CC BY
25
ся для широкого применения в свиноводческих хозяйствах. Анализ гематологических и биохимических показателей крови показал, что фармацин в форме 5%-ного раствора в дозе 0,4 мл на животное при внутрикожном и в дозе 1 мл/33 кг массы тела при подкожном введениях не оказывает существенного влияния на гомеостаз поросят.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гельминтоценозы жвачных животных и их профилактика / А.И. Ятусевич [и др.] // Международный вестник ветеринарии. - 2005. - № 2. - С. 29-31.
2. Даугалиева, Э.Х. Механизм развития клеточного и гуморального иммунного ответа при гельминтозах / Э.Х. Даугалиева // Гельминтозоонозы - меры борьбы и профилактики: матер. докл. науч. конф. - М., 1994. - С. 63-65.
3. Капитатенко, A.M. Клинический анализ лабораторных исследований / A.M. Капитатенко, Н.И. Дочкин. - М.: Воениздат, 1988. - 270 с.
4. Карпуть, И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных / И. М. Карпуть. - Минск: Ураджай, 1986. - 183 с.
5. Руководство по ветеринарной паразитологии / А.И. Ятусевич [и др.]. - Минск: Техноперспектива, 2007. - 481 с.
6. Сафиуллин, Р.Т. Паразитарные болезни свиней / Р.Т. Сафиуллин // Свиноводство. - 2004. - № 3. - С. 30-32.
7. Якубовский, М.В. Паразитарные болезни свиней и их профилактика / М.В. Якубовский, А.И. Ятусевич. - Минск: Ураджай, 1987. - 143 с.
8. Ятусевич, А.И. Ветеринарная и медицинская паразитология / А.И. Ятусевич, И.В. Рачковская, В.М. Каплич; под. ред. А.И. Ятусевича. - М.: Медицинская литература, 2001. - 320 с.
9. Ятусевич, А.И. Паразитология и инвазионные болезни животных: учеб. для студ. по спец. «Ветеринарная медицина» учреждений, обеспечивающих получение высшего образования / А.И. Ятусевич, Н.Ф. Карасев, М.В. Якубовский; под ред. А.И. Ятусевича. - Минск: ИВЦ Минфина, 2007. - 580 с.
10. Справочник врача ветеринарной медицины / А.И. Ятусевич [и др.]. - Минск: Техно-перспектива, 2007.
УДК 635.52/58.083.37:619:615.3
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА «БИФИНОРМ» С ПРЕБИОТИЧЕСКИМ КОМПОНЕНТОМ
ПРИ ДИСБИОТИЧЕСКИХ ДИАРЕЯХ И В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ ТЕЛЯТ ПРИ КРИПТОСПОРИДИОЗЕ
Г.Ф. БОВКУН ФГБОУ ВПО «Брянская сельскохозяйственная академия» г. Брянск, Российская Федерация, 243365
(Поступила в редакцию 03.03.2012)
Введение. Многолетняя тенденция заболеваемости новорожденных телят диарейными заболеваниями в условиях Российской Федерации имеет однонаправленную динамику в сторону повышения. Многие исследователи [1, 3] отмечают наиболее высокие положительные темпы прироста заболеваемости в хозяйствах, относящихся к экологически неблагополучным районам, где диарейные заболевания протекают в тяжелой форме.
В современных условиях получения, выращивания и использования продуктивных животных (с учетом кризиса экосистемы и антропо-
356
генных аномалий внешней среды) возникла необходимость в разработке нового подхода к пониманию причин возникновения и развития патологии у молодняка сельскохозяйственных животных, позволяющего обосновать с эколого-адаптационных позиций более эффективную стратегию защиты их здоровья [3, 9].
В этиологии и патогенезе желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота важное значение имеет состояние микробной экологии, поэтому этиологическая значимость дисбиотиче-ских нарушений при диарейных заболеваниях у телят признана многими учеными [9]. Одна из причин диарейных заболеваний телят -паразитирование криптоспоридий. Зарубежные сведения о предотвращении заболевания свидетельствуют о соблюдении гигиены кормления, содержании молодняка [7]. По данным А.Ю. Гудковой, Ю.Ф. Петрова [2], паразитирование трематод у молодняка крупного рогатого скота сопровождаются дисбиотическими нарушениями в кишечнике с увеличением количества факультативной микрофлоры, появлением патогенных стафилококков, эшерихий.
