым острым гнойно-катаральным эндометритом. По степени выраженности интоксикации животные делились на 3 группы. В 1-ю (п = 18) и 2-ю (п = 16) группы входили коровы в компенсированном состоянии без угрозы и с угрозой развития сепсиса соответственно (условно — 1-й 2-я степень эндотоксикоза). Третью группу (п = 5) составляли животные с развившимся сепсисом и недостаточностью какой-либо одной или нескольких функциональных систем (условно — 3-я степень эндотоксикоза). Контрольную группу составляли животные 3 — 4-х лет в послеродовой (3—15 суток после отела) период (п = 25) с аналогичными показателями массы и молочной продуктивности, у которых значения биохимических показателей находились в пределах физиологической нормы.
Исследования проводились в зимний стойловый период. Животные получали одинаковый по структуре и питательности рацион, соответствующий нормам кормления.
Статистическая обработка данных проводилась с использованием критериев Стьюдента и Фишера, для выявления сопряжённости признаков применялся коэффициент линейной корреляции Пирсона. Нормальность распределения проверялась с помощью критерия соответствия %2.
Результаты и их обсуждение
Полученные результаты показали, что рутинные биохимические показатели крови животных, характеризующие функциональное состояние печени и почек, не способны выявлять адекватное усиление, а обнаруживают уже неадекватное усиление работы системы детоксикации, но и то лишь при локализации первичного патологического очага в печени или почках. Во всех остальных случаях увеличение их значений свидетельствует о развитии печеночно-по-чечной недостаточности, возникающей при дисфункции органов системы детоксикации.
Интегральный подход к оценке функционирования системы детоксикации крупного рогатого скота разработан на основе комплекса метаболических показателей крови, отражающих ее деятельность, а именно показателей реакций свободнорадикального окисления и состояния антирадикальной защиты, содержания веществ низкой и средней молекулярной массы плазмы и эритроцитов, эффективной концентрации и связывающей способности альбуминов, сор-бционной способности эритроцитов.
2-15 1 2 3 6 9 12 18 24
Рис. 3. Значения показателя СРО сыворотки крови здоровых телок Примечание: контроль - 1 месяц
Состояние свободнорадикальных реакций крови
Развитие стрессового состояния в организме животных в раннем постнатальном онтогенезе, сопряженное с осуществлением специфических адаптивных реакций, связанных с различиями в кислородных режимах и метаболизме плода и новорожденного, приводит к существенному изменению в течение свободнорадикальных реакций (рис. 2).
Установлено, что самая низкая антиоксидантная активность сыворотки крови характерна для новорожденных телок, к их одномесячному возрасту она увеличивается, в 1 — 3-месячном возрасте — практически не изменяется, с 3 до 6 месяцев — вновь повышается, а в последующем остается на постоянном уровне, характерном для взрослых животных.
В то же время, интенсивность процессов свобод-норадикального окисления устанавливается на отно сительно низком стационарном уровне, характерном для клинически здоровых взрослых животных, к 2-месячному возрасту, что указывает на согласованное взаимодействие всех звеньев системы АОС, то есть на завершение в последней адаптивных реакций (рис. 3). Постепенное повышение мощности системы АОС к 6-месячному возрасту, по-видимому, связано с алиментарными факторами
У животных в период родов, когда компенсаторно-адаптационные механизмы материнского и плодового организмов находятся в состоянии максимального напряжения, при котором, в частности, в крови материнского организма существенно возрастает парциальное давление кислорода и увеличивается интенсивность обмена липидов, достоверно изменяется функционирование антиоксидантной системы. В сыворотке крови у здоровых коров в период раздоя (контроль) показатель АОС равен 0,21 ± 0,02 ед.; его значения в периоды начального и заключительного этапов сухостойности и новотельно-сти увеличиваются до 0,25 ± 0,02; 0,25 ± 0,01 и 0,25 ± 0,03 ед. (р< 0,05); при этом показатель СРО практически не изменяется и принимает значения 16,65 ± 0,83; 14,51 ±2,41; 15,07 ± 2,10 и 17,69 =ь 0,56 ед. (р > 0,05) соответственно.
По-видимому, протекание реакций свободнора-дикального окисления на низком стационарном уровне, обеспечивающим нормальное течение метаболических процессов, обусловлено адаптивными изменениями в системе АОС.
У животных с клиническими признаками метаболических нарушений выявлена интенсификация реакций свободнорадикального окисления при одновременном снижении антиоксидантной активности сыворотки крови (рис. 4).
| 200 Нсро ^
| 180 4 .»ИАОС ***
2 160 |НКБ № И
" 1401 I II
I Мш!
5 тещи телки коровы коровы коровы
контроль контроль 1 степень 2 степень
Рис. 4. Значения показателей СРО, АОС и КБ у животных при метаболических нарушениях
В этом случае линейная взаимосвязь между значениями показателей СРО и АОС практически отсутствует. В группе 12-месячных телок коэффици-е нт Пирсона равен 0,20 ед., в группах коров со слабо и явно выраженными признаками сдвигах в обмене веществ — соответственно 0,28 и — 0,16 ед. (р >0,05).
Полученные результаты показывают, что соотношение функционирования про- и антиоксидантной систем в организме животных по разным причинам может меняться. Они подтверждают тот факт, что интенсивность окислительных процессов в организме является не только регуляторным механизмом направленности обменных процессов, но и начальным звеном в развитии органной патологии [5]. Несостоятельность АОС на фоне усиления интенсивности пероксидации приводит к развитию оксидативного стресса, что, возможно, является одной из возможных причин клинических проявлений метаболических нарушений.
