CC BY
8
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XII, № 2, 2016
CD117, CD 106, CD144, CD45, CD146, CD71, CD14, CD62P, CD73, CD147, CD116, FLT1, CD54, CD18, CD36; ангиогенных Т-клеток на основании экспрессии CD31/CD184/CD3 с использованием методов проточной иммуноцитометрии. Полученные данные обрабатывались с использованием пакетов статистических программ EXCEL, BIOSTAT и Statistica 6.0.
Результаты. Исследованы уровни эндотели-альных клеток на различных стадиях дифферен-цировки и Танг, содержащихся в мононуклеар-ной фракции периферической крови пациентов с ЛИМ при ЦМА. В первые 48 ч ЛИМ в периферической крови пациентов определялось до 5,510,5 % 34+-ЭКП, обладающих метаболической и пролиферативной активностью, но с достаточно слабым потенциалом к межклеточному взаимодействию, а также повышенное содержание в кровотоке так называемых «слущенных» CD31+CD309+CD144+ эндотелиоцитов (p < 0,05). Количество CD34+-клеток, способных принять блокирующий сигнал через FLT1, было увеличено (р < 0,05), при этом соотношение ингибитора ангиогенеза FLT1 к стимулятору ангиоге-неза CD309 составляло 1,75 (р < 0,05). Исходно низкие уровни относительного содержания пула циркулирующих «зрелых» эндотелиальных клеток начинало расти к 7 суткам терапии (p < 0,05).
Доля Танг минорного пула CD31hI к 7 суткам терапии суммарно возрастала (р < 0,01), а исходно высокий уровень экспрессии молекулы CXCR4 сохранялся. Выявлена отрицательная корреляционная связь между уровнем Танг и степенью экспрессии CD95 (г = -0.69, р < 0,05). Экспрессия CD106 была повышена (р < 0,01), что может быть связано с хронической эндотелиальной дисфункцией при ЦМА. Изучена связь проли-феративного и функционального потенциалов ЭКП: установлена корреляционная связь между экспрессией CD116 и экспрессией CD309 (г=0,84, р < 0,05), а также между экспрессией CD73 и CD71 (г=0,86, р < 0,05) и между CD73 и CD116 (г=0,55, р < 0,05).
Выводы. Определение экспрессии молекул CD34, CD31, CD309, CD133, CD117, CD146, CD54, CD106 и CD144 в различных комбинациях может служить биомаркером эндотелиально-го баланса в периферическом кровотоке. Определение баланса циркулирующих ЭКП и зрелых ЭК может быть использовано при оценке репа-ративной функции эндотелия церебрального ми-кроциркуляторного русла с целью оптимизации проводимого лечения. Определение Танг может служить дополнительным маркером лейкоцитар-но-эндотелиального взаимодействия в острейшем периоде ЛИМ при ЦМА.
Грицаев С. В., Сидорова Ж. Ю., Кострома И. И., Тиранова С. А., Свитина С. П., Дрижун Ю. С., Чубукина Ж. В., Мартынкевич И. С., Капустин С. И., Бессмельцев С. С.
ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург
ОЦЕНКА ГИПЕРМЕТИЛИРОВАНИЯ ПРОМОТОРНЫХ ОБЛАСТЕЙ ГЕНОВ SOX7, P15INK4B И АНТАГОНИСТОВ СИГНАЛЬНОГО ПУТИ WNT У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМИ МИЕЛОИДНЫМИ ЛЕЙКОЗАМИ
Цель. Изучение статуса аберрантного метилирования генов SOX7, p15INK4b и антагонистов сигнального пути Wnt у больных острым мие-лоидным лейкозом (ОМЛ) для выявления частоты аберрантного метилирования с морфологическим вариантом и характером хромосомных аберраций.
Материалы и методы. Были отобраны образцы геномной ДНК 57 больных ОМЛ. В исследование не включались больные с острым промиелоцитарным лейкозом. Возраст больных, из которых 20 мужчин и 37 женщин, был в диапазоне от 20 до 79 лет, с медианой 51 год. Распределение по вариантам было следующим: 2 боль-
ных М0 вариантом, 7 больных М1, 23 больных М2, 4 больных М4, 8 больных М5, 3 больных М6 вариантом и 10 больных ОМЛ с миелодисплази-ей. По результатам изучения кариотипа, известного у 56 больных, были выделены три группы: 31 (54,4 %) больной с нормальным кариотипом, 8 (14,0 %) с комплексным кариотипом и 17 (29,8 %) с другими хромосомными аберрациями. Статус метилирования генов изучали посредством ме-тилспецифической полимеразной цепной реакции.