Стратегия профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний должна быть основана на применении пробиотических препаратов, способных модифицировать микробную экологию кишечника молодняка и создать условия, непригодные для колонизации кишечника условно-патогенными микроорганизмами и возбудителями и оптимальные для выживания и размножения полезных микроорганизмов, прежде всего бифидобактерий, выполняющих защитную, антитоксическую, синтезирующую, пищеварительную функции.
Современное направление совершенствования терапевтической и профилактической эффективности пробиотиков - это применение бифидогенных веществ, используемых бифидобактериями в качестве субстрата для размножения. Самое известное в мире бифидогенное вещество - лактулоза, представляющая собой галактозилфруктозу, получаемую из лактозы. Лактулоза, являясь изомером лактозы, не расщепляется мукозами, не всасывается в кровь и, пройдя через тонкий кишечник, достигает контакта с микрофлорой толстой кишки и метаболизируется до короткоцепочечных жирных кислот (КЦЖК), снижающих рН в толстом кишечнике, модифицирующих микрофлору за счет специфического усиления роста бифидобактерий, лактобацилл. По данным A. Terada, H. Hara [12], применение лактулозы увеличивает содержание бифидобактерий и ацидофильных бацилл в толстом кишечнике в 6-7 раз, подавляет рост колиформенных микроорганизмов, бактероидов, сальмонелл, шигелл. W.Liao, X.S Cui, C.H. Floren [11] установлено, что оральное назначение лактулозы оказывает благоприятное действие на организм больных с различной патологией, снижает частоту возникновения кишечных, респираторных, мочеполовых инфекций, предотвращает развитие эндотоксемии кишечного происхождения, снижает уровень сывороточного аммиака при патологии печени за счет увеличения бифидо-, лактофлоры, снижения рН в толстой киш-
357
ке, что удерживает аммиак в ионизированной форме, не давая сорбироваться в печени.
Микроэкологически обусловленные заболевания в основном связаны с дефицитом бифидо-, лактофлоры, поэтому концепция «поддержки», которая заключается в повышении выживаемости и адгезив-ности облигатной бифидофлоры, лактобактерий, может быть использована для их профилактики и лечения, усиления лечебно-профилактических свойств пробиотических препаратов.
Цель работы - изучить лечебное и профилактическое действие пробиотического препарата «Бифинорм», содержащего лактулозу при диарейных заболеваниях у телят, обусловленных микроэкологическими нарушениями, наличием патогенных простейших.
Материал и методика исследований. Исследования проводили в двух хозяйствах Новозыбковского района с высокой плотностью накопления радиоцезия в почвах пашни и сенокосов, соответствующих принадлежности к загрязненной зоне и в УОХ «Кокино», не имеющего радиоактивного загрязнения.
Влияние жидкой лактулозы на пролиферацию бифидобактерий при культивировании испытывали на производственном штамме Bifidobac-terium adolescentis МС-42. Активность пролиферации бифидобактерий под действием разных доз лактулозы сравнивали с максимальным накоплением Lg КОЕ/мл испытуемой культуры, выращенной на куку-рузно-лактозной среде (КЛС).
Препарат «Бифинорм» готовили согласно инструкции по приготовлению и техническим условиям (ТУ 9383-001-00484759-02, утвержденных МСХ РФ 24.04.02 г.), но с добавлением в питательную среду лактулозы синтетического происхождения производства ООО «Фели-цата Холдинг».
Клинический диагноз у больных телят возрастом от 9 до 18 дней черно-пестрой и швецкой породы устанавливали по топике поражения органов пищеварения. Учитывали осложнения: дегидратацию, поражение нервной, сердечно-сосудистой, дыхательной систем, симптомы почечной недостаточности.
Пробы фекалий брали из прямой кишки стерильным резиновым ка-тетором и исследовали в течение двух часов с момента забора материала.