Необходимо отметить, что повышение значений показателей СРО и АОС относительно референтных величин (с учетом возраста и физиологического состояния), свидетельствующих, прежде всего, об активации свободнорадикальных реакций липидов, может быть связано как с нарушением липидного обмена (гипо-, гипер-, дислипопротеи-немии) в организме, так и с воспалительным процессом или инфекционным заболеванием. Поэтому при выявленном дисбалансе интенсивности свободнорадикальных реакций липидов и состояния АОС необходимо определить содержание общих липидов сыворотки крови для исключения ли-пидных нарушений. При нормальной концентрации общих липидов следует провести общий анализ крови для подтверждения наличия воспалительного процесса. С целью выявления конкретного воспалительного можно провести, например, ряд определений ферментов, активность которых меняется более дифференцированно. Так, активность щелочной фосфатазы изменяется при заболеваниях печени и костной патологии, а-амилазы или липазы — при панкреатите и т.д.
Понижение значений показателей СРО и АОС относительно референтных величин (с учетом возраста и физиологического состояния) свидетельствует либо об анемии, либо о наличии злокачественного образования.
Для расширения диагностических возможностей метода биохемилюминесценции разработан и изучен коэффициент сбалансированности свободнорадикальных процессов (КБ, ед.), который является отношением показателей АОС (ед.) и СРО (ед.) и рассчитывается по формуле:
Рис. 5. Спектрограммы плазмы (1) и эритроцитов (2) крови здоровых коров в период раздоя
КБ = ^1100, „ч
СРО Ш
где 100 — эмпирический коэффициент.
Коэффициент сбалансированности в группах животных в возрасте: 2— 15 суток, 1, 2, 3, 6, 9, 12, 18, 24 месяцев принимает значения: 0,95 ± 0,10; 1,18 ± 0,12; 1,09 ± 0,15; 1,10 ± 0,13; 1,30 ± 0,10; 1,34 ± 0,14; 1,39 ± 0,18; 1,32 ± 0,15; 1,38 ± 0,14 ед. соответственно. Следует отметить, что КБ у новорожденных телок ниже, чем у животных других возрастных групп (р <0,05).
Значения КБ коров и в периоды: раздоя (контроль), начального и заключительного этапов сухостойнос-ти и новотельности соответственно равны: 1,26 ± 0,05; 1,67 ± 0,06; 1,68 ± 0,17; 1,41 ± 0,13 ед., причем они достоверно увеличиваются в период сухостойности (р < 0,001).
Выявлено, что у животных с клиническими признаками нарушенного обмена веществ значения КБ достоверно ниже по сравнению с контролем, причем, чем сильнее выражены метаболические нарушения, тем выше степень изменения показателя (рис. 5). Вероятно, величина КБ меньшая единицы, свидетельствует о состоянии оксидативного стресса в организме.
Эффективность показателей биохемилюминес-ценции крови определяется высокой чувствительностью на наличие предпатологического состояния. Если их значения находятся в диапазоне значений нормы, можно однозначно говорить об отсутствии в этом организме патологии или предпатологического состояния, что невозможно на одном анализе ни при каких других формах обследования.
Таким образом, полученные результаты показывают, что интегральные показатели свободноради-кальных реакций позволяют своевременно выявлять адекватное усиление функционирования системы детоксикации.
Соотношение интенсивности свободнорадикальных процессов с содержанием веществ низкой и средней молекулярной массы крови
Содержание ВНСММ признано универсальным биохимическим маркером, отражающим уровень патологического метаболизма, а, следовательно, и деятельность системы детоксикации. В группу ВНСММ входит более 200 соединений с молекулярной массой 500-5000 Д, способных к ультрафиолетовому поглощению света в диапазоне длин
плазма
18 - Т ^т
^ ^"эритроциты „• ,„
2?15 1 2 3 6 9 12 1В 24 суг. мес. мес. мес. мес. мес. мес. мес. мес.
Рис. 6. Содержание ВНСММ плазмы и эритроцитов крови здоровых телок
волн 238— 310 нм. Это вещества в основном белковой и углеводной природы с разной биологической активностью. В физиологических условиях содержание ВНСММ в крови поддерживается на стационарном достаточно низком уровне, причем 95% ВНСММ удаляются главным образом путем гломе-рулярной фильтрации. При метаболических нарушениях той или иной степени выраженности, сопровождающих самые различные, этиологически и патогенетически нетождественные состояния, в жидкостях и тканях организма в нефизиологических концентрациях накапливаются продукты нормального и нарушенного метаболизма, в том числе и с низкой и средней молекулярной массой. Показано, что при сохранении нормального уровня гло-мерулярной фильтрации повышение содержания ВНСММ в крови связано с дисбалансом между активностью протеазной и антипротеазной систем.
При анализе профилей спектрограмм крови здоровых животных обнаружено, что они имеют вид параболы рис. 5. В диапазоне длин волн 238 — 246 нм, спектрограммы имеют нулевые, а начиная с 250 нм равномерно восходящие значения оптической плотности с максимумами светопоглощения соответственно для плазмы и эритроцитов крови при 274 ± 8 и 286 ± 4 нм. Необходимо отметить, что в группе новорожденных телок максимум поглощения эритроцитов резко сдвинут в коротковолновую область.
В ходе адаптации орг анизма к условиям окружающей среды в крови существенно изменяется содержания ВНСММ. В плазме самый высокий уровень этих молекул наблюдается у новорожденных телок, начиная же с 1-месячного возраста, он устанавливается на стационарном уровне характерном для взрослых животных (рис. 6). В эритроцитах максимальная концентрация ВНСММ также характерна для новорожденных животных, к 1-месячному возрасту она снижается и остается неизменной до 3-х месяцев жизни, к 6-ти месяцам — повышается и стабилизируется.
По мере развития организма в крови изменяется содержание многочисленных низкомолекулярных и среднемолекулярных азотистых веществ, в частности, нуклеотидов, нуклеозидов, мочевой кислоты, креатина, креатинина, мочевины, аминокислот, оли-гопептидов и т.д. Стабилизация содержания ВНСММ к 6-месячному возрасту свидетельствует о завершении адаптации.
