CC BY
32
RUSSIAN CLINICAL LABORATORY DIAGNOSTICS. 2018; 63(11) DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2018-63-11-707-710
IMMUNOLOGY
ИММУНОЛОГИЯ
©КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2018 УДК 616.98:579.881.11]-078.33
Штрек С. В.12, Рудаков Н. В.12, Абрамова Н. В.12, Самойленко И. Е.1, Березкина Г. В.1, Зеликман С. Ю.1,2, Кумпан Л. В.1,2, Матущенко Е. В.1,2
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ У БОЛЬНЫХ КЛЕЩЕВЫМИ РИККЕТСИОЗАМИ НА ТЕРРИТОРИЯХ РАЗЛИЧНОГО РИСКА ЗАРАЖЕНИЯ RICKETTSIA SIBIRICA
1ФБУН «Омский НИИ природно-очаговых инфекций» Роспотребнадзора, 644080, г. Омск, Россия; 2ФГБОУ ВО «Омский государственный медицинский университет» Минздрава России, 644099, Омск, Россия
Случаи клещевых риккетсиозов в Сибири и на Дальнем Востоке связаны с R. sibirica - возбудителем сибирского клещевого тифа (СКТ). В связи с резким сокращением номенклатуры выпускаемых диагностических препаратов и увеличением спектра выявленных на территории России видов риккетсий необходимы новые подходы к лабораторной верификации диагнозов. Представлена оценка эффективности серологических методов исследования (реакция связывания комплемента, реакция непрямой иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ) у больных клещевымириккетсиозами на территориях различного риска заражения R. sibirica. Обследованы больные с диагнозом сибирский клещевой тиф с высоко эндемичной территории Республики Алтай и из Называевского района Омской области, где установлено наличие природного очага риккетсиозов группы клещевой пятнистой лихорадки с циркуляций двух видов патогенных риккетсий - R. sibirica и R. raoultii. В качестве контрольной группы использовали пробы сывороток крови, полученных в эпидемические сезоны от клинически здоровых людей г. Омска.
Для верификации диагноза сибирского клещевого тифа наиболее приемлемо применение серологических методов, из которых наиболее чувствительным является ИФА, позволяющий выявить антитела в более ранние сроки. В ИФА для подтверждения диагноза первую сыворотку крови можно исследовать только на IgM. Исследование 2-й сыворотки необходимо проводить в ИФА на наличие IgM- и IgG- антител с антигеном R. sibirica. РНИФ для исследования парных сывороток следует проводить со специфичными антигенами риккетсий, циркулирующих в данном очаге. В лабораториях, не оборудованных для постановки ИФА, рекомендуется использовать РСК. При нарастании титра в 2 и более раза и обнаружении IgM и IgG во второй сыворотке, с учётом клинических проявлений, диагноз «сибирский клещевой тиф» можно считать подтверждённым.
Результаты исследований свидетельствуют о высокой эффективности серологических методов исследования (РСК, РНИФ, ИФА) и служит обоснованием для их использования в лабораторной диагностике для подтверждения диагноза СКТ.
Ключевые слова: риккетсии и риккетсиозы; группа клещевой пятнистой лихорадки;лабораторная диагностика. Для цитирования: Штрек С. В., Рудаков Н. В., АбрамоваН. В., Самойленко И. Е., Березкина Г. В., Зеликман С. Ю., Кумпан Л. В., Матущенко Е. В. Оценка эффективности серологических методов для выявления антител у больных клещевыми риккетсиозами на территориях различного риска заражения Rickettsia sibirica. Клиническая лабораторная диагностика. 2018; 63 (12): 777-782. DOI: http://dx.doi.org/10.18821.0869-2084-2018-63-12-777-782 Shtrek S. V.12, RudakovN. V.12, Abramova N. V.12, Samoylenko I. E.1, Berezkina G. V.1, Zelikman S. Y.12, Kumpan L. V.12, Matuschenko E. V.1-2
EVALUATION OF THE EFFECTIVENESS OF THE SEROLOGICAL METHODS FOR THE IDENTIFICATION OF ANTIBODIES IN PATIENTS WITH TISSUE RICKETSIOSIS ON THE TERRITORIES OF A DIFFERENT RISK OF RICKETTSIA SIBIRICA INFECTION
1Omsk Research Institute of natural focal Infections, 644080, Omsk, Russia; 2Omsk State Medical University, 644050, Omsk, Russia
Cases of tick-borne rickettsiosis in Siberia and the Far East are associated with R. sibirica, the causative agent of Siberian tick typhus (STT). In connection with a sharp reduction in the nomenclature of diagnostic products and an increase in the spectrum of species of founding rickettsiae on the territory of Russia, new approaches to the laboratory verification of diagnoses are needed. We present an evaluation of the effectiveness of serological research methods (complement fixation test, indirect immunofluorescence, and ELISA) in patients with tick-borne rickettsioses in areas of different risk of infection with R. sibirica. Patients were diagnosed with STT from the highly endemic territory of the Altai Republic and from the Naziayevsky district of the Omsk region, where natural foci of rickettsioses of the spotted fever group was detected with the circulation of two species ofpathogenic rickettsia, R. sibirica and R. raoultii. As a control group, samples of sera from epidemic seasons from clinically healthy people in Omsk were used.