Микробную экологию толстого кишечника изучали согласно «Методическим рекомендациям по лабораторной диагностике дисбактери-оза кишечника молодняка сельскохозяйственных животных», утвержденных РАСХН (2008 г.). Полученные данные сравнивали с показателями микробиоценоза кишечника клинически здоровых телят.
Возбудителей эшерихиоза исключали бактериологическим исследованием фекалий, руководствуясь «Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза)» [5].
Исследования смешанной кишечной инфекции проводили по «Методическим указаниям по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка» [4].
358
Ооцисты криптоспоридий, кокцидии исключали в фекалиях, содержащих примеси крови, микроскопией мазков, окрашенных по Цилю - Нильсену.
Проводили гематологические исследования, определяя у обследуемых телят количество лейкоцитов, эритроцитов, гемоглобина, белка, показатель гематокрита, СОЭ.
Полученные цифровые данные обрабатывали статистически с целью определения достоверности средних арифметических показателей.
Клиническую эффективность «Бифинорма», содержащего лактуло-зу, испытывали на 163 больных новорожденных телятах СПК «Комсомолец», СПК «Решительный», УОХ «Кокино» согласно Наставлению по применению препарата [6]. О выздоровлении животных судили по исчезновению признаков диареи, патологических примесей в фекалиях, метеоризма, спазмов, болевых ощущений, улучшению общего состояния, появлению аппетита. Результаты учитывали по сохранности.
Профилактическое действие «Бифинорма», содержащего лактуло-зу, изучали на 167 телятах в тех же хозяйствах. Новорожденным телятам выпаивали препарат согласно Наставлению по применению препарата [6]. Наблюдения вели в течение трех месяцев. Результаты учитывали также по сохранности.
Результаты исследований и их обсуждение. Основанием для изучения влияния концентрата жидкой лактулозы синтетического происхождения на активность пролиферации и биологические свойства би-фидобактерий послужили исследования ^ Hidaka [10] о селективной утилизации фруктоолигосахаридов бифидофлорой, ее пребиотические свойства при выращивании молодняка крупного рогатого скота (табл. 1) [1].
Таблица 1. Активность пролиферации бифидобактерий под действием лактулозы
Наименование штамма КЛС М±м ^ КОЕ/мл Концентрация латулозы, накопление М±м КОЕ/мл, % увеличения
1 0,1
МС-42 9,3±0,3 12,69±0,53/36,3 12,47±0,81/34,08
Концентрация лактулозы, равная 55 мкг/мл (1%), стимулировала пролиферацию бифидобактерий производственного штамма МС-42: накопление биомассы (12,69±0,3 ^ КОЕ/мл), нарастание количества бифидобактерий к контролю (3,39 процент увеличения (36,3).
Накопление биомассы производственного штамма МС-42 при концентрации лактулозы 5,5 мкг/мл (0,1 %) составило 12,47±0,81 ^ КОЕ/мл, нарастание количества бифидобактерий к контролю -3,17 процент увеличения - 34,08. Установленные показатели пролиферации незначительно отличались от показателей роста при десятикратном увеличении концентрации лактулозы, процент накопления был всего на 2,22 меньше.
По данным Э.Г. Щербаковой [8], лактулоза синтетического происхождения оказывала бифидогенное действие на производственный штамм В.ЫШит при концентрациях 100-10 мкг/мл, при этом нарастание количества бифидобактерий составляло 3-4
Применение 1%-ной лактулозы в составе питательной среды при приготовлении препарата также стимулировало пролиферацию бифидобактерий, накопление которых в составе препарата составляло 10 01011, увеличивало кислотообразующую активность и усиливало жизнеспособность популяций при пересевах, что упрощало технологию приготовления препарата.
Перед клиническим испытанием препарата «Бифинорм» с пребио-тическим компонентом мы провели клиническое обследование новорожденных телят, установили этиологическую значимость микрофлоры у 30 телят с диарейным синдромом в СПК «Комсомолец», СПК «Решительный» Новозыбковского района, УОХ «Кокино» Выгонич-ского района.
В СПК «Комсомолец» телята неонатального возраста болели энтероколитом, характерным признаком которого была диарея с примесью слизи, крови, метеоризм, болевые ощущения в кишечнике. Заболевание протекало без осложнений при нормальной температуре тела. Телята старшего возраста имели клинические признаки авитаминоза.
