CC BY
15
УДК 616.36-072.7:613.63
ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ПЕЧЕНИ С ПОМОЩЬЮ НАГРУЗКИ БРОМСУЛЬФАЛЕИНОМ
В САНИТАРНО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ ЭКСПЕРИМЕНТЕ
В. Н. Тугаринова, В. Е. Миклашевский
Центральная научно-исследовательская лаборатория им. С. И. Чечулина I Московского ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени медицинского института
им. И. М. Сеченова, Москва
Нагрузка бромсульфалеином (БСФ), впервые предложенная в 1925 г. (Rosental, White), в дальнейшем нашла применение для ранней клинической диагностики тбксической дистрофии печени, хронического гепатита и начинающегося цирроза. В работах, опубликованных за последние 10—15 лет, этот тест, характеризующий экскреторную функцию печени, рекомендуется как наиболее чувствительный и точный для выявления ее ранней патологии (И. Т. Абасов; В. С. Лисичкина Ricketts; Zieve и Hill; Carbone и соавторы). Макрометод определения БСФ в крови, используемый в клинической практике, неприемлем в условиях хронического эксперимента в связи с необходимостью взятия большого количества крови. Описанные до настоящего времени модификации микрометода (Casals и Olitsky; Frommer; Hoffmann и Oettel; Vogt и Sther) предусматривают применение для анализа сложных приспособлений или особых микрокювет.
В настоящей работе использован разработанный нами вариант микрометода (представляющий собой модификацию методики Гофмана и Эттеля), который позволяет определять содержание БСФ в небольшом количестве крови с необходимой точностью на отечественных фото-электроколориметрах. Это обеспечивается простым приспособлением (вставляемым в гнездо кю-ветодержателя ФЭК) для фиксации 5-миллиметровых кювет в сагиттальной плоскости, благодаря чему толщина слоя, через который проходит пучок света, становится равной 18 мм (рис. 1).
В центрифужную пробирку вносят 1,5 мл цитратно-солевого буфера (4 части 0,9% раствора NaCl и 1 часть 3,8% раствора цитрата натрия; pH буфера доводят до 6,5 добавлением кристаллической лимонной кислоты) и смешивают с 0,2 мл крови. Содержимое пробирки центрифуги-
1 Кандидатская диссертация. М., 1965.
Рис. 1. Схема футляра для установки кювет.
А — общий вид: Б — вид спереди; В — вид сверху; Г — вид сбоку. Все размеры в миллиметрах.
руют 10 мин. при 3500 об/мин. Затем 1,4 мл супернатанта переносят в чистую пробирку, туда же добавляют 0,2 мл (4 капли) 1 % раствора едкого натра (общее разведение плазмы 1 : 17,28). Содержимое тщательно перемешивают.
Колориметрирование производят против раствора цитратно-солево-го буфера при фильтре с максимальным значением коэффициента пропускания 570—580 ммк. Для опытных образцов и цитратно-солевого буфера всегда должны использоваться одни и те же кюветы.
После снятия экстинкций алкализированной пЛазмы в нее вносят 0,2 мл 1 н. раствора HCl и вновь подвергают ее колориметрированию. Полученные показатели используют в качестве контроля.
С целью определения количества БСФ в исследуемых образцах строят калибровочную кривую для алкализированных растворов БСФ различных концентраций (от 0,5 до 15 мг%). Стандартные растворы готовят, исходя из следующих объемных соотношений отдельных ингредиентов: 1 мл раствора БСФ каждой исследуемой концентрации, 15 мл нитратного буфера и 2,28 мл 1 % раствора NaOH. Этим обеспечивается разведение испытуемых растворов БСФ также в 17,28 раза, что позволяет в дальнейшем без умножения на разведение по калибровочной кривой непосредственно переводить величины экстинкций (после вычитания контроля из опытных образцов) в миллиграмм-проценты БСФ.
Изучение динамики элиминации БСФ у кроликов в условиях нормы и патологии позволяет рекомендовать следующую схему проведения пробы. БСФ вводят в краевую ушную вену в дозе 5 мг на 1 кг веса в виде 5% водного раствора (продолжительность инъекции примерно 30 сек). По литературным данным, даже введение БСФ в дозе 50—150 мг/кг не вызывает токсического эффекта (Casals и Olitsky; Kutoß и Plaa). Пробы крови берут через 1 и 15 мин. после начала введения из вены другого уха. Результаты анализов этих проб позволяют установить величину «коэффициента ретенции» (Кр):
^__3,5 X 100
КР--Э,— >
где Э15 — экстинция 2-й пробы, Эi — экстинция 1-й пробы.
Предлагаемая схема постановки опыта дает возможность контролировать правильность введения препарата, причем вычисление Кр помогает скомпенсировать некоторую неточность дозировки, возникающую при расчете ее на 1 кг веса.