To verify the diagnosis of Siberian tick typhus, the use of serological methods is most appropriate, of which the most sensitive is ELISA, which allows detecting antibodies at an earlier time. In the ELISA for confirmation of the diagnosis, the first serum can be
Для корреспонденции: Рудаков Николай Викторович, д-р мед.наук, проф., дир. ; e-mail: rickettsia@mail.ru
КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА. 2018; 63(11) DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2018-63-11-707-710
ИММУНОЛОГИЯ
examined only on IgM. Investigation of the 2nd .serum should be performed in ELISA for the presence ofIgM and IgG antibodies with R. sibirica antigen. Reaction of indirect immunofluorescence (RNIF) for the study of paired sera should be conducted with specific antigens of rickettsia circulating in this focus. In laboratories not equippedfor setting ELISA, it was recommended to use CFT. When the titer increases in two or more times and IgM and IgG are detected in the second serum, taking into account clinical manifestations, the diagnosis of "Siberian tick typhus" can be considered confirmed.
Keywords: rickettsiae and rickettsioses; spotted fever group; laboratory diagnostics.
For citation: ShtrekS. V., RudakovN. V, AbramovaN. V, Samoylenko I. E., Berezkina G. V, Zelikman S. Y., Kumpan L. V,
Matuschenko E. V. Evaluation of the effectiveness of the serological methods for the identification of antibodies in patients with
tissue ricketsiosis on the territories of a different risk of Rickettsia sibirica infection. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika
(Russian Clinical Laboratory Diagnostics).2018; 63 (12): 777-782 (in Russ.)
DOI: http://dx.doi.org/10.18821.0869-2084-2018-63-12-777-782
For correspondence: RudakovNikolay Viktorovich; e-mail: rickettsia@mail.ru
Information about authors:
Rudakov N.V., http: orsid.org/ 0000-0001-9566-9204
Conflict of interests. The authors declare the absence of conflict of interests. Acknowledgment. The study had no sponsor support.
Received 28.09.2018 Accepted 20.11.2018
В России для лабораторной диагностики клещевых риккетсиозов (КР) до недавнего времени базовым методом являлась реакция связывания комплемента (РСК), которая характеризуется невысокой чувствительностью [1]. В соответствии с Европейскими рекомендациями для серологической диагностики КР применяется реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ), которую считают «золотым стандартом» серодиагностики риккетсиозов [2]. Для постановки РНИФ используют «слайд-антигены», получаемые на культурах клеток из эталонных штаммов соответствующих видов риккетсий в специализированных риккетсиологических лабораториях [3]. В последние годы в Омском НИИ природно-очаговых инфекций для серологической диагностики риккетсиозов группы КПЛ предложен иммунофермент-ный анализ (ИФА) на основе цельно-растворимого антигена [4]. Эндемичные по сибирскому клещевому тифу (СКТ) очаговые территории отличаются по риску инфицирования Rickettsia sibirica и спектру циркулирующих штаммов риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки (КПЛ).
Цель работы - оценить эффективность серологических методов исследования (РСК, РНИФ, ИФА) у больных КР на территориях различного риска заражения Rickettsia sibirica для разработки эффективного алгоритма лабораторной диагностики КР.
Материал и методы. Для сопоставления выбраны две территории, существенно отличающихся по эпидемиологическим показателям и переносчикам - республика Алтай, большинство административных территорий которой характеризуются высоким риском инфицирования R. sibirica, и Называевский район Омской области с низким риском заражения.
