CC BY
24
DOI 10.31588/2413-4201-1883-245-1-41-46
УДК: 619:616. 98:579.882.11:616 097:636
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ УНИВЕРСАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ХЛАМИДИОЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ НА КРОЛИКАХ
Евстифеев В.В.1 - д.б.н., доцент, зав. отделением вирусологии, Хусаинов Ф.М.1 - д.вет.н., доцент, в.н.с., Яковлев С.И.1 - м.н.с., Хусаинова Г.И.1 - к.б.н., Акбашев И.Р.1 - м.н.с., Морозова Д.Д. 2 - ассистент
1ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» 2ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины
им. Н.Э. Баумана»
Ключевые слова: антигенная активность, иммуногенность, хламидиоз, вакцина, антитела
Keywords: antigenic activity, immunogenicity, chlamydia, vaccine, antibodies
Хламидиозы сельскохозяйственных животных представляют потенциальную угрозу не только животноводческой сфере, но и здоровью людей, контактировавших с ними.
Установлено, что хламидии чувствительны к целому ряду антибиотиков. Однако ввиду уникального жизненного цикла хламидий, включающего внутриклеточную стадию развития возбудителя, использование антибиотиков с лечебной и профилактической целью не эффективно и экономически не оправданно. Поэтому вакцинация является основным методом борьбы с хламидиозом и его профилактики у сельскохозяйственных животных. Для этого отечественными и зарубежными авторами разработан целый ряд вакцин [2, 3, 4, 5, 6].
Одним из ведущих учреждений по данной проблематике в России является ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»). За годы исследований в данной области в ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» были изучены основные проблемы, связанные с заболеваемостью животных этой инфекцией. Кроме того, разработаны средства диагностики и специфической профилактики, позволяющие эффективно бороться с данной инфекцией [1, 7, 8].
Однако на данном этапе на базе накопленных знаний и опыта назрела
необходимость создания универсальной вакцины, позволяющей осуществлять эффективную специфическую профилактику хламидийных инфекций, если не у всех, то по крайней мере у большинства видов животных (КРС, козы, овцы, свиньи, лошади).
Исходя из этого, целью настоящего исследования явилась оценка эффективности «Универсальной вакцины против хла-мидиоза сельскохозяйственных животных» на кроликах. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: изучение антигенной активности вакцины; оценка иммуногенности вакцины.
Материал и методы исследований. Исследования проводили на базе отделения вирусологии ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» и каф. хирургии, акушерства и ПМЖ, ФГБОУ ВО КГАВМ имени Н.Э. Баумана.
Исследования проводили согласно «Методическим указаниям по лабораторным исследованиям на хламидийные инфекции животных», утвержденным заместителем руководителя Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ от 30 июня 1999 г. №13-7-2/643.
Для создания вакцины использовали антигены трех гетерологичных штаммов хламидий, выделенных от разных видов сельскохозяйственных животных (КРС, свиньи, козы) при различных клини-
ческих патологиях.
Испытания на стерильность проводили согласно ГОСТу 28085-2013 путем высева на МПБ, МПА, Сабуро-агар и среду Китт-Тароцци.
Безвредность препарата определяли посредством постановки биопробы на белых мышах.
Изучение антигенной активности проводили на 8 кроликах, которые были разделены на две группы: опытную (6 голов) и контрольную (2 головы). Животные первой группы были иммунизированы универсальной вакциной внутримышечно в дозе 0,5 мл. Через 14 дней была проведена ревакцинация в той же дозе.
Для оценки антигенной активности на 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180 и 195 дни после первого введения вакцины, были проведены заборы крови с целью исследования сывороток на наличие специфических хламидийных антител в реакции связывания комплемента. Реакцию ставили с использованием «Набора антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных» производства ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».
Испытание иммуногенности
вакцины в остром опыте на кроликах проводили в 6 этапов.
На 1 этапе 6 самок кроликов были иммунизированы универсальной вакциной против хламидиоза сельскохозяйственных животных внутримышечно в дозе 0,5 мл, животные контрольной группы не иммунизировались. Через 14 дней проводили ревакцинацию иммунизированных животных в той же дозе.
