Научная статья на тему 'ОЦЕНКА БИОТОКСИЧЕСКОГО ВЛИЯНИЯ КАТИОНОВ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ НА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ НОРМОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ'

ОЦЕНКА БИОТОКСИЧЕСКОГО ВЛИЯНИЯ КАТИОНОВ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ НА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ НОРМОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ Текст научной статьи по специальности «Экологические биотехнологии»

CC BY
14
5
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
E. FAECALIS / E. CLOACAE / E. COLI / L. ACIDOPHILUS / ТЯЖЕЛЫЕ МЕТАЛЛЫ / МИНИМАЛЬНЫЕ ПОДАВЛЯЮЩИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ / ФАЗЫ РОСТА / HEAVY METALS / MINIMAL INHIBITORY CONCENTRATIONS

Аннотация научной статьи по экологическим биотехнологиям, автор научной работы — Клименко О. П., Мокина Е. С., Вельш О. А., Косинова М. С., Сизенцов Я. А.

В статье представлены данные по исследованию биотоксичности тяжелых металлов в отношении представителей нормофлоры кишечника лабораторных крыс и их влияние на рост популяции исследуемых микроорганизмов

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по экологическим биотехнологиям , автор научной работы — Клименко О. П., Мокина Е. С., Вельш О. А., Косинова М. С., Сизенцов Я. А.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

EVALUATION OF BIOTOXIC EFFECTS OF HEAVY METAL CATIONS ON THE REPRESENTATIVES OF THE BACTERIAL NORMOFLORA OF THE INTESTINAL LABORATORY ANIMAL

The article presents data on the study of the biotoxicity of heavy metals in relation to representatives of the intestinal normoflora of laboratory rats and their effect on the growth of the population of the studied microorganisms.

Текст научной работы на тему «ОЦЕНКА БИОТОКСИЧЕСКОГО ВЛИЯНИЯ КАТИОНОВ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ НА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ НОРМОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ»

БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ

УДК 579.89, 579.62

ОЦЕНКА БИОТОКСИЧЕСКОГО ВЛИЯНИЯ КАТИОНОВ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ НА ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ НОРМОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА

ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ

Клименко О.П., студент группы 15Био(ба)Мб, Оренбургский государственный университет, Оренбург

e-mail: [email protected]

Мокина Е.С., студент группы 15Био(ба)Мб, Оренбургский государственный университет, Оренбург

e-mail: [email protected]

Вельш О.А., студент группы 16Био(ба)-2, Оренбургский государственный университет, Оренбург

e-mail: [email protected]

Косинова М.С., студент группы 16Био(ба)-2, Оренбургский государственный университет, Оренбург

e-mail: [email protected]

Сизенцов Я.А., студент группы 17ФПХ(с)АХ, Оренбургский государственный университет, Оренбург

e-mail: [email protected]

Научный руководитель: Барышева Е.С., д-р мед. наук, доцент, заведующий кафедрой биохимии и микробиологии, Оренбургский государственный университет, Оренбург

В статье представлены данные по исследованию биотоксичности тяжелых металлов в отношении представителей нормофлоры кишечника лабораторных крыс и их влияние на рост популяции исследуемых микроорганизмов

Ключевые слова: E. faecalis, E. cloacae, E. coli, L. acidophilus, тяжелые металлы, минимальные подавляющие концентрации, фазы роста.

В работах, посвященных проблемам загрязнения окружающей среды, на сегодняшний день к тяжелым металлам относят более 40 металлов периодической системы Д.И. Менделеева с атомной массой свыше 50 атомных единиц. При этом немаловажную роль в категорировании тяжелых металлов играют следующие условия: их высокая токсичность для живых организмов в относительно низких концентрациях, а также способность к биоаккумуляции и биомагнификации. По классификации Н.Реймерса, тяжелыми следует считать металлы с плотностью более 8 г/см3. Таким образом, к тяжелым металлам относятся: свинец, цинк, кадмий, ртуть, молибден, хром, марганец, никель, олово, кобальт, титан, медь, ванадий и так далее [1-3].

Ионы металлов являются непременными компонентами природных водоемов. В зависимости от условий среды (pH, окислительно-восстановительный потенциал, наличие лигандов) они существуют в разных степенях окисления и входят в состав разнообразных неорганических и металлорганических соединений, которые могут быть истинно растворенными, коллоидно-дисперсными или входить в состав минеральных и органических взвесей.

Тяжелые металлы обладают высокой способностью к многообразным химическим, физико-химическим и биологическим реакциям. Часть органических соединений, с которыми связываются металлы, представлена продуктами микробиологической

деятельности. Ртуть и другие металлы характеризуется способностью аккумулироваться в звеньях «пищевой цепи». Микроорганизмы почвы могут давать устойчивые к металлам популяции. Некоторые водоросли, грибы и бактерии способны аккумулировать ртуть и другие металлы в клетках, при этом «рекордсменами» по извлечению тяжелых металлов из окружающей среды являются микроорганизмы в том числе и входящие в состав пробиотическизх препаратов [4, 5].

