CC BY
45
3. Геллер Л.И., Козлова З.П. Клинические особенности язвенной болезни у больных сахарным диабетом II Врачебное дело. — 1971№4. — С. 77-79.
4. Гребенев А.Л.. Баранская Е.К., Зефирова Г.С., Салтыков Б.Б. Язвенная болезнь и сахарный диабет II Клин. мед. 1987. — №11. — С. 106-114.
5. Гребенев А.Л.. Баранская Е.К., Бокерия О.А. Неэффективность блокаторов Н1-рецепторов гистамина в лечении язвенной болез-ниу больных сахарным диабетом II Мед.реф.журн. Разд. XVII: Гастроэнтерология. — 1983. — №3. — Публ. 494.
6. Ефимов А.С., Ткач С., Щербак А.В., Лапсо Л.И. Поражение желудочно-кишечного тракта при сахарном диабете II Пробл. эндо-кринол. — 1985. —№4. — С. 80-84.
7. Крылов АЛ., Ионин М.Л., Киреева О.В. Симптоматические язвы и желудочные кровотечения при сахарном диабете II Клин. мед. 1983. — №4. — С. 62-64.
8. Макось Р.П. Функция желудка при сахарном диабете //Тер. арх. — 1961. — №3. — С. 63-67.
9. Федорова П.И., Спесивцева В.Г., Калмыкова В.И. и др. Состояние внутренних органов при сахарном диабете. — Ташкент: Медицина, 1985. —223с.
10. Федорченко Ю.Л. Проблемы хронических гастродуоденальных язв у больных сахарным диабетом II 2-е Геллеровские чтения. Хабаровск, 2001. С. 241-254.
11. Федорченко Ю.Л., Коблова Н.М., Обухова Г.Г. Особенности течения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки у больных сахарным диабетомИВрач. — 2001. — №7. — С. 28-30.
12. KingH., AubertR.E., Herman W.H. Global burben of diabetes, 1995 — 2025. Prevalence, numerical estimates and projection //Diabetes Care. — 1998. —№21. — P. 1414-1431.
© M.B. Варганов, И.Г. Брындина, C.H. Стяжкина, В.А. Ситников, 2007 УДК: 616.33/34-002.3-08:615.835.14
М.В. Варганов, И.Г. Брындина, С.Н. Стяжкина, В.А. Ситников ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ЦИТОКИНО-, ОЗОНО- И ЛАЗЕРОТЕРАПИИ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ ПЕРИТОНИТА
Ижевская государственная медицинская академия (ректор — проф. Н.С. Стрелков)
В работе исследованы иммуномодулирующие эффекты озонированных растворов, препарата «Сппенопид» и транскутанной инфракрасной лазеротерапии на модели распространенного гнойного перитонита. Показано снижение количества лейкоцитов, увеличение Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, фагоцитарной активности. Отмечено усиление иммуномодулирующего эффекта при комбинированном применении предложенных методов иммуномодуляции.
Ключевые слова: иммуномодуляция, цитокины, озон, лазер, перитонит.
ESTIMATION OF EFFICIENCY OF APPLICATION CYTOKININ-, OZON-AND LASER THERAPIES ON EXPERIMENTAL MODEL OF THE PERITONITIS
M.Varganov, I.Bryndina, S.Stjazhkina, V.Sitnikov
In work are investigated: immunomodulatory effects of ozonized solutions, preparation «Splenopid» and transskin infra-red laser therapy on model of the widespread purulent peritonitis. Decrease in quantity of leukocytes, increase in quantity T-limphocytes, B- limphocytes, phagocytic activity are shown. Amplification immunomodulatory effect is marked at the combined application ofthe suggested methods ofimmunomodulatory.
Key words: immunomodulatory, cytokinins, ozone, laser, a peritonitis.