В контрольной серии опытов мы использовали 20 самцов породы шиншилла весом 2,7—3,5 кг. Для отработки наиболее рациональной схемы постановки пробы брали образцы на 1,5, 10 и 15-й минуте после введения препарата, а в последующих (в условиях интоксикации) также на 20-й минуте.
Полученные нами результаты представлены в табл. 1 и на рис. 2 (серия К). Значения БСФ, найденные у отдельных животных, за единичными исключениями, находились в пределах доверительных границ, показанных на графике. Следовательно, приведенные средние концентрации БСФ, соответствующие разным срокам после нагрузки, характеризуют нормальную динамику элиминации препарата из кровеносного русла кроликов. Через 1 мин. после внутривенной инъекции среднее содержание БСФ составляло 11 мг%; через 15 мин. после нагрузки в крови здоровых кроликов практически оставались лишь следы препарата. Средняя величина Кр равнялась 2,07 с доверительными границами (при Р = 0,001) 0,82—3,32. Таким образом, превышение указанного верхнего предела должно вызывать подозрение о наличии патологии.
1 серия опытов была проведена на 15 кроликах, которым троекратно вводили подкожно ССЦ (0,3 мл/кг 50% раствора препарата в
Таблица 1
Динамика элиминации БСФ у кроликов в условиях нормы и патологии (интоксикация
СС14 разной тяжести)
Серия опытов Статистические критерии Время (в минутах) после нагрузки БСФ Коэффициент ретенции (Кр)
1 5 10 15 20
К М ±т 11 ±0,51 2,8 ±0,25 0,9 ±0,12 0,25 ±0,03 2,07 ±0,29
к/1 t Р 1,15 >0,2 2,18 <0,05 5,32 <0,001 8,5 <0,001 >10 <0,001
I М ±т 12 ±0,58 4,51 ±0,54 2,10 ±0,17 1,16 ±0,15 0,51 ±0,09 8,6 ±0,70
I/II t Р 0,58 >0,5 3,54 <0,01 5,94 <0,001 4,4 <0,001 4,33 <0,002 5,36 <0,001
II М ±т 12,4 ±0,4 6,6 ±0,33 4,15 ±0,2 2,25 ±0,19 1,55 ±0,17 2,09 ±0,02
Рис. 2. Кривые элиминации БСФ у интактных (К) и интоксицированных (I, II) кроликов в полулогарифмическом изображении. По оси ординат — концентрация БСФ (в лг%); по оси абсцисс — время (в минутах); / — кривая элиминации у интактных кроликов (К) по средним данным с верхней и нижней доверительными границами (при Р=0,05); 2 — то же у кроликов I серии; 3 — то же у кроликов II серии.
Рис. 3. Величины коэффициентов ретенции (Кр) у интактных животных (К) в условиях развития интоксикации СС14 (!, II) и в периоде восстановления (III).
По оси ординат — величина Кр; по оси абсцисс — серии опытов.
К I II III
персиковом масле) с трехдневными интервалами. Бромсульфалеиновую пробу проводили через 2 недели после заключительной инъекции. К моменту обследования общее состояние и вес животных не отличались от контроля.
Полученные данные свидетельствуют, что интоксикация ССЦ вызывает существенное нарушение процесса элиминации БСФ из организма животных, сохраняющееся еще довольно длительно после прекращения воздействия. Как следует из табл. 1 и рйс. 2 (см. серию I и К), даже в образцах плазмы, взятых у экспериментальных кроликов через 20 мин. после введения препарата, обнаружены измеримые количества БСФ.
Сопоставляя кривые элиминаций БСФ у контрольных (К) и инток-сицированных (I серия) животных, легко убедиться в существенной разнице их течения. Характерно, что статистически достоверные различия полученных показателей начинались с 5-й минуты и все более увеличивались в последующих (10—15-минутной) пробах. Как видно из рис. 2, с 10-й минуты нижняя доверительная граница в опытной группе была выше верхней доверительной границы в контрольной серии.
Величины Кр свидетельствуют о наличии очевидной патологии. Средняя величина Кр = 8,6, доверительные Гранины (при Р = 0,001) составляют 3.8-М3,4 (рис. 3).
Во II серии опытов кроликов первоначально подвергали интоксикации по схеме, описанной выше, а затем, после 3-недельного перерыва, они получили еще 8 инъекций ССЦ в виде 40% раствора в персиковом масле в дозах 0,2 мл/кг с 3-дневными интервалами. Пробу с нагрузкой БСФ проводили на 5—7-й день после прекращения инъекций (см. табл. 1 и рис. 2, серия II).