2 этап включал в себя проведение серологических исследований сывороток крови кроликов в РСК с целью выявления специфических комплементсвязывающих хламидийных антител. Исследования проводились на 7, 14, 30 и 45 дни после иммунизации и на 7, 14, 30 и 45 дни после заражения кроликов. На 3 этапе, через месяц после иммунизации, животные обеих групп (опытная и контрольная) были скрещены с самцами. На 17-19 день беременности (4 этап) было проведено заражение кроликов 2 групп тремя штаммами
хламидий, которые были выделены от разных видов животных (козы, КРС и свиньи). Каждым штаммом заражали по 2 группы животных (опытную и контрольную), внутримышечно в дозе 1,0 мл.
На 5 этапе проводили оценку исхода беременности кроликов опытной и контрольной групп после экспериментального заражения вирулентными культурами хла-мидий
Заключительный (6-ой) этап включал в себя проведение бактериологических исследований патологических материалов
Уровень иммунитета, созданного универсальной вакциной, по отношению к 3 штаммам хламидий, выделенных от разных видов животных, оценивали по результатам исхода беременности кроликов, наличию или отсутствию клинических признаков хламидийной инфекции и по результатам бактериологических исследований.
Результат исследований.
Исследования на стерильность и безвредность показали, что вакцинный препарат не обсеменен микрофлорой не соответствующей стандарту антигенной композиции вакцины и не вызывает гибели и выраженной ответной реакции на введение у белых мышей. На основании этого было подтверждено, что препарат стерилен и безвреден.
В результате изучения антигенной активности универсальной вакцины против хламидиоза сельскохозяйственных животных нами было установлено, что новый вакцинный препарат, после введения животным, вызывает выработку специфических хламидийных антител. Максимальный уровень комплементсвязывающих антител был выявлен на 60 день исследования и был равен в среднем по группе 1:200. Далее концентрация хламидийных антител в крови кроликов начала снижаться и к 180 дню достигла среднего показателя 1:60. На протяжении последующих 15 суток концентрация хламидийных антител оставалась на том же уровне (рисунок 1). У животных контрольной группы на протяжении всего исследования хламидийных антител в сыворотке крови выявлено не было.
Рисунок 1 - Динамика накопления специфических комплементсвязывающих хламидийных антител у иммунизированных кроликов
180 160 140 120 100 80 60 40 20 0
7 14 30 45
Вакцинированные кролики
7 14 30 45
► Контрольные кролики
0
Рисунок 2 - Динамика накопления хламидийных антител у вакцинированных и контрольных кроликов до и после заражения
Таблица 1 - Результаты исхода беременности кроликов опытной и контрольной групп после
экспериментального заражения вирулентными культурами хламидий
Наименование группы № Вид животного, от которого был выделен штамм для заражения Исход беременности Кол-во плодов Результаты исследований: 1.Микроскопически 2.Реизолированы на РКЭ
Опытная (вакцинированные) 1 2 МРС Роды Роды 3 2 отрицательно отрицательно
3 4 КРС Роды Роды 2 3 сомнительно отрицательно
5 6 Свиньи Роды Роды 3 2 отрицательно отрицательно-
Результат исхода бе ременности по группе Роды 15 отрицательно
Контрольная 1 МРС Аборт 4 положительно
2 3 КРС Мертворождение Мертворождение 2 3 положительно положительно
4 Свиньи Рождение недоразвитых крольчат 2 положительно
Результат исхода беременности по группе Аборт, мертворож-дение рождение недоразвитых крольчат 11 положительно
На рисунке 2 представлена динамика накопления хламидийных антител в сыворотке крови вакцинированных и контрольных кроликов до и после заражения.
До вакцинации опытные кролики не контактировали с хламидийным антигеном. Накопление специфических антител в сыворотке крови было выявлено на 7 сутки после введения вакцины, в среднем титре 1:6. Максимальный титр хламидийных антител в опытной группе кроликов был выявлен на 7 день после заражения и был равен в среднем по группе показателю 1:160. На 14 день после инфицирования концентрация комплементсвязывающих хлами-дийных антител снизилась до среднего титра 1:106. На 30 день после заражения средний титр снизился до 1:80. В течение последующих 15 дней концентрация антител оставалось на том же уровне. У животных контрольной группы наблюдали рост специфических антител после введения инфекционного материала, титр которых к 45 дню после заражения, в среднем, был равен 1:65.
Результаты исхода беременности кроликов в опытной и контрольной группах представлены таблице №1.
В опытной группе родились 15 голов живых и развитых крольчат, а в контрольной группе животных наблюдались аборты, рождение слабых и мертвых крольчат.