В работе исследованы иммуномодулирующие эффекты озонированных растворов, препарата «Спленопид» и транскутанной инфракрасной лазеротерапии на модели распространенного гнойного перитонита. Показано снижение количества лейкоцитов, увеличение Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, фагоцитарной активности. Отмечено усиление иммуномодулирующего эффекта при комбинированном применении предложенных методов иммуномодуляции.
Цель исследования. Изучение в эксперименте влияния комбинаций цитокино-, озоно- и лазеротерапии на систему иммунитета на модели острого перитонита.
Материалы и методы исследования. В первой серии экспериментов использовали белых беспородных крыс-самцов массой 200-220 г. Экспериментальный перитонит индуцировали инъекцией суспензии фекалий в брюшную полость в дозе 0,65 г/кг [1, 2]. День введения суспензии в брюшную полость считали нулевым днем эксперимента. Животных выводили из опыта согласно «Правил проведения работы с использованием экспериментальных животных» (приказ Минвуза от 13.11.1984 г. №724). Все животные были разделены на четыре подгруппы по 10 животных. В первой подгруппе — контрольной, после индукции перитонита не проводилось каких-либо манипуляций. Во второй подгруппе — после индукции перитонита в тот же день выполнялось введение под-
кожно озонированного физиологического раствора хлорида натрия с концентрацией 2 мг/л в дозе 30 мкг/кг. В третьей подгруппе — дополнительно к манипуляциям, произведенным в первой подгруппе, выполнялось в тот же день транскутанное облучение зоны проекции печени инфракрасным лазером «Семикон» (длина волны 0,78-0,88 мкм в дозе 0,ЗДж/кг). Животным четвертой подгруппы после индукции перитонита производили подкожное введение препарата Спленопид в дозе 1ед/кг. В последующем производилось определение в периферической крови количества лейкоцитов, нейтрофилов, Т- и В-лимфоцитов и фагоцитарной активности.
Для статистической обработки данных использовали критерий Вилкоксона-Манна-Уитни, коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Различия считали достоверными при р<0,05 и р<0,01.
Результаты исследования и их обсуждение. Графическое отображение данных общего количества лейкоцитов полученных в ходе эксперимента представленные на рисунке 1.
Из графиков видно, что у всех животных отмечался значительный подъем количества лейкоцитов на первые сутки после экспериментального моделирования перитонита. При анализе показателей количества лейкоцитов до начала эксперимента и в первые сутки в подгруппах № 2, 3, 4 не выявлено достоверной разницы по отношению как к
контрольной группе, так и в подгруппах между собой. Но количество лейкоцитов достоверно выше (р<0,05) во всех подгруппах по отношению к нулевому дню эксперимента.
-о-1 подгруппа(контроль) -°-2 подгруппа(озон)
-д-3 подгруппа (озон+лазер) -*-4 подгруппа (Спленопид)
Рис. 1. Динамика количества лейкоцитов в крови в ходе эксперимента.
На 3 сутки отмечается статистически значимое (р<0,05) снижение количества лейкоцитов в подгруппе №3 и №2 по сравнению с контролем, при отсутствии различий в показателях между самими подгруппами. В то же время, наблюдаемое незначительное снижение количества лейкоцитов в подгруппе №4 не является достоверным на данном этапе эксперимента. На 5-е сутки эксперимента количество лейкоцитов в подгруппах отличается незначительно.
В подгруппе №1 (контрольная группа) в первые сутки наблюдается значительное увеличение нейтрофильных лейкоцитов (р<0,01), которое сохраняется на протяжении первых трех суток с тенденцией к уменьшению на 5-е сутки эксперимента.
Сходная динамика наблюдается в подгруппах №2 и №3, заключающаяся в подъеме количества нейтрофилов к первым суткам, сохраняющимся на протяжении всего эксперимента.
Несколько отличающиеся данные получены при анализе показателя в подгруппе №4. Значимые различия по отношению к контрольной группе получены в 1-е и 3-и сутки эксперимента (р<0,05). В последующем на 5-е сутки процент нейтрофилов снижается до уровня данного показателя в подгруппах №1, 2, 3.