У здоровых коров при наиболее напряженных физиологических состояниях, повышенная потребность организма в таких важнейших соединениях как МАО1", NADP+, рибозо-5-фосфат, глутатион, необхо-
¡ВНСММпшзмы |вНСММэритроцитов
■ики
X
s
Рис. 7. Содержание ВНСММ и значения ИКИ
у животных при метаболических нарушениях
димых для процессов синтеза и детоксикации, приводит к снижению содержания ВНСММ. Уровень ВНСММ плазмы и эритроцитов крови коров в периоды раздоя (контроль) и начального этапа сухостойно-сти практически не различается: в 1-м случае он равен 5,10 ±0,82 и 15,26 ± 1,25, а во 2-м - 4,83 ± 0,60 и 13,84 ± 1,64 ед. В период заключительного этапа сухостой-ности он снижается до 3,33 ± 0,47 и 6,76 ± 0,93 (р < 0,001), в период новотельное™ — до 4,38 ± 0,46 (р > 0,05) и 8,92 ± 0,71 ед. (р <0,001) соответственно.
Спектрограммы крови крупного рогатого скота с клиническими признаками нарушенного обмена веществ имеют иной, чем в норме, характер. У животных со слабо выраженными признаками на спектрограммах эритроцитов в основном наблюдается повышение, а плазмы крови, напротив, снижение значений оптической плотности при длинах волн, соответствующих максимумам светопоглощения. В то время как у коров с явно выраженными признаками отмечается более высокое расположение спектрограмм плазмы и эритроцитов крови в целом, смещение максимумов поглощения УФ-лучей от нормальных величин. Кроме того, появляются отличные от нуля значения оптической плотности в диапазоне длин волн 238 — 246 нм, в котором регистрируются продукты распада клеток микробной природы, ксенобиотики и т.д.
Характер изменений уровня ВНСММ в зависимости от степени сдвигов в обмене веществ является разнонаправленным, что свидетельствует о возможности использования этих данных для контроля над метаболическим статусом животных. У животных со слабо выраженными признаками нарушенного метаболизма в плазме он снижается, а эритроцитов повышается (рис. 7). В группе животных с явно выраженными признаками он увеличивается и в плазме, и в эритроцитах.
Предполагается, что незначительное увеличение уровня ВНСММ имеет компенсаторное значение. Возможно, это происходит за счет усиления синтеза цитомединов (молекулярная масса 1 — 10 кД) и коротких регуляторных пептидов. Результаты исследований последних лет не вызывают сомнений, что у нервной, эндокринной и иммунной систем, ответственных за поддержание гомеостаза, имеется единый механизм химической регуляции, ключевыми звеньями которого являются продукция и секреция регуляторных пептидов. Пептидные гормоны, низкомолекулярные полипептиды, цитокины и цитомедины осуществляют аутокринную, эндокринную, нейрокринную и пара-кринную сигнальную передачу информации. Эти клеточные медиаторы, вырабатываемые клетками в различных органах и тканях, играя роль информационных молекул, определяютосновные параметры формиро-
бмес. 6 мес. 9 мес. 9 нес. 12мес. 12 мес. коровы норовы коровы контроль контроль контроль контролЫ степень 2 степень
Рис. 8. Значения интегральных индексов крови у животных при метаболических нарушениях
вания компенсаторно-приспособительных реакций организма на стрессорное воздействие и нарушение гомеостатического баланса.
Например, в результате цитомединовой регуляции в клетках повышается активность репаратив-ных процессов, направленных на восстановление клеточного гомеостаза и снижается скорость накопления патологических изменений (повреждение DNA, мутации, злокачественная трансформация и т.д.). В то же время сверхвысокие концентрации этих физиологически активных веществ могут оказывать дезорганизующее воздействие на различные функциональные системы организма. Считается, что нарушение цитомединовой регуляции может служить одной из причин развития ряда заболеваний, инволюции органов и тканей [ 1].
Для расширения диагностических возможностей метода определения ВНСММ разработан интегральный критерий интоксикации (ИКИ, ед.), который представляет собой отношение уровней ВНСММ плазмы и эритроцитов (1) и рассчитывается по формуле:
ИКИ — плазмы
S
эр.
(з)
Значения ИКИ у здоровых телок от 2 — 15 суток до 1 месяца повышаются, затем до 3 месяцев — находятся на постоянном уровне, к 6-месячному возрасту вновь снижаются и в последующем колеблются в пределах, соответствующим взрослым животным. У здоровых коров ИКИ возрастает при наиболее напряженных физиологических состояниях (табл. 1).
У животных с признаками сдвигов в обмене веществ изменения ИКИ носят разнонаправленный характер (рис. 8). Поскольку в начальной стадии развития метаболических нарушений содержание ВНСММ в плазме снижается, а количество ВНСММ, адсорбированное на эритроцитах, напротив, повышается, значения ИКИ снижаются. По мере усиления отклонений в обмене веществ происходит полное насыщение поверхности эритроцитов молекулами низкой и средней молекулярной массы, следствием чего является повышение содержания ВНСММ в плазме, а, следовательно, и значений ИКИ.
В совокупности, полученные результаты показали, что с повышением уровня сдвигов в обмене веществ усиливается дисбаланс в деятельности про- и антиоксидантной систем, вызывающий состояние оксидативного стресса, следствием которого является увеличение содержания ВНСММ в крови.
