CC BY
103 БЭЛУК. САНИТАРИЯ, ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ГИГИЕНА. ЖУГУШТУУ ООРУЛАР
РАЗДЕЛ 3. САНИТАРИЯ, ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ГИГИЕНА. ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ.
ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ НА СИФИЛИС В КЫРГЫЗСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ
Северина О.П., Ибраева И.Г., Мырзаева С.А., Рожкова О.И., Кучук Т.Э. Научно-производственное объединение «Профилактическая медицина»
Сифилисти тешеруучу иммуноферменттик тест-системалардын Кыргыз Республикада сапатын
баалоо
Северина О. П., Ибраева И. Г, Мырзаева С. А., Рожкова О. И., Кучук Т. Э.
«Алдын алуучу медицина» илимий - ондуруштук бирикмеси.
Корутунду. Макалада 5 иммуноферменттик сифилиске каршы тест-системалардын эффективтуулугун сезгичтиги жана озгочолугу боюнча баалоосунун изилдоосунун жыйынтыктары каралган. Баалоо мурда иштетилген жана оздоштурулгон биологиялык козомол нерселердин жардамы менен откорулгон. Баалоо эки этапты камтыйт: алдын ала текшерилген жана кенейтилген сыноолор. Жогорку ыкма сынактан откон дарт тапма препараттардын сапатын кенири изилдеп Жана алардын Кыргыз Республика аймактарында колдонууга сунуш этилет.
Негизги сездер: Иммуноферменттик анализдер, ИФА тест-системалардын сапатынын параметри, сифилис.
Quality estimation immune-enzyme test systems on a syphilis in the Kirghiz Republic
Severina O.P., Ibraeva I. G., Myrzaeva S.A., Rozhkova O.I., Kychyk T. E.
1 - Scientific production association «Preventive medicine»
Abstract. In article results of research according to diagnostic efficiency 5 immune-enzyme test systems on a syphilis on sensitivity and specificity parametres are described. The estimation was carried out with the help before the developed and certified biological control materials and included 2 stages: the preliminary and expanded tests. The given approach has allowed to study comprehensively parametres of quality of examinees of diagnostic preparations and to recommend them to application for territories of the Kirghiz Republic.
Keywords: the Enzyme immunoassay, parametres of quality IEA of test systems, a syphilis.
Современная диагностика сифилиса охватывает широкий спектр серологических методов, основанных на выявлении специфических и неспецифических антител, позволяющих с высоким уровнем точности диагностировать заболевание на разных его стадиях [1,2]. Иммуноферментный анализ (ИФА) среди них завоевывает все большие позиции в силу высокой чувствительности и специфичности метода, а так же возможностью выявлять антитела на ранних стадиях заболевания, когда другие распространенные методы еще остаются малоэффективными [4, 6]. В Кыргызстане ИФА-диагностика сифилиса пока не получила повсеместного распространения и применяется с целью диагностики заболевания частнопрактику-
ющими лабораториями, и в рамках эпидемиологических программ службой СПИД. Однако уже в ближайшее время планируется оснащение ведущих лабораторий кожно-венерологической службы ИФА-оборудованием, что должно повлечь за собой более широкое использование этого метода на всей территории государства. Вместе с тем рынок республики уже сегодня представлен значительным набором наименований используемых ИФА-тест-систем на сифилис от различных производителей. Данное обстоятельство диктует необходимость их контроля на уровне государства, поскольку качество диагностических препаратов является неотъемлемой частью обеспечения надежных результатов лабораторного анализа[3,5].
Целью нашего исследования явилось изучение и оценка диагностической эффективности регистрируемых на территории Кыргызской Республики ИФА тест-систем для диагностики сифилиса.
Материалы и методы исследования
Диагностические препараты ИФА тест-системы: «РекомбиБест антипаллидум-стрип» ф. ЗАО «Вектор-Бест», Россия; «ИФА-анти-люис G,M» и «Сиф-ДС-суммарный» ф. НПО «Диагностические Системы», Россия; «Сиф-^-ДС-стрип» и «Сиф-ДСМ-суммарный» ф. «Медико-биологический Союз», Россия; «ICE* Syphilis» ф. ABBOTT Murex Biotech Limited, США; «Syphilis Recombinant ELISA Test System» ф. ORTHO-Clinical Diagnostics, Германия.
Биологические контрольные материалы: Стандартная внутрилабораторная панель сывороток из 4-х негативных и 5-ти позитивных образцов, содержащих антитела к Treponema pallidum в различной концентрации. Использовалась для предварительной оценки специфичности и чувствительности тест-систем поступивших на регистрацию.
Референс-панель сывороток для проведения расширенных испытаний тест-систем при их регистрации на территории республики. Данная панель включала 100 негативных и 100 позитивных нативных образцов, собранных от здоровых доноров и лиц с диагнозом «Сифилис» со всех регионов республики. С её помощью проводилась оценка параметров чувствительности и специфичности испытуемых тест-систем, а также процент совпадения результатов с экспертным препаратом и степень взаимосвязи с ним.