При бактериологическом исследовании фекалий больных телят установлены дисбиотические нарушения в кишечнике, обусловленные наличием условно-патогенных энтеробактерий, увеличением пула кишечной палочки, энтерококков на фоне пониженного содержания лак-тобацилл и бифидобактерий. Перечисленные нарушения микроэкологии свидетельствовали о развитии токсического дисбактериоза. Возбудителя эшерихиоза не выделяли.
В примесях крови больных обнаружены ооцисты криптоспоридий, которые на фоне токсического дисбактериоза повреждали слизистую кишечника.
В результате гематологических исследований у телят с клиническими признаками авитаминоза установлены низкие показатели гемоглобина (7,2±0,96 г %), гематокрита (22±2,67 %), подтверждающие анемию.
В СПК «Решительный» новорожденные телята имели клинические признаки гипотрофии и энтероколита. У большинства телят энтероколит был катаральной природы (в фекалиях отмечали примеси слизи). Фекалии некоторых больных, в том числе старшего возраста, содержали примеси крови. Кроме специфических для энтероколита клинических признаков других свидетельствующих об осложнениях особенностей не установлено.
Бактериологическим исследованием фекалий больных установлены дисбиотические нарушения в кишечнике, соответствующие деструктивному дисбактериозу и обусловленному наличием протеев, дрожже-подобных грибов, пониженным содержанием лактобацилл и бифидо-бактерий.
В примесях крови фекалий больных телят 10-дневного и 30-дневного возраста обнаружены ооцисты криптоспоридий, которые на фоне деструктивного дисбактериоза повреждали слизистую кишечника.
Бактериологическими исследованиями фекалий был исключен возбудитель эшерихиоза.
Гематологические исследования у телят старшего возраста свидетельствовали о развитии анемии (показатель гемоглобина - 7,8 ±0,56 г%; гематокрита - 24,5±1,34 % .
Несмотря на то, что исследования проводили в разных хозяйствах Новозыбковского района, различия в полученных результатах были незначительными.
У больных телят УОХ «Кокино» отмечали нормальную температуру тела, уплотнения в сычуге, метеоризм и спазмы в тонком и толстом отделах кишечника, сильную диарею с примесью слизи и крови в фекалиях. У больных телят были выявлены признаки угнетения, ослабления работы сердца и дыхательной системы на фоне дегидратации.
Дисбиотические нарушения в кишечнике больных характеризовались статистически достоверным снижением количества лактобацилл и бифидобактерий (Р<0,05). Количество эшерихий соответствовало норме. Выявленные нарушения количественного состава лактобацилл и бифидофлоры способствовали пролиферации факультативных микроорганизмов, таких как протеи, у 20 % обследуемых, дрожжеподобных грибов, условно-патогенных энтеробактерий - у 80 %, гемолитических гнилостных бацилл - у 20 %. У всех больных установлено значительное количество сульфитредуцирующих клостридий (8,15±0,77 ^ КОЕ/г).
Перечисленные микроорганизмы не входили в состав биоценоза клинически здоровых телят и могли проникнуть в кишечник при выпаивании загрязненного почвой молозива. У всех больных было установлено количественное преимущество энтерококков, что подтверждалось статистически.
Наличие примесей крови в фекалиях больных, свидетельствующее о значительных деструктивных изменениях слизистой тонкого и толстого кишечника, послужили основанием для исключения криптоспо-ридий, кокцидий. Микроскопией мазков фекалий, окрашенных по Цилю - Нильсену, а также исследованием фекалий по Фюллеборну с последующей микроскопией не обнаружены ооцисты криптоспоридий, кокцидий.
При исследовании 10 проб фекалий не установлено ни одного случая выделения возбудителя эшерихиоза.