У телок и коров со слабо выраженными признаками метаболических нарушений установлена условно-вероятная положительная взаимосвязь уровня ВНСММ эритроцитов с показателем СРО, при этом коэффициент Пирсона соответственно равен 0,54 и
0,52 (р > 0,05). У коров с явно выраженными признаками выявлена вероятная корреляция изучаемых показателей, как в плазме, так и в эритроцитах, коэффициент Пирсона соответственно равен 0,81 и 0,85 (р < 0,01). В группе телок наблюдается вероятная или условно-вероятная взаимосвязь уровня ВНСММ плазмы и эритроцитов с показателем АОС, значения коэффициента корреляции соответственно равны 0,76 (р < 0,01) и 0,59 (р > 0,05). В то же время в группах коров со слабо и явно выраженными признаками нарушенного метаболизма взаимосвязи между содержанием ВНСММ и состоянием АОС не обнаружено: коэффициент Пирсона уровня ВНСММ в плазме с показателем АОС равен 0,05 и — 0,02, а в эритроцитах — 0,22 и 0,21 (р > 0,05) соответственно.
Таким образом, значительная активация в крови процессов свободорадикального окисления, снижение антиокислительной активности при одновременном повышении уровня ВНСММ свидетельствует об усилении функционирования системы детоксикации,
Интегральные индексы крови
Для повышения экспрессности метода определения ВНСММ предложены и изучены интегральные индексы плазмы (ИИПЛАЗМЫ, ед.) и эритроцитов (ИИЭР., ед.) крови животных. Они представляют собой площади фигур, ограниченных спектральной кривой и осью абсцисс в диапазонах длин волн, соответствующих максимумам светопоглощения. Эти индексы отражают содержание веществ, поглощающих УФ-лучи в выбранных диапазонах длин волн, и рассчитываются по формулам:
ИИ
ЗОКА, г/я
(266-282)'
ииэ„=4.т
ИИ =4-уО
эр.,нов. ^ (254-266)
(4)
'Эр,—¿"(282-294). <5»
где Э - оптическая плотность, ед.; 4 - шаг измерения.
Для новорожденных животных ИИЭР. рассчитывается по формуле:
(6)
Значения интегральных индексов крови клинически здоровых телок представлены в табл. 1. Примечательно, что у новорожденных животных их значения выше, чем у одномесячных. Стабилизация ИИПЛАЭМЫ и ИИЭР. происходит к 1- и 6-месячному возрасту соответственно.
У здоровых коров значения индексов изменяются при наиболее напряженных физиологических состояниях, причем, максимальные отличия приходятся на заключительный этап сухостойного периода (табл. 2).
Значения ИИП
, у животных в зависимости от
уровня патологического обмена могут либо снижаться, либо повышаться, а значения ИИЭГ - увеличиваться относительно нормы (рис. 8).
При сопоставлении уровня ВНСММ и значений интегральных индексов крови у животных с признаками обменных отклонений в основном обнаружен практически одинаковый характер их изменений относительно нормы. Так, в объединенных группах телок и коров коэффициент Пирсона между ВНСММПЛАЗМЫ и ИИПЛАЗМЫ принимает значения 0,68 и 96 (р < 0,001), а между ВНСММЭР. и ИИЭР. -0,62 (р <0,01) и68 (р <0,001) соответственно.
С целью сокращения временных затрат на проведение анализов изучены экспрессные интегральные индексы плазмы (ЭИИ^^ы) и эритроцитов (ЭИИЗР),
3 КА, г/л
1С СЛ. %
Рис. 9. Альбуминовые показатели сыворотки крови клинически здоровых телок Примечание: контроль -1 месяц
представляющие собой оптическую плотность супер-нагантов при максимумах светопоглощения, которые рассчитываются по формулам:
ЭИИ
плазмы 274
(7)
ЭИИ
эр. —286. (8)
где Б - оитическая плотность раствора, ед. Для новорожденных животных ЭИИ.3[) рассчитывается по формуле:
ЭИИ =0,„
эр,нов 262
(9)
У здоровых телок разного возраста и коров при разных физиологических состояниях значения эииплазмы в основном соответствуют ИИПЛА;1МЬ|1 а значения значения ЭИИ.1Р - ИИэр (табл. 2).
В группах животных с проявлениями обменных отклонений также выявлен однотипный характер изменений экспрессных и соответствующих им интегральных индексов крови. В объединенной группе телок коэффициент Пирсона пар: ИИ^^-ЭИИ^^, и ИИЭР -ЭИИэр соответственно равен 0,91 и 0,97, в группе коров -0,93 и 0,97 (р <0,001). Это свидетельствуют, что экспрессные индексы крови быть использованы для контроля над состоянием биохимического профиля при массовой диспансеризации животных. В то же время они не позволяют выявлять в организме больных животных степень метаболических сдвигов с целью подбора патогенетически обоснованных методов терапии и контроля над их эффективностью.
Для выявления уровня патологического обмена веществ предложен и изучен относительный интегральный индекс (ИИотн, ед.), который представляет собой отношение интегральных индексов плазмы (5) и эритроцитов (6 или 7) и рассчитывается по формуле: ИИ
эр
Значения относительного индекса у клинически здоровых телок представлены в табл. 1. Его значения повышаются к 1 месяцу, в возрастном диапазоне от 1 до 3 месяцев находятся на постоянном уровне, к 6-месячному возрасту вновь снижаются, а в последующем стабилизируются. У коров они достоверно увеличиваются в период заключительного этапа сухостойности, а в период новотельное™ возвращаются к норме.
У животных с клиническими признаками метаболических нарушений динамика ИИотн в зависимости от уровня патологического обмена имеет разнонаправленный характер (рис. 9).
Для уменьшения временных затрат на выполнение анализов предложен и изучен относительный экспрессный индекс (ЭИИотн , ед.), который представляет
собой отношение экспрессных интегральных индексов плазмы (8) и эритроцитов (9 или 10). Он рассчитывается по формуле:
эии
ЭИИ =-аиаш-
эии (11)
эр.