статистические методы:
Чувствительность тест-системы (способность тест-системы правильно идентифицировать положительные образцы) рассчитывали по формуле:
4= — х 100% S
где P — количество образцов, давших положительный результат в данной тест-системе,
S — общее количество исследованных положительных образцов.
Специфичность тест-системы (способность тест-системы правильно идентифицировать отрицательные образцы) рассчитывали по формуле:
С= — у 100% S
где N — количество образцов, давших отрицательный результат в данной тест-системе,
S — общее количество исследованных отрицательных образцов.
Совпадение результатов испытуемого и экспертного препаратов рассчитывали по формуле:
А + В+ С+£>
где А - число истинно положительных результатов;
D - число истинно отрицательных результатов;
В - число ложно положительных результатов.
С - число ложно отрицательных результатов.
Достоверность совпадения результатов
оценивали по значению «%2» - критерия соответствия сопряженности экспертной и испытуемой тест-системы.
(Ay.D-Cy-Bfy.ri
~ ((А+С)у(А +В)У(В +Б)У(С+Б)
Степень взаимосвязи испытуемой и экспертной тест-системы оценивали с помощью коэффициента сопряжнности - "С", который расчитывали по формуле:
и оценивали в соответствии с полученными показателями по следующим степеням взаимосвязи:
1) 0.00 - 0.39 - слабая;
2) 0.40 - 0.69 - средняя;
3) 0.70 - 1.00 - сильная.
Наибольшее соответствие между испытуемым и экспертным препаратами наблюдается при "сильной" степени связи [7,8].
результаты исследования:
Оценка параметров качества ИФА тест-систем проводилась в два этапа с использованием разработанных в Республиканском научно-практическом центре контроля качества лабораторной диагностики инфекционных болезней (РНПЦККЛ-ДТБ) биологических стандартных материалов [5]. Тактика оценки качества диагностических препаратов проводилась в соответствие с регламентированными международными и национальными требованиями [9,10,11] и включала два этапа. На первом этапе оценки диагностической эффективности использовалась внутрилабораторная стандартная панель, включающая 5 позитивных образцов содержащих антитела к Т.ра1Шит в различной концентрации и 4 негативных образца, не содержащих антитела к Т.ра1Мит. С её помощью была проведена предварительная оценка качества ИФА тест-систем на сифилис по параметрам чувствительности и специфичности (таблица 1). Данная оценка должна была помочь исключить из дальнейших испытаний тест-системы не соответствующие основным параметрам качества.
МЕДШЦМНА ежемесячный научно-практическии медицинским журнал
Кыргызстана
Таблица 1
Результаты предварительных испытаний тест-систем для выявления
антител к сифилису
Испытуемые ИФА тест-системы для выявления анти- Treponema pallidum Параметры качества испытуемых ИФА тест-систем для выявления анти- Treponema pallidum
Чувствительность (%) Специфичность (%)
«ИФА-анти-люис G,M» НПО «Диагностические системы», Россия 100 100
«РекомбиБест антипаллидум-стрип» ЗАО "Вектор Бест",Россия 100 100
«Сиф-ДСМ-суммарный» ф. «Медико-биологический союз»,Россия 100 100
«Сиф-^-ДС-стрип» ф.«Медико-биологический союз»,Россия 100 100
«ICE* Syphilis» ф. ABBOTT Murex Biotech Limited, США. 100 100
В результате предварительной оценки чувствительность и специфичность всех ИФА тест-систем для диагностики сифилиса ровнялась 100%, что позволило продолжить оценку всех тест-систем в рамках расширенных испытаний на втором этапе исследований. С этой целью применялась референс-панель сывороток состоящая из 100 позитивных и негативных на сифилис образцов собранных из различных регионов Кыргызской Республики. Такой подход был необходим для всесторонней оценки параметров качества тест-систем и помогал исключить применение на тер-
ритории республики тест-систем, не способных правильно идентифицировать образцы, обладающих региональными особенностями.
Результаты расширенных испытаний представлены в таблице 2. Оценка испытуемых тест-систем проводилась по отношению к тест-системе «Syphilis Recombinant ELISA Test System» ф. ORTHO-Clinical Diagnostics, Германия, включенной в реестр диагностических препаратов рекомендованных ВОЗ к применению повсеместно, что позволило нам использовать её в качестве экспертной тест-системы.