На основании вышеизложенных данных перед нами была поставлена следующая цель: изучить влияние катионов тяжелых металлов на представителей факультативно -анаэробной кишечной нормофлоры крыс в условиях in vitro.

Для достижения поставленной цели были выдвинуты следующие задачи:

1) определить видовой состав микрофлоры лабораторных крыс;

2) определить минимальные подавляющие концентрации тяжелых металлов на рост и изучить их влияние на динамику роста микроорганизмов, входящих в состав нормофлоры кишечника лабораторных животных

В качестве материалов выступала факультативно-анаэробная нормофлора лабораторных крыс: E. faecalis, E. cloacae, E. coli, L. acidophilus. В качестве источника катионов тяжелых металлов использовались соли с высоким уровнем диссоциации в водных растворах: FeSO4 - сульфат железа, ZnSO4 - сульфат цинка, Pb(NO3)2 - нитрат свинца, CdSO4x8H2O - восьмиводный сульфат кадмия, CuSO4x5H2O - пятиводный сульфат меди.

Для определения минимальных подавляющих концентраций (МПК) тяжелых металлов мы использовали метод последовательных разведений, что позволило нам получить различные концентрации начального 0,02 М/л раствора солей исследуемых металлов.

Получение ряда разведений растворов тяжелых металлов (таблица 1), было необходимо с целью определения ингибирующих и субингибирующих концентраций, в отношении исследуемых микроорганизм, а также концентраций, которые не оказывают влияния на рост популяции. Это позволило создать оптимальные условия для культивирования исследуемых микроорганизмов в присутствии солей тяжелых металлов.

Из таблицы 1 следует, что концентрации солей свинца расположенные в анализируемом диапазоне до концентрации 0,005 М/л оказывали бактерицидный эффект на E. coli и E. faecalis. Такой же эффект оказывали концентрации солей железа, меди и цинка расположенные в анализируемом диапазоне до концентрации 0,0025 МУл (в случае E. faecalis до концентрации 0,0025, 0,0003 и 0,0006 М/л соответственно), концентрации кадмия до концентрации 0,0003 МУл (в случае E. faecalis до 0,00001 М/л).

Так же представленные данные следуют, что бактерицидный эффект на L. acidophilus оказывали концентрации солей железа и свинца, расположенные в диапазоне до концентрации 0,0025 М/л. Концентрации солей цинка оказывали бактерицидный эффект на L. acidophilus до концентрации 0,00125 М/л, концентрации солей меди и кадмия до 0,0003 М/л. Концентрации находящиеся ниже перечисленных значений не оказывали негативного влияния на рост популяции данного микроорганизма.

Бактерицидный эффект на E. cloacea оказывали концентрации солей железа и свинца, расположенные в диапазоне до 0,005 М/л. Концентрации солей цинка и меди оказывали бактерицидный эффект до 0,00125 М/л, концентрации солей кадмия до концентрации 0,0003 М/л. При меньших концентрациях наблюдался обильный рост данной культуры.

Концентрации солей металлов, располагающиеся между бактерицидными и концентрациями при которых наблюдался рост исследуемых микроорганизмов, являлись бактериостатическими или оказывали субингибирующее действие. Определение данных концентраций позволяло судить о степени биотоксичности катионов исследуемых металлов.

Обобщая и интерпретируя полученные данные можно констатировать, что из всех исследуемых микроорганизмов наиболее чувствительным штаммом по отношению ко всем используемым металлам является L. acidophilus. Металлами, проявляющими наименьшую

токсичность в отношении E.coli являлись железо, цинк, свинец и медь, в отношении E. faecium, E. cloaceae и L. acidophilus только свинец и железо. Наиболее токсичным металлом в отношении исследуемых микроорганизмов является кадмий.