Значения ЭИИОТН. в группах клинически здоровых животных представлены в табл. 1 и 2, их данных которых видно, что характер изменения значений ЭИИотн такой же, как и ИИотн В группах крупного рогатого скота с проявлениями сдвигов в обмене веществ характер изменения ЭИИотн относительно нормы также практически идентичен динамике ИИотн, что подтверждается наличием между ними вероятной корреляции. Так, в объединенной группе телок коэффициент Пирсона равен 0,98, а в группе коров - 0,92 (р < 0,001) соответственно. Результаты показывают возможность использования ЭИИотн для диагностики уровня патологического обмена.
В целом интегральный метод оценки метаболического статуса крупного рогатого скота, а, следовательно, и функционирования естественной системы деток-сикации, основанный на спектрофотометрическом определении содержания ВНСММ, является хорошо воспроизводимым, простым и повышает биохимическую информативность при сокращении числа общепринятых анализов крови. Разработанные показатели следует использовать для разных целей. Для контроля над состоянием здоровья животных следует применять интегральные индексы (4,5,6). При массовой диспансеризации крупного рогатого скота предпочтительны экспрессные индексы (7,8,9). В случае выявления метаболических нарушений необходимо применять более чувствительные тесты - ЭИИотн (11) илиИИотн (10), или ИКИ (4).
Альбуминовые показатели сыворотки крови
В физиологических условиях эффективная концентрация и связывающая способность альбуминов сыворотки крови - важные показатели функционирования системы детоксикации у телок в онтогенезе остаются на одном уровне (рис. 9). Причем эффективное содержание этих белков практически соответствует общему.
При анализе альбуминовых показателей здоровых коров в периоды раздоя, начального и заключительного этапов сухостойности и новотельности выявле-
но, что их значения практически не изменяются. При этом эффективная концентрация альбуминов равна 26,86 ± 2,57; 26,50 ± 2,30; 23,71 ± 2,34 и 25,27 ± 2,44; общая - 29,06 ± 2,39; 28,70 ± 2,20; 25,77 ± 2,37 и 27,31 ± 2,18 г/л; связывающая способность - 92,35 ± 8,80; 92,58 ± 8,99; 92,50 ± 9,86 и 92,36 ± 9,60 % соответственно.
У животных с проявлениями сдвигов в метаболизме эффективная концентрация и связывающая способность альбуминов снижаются относительно нормы, в то время как их общее количество имеет лишь тенденцию к изменению (рис. 10).
Следует отметить, что степень изменения первых показателей является практически одинаковой. Так, в объединенной группе телок коэффициент Пирсона пар: ЭКА-ССА, ЭКА-ОКА и ССА-ОКА принимает значения 0,73 (р <0,001), 0,45 (р 2 0,05) и 0,38 (р > 0,05); в группе коров - 0, 92 (р < 0,001), 0,46 (р ¿0,05) и 0,28 (р > 0,05) соответственно.
Таким образом, эффективная концентрация альбуминов и их связывающую способность, обладающие более высокой диагностической надежностью, чем общая концентрация этих белков, могут использоваться в качестве дополнительного теста для диагностики функционирования системы детоксикации, атакжедля контроля над эффективностью проводимой терапии.
Интегральные критерии крови
Спектрофотометрические методы позволяют оценить содержание только водорастворимых ВНСММ, и не характеризуют содержание гидрофобных молекул, в том числе токсичных олигопептидов. Вместе с тем, последние способны быстро связываться с клеточными мембранами и внутриклеточными белками и модифицировать их структуру, результатом чего является повышение мембранной проницаемости и ингибиро-вание активности ряда ферментов. Гидрофобные пептиды находятся в плазме практически полностью в связанном состоянии в виде комплексов с альбуминами и липопротеинами низкой плотности. В связи с чем сорбцию гидрофобных ВНСММ макромолекулами альбуминов можно рассматривать как важный механизм детоксикации организма, обеспечивающий многократное снижение свободной концентрации токсинов и их доставку в печень для последующей элиминации. Особое значение этот механизм имеет для токсинов низкой и средней молекулярной массы, так как на эти соединения не срабатывает иммунная система организма.
Интегральные индексы крови здоровых телок ( X ± в(1)
Таблица 1
Группа телок ИКИ, ед. ИИ™«, ед. ИИГ№, ед, ЭИИплдзмы. ед ЭИИэр.ед. ИИстщ ед ЭИИотн. ед
2—15сут. 0,48 + 0,04' 4,17 + 0,61"* 6,78 ±0,64- 0,24 ±0,03"' 0,49 ±0,09*" 0,51 ±0,06'" 0,44 ±0,05 "
1 мес., (контроль) 0,59 ±0,06 2,86 ±0,38 3,29 ±0,53 0,15 + 0.02 0,22 ±0,04 0,85 ±0,14 0,68 ±0,10
Змее. 0,48 ±0,06 3,09 ±0,38 4,11+0,35 0,16 ±0,02 0,27 ±0,02 0,74 ±0,13 0,59 ±0,09
6 мес. 0,35 ±0,04- 3,10 + 0,34 4,86 ±0,35 "" 0,16 ±0,02 0,32 ±0,02 ~ 0,61 ±0,08' 0,52 ±0,09
9 мес. 0,36 ±0,05*" 3,21 ±0,64 5,15 ±0,55- 0,16± 0,03 0,33 ±0,04" 0,57 ±0,09 "' 0,49 ±0,10"
12 мес. 0,40 ±0,04"" 3,15± 0,77 5,47 ±0,86" 0,17 ±0,03 0,36 ±0,05"' 0,52±0,10 "' 0,44 ±0,09"