Таблица 2
Результаты расширенных испытаний тест-систем для выявления антител к сифилису
Аттестуемые ИФА тест-системы для выявления анти- Treponema pallidum Показатели диагностической эффективности по отношению к экспертной тест-системе, диагностическая эффективность которой принята за 100%
Чувствительность (%) специфичность (%) совпадение результатов (%) Коэффициент сопряженности «С» Степень взаимосвязи с экспертным препаратом
«ИФА-анти-люис G,M» НПО «Диагностические системы», Россия 98 98 97,9 0,96 Сильная
«РекомбиБест антипаллидум-стрип» ЗАО "Вектор Бест",Россия 99 99 98,9 0,98 Сильная
«Сиф-ДСМ-суммарный» ф. «Медико-биологический союз»,Россия 100 96,9 98,5 0,97 Сильная
«Сиф-^-ДС-стрип» ф.«Медико-биологический союз»,Россия 100 97,8 98,7 0,97 Сильная
«ICE* Syphilis» ф. ABBOTT Мигех Biotech Limited, США. 100 100 100 1 Сильная
Из таблицы 2 видно, что специфичность испытуемых тест-систем варьировала от 96,9 до 100%, а чувствительность от 98 до 100%. Полученные результаты свидетельствуют о том, что 4 из 5 ИФА тест-систем с вероятностью от 1% до 3,1% могут дать ложноположительные и 2 из 5 с вероятностью от 1% до 2% - ложноотрицательные результаты при проведении рутинных исследований. Вместе с тем, в соответствии с международными требованиями разрешаются к применению в медицинской практике ИФА тест-системы, с чувствительностью не ниже 98% и специфичностью не ниже 95% [9], что позволило нам дать позитивную оценку всем испытуемым ИФА тест-системам.
обсуждения результатов:
Одним из условием обеспечения достоверных результатов лабораторного исследования является качество выпускаемых ИФА тест-систем, что в свою очередь требует постоянного их контроля. На основе ряда нормативных документов [9,10,11,12] в РНПЦККЛДИБ на базе Научно-производственного объединения «Профилактическая медицина» с 2005 года проводится контроль качества регистрируемых на территории государства ИФА тест-систем для диагностики сифилиса. Основными параметрами качества ИФА тест-систем является их чувствительность и специфичность, которые определяются с помощью биологических контрольных материалов. В данном исследовании были использованны ранее разработанные нами биолоогические контрольные материалы: внутрилабораторная стандартная панель сывороток, и референс-панели сывороток для проведения расширенных испытаний. Такой подход дал возможность объективно и всесторонне оценить диагностическую эффективность 5 ИФА тест-систем для диагностики сифилиса по всем требуемым параметрам качества.
В результате проведения расширенных испытаний с помощью референс-панели нативных позитивных и негативных образцов результаты 2-х ИФА тест-систем для диагностики сифилиса отличались от значений, полученных при предварительной оценке качества. Однако существенных отличий не наблюдалось, поскольку степень вза-
имосвязи с экспертной тест-системой во всех случаях была оценена как «сильная», что позволило рекомендовать их к регистрации на территории Кыргызской Республики.
список используемой литературы:
1. Глобальная ликвидация врожденного сифилиса: обоснование и стратегия действий. Доклад ВОЗ, -2008г., с.7.
2. Никулин Н.К., Главинская Т.А., Фриго Н.В., Комарова В.Д., Новикова С.И. Результаты сравнительного изучения диагностической эффективности ряда современных нетрепонемных и трепонемных тестов //Вестник дерматологии и венерологии. 1999. № 3 - с. 48-51.
3. Делекторский Л.Н., и др. Оценка диагностической эффективности лабораторных тестов // Методические рекомендации. -1992. (ЗО)
4. Киселева Г.А., Беднова В.Н., Дмитриев Г.А., Постановка иммуноферментного анализа для серодиагностики сифилиса // Вестник дерматологии и венерологии. -1998. №1 - с. 39-41.
5. Северина О. П., Ибраева И. Г., Мырзаева С. А., Рожкова О. И., Кучук Т. Э., «Разработкареференс-материалов для оценки и контроля качества иммуноферментных тест-систем на сифилис» // Здравоохранение Кыргызстана. 2009. № 3 - с. 88-91.
6. Ткачев В. К., Вяткина Т. Г. ИФА-диагностика сифилиса, информационно-методическое пособие, издание 3, 2005.
7. Разработка системы мер по управлению качеством лабораторных исследований парентеральных вирусных гепатитов в Кыргызстане // Заключительный отчет о научно-исследовательской работе по теме: № 0003096 Научно-производственное объединение «Профилактическая медицина», Бишкек - 2006, - с. 7.
8. Обеспечение и внутрилабораторный контроль качества в иммуноферментном анализе. Методическое руководство, Бишкек - 2005. (ЗО)
9. Руководство ВОЗ WHO/BTS/99.1 UNAIDS/99.5. Эксплуатационные характеристики коммерчески доступных тестов для определения инфекционных агентов в сыворотке/плазме человека, 1998.
10. Санитарные правила СП 3.3.2.561-96. Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммуноби-ологиченских препаратов (МИБП). М.1998.
11. Порядок государственного надзора за качеством МИБП. МУ 3.3.2.1081-01, М. 2001.
12. Санитарные правила СП 3.3.2.015-94. Производство и контроль МИБП для обеспечения их качества. М.1994.