Таблица 1 - Минимальные подавляющие концентрации тяжелых металлов, влияющие на рост исследуемых микроорганизмов, молях на литр

Штамм Соли металлов Концентрация

0,02 0,01 0,005 0,0025 0,00125 0,000625 0,0003 0,0001

E.coli FeSO^O - - - ± + + + +

ZnSO4 - - - ± + + + +

Pb(NO3)2 - - ± + + + + +

CdSO4- 8H2O - - - - - - ± +

CuSO4-5H2O - - - ± + + + +

E.faecalis FeSO4-H2O - - - ± + + + +

ZnSO4 - - - - - ± + +

Pb(NO3)2 - - ± + + + + +

CdSO4- 8H2O - - - - - - - -

CuSO4-5H2O - - - - - - ± +

E. cloacae FeSO4-H2O - - ± + + + + +

ZnSO4 - - - - ± + + +

Pb(NO3)2 - - ± + + + + +

CdSO4- 8H2O - - - - - - + +

CuSO4-5H2O - - - - ± + + +

L. FeSO4-H2O - - - ± + + + +

acidophilus ZnSO4 - - - - ± + + +

Pb(NO3)2 - - - ± + + + +

CdSO4- 8H2O - - - - - - ± +

CuSO45H2O - - - - - - ± +

«-» - ингибирующие концентрации «±» - субингибирующие концентрации

«+» - концентрации не оказывающие ингибирующего действия на рост популяции

Процесс аккумуляции катионов металлов бактериальными штаммами происходит в стационарной фазе роста. Данный процесс связан с тем, что в данной фазе происходит истощение субстрата и аккумуляция токсичных продуктов, что в свою очередь вынуждает микроорганизмы к поиску других источников энергии, а так же детоксикации среды обитания. На основании изложенного следующим этапом нашей работы являлось изучение роста популяций, с целью выявления оптимального времени роста в периодической культуре, и оценка влияние катионов тяжелых металлов на динамику роста исследуемых микроорганизмов.

Определение оптимального времени роста на периодической культуре осуществлялось путем культивирования исследуемых штаммов в периодической культуре на жидкой питательной среде с измерением оптической плотности каждые 3 часа. Измерения велись до получения не менее трех одинаковых значений оптической плотности, что свидетельствовало о наступлении стационарной фазы роста. По полученным результатам для каждого штамма были выстроены кривые роста.

Исходя из полученных данных следует, что лаг-фаза E. coli (рисунок 1) длилась около 3 часов, E. faecium 9 часов, а у L. acidophilus - 12 часов. Продолжительность эспоненциальной фазы роста составляла для E. coli и E.faecalis 6 часов, для L. acidophilus 12 часов. Время наступления стационарной фазы происходило у E.coli через 24 часа культивирования, у E. faecium через 27 часов, у L. acidophilus через 36 часов.

Изучение влияния солей тяжелых металлов на динамику роста исследуемых бактерий проводилось аналогично, для этого в среду культивирования вносилась рабочая концентрация исследуемого металла и осуществлялось культивирование до наступления стационарной фазы роста.

Анализ полученных данных свидетельствует, что влияние солей тяжелых металлов на время наступление и продолжительность фаз роста неоднозначно, при этом стимулирующее действие на рост Е.еоМ оказывали ионы свинца и железа (рисунок 1). При этом продолжительность лаг-фазы составляла 2 часа, экспоненциальной фазы - 13 часов, фазы замедленного роста - 3 часа. Стационарная фаза наступала через 18 часов культивирования.

,,,--,--,--*------------

........

^ ___^ д I ~ *М-■ —■— Контроль роста

" " " —»— FeSO4fl2O

_ " " " - -•— - -•— - -• —•- ZnSO4 / Pb(NO3)2

' CdSO48H2O

- *- CuSO4-5H2O

3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39

время исследования, часы

Рисунок 1 - Влияние катионов солей тяжелых металлов на рост E.coli

Выводы. Наиболее чувствительным представителем нормофлоры кишечника по отношению ко всем используемым металлам является L. acidophilus. Металлами, проявляющими наименьшую токсичность в отношении E.coli являлись железо, цинк, свинец и медь, в отношении E. faecium, E. cloaceae и L. acidophilus только свинец и железо. Наиболее токсичным металлом в отношении исследуемых микроорганизмов является кадмий.

Литература

1. Северин, Е.С. Биохимия: учебник / Е.С. Северин. - Москва: Гэо-тар-мед, 2004. -

784 с.

2. Quigley, J.G. Identification of a human heme exporter that is essential for erythropoiesis. / J.G. Quigley, Z. Yang, Mark T. Worthington // Cell. - 2004. - Vol. 118. - № 6. - pp. 757-766.

3. Портал фундаментального химического образования России [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.chem.msu.ru/ - (дата обращения: 15.02.17).

4. Collins, M.D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approach for modulating the microbial ecology of the gut / M.D. Collins, G.R. Gibson // Am.J.Clin.Nutr. - 2003. - Vol. 69. -№ 5. - pp. 1052-1057.

5. Сизенцов, А.Н. Способность пробиотических препаратов на основе бактерий рода bacillus к биоаккумуляции ионов тяжелых металлов в организме лабораторных животных / А.Н. Сизенцов, Е.С. Барышева, А.Е. Бабушкина // Российский иммунологический журнал. -2015. - Т. 9. - № 2(1) (18). - С. 753-755.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.