CC BY
101
Существенное значение в постановке диагноза токсокароза имеет эпидемический анамнез.
Нами предложен и проверен на практике гельминтоовосокпический комбинированный метод диагностики токсокароза плотоядных,
значительно превосходящий предложенные ранее.
GELMYNTOOVOSCOPY DYAGNOSIS OF TOXOCAROSIS
Dolbin D.A., Lutfullin M. H., Idrisov A.M.
Summary
The leader in diagnostics fabric toxocarosis in the way of immunological diagnostic.
Essential value directed by the diagnosis of toxocarosis а has the epidemic anamnesis.
By us it is offered and checked up in practice of gelmyntoovoscopy the combined method of diagnostics of toxocarosis carnivorous, considerably surpassing offered earlier.
УДК 619: 616.98:578.882.11+619:615.3:636.2
ОПЫТ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ЭМУЛЬСИОННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ХЛАМИДИОЗА РОГАТОГО СКОТА
Евстифеев В.В., Хусаинов Ф.М., Барбарова Л.А., Хусаинова Г.И., Мифтахов Н.Р., Нигъматуллина Д.И.
ФГБУ «ФЦТРББ-ВНИВИ», г. Казань, e-mail: vnivi@mail.ru
Ключевые слова: хламидиоз, адъювант, эмульсионная вакцина, лабораторные животные, кинематическая вязкость, антигенная активность.
Key words: chlamydia, adjuvant, emulsion vaccine, laboratory animals, kinematic viscocity, antigenic activity.
В настоящее время достоверно доказано, что успешная ликвидация хламидиоза в животноводческих хозяйствах возможна только на фоне противохламидийного иммунитета. Этот факт обуславливает применение в неблагополучных хозяйствах вакцин, индуцирующих в организме животных выработку напряженного противохламидийного иммунитета, способного противостоять заражению. Но при конструировании таких вакцин, в связи со слабой иммуногенной активностью хламидийных антигенов, возникает необходимость использования адъювантов.
На сегодняшний день практически все противохламидийные вакцины представляют собой прямую эмульсию (вода в масле) на основе неполного адъюванта Фрейнда (НАФ), который значительно усиливает иммунный ответ при совместном использовании с инактивированными хламидийными антигенами. Однако применение НАФ может вызывать нежелательные побочные эффекты в виде гранулем и стерильных абсцессов на месте инъекции, поэтому изыскание эффективных адъювантов, способных стимулировать высокий уровень
противохламидийного иммунитета и не вызывать побочных реакций, остается актуальной задачей в течение многих лет.
Ранее нами была разработана технология получения инактивированных эмульсионных вакцин против хламидиоза (патент РФ №2301682 06.2007) в составе которой применяется НАФ. На основе этой технологии были созданы и внедрены в ветеринарную практику «Вакцина против хламидиоза рогатого скота инактивированная эмульсионная» (Регистрационный № ПВР-1-1.8/02340), «Вакцина против хламидиоза свиней инактивированная эмульсионная» (Регистрационный № ПВР-1-1.8/02339) и «Ассоциированная вакцина против ПГ-3, ИРТ и хламидиоза КРС инактивированная эмульсионная» (Регистрационный № ПВР-1-4.8/02246).
Наиболее широко при конструировании эмульсионных вакцин типа «вода в масле» для рогатого скота и свиней применяется готовый коммерческий адъювант Мontanide ISA 70 производства фирмы Seppic. В отличие от НАФ который образует эмульсию с водной антигенной средой в равных соотношениях (1:1) он эмульгируется в соотношении 7 частей адъюванта к 3 частям воды (антигена), тем самым обладая меньшей вязкостью и реактогенностью.
Мы попытались усовершенствовать НАФ (УНАФ), смешивая его с водной средой в тех же пропорциях, что и ISA-70 (7:3). Это позволило уменьшить количество эмульгатора в составе адъюванта и тем самым понизить его местную реактогенность. Далее создать на основе такого адъюванта вакцину и сравнить её с аналогами на основе НАФ и ISA.
Биомассу для полишаммовой вакцины против хламидиоза крупного рогатого скота получали на основе 3-х штаммов хламидий: «СК» -возбудителя конъюнктивита телят, «МЗ» - возбудителя
менингоэнцефалита КРС и «250» - возбудителя аборта коров. Все штаммы депонированы в «ВГНКИ» и стандартизированы согласно СТО 00492374004-2008.
Антиген для вакцин стандартизировали по оптической плотности. Для вариантов вакцин, которые смешиваются 7:3, подбирали соответственную концентрацию антигена путем её пропорционального увеличения. Водную часть и адъювант при изготовлении трех вакцин смешивали в аналогичных условиях механическим способом при частоте
вращения вала мешалки 3000-4000 об/мин в течение 3-5 минут при комнатной температуре и разливали в стерильные стеклянные флаконы.