По заболеваемости населения СКТ республика Алтай характеризуются наиболее высокими показателями в РФ, что является проявлением высокой эпидемической активности природных очагов. Основными переносчиками R. sibirica являются клещи Dermacentor nuttalli. В очагах КР в Алтайском крае, кроме R. sibirica, выявлены другие патогенные альфа1-протеобактерии порядка Rickettsiales - R. heilongjiangensis, R. raoultii и Anaplasma phagocytophilum [5]. Для клинической картины заболевания СКТ в Республике Алтай характерны острое нача-
ло с синдромом интоксикации, макуло-папулезная сыпь, наличие первичного аффекта (80,3%) и преимущественно среднетяжёлое течение болезни. Основной контингент заболевших составляют дети в возрасте 3-14 лет.
В 2003 г. в Называевском районе Омской области первые случаи острого лихорадочного заболевания после присасывания клеща с клиникой КР, с 2006 г. пациенты с подобной симптоматикой выявляются регулярно. У всех больных отмечается лихорадка продолжительностью в среднем неделю, первичный аффект, регионарный лимфаденит, в 70% случаях - розеолезно-петехиальная сыпь. У детей основным клиническим проявлением является регионарный лимфаденит, сопровождающийся субфе-брильной или нормальной температурой [6]. С 2009 г. в РСК с антигеном Я. sibirica у пациентов из Называевско-го района выявляют сероконверсию к Я. sibirica в РСК [7]. Места заражения людей находятся в ареале клещей D. marginatus и D. геЫсиШш, что объясняет весеннюю и осеннюю сезонность. Из иксодовых клещей, снятых с людей, методом ПЦР с последующим секвенированием ампликонов обнаружена Я. гаоиЫи. В пробе клещей D. marginatus при первичном заражении и исследовании в трёх пассажах на морских свинках идентифицирована Я. sibirica молекулярно-биологическими методами (ПЦР+секвенирование) [8]. Установлено наличие природного очага риккетсиозов группы КПЛ с циркуля-ций двух видов патогенных риккетсий - Я. sibirica и Я. гаоЫШ [9].
В качестве исследуемой группы в работе обследованы 72 больных, с диагнозом «Сибирский клещевой тиф», находившихся на лечении в инфекционном отделении На-зываевской ЦРБ в период 2012-2015 гг. Исследованы 45 одиночных и 27 парных сывороток крови, взятых в динамике инфекционного процесса. Все пациенты обследованы на первой - начале второй недели и 2-4 нед заболевания (в среднем на 6,7±3 и на 20,4±5 день болезни).
Контрольная группа состояла из 72 пробы сывороток крови, полученных в эпидемические сезоны 2012-2016 гг., от клинически здоровых людей г. Омска. Сыворотки от 34 больных группы сравнения, с диагнозом «Сибирский клещевой тиф», получены в эпидемический сезон 2017 года из Республики Алтай. Количество парных сывороток равно 22, одиночных 12.
RUSSIAN CLINICAL LABORATORY DIAGNOSTICS. 2018; 63(11) DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2018-63-11-707-710
Сыворотки крови пациентов всех трёх групп исследованы на наличие антител к антигену R. sibirica в РСК и ИФА. В РНИФ к антигенам R. sibirica и R. гаоЫШ исследованы сыворотки пациентов исследуемой и контрольной групп (табл. 2).
РСК выполняли микрометодом с «Диагностикум рик-кетсиозный «Сибирика» сухой для РСК» производства НПО «БИОМЕД», г. Пермь по общепринятой методике [10]. РНИФ осуществляли по стандартной методике, для выполнения использованы корпускулярные антигены R. sibirica и R. гаоЫШ, приготовленные из клеточных культур, хранящихся в рабочей коллекции Омского НИИ природноочаговых инфекций; иммуноглобулины диагностические флюоресцирующие антивидовые против иммуноглобулинов человека, сухие (НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи РАМН, г. Москва), с контрастированием препаратов альбумином бычьим, меченным родамином, сухим («МЕДГАМА» ГУ НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи, г. Москва). Исследование сывороток крови в ИФА проводили экспериментальной тест-системой, разработанной в Омском НИИ природно-очаговых инфекций [11].
За положительный результат принималось наличие специфических антител в любом из трёх методов. По результатам серологических исследований больных исследуемой группы сформированы 2 подгруппы. Серопо-зитивную подгруппу (50 человек) составили больные с серологическим подтверждением диагноза, среди которых 16 женщин и 34 мужчины в возрасте от 3 до 84 лет (средний возраст 49,3±21,4 лет). Подгруппу серонега-тивных составили 22 больных, у которых диагноз СКТ не имел серологического подтверждения, и выставлен на основании клинико-эпидемиологических данных, из них 10 женщин и 12 мужчин в возрасте от 12 до 76 лет (средний возраст 53,4±18,6 лет).