В ходе проведения лабораторных исследований внутренних органов крольчат опытной группы обнаружить хламидии не удалось. При исследовании внутренних органов животных контрольной группы хламидии были обнаружены и реизолиро-ваны на развивающихся куриных эмбрионах, что подтверждало хламидийную этиологию абортов и мертворождений.
В ходе проведения патологоанато-мического вскрытия кроликов нами были отмечены ярко выраженные поражения внутренних органов у животных контрольной группы, которые характеризовались увеличением печени и селезенки, а также воспалительными процессами в легких.
Испытание универсальной вакцины против хламидиоза сельскохозяйственных
животных в остром опыте на 10 кроликах показало, что введение вакцины в дозе 0,5 мл обеспечивало формирование стойкого иммунитета, способного защитить беременных крольчих от экспериментального заражения вирулентными штаммами хламидий, вызывающими аборты у разных видов сельскохозяйственных животных.
Заключение. В ходе проведения лабораторных исследований опытных образцов универсальной вакцины на кроликах было доказано, что вакцина стерильна, безвредна, обладает выраженной антигенной активностью, а также способна вызывать формирование стойкого иммунитета, способного защищать лабораторных животных от экспериментального заражения вирулентными штаммами хламидий,
ЛИТЕРАТУРА:
1. Евстифеев, В.В. Разработка и усовершенствование биологических препаратов для диагностики и специфической профилактики хламидиозов животных: дис. докт. биол. наук: 06.02.02. / Виталий Валерьевич Евстифеев. - Казань 2015. -47 с.
2. Курбанов, И.А. Диагностика, меры борьбы и профилактика хламидийных абортов крупного рогатого скота / И.А. Курбанов, Ф.З. Авзалов, Л.Ф. Лабу-тина [и др.] - Казань, - 1982. - 29 с.
3. Митрофанов, П.М. Хламидиоз крупного рогатого скота и меры борьбы с ним / П.М. Митрофанов, В.А. Семенов, Р.Х. Хамадеев // ЧГСА Мин. с.-х. и П ЧР, Чебоксары. - 2001. - С. 31-42.
4. Самуйленко, А.Я. Ветеринарные аспекты обеспечения продовольственной безопасности России / А.Я. Самуйленко, Л.А. Неминущая, Е.О. Литвинова [и др.] // Ветеринария. - 2012. - № 3. - С. 9-12.
5. Спиридонов, А.Г. Желудочно-кишечные заболевания телят в условиях промышленных комплексов и разработка лечебно-профилактических мероприятий /
A.Г. Спиридонов, Х.Н. Макаев, А.К. Гали-уллин, Д.Д. Насертдинов // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: матер. межд. научно-практ. конф., посвященной 90-летию со дня рождения профессора
B.А. Киршина. - Казань, 2018. - С. 320324.
6. Хусаинов, Ф.М. Распространенность хламидиоза рогатого скота в регионе Среднего Поволжья, Предуралья и специфическая профилактика // Ф.М. Хусаинов, А.Н Чернов, В.В. Евстифеев // Ветеринарный врач. - 2011.- № 3. -С. 2-3.
7. Хусаинов, Ф.М. Профилактика и лечение хламидиоза крупного рогатого скота и свиней // Ф.М. Хусаинов, Р.Х. Ха-
мадеев // Ветеринарный врач. - 2000. - № 4. - С. 22.
8. Хусаинов, Ф.М. Клинико-эпизоотологические особенности и разработка средств специфической профилактики хламидиоза сельскохозяйственный животных // Ф.М. Хусаинов, В.В. Евстифеев, Л.А. Барбарова [и др.] // Ветеринарный врач. - Казань 2005. - № 2. - С.42-49.
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ УНИВЕРСАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ХЛАМИДИОЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ НА КРОЛИКАХ
Евстифеев В.В., Хусаинов Ф.М., Яковлев С.И., Хусаинова Г.И., Акбашев И.Р.,
Морозова Д.Д.