Нарушения микробиоценоза кишечника, обусловленные пролиферацией сульфитредуцирующих клостридий, условно-патогенных энте-робактерий, гемолитических гнилостных бацилл, дрожжеподобных грибов на фоне дефицита лактобацилл и бифидобактерий, мы характеризовали как третью степень выраженности дисбиотических наруше-
361
ний, способствующих развитию деструктивных изменений слизистой кишечника, всасыванию токсинов и метаболитов факультативной микрофлоры в кровь с развитием выраженного эндотоксикоза, что в совокупности обусловливало развитие токсического дисбактериоза и клинически проявлялось гастроэнтероколитом, дегидратацией организма, угнетением центральной нервной, сердечно-сосудистой и дыхательной систем.
Таким образом, использование микроэкологического подхода в лабораторной диагностике диарей позволило расшифровать их этиологию (табл. 2).
Таблица 2. Этиология диарейных заболеваний у телят
Наименование хозяйства Топический диагноз Этиологический фактор
СПК «Комсомолец» Энтероколит, анемия Токсический дисбактериоз, криптоспоридиоз
СПК «Решительный» Энтероколит, гипотрофия, анемия Деструктивный дисбактериоз, криптоспоридиоз
УОХ «Кокино» Гастроэнтероколит Токсический дисбактериоз
Этиологическое значение дисбиотических нарушений при диареях подтверждено у больных в обследуемых хозяйствах. В СПК «Комсомолец» и в УОХ «Кокино» они имели одинаковую степень выраженности и специфичность, но в СПК «Комсомолец» дисбиотические нарушения были усугублены наличием микроскопических паразитов -криптоспоридий. Клиническое течение токсического дисбактериоза было различным, что связано с присутствием криптоспоридий. У телят в СПК «Решительный», больных гипотрофией, энтероколит был обусловлен деструктивным дисбактериозом, а у некоторых осложнен криптоспоридиозом. Наличие криптоспоридий, активно разрушающих эпителиоциты, обусловливало развитие анемии (табл. 3).
Таблица 3. Результаты профилактического и лечебного действия препарата Бифинорм с пребиотическим компонентом
Хозяйства Количество испытуемых животных, гол.
Лечение Эффективность,% Профилактика Эффективность,%
СПК «Комсомолец» 32 72 30 90
СПК «Решительный» 30 83,3 45 100
УОХ «Кокино» 66 96,97 32 100
Итого 128 84,09 107 96,6
Лечение диареи, обусловленной токсическим дисбактериозом и крип-тоспоридиозом, у телят СПК «Комсомолец» обеспечивало 72%-ный лечебный эффект. Профилактический эффект в этом хозяйстве составлял 90 %.
В СПК «Решительный» терапевтический эффект от препарата у больных телят с деструктивным дисбактериозом, осложненным крип-тоспоридиозом, составлял 83,3 %, а профилактический - 100 %.
362
Лучшее терапевтическое действие препарата отмечали в УОХ «Ко-кино» при лечении токсических дисбактериозов - 96,97 %, а профилактический эффект составлял 100 %.
Для профилактики и лечения энтероколитов, обусловленных токсическим или деструктивным дисбактериозом, осложненным крипто-споридиозом и анемией, применяли комплексное лечение фуразолидо-ном в дозе 10 мг/кг и «Бифинормом» в течение пяти дней (табл. 4).
Таблица 4. Результаты комплексной терапии
Хозяйства Количество испытуемых животных, гол.
Лечение Эффективность, % Профилактика Эффективность, %
СПК «Комсомолец» 15 80 30 100
СПК «Решительный» 20 90 30 100
Итого 35 85 60 100
Комплексное применение пробиотического препарата, содержащего лактулозу, и фуразолидона телятам в СПК «Комсомолец» обеспечивало 100%-ную профилактическую эффективность, которая превосходила на 10 % результаты, полученные при выпаивании одного препарата.
Профилактическая эффективность совместного применения препарата и фуразолидона в СПК «Решительный» составляла 100 % и была идентична пробиотикопрофилактике.
Использование фуразолидона как этиотропного средства против криптоспоридий также повышало эффективность пробиотикотерапии. Лечебный эффект в СПК «Комсомолец» составил 80 %, а в СПК «Решительный» - 90 %. Превосходство позитивного эффекта составило 6,7-8 %. Лечебный эффект при комплексном применении по данным двух хозяйств -85 %, а профилактический - 100 %.
После выздоровлении телят отмечали нормализацию показателей гемоглобина и гематокрита.