Результаты и обсуждение. У пациентов исследуемой группы независимо от результатов серологического обследования инфекция протекала типично. Всё это в сочетании с эпидемическим сезоном и наличием у подавляющего большинства (76,3%) факта присасывания клеща позволило всем больным поставить клинический диагноз сибирский клещевой тиф.
Преобладали взрослые (68,1±5%) в возрасте от 40 до 70 лет. Инкубационный период колебался в пределах 1-20 дней (в среднем 5,7±6,9). Первичный комплекс в виде корочки, инфильтрата, регионарного лимфаденита не всегда представлен всеми его признаками. Другим типичным признаком являлась сыпь. Симптомы интоксикации разной выраженности отмечались у всех пациентов. У некоторых больных наблюдалось повышение аланинаминотрансферазы (АлТ) и аспартатаминотранс-феразы (АсТ).
Изменения со стороны периферической крови на высоте заболевания сводились к лейкоцитозу у части пациентов (38,9%), из них 96,4% из подгруппы серо-позитивных, либо к лейкопении (5,6%). Относительная лимфопения выявлена у 12,5% больных, нейтрофилёз -у 11,1%. Повышение СОЭ отмечено у 55,6% больных.
У пациентов серопозитивной подгруппы на месте присасывания клеща чаще выявлялась корочка и инфильтрат на месте первичного аффекта, инкубационный период больше на сутки, отмечались слабость и увеличение селезёнки. В подгруппе серонегативных было больше пожилых пациентов, и несмотря на отсутствие антител к возбудителю, отмечены характерные для КР клинические проявления. «Серонегативность» может
IMMUNOLOGY
быть связана с рядом причин. Во-первых, ранние сроки серологического обследования и недостаточная чувствительность используемых методов. Во-вторых, циркуляция в очаге R. raoultii - этиологического агента синдрома TIBOLA. Клинические проявления риккет-сиоза, вызванного R. raoultii, выражены значительно слабее, чем при «классическом» клещевом риккетсиозе, обусловленном R. sibirica, генерализация процесса и, соответственно, выработка антител менее выражена [12,
13].
В группе сравнения наблюдались преимущественно дети (85,3%). Инкубационный период длился 3-4 суток. У половины (47,1%) больных отмечен первичный аффект, повышение температуры в среднем до 38,9о С. Сыпь одинаково часто отмечена как у серонегативных (86,7%), так и серопозитивных (89,5%), у серонегативных сыпь появляется позже на 1 день. Полученные данные совпадают с клинической картиной СКТ в Республике Алтай, описанной ранее [14].
Методом РСК исследовано 123 одиночных и 55 парных сывороток, из них положительных 1 и 25 соответственно. В исследуемой группе риккетсиозные антитела выявлены в 19 парных сыворотках и в 5 сыворотках в группе сравнения. Одна одиночная положительная сыворотка была только в группе сравнения.
Проанализировав данные о сроке после присасывания клеща до взятия первой сыворотки у 20 больных получили следующее: антитела к антигену R. sibirica в РСК выявлялись с 7 дня в титре 1/20, и обнаруживаются ещё на 65 день. Максимальные титры (1/160-1/320) антител в сыворотке выявляются в промежутке с 31 по 52 дни. Данная картина характерна для лиц старше 40 лет. О сроках выявления антител у детей недостаточно данных, что не позволяет сделать определённых выводов по этому вопросу. Клиническая картина у серопозитив-ных в РСК пациентов типичная, с наличием первичного аффекта в месте входных ворот, пятнисто-папулезной сыпи, гепатолиенального и умеренного токсического синдрома.
Чувствительность и специфичность для РСК рассчитывали отдельно для первых и для парных сывороток (табл. 1). Чувствительность при расчёте для первых проб составила 5,6%, специфичность 100%, при исследовании парных сывороток чувствительность составила 25,5%.
Анализ полученных данных позволил заключить, что метод РСК недостаточно чувствителен на ранних стадиях заболевания. Для подтверждения диагноза «сибирский клещевой тиф» у больных необходимо тестировать сыворотку крови после 10 дня после присасывания клеща или не ранее 4-7 дней заболевания. Исследования первой сыворотки недостаточно; в связи с низкой чувствительностью существует вероятность получения ложноотрицательного результата. Необходимо исследовать парную сыворотку, для обнаружения нарастания титра антител, взятие которой целесообразно проводить с 14 по 21 день болезни.