В целом показатели количества лейкоцитов и процентного содержания нейтрофилов отражают острофазную реакцию организма животного на воспаление. Более выраженное снижение количества лейкоцитов в подгруппах №3 по отношению к контрольной группе (р<0,05) к 3-им суткам, по нашему мнению, обусловлено детоксицирующем и противовоспалительным действием озонотерапии и дополняющей её лазеротерапии. В то же время выраженный нейтрофилез в подгруппе №4 может быть обусловлен наличием провоспалительных цитоки-нов в составе Спленопида, мобилизующих выход дополнительного количества нейтрофилов из депо.
Графическое отображение динамики количества Т-лимфоцитов в процентах показано на рисунке 2.
Как видно из графика, в подгруппе №1 (контрольной группе) наблюдается прогредиентное уменьшение количества Т-лимфоцитов, что может служить показателем снижения напряженности иммунитета в отношении инфекции на фоне острого гнойного перитонита.
В подгруппах №2 и №3 наблюдалась другая динамика, заключающаяся либо в сохранении исследуемого показателя на исходном уровне, либо в его повышении. Выявлены достоверные различия в содержании Т-лимфоцитов в данных подгруппах по отношению к контрольной группе на 1-е, 3-и и 5-е сутки (р<0,01). В то же время не обнару-
-о-1 подгруппа (контроль) -л-2 подгруппа (озон)
-д-3 подгруппа (озон+лазер) -х-4 подгруппа (Спленопид)
Рис. 2. Динамика процентного содержания Т-лимфоцитов в крови экспериментальных животных.
жено значимых различий в показателях между самими подгруппами.
Обработка данных подгруппы №4 выявила увеличение процентного содержания Т-лимфоцитов на 1-е сутки на 26% по отношению к исходным данным, увеличение являлось достоверным по отношению к контрольной группе (р<0,01). В дальнейшем отмечено повышение показателя на 35% на 5-е сутки по отношению к 0 дню эксперимента, изменения достоверны по отношению к контрольной группе (р<0,01). Параллельно обнаружено повышение показателя по отношению к усредненному количеству лимфоцитов в подгруппах №2 и №3 на 1-е и 3-и сутки эксперимента (р<0,05).
На 5-е сутки доля Т-лимфоцитов снижается до почти исходных величин и различий между подгруппами №2, №3, №4 уже не определяется, что может быть объяснено прогрессированием иммунодепрессии на фоне продолжающегося экспериментального перитонита. Но на данном этапе эксперимента сохраняется различия между удельным весом Т-лимфоцитов в подгруппах №2, №3, №4 по отношению к контрольной группе (р<0,05).
В целом анализирую данные по Т-лимфоцитам нужно отметить, что в подгруппах получавших лечение не наблюдалось снижение Т-лимфоцитов ниже исходного уровня в процессе эксперимента. По отдельным подгруппам можно сказать, что применение озоно- и лазеротерапии предотвращают снижение Т-лимфоцитов при экспериментальном перитоните, а терапия препаратом «Спленопид» существенно увеличивает этот показатель на 1-е и 3-и сутки эксперимента.
Данные, полученные при исследовании процентного содержания В-лимфоцитов, представлены на рисунке №3.
-о-1 подгруппа (контроль) -о-2 подгруппа (озон)
-д-3 подгруппа (озон+лазер) ~х~4 подгруппа (Спленопид)
Рис. 3. Динамика процентного содержания В-лимфоцитов в крови экспериментальных животных.
На графике наблюдается незначительная динамика в сторону нарастания количества В-лимфоцитов в кон-
трольной группе (подгруппе №1). Не выявлено различий исходных показателей и между подгруппами.
В подгруппе №3 наблюдается повышение количества В-лимфоцитов на 3-и сутки (р<0,01) по отношению к контрольной группе, в это же время отмечены значимые различия между подгруппами №2 и №3. На 3-и сутки отмечено достоверна разница данных в подгруппе №3 и контрольной группе (р<0,01), в отношении подгруппы №2 достоверность (р<0,05). К 5-ым суткам эксперимента разница между подгруппами по данному показателю сглаживается.