Заключение. В спектре этиологических факторов при диарейных заболеваниях телят дисбиотическим нарушениям принадлежит ведущая роль, а паразитирование криптоспоридий усугубляет тяжесть клинического проявления диареи.
Применение 1%-ной лактулозы в составе питательной среды при приготовлении препарата стимулировало пролиферацию бифидобак-терий, усиливало кислотообразующую активность, повышало жизнеспособность популяций при пересевах, упрощало технологию приготовления препарата Бифинорм. Выпаивание препарата Бифинорм с пребиотическим компонентом телятам обеспечивало 100%-ный профилактический эффект при гастроэнтероколитах дисбиозной этиологии и 95%-ное позитивное действие при энтероколитах дисбиозного происхождения, осложненных криптоспоридиозом.
Лечебная эффективность препарата Бифинорм с пребиотическим компонентом при диарейных заболеваниях телят дисбиозной этиологии - 96,97 %, а осложненных криптоспоридиозом - 77,65 %.
363
Коплексное применение препарата и фуразолидона обеспечивало 100%-ный профилактический и 85%-ный лечебный эффект при дисбиотических состояниях кишечника на фоне криптоспоридиоза. Применение комплексной терапии позволило на 7,35 % повысить вы-здоравливаемость и сохранность телят.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бовкун, Г.Ф. Использование пребиотических добавок при выращивании телят в условиях загрязнения окружающей среды радиоцезием / Г.Ф. Бовкун // Актуальные проблемы кормления сельскохозяйственных животных: матер. междунар. науч.-практ. конф. - Дубровицы, 2007. - С. 374-379.
2. Гудкова, А.Ю. Динамика микрофлоры кишечника при моноинвазии и микс-тинвазии трематодами / А.Ю. Гудкова, Ю.Ф. Петров // Ветеринарный врач. - 2004. -№ 2. - С. 62-67.
3. Кашин, А.С. Экологические проблемы патологии сельскохозяйственных животных / А.С. Кашин // Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных: матер. Междунар. координац. совещания. - Воронеж, 1997. - С. 17-20.
4. Методические указания по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями: утв. ГУВ МСХ СССР. - М., 1999. - 18 с.
5. Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных: утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ. - М., 2002. - 20 с.
6. Наставление по применению пробиотического препарата Бифинорм: утв. МСХ РФ. -М., 2002. - 4 с.
7. Техническое руководство по производству молока. Выращивание телят. - Орел, 2006. - С. 82-83.
8. Щербакова, Э.Г. Изучение бифидогенного действия сиропа Лактусан / Э.Г. Щербакова // Лактусан: лечебно-профилактические свойства и применение лакту-лозного сиропа: информация для врачей. - М., 2002. - 84 с.
9. Шахов, А. Г. Желудочно-кишечные болезни телят / А.Г. Шахов // Комплексная экологическая безопасная система ветеринарной защиты здоровья животных. - М.: ФГНУ Росинформагротех, 2000. - С. 132-150.
10. Hidaka, H. Fructooligossarides enzymatia preparation and biofunctions / H. Hidaka // Carbogidrate Chem. - 1991. - № 10. - Р. 509-522.
11. Liao, W. Lactulosa a potential drug for the treatment of inflammatory bowel disease / W. Liao, X.S. Cui, C.H. Floren // Med. Hypotheses. - 1994. - Уо1. 43. - № 4. - P. 234-238.
12. Terada, A. Lecithinasa positive closteidia isolated from human feces on consumption of lactosucrose / A. Terada, H. Hara // Jap.J. Food Microbiology. - 1994. - уо1. 11. - № 2. -P. 119-123.
УДК 635.52/58
ХАРАКТЕРИСТИКА КАЧЕСТВА МОЛОКА КОРОВ, СОДЕРЖАЩИХСЯ В РАЗЛИЧНЫХ ПОМЕЩЕНИЯХ
А.С. ДОГЕЛЬ
УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины» г. Витебск, Республика Беларусь, 210026
(Поступила в редакцию 15.01.2012)
Введение. Основной задачей интенсификации молочного скотоводства является повышение продуктивности животных и улучшение
364