В ИФА исследовано 234 сывороток: 123 одиночных, 55 парных. В исследуемой группе больных с типичной клинической картиной СКТ с помощью ИФА в 68,1% проб удалось выявить антитела класса IgM и/или IgG к антигену R. sibirica. При анализе парных сывороток антитела класса IgM выявлены в среднем в 68,5% сывороток крови (чаще во второй, чем в первой - 73,1% и 58,3% соответственно); IgG к R. sibirica - в среднем в
КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА. 2018; 63(11) СЮ!: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2018-63-11-707-710
ИММУНОЛОГИЯ
Таблица 1
Диагностическая эффективность серологических методов для обнаружения антител к риккетсиям
Объект исследования Вид антигена Больные («=106) * Здоровые («=72) ** Характеристики теста
«+» (а) «-» (с) «+» (Ь) «-» № Se,% а/(а+с) Sp,% а/(ъ+а) PV+,% а/(а+Ъ) а/(с+а)
Первые РСК 6 100 0 72 5,6 100 100 41,9
сыворотки РНИФ с Аг Я. sibirica 5 27 0 6 15,6 100 100 22,9
РНИФ с Аг Я. топИ 5 29 0 3 14,7 100 100 23,7
ИФА 52 51 0 72 50,5 100 100 56,8
Все сыво- РСК 27 79 0 72 25,5 100 100 47,3
ротки РНИФ с Аг Я. sibirica 11 21 0 6 34,4 100 100 27,6
РНИФ с Аг Я. топИ 11 23 0 3 32,4 100 100 25,8
ИФА 68 38 0 72 64,2 100 100 63,1
Примечание. * - диагноз установлен на основании типичной клинической картины клещевого риккетсиоза; ** - практически здоровые пациенты.
Таблица 2
Частота обнаружения методом ИФА антител к антигену R. sibirica в сыворотках крови пациентов исследуемой группы и группы
сравнения
Объект исследования Класс иммуноглобулинов Исследуемая группа Группа сравнения
1-я сыворотка 2-я сыворотка всего % 1-я сыворотка 2-я сыворотка всего %
Одиночная 1§М 10 10 22,2±6,3 9 9 75,0±13,1
сыворотка ДО 10 10 22,2±6,3 1 1 8,3± 8,3
1§М+ДО 5 5 11,1±4,7 0 0 0±24,2
Количество исследо- 45 45 100 34 12 100
ванных сывороток
Парная сыво- 1§М 10 11 24* 44,4±6,8 7 15 22* 48,9±7,5
ротка ДО 3 4 7* 13,0±4,6 0 0 0 0±7,9
1§М+ДО 4 8 13* 24,1±5,9 0 0 0 0±7,9
Количество исследо- 24 26 54 100 22 22 45* 100
ванных сывороток
Примечание. * - включены и 3-и сыворотки.
37,0% сывороток крови (чаще во второй, чем в первой -46,2% и 29,2% соответственно) (табл. 2).
В группе сравнения положительные сыворотки в 94,7% представлены ^М. В парных сыворотках в 68,2% ^М выявляется во второй сыворотке (аналогичная картина в исследуемой группе). В одной первой пробе выявлен IgG, что может быть связано с более поздним забором материала для исследования. В контрольной группе все сыворотки отрицательные.
Для анализа времени выработки антител проанализированы данные 32 пациентов с известными датами присасывания клеща и забора материала. Обнаружение ^М возможно с пятого дня после присасывания в титре 1:100, в то время как IgG выявляется на 7 день в титре 1:50. Максимальные значения ^М отмечается с 8 по 12 день, для IgG с 14 по 30 день. Обнаружение ^М-антител в сыворотке больного указывает на текущую или недавно перенесённую инфекцию. Нами ^М обнаружен на 65 день, иногда в низких концентрациях он сохраняется после 12 мес от момента инфицирования [15].
Аналогично для ИФА рассчитаны чувствительность и специфичность (табл. 1). Установлено, что высокая чувствительность (81,6%) достигается при исследовании парных сывороток. Специфичность при этом равна 100%. Но при анализе всех сывороток значения специфичности равняется 90,3%. В ИФА выявляются пере-
крёстные реакции, характерные для ^М, к различным антигенам риккетсий группы КПЛ [4]. Для повышения качества результатов ИФА рекомендуется использовать антигены риккетсий, циркулирующих в эндемичном регионе.