Качество вакцин проверяли согласно ТУ 9384-002-00492374-2009, утвержденным в установленном порядке. Вакцины проверялись по внешнему виду, стабильности и вязкости эмульсии, стерильности, безвредности и антигенной активности.
Стабильность эмульсии проверяли путем её замораживания при минус 400С и дальнейшего оттаивания при плюс 370С. Стабильность и внешний вид оценивали визуально.
Кинематическую вязкость вакцин устанавливали при помощи вискозиметра ВПЖ-2 путем пропускания определенного объема эмульсии через капилляр с диаметром 2,37 мм под собственной силой тяжести, засекая промежуток времени. Вязкость вычисляли по формуле V=g/9,807*T*K, где V - кинетическая вязкость мм /с, g - ускорение свободного падения в месте измерения, К - постоянная вискозиметра, Т -время истечения жидкости.
Стерильность препаратов определяли в соответствии с ГОСТ 28085 путем их высева на МПА, МПБ, Сабуро-агар, среду Китт-Тароцци с последующим помещением в термостат при плюс 370С и наблюдением в течение 10 дней.
Безвредность определяли на белых мышах массой 18-20 г. путем внутрибрюшинного введения вакцин в дозе 0,2 см и дальнейшего наблюдения за мышами в течение 2-х недель. Использовали 60 голов белых мышей: по 15 голов на каждую вакцину и 15 контрольных.
Антигенную активность и местную реакцию на введение биопрепаратов проверяли на морских свинках, клинически здоровых, массой 350 - 400 г. 16 голов морских свинок разделили на 4 равные группы, 3 из которых вакцинировали внутримышечно в дозе 0,5 см разными вариантами вакцин, а 4 группу не вакцинировали и держали в качестве контроля. После вакцинации проводили ежедневную термометрию и клинический осмотр свинок. Через месяц сыворотки крови опытных и контрольных свинок исследовали в РСК для определения уровня специфических антител.
РСК ставили по общепринятой методике используя «Набор антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиоза сельскохозяйственных животных» (№ РОСС RU. ФВ01. Н21898)
производства ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань). Результаты оценивали визуально, по феномену гемолиза эритроцитов. Отсутствие гемолиза эритроцитов оценивали как положительную реакцию (4 креста), а полный гемолиз соответственно как отрицательную реакцию.
Изучение внешнего вида и стабильности эмульсии трех образцов вакцин показало, что все они удовлетворяют предъявляемым требованиям. Вакцины представляли из себя эмульсию белого цвета. Разрушения
эмульсии во всех трех образцах после охлаждения и нагрева не происходило. В образце вакцины, приготовленном на основе усовершенствованного адъюванта (УНАФ), наблюдалось незначительное отслоение (1-2% от объема) масла вверху флакона, которое равномерно распределялось при встряхивании биопрепарата.
Данные по испытанию вакцин обобщены в таблице 1.
1. Результаты испытания вакцин
Наименование показателей Варианты вакцин на основе Контроль
НАФ КА-70 УНАФ
1. Внешний вид Удовл. Удовл. Удовл. -
2. Стабильность эмульсии Стабильна Стабильна Стабильна -
3. Вязкость эмульсии, мм /с 203 47 81 -
4. Стерильность Стерильно Стерильно Стерильно -
5. Безвредность, % выживаемости белых мышей 100 93 100 93
6. Антигенная активность, средний титр к/с антител 1:27,5 1:7,5 1:12,5 0
Определение вязкости вакцин показало значительные различия трех изучаемых образцов. Так, наибольшей вязкостью обладал образец, изготовленный на основе НАФ. Его вязкость составила 203 мм /с. Вязкость вакцины на основе УНАФ была значительно ниже и составляла 81 мм /с. Наименьший показатель вязкости - 47 мм /с был зафиксирован у биопрепарата, изготовленного на основе 1БЛ-70.
При определении стерильности было установлено, что все вакцины не давали роста бактериальной и грибной микрофлоры на питательных средах в течение срока наблюдений.
Испытание безвредности вакцин показало, что после вакцинации ухудшения состояния у мышей не наблюдалось. Выживаемость мышей, как в опытных, так и в контрольной группах была высокой (93-100%), что говорило о безвредности проверяемых биопрепаратов.
Изучение антигенной активности трех образцов вакцины показало существенные различия в титрах, вырабатываемых
комплементсвязывающие антитела. Так, в ответ на введение вакцины изготовленной на основе НАФ у морских свинок вырабатывался сравнительно высокий уровень антител. Средний титр по этой группе составил 1:27,5. Несколько ниже титр антител был в группе морских свинок, иммунизированных вакциной на основе УНАФ - 1:12,5.