Следовательно, степень количественных отклонений данных бром-сульфалеиновой пробы от нормальных показателей служит тонким индикатором глубины функционального поражения печени. Содержание БСФ в крови животных II серии в тождественные сроки (за исключением 1-й минуты) значительно выше отмеченных в I серии. Если в I серии через 5 мин. нижняя доверительная граница была в диапазоне доверительных границ контрольной серии, то во II серии она значительно превышала верхние доверительные границы контроля, а во всех последующих пробах нижние доверительные границы II серии находились даже выше верхних доверительных границ I серии. Весьма показательно также увеличение Кр у кроликов II серии. Средняя величина Кр=20,9, доверительные границы (при Р = 0,001) составляют 8,9^-32,9. Таким образом, нарастание Кр также шло параллельно утяжелению интоксикаций (см. рис. 3).
Как видно из приведенного материала, различия динамики элиминации БСФ у нормальных и интоксицированных животных могут быть отмечены уже на 5-й минуте после введения препарата, в дальнейшем они увеличиваются и достигают максимума к 15-й минуте. В этот срок в крови нормальных животных обнаруживаются количества препарата, находящиеся на грани возможной точности измерения. Отсюда становится ясной правомерность предложенной выше схемы проведения бромсульфалеиновой пробы в качестве теста для дифференциации нормального и патологического состояния печени.
III серия опытов была поставлена на животных, использованных во II серии, после месячного перерыва в интоксикации СС14. Содержание БСФ в крови животных по изложенным выше соображениям мы определяли на 1-й и 15-й минуте после нагрузки.
Полученные результаты в сопоставлении с данными контрольной и II серий опытов представлены в табл. 2.
Таким образом, показатели ретенции БСФ в крови животных III серии значительно ниже по сравнению с аналогичными данными во II се-.-ЕДИ и статистически достоверно отличаются от последних. Это свидетель-
ствует о том, что перерыв в интоксикации сопровождается улучшением экскреторной функции печени.
В то же время высокая чувствительность пробы позволила зарегистрировать остаточные нарушения экскреции и на данном этапе эксперимента. Показатели задержки вещества в крови животных к 15-й минуте после инъекции БСФ отличаются от контроля с высокой степенью достоверности (см. табл. 2, К и III серия). Это, естественно, отражается и на величине, Кр, который в III серии равен 6,5 с доверительными границами 2,7+10,3 при Р = 0,001 (см. рис. 3).
Сравнительный анализ изложенных материалов позволяет судить о высокой точности, надежности и чувствительности теста с нагрузкой БСФ, количественные отклонения в показателях которого находятся в строгой положительной корреляции с тяжестью патологического процесса. Бромсульфалеиновая проба проста по техническому выполнению и представляет несомненный интерес для санитар-но-токсикологических исследований.
ЛИТЕРАТУРА
А б а с о в И. Т. Клин, мед., 1962, № 9, с. 121. — Л и с и ч к и н а B.C. Там же, 1963, № 8, с. 128. -¿"Carbone J. V. et al., J. clin. Invest., 1959, v. 38, p. 1989.— Casals J. et al., Proc. Soc. exp. Biol. (N. Y.), 1946, v. 63, p. 383. — F г о m m e г J., Ibid., 1954, v. 86, p. 567.— Hoffmann H. T., Oettel H„ Wschr., 1954, Bd 9, S. 965. — К u t o b S. D„ P 1 a a G. L., J. appl. Physiol., 1962, v. 17, p. 123. —l/R i с k e 11 s W. E„ Am. J. med. Sei., 1951, v. 221, p. 287, — Rose n t h a 1 S. M., W h i t e E. C„ J. A. M. A., 1925, v. 4, p. 1112.— Vogt D., Sther K., Med. Monatsschr., 1956, Bd 10, S. 154. ir Z i e v e L., Hill E., Gastroenterology, 1955, v. 28, p. 785.
Поступила 6/XII 1965 r.
УДК 614.3-074:546.262.3-31
МОДИФИЦИРОВАННЫЙ МЕТОД ФОТОЭЛЕКТРОКОЛОРИМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКИСИ УГЛЕРОДА В ПРОДУКТАХ ДЕСТРУКЦИИ НЕКОТОРЫХ ПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ
В. Д. Яблочкин
При санитарно-химическом исследовании продуктов газовыделения полимерных материалов наряду с другими веществами, как правило, приходится определять окись углерода (СО), образующуюся вследствие
Таблица 2
Показатели ретенции БСФ в условиях нормы, интоксикации CCI, и в периоде восстановления
Серия ОПЫТОВ Статистический критерий Время (в минутах) после нагрузки БСФ Коэффициент ретенции (Кр)
1 15
к Mázm 11+0,51 0,25+0,03 2,07+0,29
III/K t 0,75 6,47 7,18
P >0,4 <0,001 <0,001
III M±m 11,6+0,5 0,8+0,11 6,5+0,64
III/II t 1,33 2,16 2,28
P 0,2 0,05 <0,05
II M + m 12,4+0,4 2,25+0,19 20,9+2,02