Сопоставлены результаты лабораторного подтверждения СКТ с помощью ИФА с результатами серологической верификации с помощью РСК у 27 больных СКТ, сыворотки крови которых параллельно исследованы в ИФА и РСК с коммерческим диагностикумом Я. sibirica (табл. 3).
При исследовании парных сывороток в РСК подтвердили диагноз в 66,7%, с помощью ИФА на ^М - в 70,4% и в результате сочетанного применения РСК и ИФА и на ^М и на IgG - 85,2% случаев. Для подтверждения диагноза первую сыворотку достаточно исследовать на наличие ^М, вторую на антитела обоих классов иммуноглобулинов.
При сравнительной оценке двух методик установлено, что оба метода обладают высокой специфичностью, однако, РСК уступает ИФА в чувствительности.
Из 42 сывороток, исследованных в РНИФ с антигеном Я. sibirica, положительные результаты выявлены в 13 пробах. В 46,2% положительный результат выявлен во второй сыворотке. С антигеном Я. топки исследовано 43 сыворотки, из них 11 положительных (63,6% выявлены в
RUSSIAN CLINICAL LABORATORY DIAGNOSTICS. 2018; 63(11) DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2018-63-11-711-716
MOOBЮLOGY
Таблица 3
Анализ совпадений результатов серологической верификации диагноза СКТ у больных исследуемой группы при использовании
ИФА и РСК
Всего больных ИФА+ РСК+ Совпадения положи- Совпадения отрица-
Алгоритм применения ИФА абс. % абс. % тельных результатов ИФА и РСК, % тельных результатов ИФА и РСК, %
ИФА на ^М (1-я проба) 27 14 51,9±9,8 4 14,8±6,9 28,6±12,5 100
ИФА на ^М (парные пробы) 27 19 70,4±8,9 18 66,7±9,3 94,7±5,3 100
ИФА на ^М (парные пробы) и ИФА на IgG (парные пробы) 27 23 85,2±6,9 18 66,7±9,3 78,3±9,0 100
Таблица 4
Анализ совпадений результатов серологической верификации диагноза СКТ у больных исследуемой группы при использовании
РНИФ с антигенами R. sibirica и R. тоиНи, ИФА и РСК
Количество проб Из них положительных в РСК с антигеном R. sibirica Из них положительных в ИФА с антигеном R. sibirica Из них положительных в РНИФ с антигеном R. sibirica Из них положительных в РНИФ с антигеном R. raoultii
абс. | % абс. | % абс. | % абс. | %
20 12 60,0±11,2 17 85,0±8,2 11 55,0±11,4 7 35,0±10,9
парной сыворотке). При исследовании всех сывороток с двумя антигенами, чувствительность в среднем составила 33,4±1%, специфичность 84,5±4,5% (см. табл. 1).
В исследуемой группе отобраны 20 обследованных тремя методами, в РНИФ с разными антигенами (табл. 4). В ИФА антитела обнаружены в 85,0%, в РНИФ с антигеном Я. sibirica в 55,0%, с антигеном Я. гсюп1Ш в 35,0%. Все положительные в РНИФ с антигеном Я. sibirica в 100% случаев положительны в РСК и ИФА. У 80% больных с высокими титрами антител в РНИФ к антигену Я. sibirica первичный аффект представлен не полностью, чаще (60%) отсутствовал лимфаденит. Всего у одного пациента проба положительна к антигену Я. гаоп1Ш и отрицательна к Я. sibirica, где клиническая картина представлена полностью всеми признаками.
Заключение и практические рекомендации. Для верификации диагноза СКТ наиболее приемлемо применение серологических методов, из которых наиболее чувствительнымявляется ИФА, позволяющий выявить антитела в более ранние сроки. В связи с наличием перекрестно-реагирующих антигенных детерминант у разных видов риккетсий ни ИФА, ни РНИФ не обладают видоспецифичностью.
Взятие первой пробы крови осуществлять после выявления заболевания на 4-7 день, вторую пробу с 14-18 день заболевания, третью (при необходимости) после 25 дня от начала заболевания.
В ИФА для подтверждения диагноза первую сыворотку крови можно исследовать только на ^М. Исследование 2-й сыворотки необходимо проводить в ИФА на наличие ^М- и IgG-антител с антигеном Я. sibirica. РНИФ для исследования парных сывороток следует проводить со специфичными антигенами патогенных риккетсий, циркулирующих в данном очаге. В лабораториях, не оборудованных для постановки ИФА, рекомендуется использовать РСК.