Как видно из графика, показатели животных леченных «Спленопидом» несколько превышают аналогичные в других подгруппах, но значимых различий по отношению к подгруппам №2 и №3 не выявлено, в то же время отмечены различия по отношению к группе сравнения (р<0,01).
Таким образом, при экспериментальном перитоните количество В-лимфоцитов в контрольной группе практически не изменяется, тогда как применение цитокино-, озоно- и лазеротерапии приводит к увеличению этого показателя.
Наиболее существенными были изменения фагоцитарной активности нейтрофилов (рис. 4).
-о-1 подгруппа(контроль) -°-2 подгруппа(озон)
-д-3 подгруппа (озон+лазер) -*-4 подгруппа (Спленопид)
Рис. 4. Динамика фагоцитарной активности нейтрофилов.
В подгруппе №1 (контроль) наблюдается снижение фагоцитарной активности в ходе всего эксперимента, данные достоверны на 1-е, 3-и, 5-е сутки по отношению к нулевому дню (р<0,01). Так наблюдалось снижение по-
казателя в среднем на 11,5% к первым суткам, на 17,2% к третьим и на 28,6% к пятым суткам эксперимента.
В подгруппе №2 отмечено нарастание фагоцитарной активности нейтрофилов на 1-е сутки, которое сохранялось на 3-и сутки с восстановлением до исходного уровня к 5-м суткам. На протяжение всего наблюдения данные достоверны по отношению к контрольной группе (р<0,01) и подгруппе №4 (р<0,05).
В подгруппе №3 наблюдается сходная динамика показателя, причем, значимые различия по отношению к контрольной группе (р<0,01) и подгруппе №4 (Р<0,05) отмечены во все периоды опытов. Отмечено также достоверное повышение активности фагоцитов на 1 сутки по отношению к подгруппе №2 (р<0,05).
Изменения, произошедшие в подгруппе №4, в целом повторяют динамику показателя в подгруппе №1, но достоверно превышают их на протяжении всего эксперимента (р<0,05). Данные изменения могут говорить о недостаточной выраженности иммуномодулирующего эффекта в отношении активности фагоцитов препарата «Спленопид» на фоне прогрессирования эндотоксикоза при продолжающемся воспалительном процессе в брюшной полости.
На заключительном этапе эксперимента определяли показатель летальности лабораторных животных в подгруппах. В первой подгруппе (контрольной) обнаружен наибольший показатель летальности, умерло 7 животных (70%). Во второй подгруппе летальность составила 50%, умерло 5 животных. В третьей подгруппе, получавшей в качестве лечения озоно- и лазеротерапию получен наименьший показатель летальности (30%) умерло 3 животных. В четвертой подгруппе данный показатель составил 60%, умерло 6 животных.
Таким образом, количество Т-лимфоцитов, фагоцитарная активность нейтрофилов крови, сниженные при перитоните, возрастают при использовании цитокинотерапии, озонотерапии и лазеротерапии. Озонотерапия в сочетании с воздействием лазера и «Спленопида» увеличивают также количества В-лимфоцитов
В подгруппах с более высоким показателем фагоцитарной активности нейтрофилов наблюдается более низкая летальность.
Комбинация цитокино- и озонотерапии с лазеротерапией ведет к дополнительному повышению показателей иммунитета за счет суммации эффектов данных методов.
Литература:
1. Zamora Z. et al. Ozone Profilactic Effect and Antibiotics as Modulator of Inflammatory Septic process in Rats// 'Ше journal of the international ozone association Conference on ozone in medicine and Environment and Health. — UK, 2001.
2. Zullyt B. et al. Ozone Prophylactic Effect and Antibiotics as a Modulator of Inflammatory Septic process in Rats II Int. Ozone congress. — London, 2003. — P. 123.