Резюме
В статье представлены данные о проведении лабораторных испытаний универсальной вакцины против хламидиоза сельскохозяйственных животных на стерильность, безвредность, антигенную активность и иммуногенность. Оценку стерильности препарата проводили на жидких и твердых питательных средах (МПА, МПБ, МППБ и Сабуро), безвредность вакцины оценивали по результатам биопроб на лабораторных животных: белых мышах. Установлено, что вакцина стерильна и безвредна. Антигенную активность оценивали на кроликах, путем их иммунизации. Наблюдения вели в течение 195 дней. Результаты учитывались исходя из данных, полученных в ходе проведения систематических серологических исследований сывороток крови, иммунизированных кроликов. Было установлено, что вакцина стимулирует иммунную систему лабораторных животных на выработку комплементсвязы-вающих хламидийных антител. По истечении 6,5 месяцев после введения препарата, титры хламидийных антител оставались выше показателя защитного титра и были равны в среднем 1:60. Об иммуногенности вакцины судили по устойчивости иммунизированных беременных крольчих к экспериментальному заражению вирулентной культурой хламидий. В ходе эксперимента удалось установить способность вакцины вызывать выработку противохламидий-ного иммунитета у лабораторных животных; от вакцинированных и зараженных на 3 неделе беременности кроликов удалось получить здоровое потомство, в то время как в контрольных группах были отмечены массовые аборты, мертворождения и рождение нежизнеспособного потомства. По результатам патологоанатомического вскрытия животных опытных и контрольных групп было установлено, что у вакцинированных и далее зараженных животных не было выявлено никаких патологоанатомических изменений во внутренних органах, в отличие от животных контрольных групп.
ASSESSMENT OF THE EFFECTIVENESS OF A UNIVERSAL VACCINE AGAINST AGRICULTURAL ANIMAL CHLAMIDIOSIS ON RABBITS
Evstifeev V.V., Khusainov F.M., Yakovlev S.I., Khusainova G.I., Akbashev I.R.,
Morozova D.D.
Summary
The article presents data on laboratory tests of a universal vaccine against chlamydia of farm animals for sterility, safety, antigenic activity and immunogenicity. The sterility of the new vaccine preparation was evaluated on nutrient media (MPA, MPB, MPPB and Saburo), the vaccine was harmless according to the results of bioassays on laboratory white mice and guinea pigs. The vaccine was found to be sterile and harmless to laboratory animals. Evaluation of antigenic activity was carried out on rabbits, the study lasted 195 days, the results were taken into account on the basis of data obtained during systematic serological studies of blood serum immunized with rabbits. It was found that the vaccine stimulates the immune system of laboratory animals to produce complementary chlamydial antibodies. After 6.5 months after the administration of the drug, the titers of chlamydial antibodies remained above the protective titer and were equal on average 1:60. Evaluation of the immunogenicity of the vaccine was carried out in an acute experiment on rabbits (females). During the experiment, it was possible to establish the ability of the vaccine to induce the production of immunity in laboratory animals that can overcome chlamydial infection. Healthy rabbits were obtained from rabbits vaccinated and infected at the 3rd week of pregnancy, while mass abortions, stillbirths and the birth of non-viable offspring were noted in the control groups. According to the results of post-mortem dissection of animals from the experimental and control groups, it was found that vaccinated and further infected animals did not reveal any pathological changes in the internal organs, in contrast to the animals from the control groups.
DOI 10.31588/2413-4201-1883-245-1-46-50 УДК 616:619.522
МОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ КАПСУЛ И ЛИЧИНОК ТРИХИНЕЛЛ БАРСУКА. ОСОБЕННОСТИ ДИАГНОСТИКИ И ПРОФИЛАКТИКИ
Жданова О.Б.1,2- д.б.н., профессор, ст.н.с., Окулова И.И.2,3 - к.вет.н, ст.н.с., Холкина П.Ю.2 - студент, Пересторонина А.Е.2 - студент, Рухлядьева Е.А.2 - студент;
Успенский А.В.1,2 - член-корр. РАН, Домский И.А.2 - член-корр. РАН
1ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт паразитологии
им. К.И. Скрябина»
2фбгоу во кировский гму
3ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт охотничьего хозяйства и звероводства им. профессора Б.М. Житкова»
Ключевые слова: морфометрия, зоонозы, личинки трихинелл, барсук
Keywords: morphological researches, zoonosis, Trichinella larvae, a badger
Среди всех куньих барсуки наиболее неприхотливы, они хорошо размножаются, однако нередко становятся источником распространения и резервуаром гель-минтозов в дикой природе. В Кировской области встречаются европейский и азиатский барсуки, причем, наблюдается сим-патрия данных видов. Плотность расселе-
ния барсука в настоящее время не превышает 0,25 особей на 1000 га лесных массивов. Животные часто посещают свалки и иногда заходят в населенные пункты в поисках корма. Барсук, благодаря его всеядности, часто заражается трихинеллезом. Хозяйственное значение барсука складывается из добычи жира и мяса, которое