Результаты исследований свидетельствуют о высокой эффективности серологических методов исследования (РСК, РНИФ, ИФА) и служит обоснованием для их использования в лабораторной диагностике для подтверждения диагноза СКТ.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА (пп. 2, 15 см. REFERENCES)
1. Рудаков Н.В., Самойленко И.Е., Решетникова Т.А. Проблемы лабораторной диагностики риккетсиозов группы клещевой пятнистой лихорадки. Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 1 (60): 50-2.
3. Кумпан Л.В., Рудаков Н.В., Самойленко И.Е., Красиков А.П., Абрамова Н.В., Решетникова Т.А. и др. Получение и экспериментальное изучение антигенов клещевых а-протеобактерий. Здоровье населения и среда обитания. 2014; 12 (261): 36-9.
4. Абрамова Н.В., Рудаков Н.В., Пеньевская Н.А., Седых Н.Н, Кумпан Л.В., Самойленко И.Е. и др. Апробация иммунофер-ментного анализа для серологической диагностики инфекций, вызываемых риккетсиями группы клещевой пятнистой лихорадки. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2010; 1 (50): 17-21.
5. Шпынов С.Н., Арсеньева И.В., Гранитов В.М., Рудаков Н.В. Клещевой риккетсиоз в Алтайском крае: эпидемиологические аспекты, молекулярно-биологическая верификация. Сибирский медицинский журнал. 2008; 7 (82): 43-6.
6. Самойленко И.Е., Решетникова Т.А., Шаламова Е.В., Кумпан Л.В., Лебедева М.А., Танцев А.К. и др. Новый очаг клещевого риккетсиоза в Называевском районе Омской области. Национальные приоритеты России. 2011; 2 (5): 141-2.
7. Самойленко И.Е., Рудаков Н.В., Решетникова Т.А., Егембердие-ва Р. А., Шаламова Е.В., Штрек С.В. и др. Результаты выявления антител к риккетсиям в сыворотках крови пациентов Омской области и Западно-Казахстанской области Республики Казахстан. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2015; 1 (80): 36-8.
8. Самойленко И.Е., Решетникова Т.А., Иголкина Я.П., Околелова Н.А., Коломеец А.Н., Шаламова Е.В. и др. Результаты микробиологических и молекулярно-биологических исследований в сочетанном очаге клещевых риккетсиозов в Омской области. ЗНиСО. 2016; 11 (284): 19-21.
9. Березкина Г.В., Штрек С.В., Зеликман С.Ю., Боброва О.А., Околелова Н.А., Коломеец А.Н. и др. Комплексное выявление возбудителей природно-очаговых инфекций методом ПЦР в снятых с людей переносчиках в Омской области. Национальные приоритеты России. 2016; 4 (22): 78-85.
10. Методические рекомендации. Профилактика клещевых риккетсиозов. Омск: Омский НИИ природно-очаговых инфекций; 2014.
КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА. 2018; 63(11) DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2018-63-11-711-716
МИКРОБИОЛОГИЯ
11. Рудаков Н.В., Абрамова Н.В., Пеньевская Н.А., Самойленко И.Е., Шпынов С.Н., Решетникова Т.А. Способ лабораторной диагностики клещевого риккетсиоза с использованием иммунофер-ментного анализа для определения антител к антигену Rickettsia sibirica. Патент РФ № 2477860 .
12. Рудаков Н.В., Самойленко И.Е., Рудакова С.А., Кумпан Л.В., Белан Ю.Б., Решетникова Т.А. и др. О роли Rickettsia raoultii в эпидемиологии клещевых риккетсиозов в России. Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2015; 3: 17-21.
13. Иголкина Я.П., Рар В.А., Епихина Т.И., Тикунов А.Ю., Краснова Е.И., Проворова В.В. и др. Выявление ДНК Rickettsia raoultii и Rickettsia sibirica в крови и ликворе пациентов в Западной Сибири. Национальные приоритеты России. 2016; 4 (22): 85-8.
14. Рудаков Н.В., Оберт А.С. Клещевой риккетсиоз. Омск: Издательско-полиграфический центр ОГМА; 2001.