Результаты. Признаки аберрантного метилирования >1 генов выявлены у 52 из 57 больных (91,2 %) ОМЛ. Наиболее частой находкой было
«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ»
Санкт-Петербург 23-24 июня 2016 г.
метилирование генов БГЯР1 и р151Ш4Ь — у 39 (68,4 %) и 36 (63,2 %) больных соответственно. Следующими по частоте убывания были гены БОХ7, БГЯР4 и БГЯР5 — у 27 (47,4 %), 24 (42,1 %) и 20 (35,1 %) больных соответственно. Одновременное метилирование 3-5 генов было более частой находкой у больных ОМЛ с мие-лодисплазией (7 из 10 больных, 70 %). При анализе числа метилированных генов в группах с разными вариантами кариотипа выявлено, что у больных с нормальным кариотипом и больных с одной или двумя независимыми хромосомными аберрациями чаще обнаруживалось метилирование 2 (32,3 % и 29,4 % соответственно) и 3 (22,6 % и 23,5 % соответственно) генов одновременно. Напротив, метилирование 5 генов чаще выявлялось у больных с множественными хромосомными аберрациями. Следствием этого является значимое различие между больными с на-
личием комплексного и нормального кариотипа, у которых выявлено одновременное метилирование 5 генов: 50,0 % против 9,7 % соответственно (р = 0,022).
Выводы. Аберрантное метилирование генов р15ШК4Ъ, БОХ7 и антагонистов сигнального пути Wnt обнаруживается у большинства больных ОМЛ, что позволяет рекомендовать гипомети-лирующие препараты для лечения больных, которым по разным причинам не может быть назначена интенсивная цито статическая терапия. Обнаружение у большей части больных ОМЛ с миелодисплазией или комплексным кариоти-пом значительного числа генов с аберрантным статусом метилирования может послужить основанием для инициации пилотного исследования по изучению комбинированного лечения 5-аза-цитидина с малыми дозами цитарабина.
Грицаев С. В., Сидорова Ж. Ю., Кострома И. И., Мартынкевич И. С., Тиранова С. А., Свитина С. П., Дрижун Ю. С., Капустин С. И., Бессмельцев С. С.
ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», г. Санкт-Петербург
АБЕРРАНТНОЕ МЕТИЛИРОВАНИЕ ПРОМОТЕРНЫХ ОБЛАСТЕЙ ГЕНОВ И ВЫЖИВАЕМОСТЬ БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ С НОРМАЛЬНЫМ КАРИОТИПОМ И ОТСУТСТВИЕМ МУТАЦИЙ
В ГЕНАХ ЕЬТЗ И ЫРМ1.
Выбор интенсивности постремиссионной терапии больных острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) зависит, прежде всего, от молекулярно-генетических аберраций, отражающих биологический фенотип лейкозных клеток, в частности, чувствительность бластов к лекарственной терапии и риск развития рецидива. Наибольшие трудности возникают в случае нормального ка-риотипа и отсутствия мутаций с установленным прогностическим потенциалом.
Цель. Изучить ассоциацию аберрантного метилирования островков CpG генов БОХ7, р15ШК4Ъ и антагонистов сигнального пути Wnt с общей и безрецидивной выживаемостью больных ОМЛ с нормальным кариотипом и без мутаций в генах FLT3 и ЫРМ1.
Материалы и методы. Изучены клинико-ла-бораторные показатели 57 больных ОМЛ, которые в индукционном периоде получали курсы 7+3. Критерии исключения: острый промиело-цитарный лейкоз и лечение гипометилирующи-ми препаратами до заготовки образцов перифе-
рической крови. Геномную ДНК из лейкоцитов периферической крови выделяли стандартным способом. До проведения исследования образцы ДНК хранили при температуре -20оС. Статус метилирования генов изучали посредством метил-специфической полимеразной цепной реакции.
Результаты. Нормальный кариотип имел место у 31 из 56 больных (54,4 %) с известными результатами цитогенетического исследования. Для решения поставленной цели из данной группы были исключены 8 больных: двое по причине обнаружения мутаций в генах FLT3 и ЫРМ и трое из-за невозможности проведения стандартных индукционных курсов 7+3. Дополнительно больные были стратифицированы на 2 группы по числу генов (БОХ7, р15ШК4Ъ, SFRP1, SFRP4 и SFRP5) с аберрантным статусом метилирования: 0-2 против 3-5. В первую группу вошли 13 больных и во вторую 10 больных. В группе с 0-2 метилированными генами полная ремиссия была достигнута у 9 (69,2 %) больны, у 4 констатирован первично-резистентный ва-