Наименьшую антигенную активность проявил биопрепарат, изготовленный на основе 1БЛ-70. Средний титр антител у животных в этой
группе был на уровне 1:7,5. У контрольной группы морских свинок специфических антител к хламидийному антигену выявлено не было.
Наблюдения, проводимые за вакцинированными и контрольными свинками в течение опыта, не выявляли клинических признаков ухудшения состояния после прививки. Температурных реакций на введение вакцин также не наблюдали. На месте введения вакцины, изготовленной на основе НАФ, у морских свинок наблюдалось небольшое уплотнение, которое постепенно исчезло к концу срока наблюдения.
Таким образом, в ходе исследований удалось установить, что все испытуемые адъюванты образуют стойкие эмульсии с водным хламидийным антигеном. Вакцины изготовленные на их основе, стерильны и безвредны для лабораторных животных. Однако в ходе эксперимента установлены существенные различия в вязкости, реактогенности и антигенной активности испытуемых биопрепаратов.
Так, вакцина, изготовленная на основе НАФ, обладала наибольшей вязкостью и проявляла слабую реактогенность. Но антигенная активность этой вакцины была в разы выше по сравнению с другими препаратами.
Изготовленная на основе ІБЛ-70 вакцина обладала наилучшими показателями по вязкости, реактогенности и стабильности эмульсии, но к сожалению, антигенная активность этого биопрепарата была низкой.
Наиболее оптимальными показателями, удовлетворяющими всем требованиям по вязкости, реактогенности и антигенной активности обладала вакцина, изготовленная на основе УНАФ. Она не обладала реактогенностью, показатели её вязкости были близки к препарату, изготовленному на основе ІБЛ-70, а антигенная активность была выше, хотя уступала по этому показателю вакцине на основе НАФ.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Хамадеев Р.Х., Евстифеев В.В., Хусаинов Ф.М., Барбарова Л.А. Хламидиоз сельскохозяйственных животных: диагностика, меры борьбы и специфическая профилактика. // Ветеринарный врач 2006.-№ 1. С.29-31. 2. Хусаинов Ф.М., Евстифеев В.В., Барбарова Л.А. Оценка эффективности средств специфической профилактики хламидиозов рогатого скота и лошадей в хозяйствах Российской Федерации.// Научнотехнический бюллетень института биологии животных.- Львов, Выпуск 10. №3.- 2009.- С.192-195. 3. Шемельков Е., Федоров Ю. Антигенная активность вакцины против инфекционных болезней свиней при включении в ее состав адъювантов.// Ветеринария сельскохозяйственных животных 2011 №4. С.21-25. 4. Мечников И.И. Иммунология.// Издательство “Медицина” 2011.- №1 С.37-43. 5. Мечников И.И.
Иммунология.// Издательство “Медицина” 2011.- №2 С. 101-106.
ОПЫТ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ЭМУЛЬСИОННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ХЛАМИДИОЗА РОГАТОГО СКОТА
Евстифеев В.В., Хусаинов Ф.М., Барбарова Л.А., Хусаинова Г.И., Мифтахов Н.Р., Нигъматуллина Д.И.
Резюме
В работе изложены результаты испытания 3 вариантов инактивированных эмульсионных вакцин против хламидиоза рогатого скота, изготовленных на основе разных адъювантов.
Установлено, что все испытуемые адъюванты образуют стойкие эмульсии с хламидийным антигеном. Вакцины, изготовленные на их основе стерильны и безвредны для лабораторных животных. Однако в ходе эксперимента установлены существенные различия в вязкости, реактогенности и антигенной активности испытуемых биопрепаратов.
EXPERIENCE OF IMPROVEMENT OF AN INACTIVATED EMULSION VACCINE
AGAINST CHLAMYDIOSIS CATTLE
Evstifeev V.V., Khousainov F.M., Barbarova L.A., Khusainova G.I., Miftahov N.R., Nigmatullina D.I.
Summary
In work results of test of three options of inactivated emulsion vaccines against chlamydiosis of a cattle made on the basis of different adjuvant are stated.
It is established that all examinees adjuvant form resistant emulsions with a chlamydial antigen. Vaccines made on their basis are sterile and harmless to laboratory animals. However, during experiment essential distinctions in viscosity a reactogenicity and antigenic activity of examinees of biological preparation are established.
УДК 619:615.038:615.281
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БЕЗВРЕДНОСТИ КОМПЛЕКСНОГО АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА ФК-1
Жукова С.В. - м.н.с.; Востроилова Г.А. - д.б.н., зав. лабораторией; Ческидова Л.В. -к.в.н., с.н.с. Брюхова И.В. - к.в.н., н.с.; Беляев В.И. - д.б.н., н.с.; Шушлебин В.И. -
к.б.н., зав. лабораторией ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН», г.Воронеж, E-mail: vnivipat@mail.ru
Ключевые слова: препарат ФК-1, токсичность, белые крысы, биохимические показатели, закономерность.