REFERENCES
1. Rudakov N.V., Samoylenko I.E., Reshetnikova T.A. Problems of laboratory diagnostics of rickettsioses of spotted fever group. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2015; 1 (60): 50-2. (in Russian)
2. Philip R.N., Casper E.A., Ormsbee R.A., Peacock M.G., Burgdorfer W. Microimmunofluorescence test for the serological study of Rocky Mountain spotted fever and typhus. J. Clin. Microbiol. 1976; 1 (3): 51-61.
3. Kumpan L.V., Rudakov N.V., Samoylenko I.E., Krasikov A.P., Abramova N.V., Reshetnikova T.A. et al. Preparation and experimental study of antigens of tick-borne a-proteobacteriae. Zdorove naseleniya i sreda obitaniya. 2014; 12 (261): 36-9. (in Russian)
4. Abramova N.V., Rudakov N.V., Penyevskaya N.A., Sedih N.N., Kumpan L.V., Samoylenko I.E. et al. Approbation of the ELISA for the serological diagnosis of infections caused by rickettsiae of the spotted fever group. Epidemiologiya i vakcinoprofilaktika. 2010; 1 (50): 17-21. (in Russian)
5. Shpynov S.N., Arsenjeva I.V., Granitov V.M., Rudakov N.V. Tick - borne rickettsiosis in the Altai region: epidemiological aspects, molecular biological verification. Sibirskij medicinskij zhurnal. 2008; 7 (82): 43-6. (in Russian)
6. Samoylenko I.E., Reshetnikova T.A., Shalamova E.V., Kumpan L.V., Lebedeva M.A., Tancev A.K. et al. New focus of tick-borne rickettsiosis in the Naziivaevsky district of the Omsk region. Nacionalnyeprioritety Rossii. 2011; 2 (5): 141-2. (in Russian)
7. Samoylenko I.E., Rudakov N.V., Reshetnikova T.A., Egemberdyeva R.A., Shalamova E.V., Shtreck S.V. et al. The results of detection of antibodies to rickettsiae in blood serum of patients in the Omsk region and the West Kazakhstan region of the Republic of Kazakhstan. Epidemiologiya i vakcinoprofilaktika. 2015; 1 (80): 36-8. (in Russian)
8. Samoylenko I.E., Reshetnikova T.A., Igolkina Y.P., Okolelova N.A., Kolomeyetz A.N., Shalamova E.V. et al. Е.В. Results of microbiological and molecular-biological studies in a mixt foci of tick-borne rickettsioses in the Omsk region. ZNiSO. 2016; 11 (284): 19-21. (in Russian)
9. Berezkina G.V., Shtreck S.V., Zelikman S.Y., Bobrova O.A., Okolelova N.A., Kolomeyetz A.N. et al. Complex detection of pathogens of natural focal infections by the method of PCR in ticks taken from people in the Omsk region. Nacionalnye prioritety Rossii. 2016; 4 (22): 78-85. (in Russian)
10. Metodical recommendations. Prevention of tick-borne rickettsiosis: guidelines. Omsk: Omskij NII prirodno-ochagovyx infekcij, 2014. (in Russian)
11. Rudakov N.V., Abramova N.V., Penyevskaya N.A., Samoylenko I.E., Shpynov S.N., Reshetnikova T.A. The method for laboratory diagnosis of tick-borne rickettsiosis using an enzyme immunoassay for the detection of antibodies to the Rickettsia sibirica antigen. Patent RF №2477860; 2013. (in Russian)
12. Rudakov N.V., Samoylenko I.E., Rudakova S.A., Kumpan L.V., Belan Y.B., Reshetnikova T.A. et al. About the role of Rickettsia raoultii in the epidemiology of tick-borne rickettsioses in Russia. Medicinskaya parazitologiya i parazitarnye bolezni 2015; 3: 17-21. (in Russian)
13. Igolkina Y.P., Rar V.A., Epihina T.I., Tikunov A.Y., Krasnova E.I., Provorova V.V. et al. Revealing of Rickettsia raoultii and Rickettsia sibirica DNAs in the blood and liquor of patients in Western Siberia. Nacionalnye prioritety Rossii. 2016; 4 (22): 85-8. (in Russian)
14. Rudakov N.V., Obert A.S. Tick-borne rickettsiosis. Omsk: Izdatel-sko-poligraficheskij centr OGMA; 2001. (in Russian)
15. Halle S., Gash G.A. Use of a sensitive microplate enzyme like immunosorbent assay in a retrospective serological analysis of a laboratory population at risk to infection with typhus group rickettsia. J. Clin. Microbiol, 1980; 12: 343-50.
Поступила 28.09.18 Принята к печати 20.11.18