18 мес. 0,42 ±0,04 "" 2,93 ±0,35 5,53 ±0,40 " 0,16 ±0,02 0,36 ±0,08 - 0,54 + 0,12" 0,50 ±0,07'
24 мес. 0,38 ±0,05" 2,86 ±0,19 5,39 ±0,61"" 0.14+0.01 032+0,06™ 0,57±0,14" 0,43 ±0,08"
_ Таблица 2
Интегральные индексы крови здоровых коров (X ± вс1)
Группа коров ИКИ, ед. ИИпддэмь,, ед ИИЗР., ед. ЭИИп^дзы, ед. ЭИИ31,,ед. ИИотн. ед- ЭИИслнед
раздой (контроль) 0,33 ±0,05 £29 + 0,28 5,08 ±0,87 0,13 ±0,02 0,36 ±0,04 0,44 ±0,04 0,34 ±0,08
начальный этап сухостойности 0,35 ±0,04 2,30 ±0,26 4,98 ±0,43 0,12+0.01 0,30 ±0,03 0,37 ±0,05 0,36±0,05
заключительный этап сухостойности 0,48 + 0,05" 1.45+0,29 3,04±0,71 ~ 0.08 + 0,02*" 0,21± 0,04 " 0,57 ±0,09" 0,51 ±0,08'
новотедьноегь 0,49±0,0б" 2,03 + 0,42 3,29+ 0,63 ~ 0,10 ±0,01 ' 0,23 ±0,06* 0,44 ±0,06 0,43 ±0,09
9 12 «ее. ■ ее. ьоироль
12 ьврогы кероги юр 01 и «ее. юироль 1 оге 2 сте ч 1ь
Рис. 10. Общая и эффективная концентрации и значения связывающей способности альбуминов сыворотки крови животных при метаболических нарушениях
Исходя из изложенного выше, были предложены и изучены интегральные показатели на основе уровня ВНСММ и ОКА крови. Интегральный показатель плазмы (ИП, ед.) представляет собой отношение интегрального индекса плазмы (5) и общей концентрации альбуминов сыворотки крови (г/л) и рассчитывается по формуле:
ИИ
ИП=-плазмы .[00
(12)
ИК= ИИ"лазмь. ,]00
ИИэрОКА
В физиологических условиях значения ИК новорожденных телок- минимальные, к 1 месяцу они возрастают, к 6 месяцам вновь снижаются и стабилизируются (рис. 11). У здоровых коров в периоды: раздоя (контроль), начального и заключительного этапов сухостойности и новотельности ИК соответственно равен: 1,70 ± 0,21; 1,63 ±0,19; 2,19 ± 0,37 (р < 0,05) и 1,70 ± 0,31ед. Из этих данных видно, что он снижается в период заключительного этапа сухостойности.
Интегральный критерий, также как и ИП, позволяет установить уровень патологического обмена, поскольку характер изменения его значений зависит от степени метаболических нарушений (рис. 13).
Для уменьшения временных затрат на проведение анализа предложен и изучен экспрессный интегральный критерий (ЭИК, ел ). который представляет собой отношение ЭИИПЛАЗМЬ1 (8) и произведения двух показателей - ЭИИэ|> (9 или 10) и ОКА (г/л). Он рас-
считывается по формуле:
ЭИК =
ЭИИ„
ЭИИэрОКА
100
(14)
ОКА
В физиологических условиях значения ИП плазмы телок разного возраста между собой практически не различаются (рис. 11).
У коров в периоды: раздоя (контроль) и начального этапа сухостойности значения интегрального показателя - практически одинаковые (соответственно равны 8,20 ± 0,88; 8,53 ± 1,30), в период заключительного этапа сухостойности они снижаются до 5,65 ± 1,21 ед. (р^0,001), ав период новотельности приближаются к норме (равны 7,45 ±1,44).
У животных с признаками нарушенного метаболизма ИП в зависимости от степени выраженности обменных нарушений либо снижается, либо возрастает относительно нормы (рис. 12), то есть позволяет выявить уровень патологического обмена.
К недостаткам ИП можно отнести то, что он не учитывает один из важных механизмов детоксикации ВНСММ - сорбцию этих молекул эритроцитами. Поэтому предложен и изучен интегральный критерий (ИК, ед.) крови, который представляет собой отношение ИИПЛДЗМЬ1 (5) и произведения двух показателей - ИИЭ1, (6 или 7) и ОКА (г/л). Он рассчитывается по формуле:
(13)
В физиологических условиях ЭИК телок в возрастном диапазоне от 2-15 суток до 1 месяца увеличивается, затем до 3 месяцев практически не изменяется, к 6 месяцам вновь снижается и стабилизируется.
У коров ЭИК увеличивается непосредственно перед отелом, а после отела возвращается к норме. Этот критерий в периоды: раздоя (контроль), начального и заключительного этапов сухостойности и новотельности соответственно принимает значения: 1,24 ± 0,14; 1,42 ±0,19; 1,81 ± 0,32 (р <0,05) и 1,51 ±0,25ед.
В группах животных с клиническими проявлениями обменных отклонений характер изменения ЭИК относительно нормы практически идентичен динамике ИК (рис. 13), что подтверждается наличием между ними сильной положительной корреляции. Так, в объединенной группе телок коэффициент Пирсона пары ИК-ЭИК принимает значение 0,99, а в группе коров - 96 (р < 0,001).
При сравнении эффективности биохимических показателей крови, позволяющих выявлять в организме уровень патологического обмена, таких как ИКИ (4), ИИотн (11), ЭИИотн (12), ИП (13), ИК (14) и ЭИК (15), установлено, что они обладают одинаковой диагностической значимостью. Поэтому с учетом экономической эффективности при массовой диспансеризации животных следует использовать ЭИИ0ТН
Перспективным, на наш взгляд, может стать использование показателей, основанных на изучении баланса между накоплением в крови и связыванием молекул низкой и средней молекулярной массы, в том числе и токсических, с целью оценки эффективности проводимой терапии при целом ряде заболеваний, сопровождающихся эндотоксикозом.
Так, изучена эффективность критерия интоксикации (КИ, ед.) укоров с послеродовым острым гнойно-катаральным эндометритом, сопровождающимся эндотоксикозом с разной степенью выраженности. Этот критерий учитывает содержание ВНСММ плазмы и эритроцитов крови (1), общую концентрацию альбуминов плазмы (ОКА, г/л) и рассчитывается по формуле:
ки Эплазмы .100
5эр • ОКА
(15)
где 100 - эмпирический коэффициент. Значения площадей усредненных спектрограмм плазмы и эритроцитов клинически здоровых коров в период новотельности соответственно равны 2,36 и 8,22 ед. В начальной стадии эндогенной ин-
эик
X]
внсмм,
х3
ВНСММ
х2
плазмы
не»
эр- _
Х4
ЭКА х5 '
б нес. 6 ми контроль
Энее. 12мес. 12 мое. корову коровы коровы > кошро|ъ контроль 1 степень 2 степень
Рис. 11. Значения интегральных показателей клинически здоровых телок Примечание: контроль -1 месяц
токсикации они повышаются соответственно до 10,5 и 17,3 (р < 0,001) ед. Во второй стадии наблюдается дальнейшее увеличение содержания ВНСММ, как в плазме, так и в эритроцитах крови до 19,0 и 25,7 ед. (р < 0,001) соответственно. В третьей стадии эндотоксикоза происходит значительное повышение уровня этих молекул в плазме до 25,0 (р < 0,001), в то время как в эритроцитах крови он практически остается неизменным (27,8 ед.).
Концентрация альбуминов в плазме крови здоровых коров в период новотельности равна 28,8 ± 3,2 г/ л (контроль). При 1-, 2- и 3-й стадии эндотоксикоза она снижается до 25,1 ± 2,9 (р > 0,05); 21,5 ± 2,3 (р < 0,05) и 19,4 ± 1,6 г/л (р <0,05) соответственно.
Значения КИ в норме составляют от 0,5 до 2,0 ед. Величина КИ от 2,1 до 3,0 соответствует первой степени эндотоксикоза, от 3,1 до 4,5 - второй, от 4,6 до 6,0 - Третьей степени, свыше 6,0 ед. - четвертой степени эндотоксикоза.
Необходимо подчеркнуть, что в ходе развития интоксикации образуются токсичные пептиды, способные угнетать тканевое дыхание, разобщать окисление и фосфорилирование, активировать пе-роксидное окисление липидов; ингибировагь ряд ферментов и т.д. В результате их биологического воздействия наблюдаются пониженная толерантность к бактериальной и вирусной инфекции, недостаточность клеточного и гуморального иммунитета, ухудшение нервно-мышечной проводимости и т.д. Поэтому высокий уровень ВНСММ при низкой концентрации альбуминов крови больных животных обусловливают назначение в комплексе традиционной терапии таких средств как энтеро-сорбенты.
Значительно расширяет диагностические возможности метода оценки функционирования системы детоксикации введение интегрального индекса интоксикации (ИИИ, ед.), который учитывает интенсивность свободнорадикальных процессов, состояние антиоксидантной системы и баланс между накоплением и связыванием в крови веществ низкой и средней молекулярной массы. Этот индекс рассчитывается по формуле:
Рис. 12. Показатели ИП, ИК и ЭИК крови животных при метаболических нарушениях
АОС - показатель антиоксидантной системы сыворотки крови, ед.;
ВНСММП
содержание веществ низкои и
где СРО - показатель свободнорадикального окисления сыворотки крови, ед.;
средней молекулярной массы плазмы крови, ед.;
ВНСММ.)Р - содержание веществ низкой и средней молекулярной массы эритроцитов крови, ед.;
ЭКА - эффективная концентрация альбуминов сыворотки крови, г/л;
х,, х2, х.,, х„, х5 - соответственно значения показателей СРО, АОС, ВНСММПДАЗМЫ, ВНСММЭР, ЭКА в норме.
В норме ИИИ равен 1,0 ±0,3ед. Превышение этих значений свидетельствует о сдвигах в обмене веществ.
Таким образом, установить уровень патологического обмена (независимо отэтаологических и нозологических особенностей болезни) с целью подбора патогенетически обоснованных методов терапии и контроля над их эффективностью помогут ИП (12), ИК (13), ЭИК (14) и КИ (15). Самым же объективным критерием оценки функционирования физиологических систем детоксикации животных является ИИИ (16).
Показатель сорбционной способности эритроцитов крови
В результате исследований выявлена зависимость сорбционной способности эритроцитов от возраста животных и физиологического состояния. В физиологических условиях самые высокие значения показателя ССЭ характерны для новорожденных телок (44,48 ± 2,17 %), причем они достоверно выше, чем у одномесячных животных (р < 0,05). К 1-месячному возрасту телок буферная емкость эритроцитов снижается, к 6-и месяцам незначительно увеличивается, а в последующем практически не изменяется. Показатель ССЭ у 1-, 3-, 6-, 9-, 12-, 18-, 24-месячных животных принимает соответственно значения: 37,44 ± 3,00; 40, 20 ± 1,70; 41,28 ±1,98; 41,79 ± 3,64; 42,44 ± 3,76; 42,31 ±4,П; 42,09 ±4,12%.
У клинически здоровых коров в периоды раздоя, начального и заключительного этапов сухостойнос-ти и новотельности показатель ССЭ находится практически на постоянном уровне и принимает соответственно значения 42,52 ± 1,58; 41,67 ± 1,88; 40,78 ± 3,06; 40,49 ± 3,25 % (р > 0,05).
При анализе сорбционной способности эритроцитов крови телок с признаками метаболических нарушений в возрасте 6,9,12 месяцев, а также у коров со слабо выраженными признаками обменных отклонений установлено, что она незначительно повышается соответственно до 45,39 ±3,19; 46,67 ± 3,70; 47,03 ± 1,76; 38,97 ± 3,84 (р > 0,05), у коров с явно выраженными отклонениями - увеличивается достоверно до 52,44 ± 5,02 % (р <0,01).
в связи с тем, что буферную емкость эритроцитов помимо ССЭ характеризует интегральный индекс эритроцитов (6), числовые значения этих показателей были подвергнуты корреляционному анализу. При этом между значениями ССЭ и ИИЭР в основном обнаружено наличие вероятной положительной взаимосвязи. Так, в объединенной группе телок коэффициент Пирсона равен 0,67, а в группе коров - 0,89 (р £ 0,001). Таким образом, полученные результаты показали, что определение буферной емкости эритроцитов с помощью показателя ССЭ является нецелесообразным, поскольку его можно заменить ИИЭР.
Заключение
В целом полученные результаты свидетельствуют, что разработанный подход к оценке деятельности системы детоксикации организма крупного рогатого скота является методологически обоснованным и эффективным. По интенсификации процессов свободнорадикального окисления можно выявить адекватное усиление функционирования системы детоксикации. Истощение буферной емкости антиоксидантной системы, повышение уровня ВНСММ, снижение эффективной концентрации и связывающей способности альбуминов, изменение сорбционной способности эритроцитов крови указывает на неадекватное его усиление. Значительно повышает чувствительность диагностики функционирования системы Детоксикации организма животных использование интегральных критериев, включающих вышеперечисленные показатели и рассчитываемых по формулам. При наличии нарушений интегральные показатели должны использоваться с показателями, дифференцированно отражающих определенную патологию.
Новые данные о функционировании системы детоксикации крупного рогатого скота, могут послужить методологической основой для обоснования эффективной стратегии ветеринарной защиты сохранения здоровья животных и повышения продуктивности.
Доказано, что при контакте организма с повреждающим фактором значительной интенсивности или длительности (токсикант, радиация, патогенный микроорганизм) может развиться стрессовая дезадаптация, приводящая к констатируемой нозологически дифференцированной патологии. Регулируя молеку-лярно-биохимические, структурно-функциональные и физиологические процессы, происходящие при стрессовой дезадаптации, наряду со снижением интенсивности действия неблагоприятных факторов, можно не допустить возникновения болезни.
Одним из звеньев профилактики болезней в современных практически полностью стрессогенных технологиях получения, выращивания и использования продуктивных животных, в качестве обязательного, является введение биологически активных веществ, обладающих антиоксидантными свойствами. Согласно нашим исследованиям, дозы антиоксидантов должны быть более высокими в рационах молодняка до 6 месяцев, поскольку состояние антирадикальной защиты стабилизируется только к этому возрасту. Коровы при наиболее напряженных физиологических состояниях (сухостойности и но-вотельности), сопровождающихся мобилизацией антиоксидантной системы, также нуждаются в повышенных концентрациях антиоксидантов.
Практические предложения
Выявленные особенности функционирования про- и антиоксидантных систем сыворотки крови
крупного рогатого скота являются нормой и могут быть использованы: при составлении рационов (дозы антиоксидантов должны быть более высокими в рационах молодняка, а также у коров при состояниях сухостойности и новотельное™), для контроля над состоянием антиоксидантного статуса и выявления оксидативного стресса в организме животных с целью решения вопроса о применении системной антиоксидантной терапии.
Данные о содержании веществ низкой и средней молекулярной массы, эффективной концентрации и связывающей способности альбуминов, значениях интегральных индексов крови крупного рогатого скота являются нормой и могут использоваться для контроля над состоянием метаболического статуса животных и эффективностью проводимой терапии при болезнях различной этиологии.
Экспресс-метод определения альбуминов сыворотки крови может использоваться в лабораторных и производственных исследованиях, и при массовой диспансеризации крупного рогатого скота.
Полученные значения интегральных показателей крови могут использоваться в лабораторных и производственных исследованиях породных и индивидуальных особенностей функционирования физиологических систем детоксикации организма крупного рогатого скота.
Список использованных сокращений
АОС -антиоксидантная система АФК - активные формы кислорода
ВНСММ - вещества низкой и средней молекулярной массы
ОКА - общая концентрация альбуминов
ПОЛ - пероксидное окисление липидов
СРО - свободнорадикальное окисление
ССА - связывающая способность альбуминов
ССЭ - сорбционная способность эритроцитов
ЭКА- эффективная концентрация альбуминов
Библиографический список
1. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксидан-ты / Ю.А Владимиров // Вестник РАМН -1998. - № 7. - С. 43-51.
2. Камышников В С. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика / В.С Камышников // Справочник, Т.1. -Минск: Интерпрессервис, 2003. - 320 с.
3. Ковалев И.Е. Ковалентное связывание ксенобиотиков с белками организма как механизм адаптации / И.Е. Ковалев, Н.В, Шипулина // Хим.- фармацевт, журнал. - 1996. - Т. 30. - № 11. - С. 312.
4. Малахова М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации / М.Я. Малахова. - СПб. : МАЛО, 1995. - 35 с.
5. Рецкий М.И. Система антиоксидантной защиты у животных при стрессе и его фармакологической регуляции: дисс. ... д-рабиол. наук / М.И. Рецкий. - Воронеж, 1997. - 309 с.
6. Степанова И.П. Биохимические аспекты интоксикации: монография / И.П. Степанова, Л.М. Дмитриева. - Омск: Изд-во ИВМ ОмГАУ, 2004. - 152 с.
СТЕПАНОВА Ирина Петровна, доктор биологических наук, профессор, зав. кафедрой химии. КОНЕВА Ирина Владимировна, кандидат биологических наук, доцент кафедры химии. МУГАК Вера Васильевна, кандидат биологических наук, доцент кафедры химии.
Дата поступления статьи в редакцию: 17.05.2009 г. © Степанова И.П., Конева И.В., Мугак В.В.
