CC BY
29
УДК 616.3:612.014.3:616-07-053:616.15:616.07.2/6
ОЦЕНКА АП0ПТ0ТИЧЕСК0Й АКТИВНОСТИ У ДЕТЕЙ С ХРОНИЧЕСКОЙ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ НА РАЗНЫХ ЭТАПАХ РЕАБИЛИТАЦИИ
Н.В. ЛАГУНОВА АО. КОТ
Крымский государственный медицинский университет имени С.И. Гергиевского, г. Симферополь
e-maihh0t.andrey200g@yandex.ru
В статье приводятся результаты собственных исследований по определению апоптотической активности за счет изучения динамики показателей маркеров апоптоза Fas (CD95) и Аннексина V у детей с хронической гастродуоденальной патологией на этапе стационарного лечения и санаторно-курортной реабилитации.
Ключевые слова: дети, гастродуоденальная патология, апоптоз.
В последнее время отмечается значительный рост и частота рецидивирования заболеваний гастродуаденальной патологии. Согласно последним статистическим данным по Украине более 2,8 млн. детей страдают патологией органов пищеварения. Наиболее распространенными среди заболеваний органов пищеварения у детей являются заболевания желудка и двенадцатиперстной кишки и составляют 50-75% в структуре детской гастроэнтерологической патологии [l] и встречаются у 100-150 на 1000 детей [2].
Таким образом, данная проблема не только сугубо медицинская, но и социальноэкономическая, поэтому остается актуальным вопрос эффективной реабилитации больных с гастродуоденальной патологией в детском возрасте [3].
В настоящее время доказано, что диагноз хронический гастрит и язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки основывается на воспалении и дисрегенераторных процессах. На клеточном уровне постоянно протекающие деление и рост должны сопровождаться альтернативным процессом удаления старых поврежденных клеток. Высокорегулируемую форму программированной смерти клетки с характерными морфологическими и биохимическими признаками определяют как апоптоз [4].
Апоптозу принадлежит важнейшая роль, как в физиологических, так и в патологических условиях, поскольку и подавление, и неадекватное его усиление ведут к патологическим изменениям органов и тканей [5, 6, 7]. Все больше внимания уделяется изучению апоптоза с точки зрения влияния его на различные патологические процессы.
В связи с этим целью работы было изучение характера изменений показателей маркеров апоптоза CD95 (Fas) и Аннексии V у детей с хронической гастродуоденальной патологией на этапе стационарного лечения и санаторно-курортной реабилитации с применением минеральной воды «Феодосийская» в сочетании с частотно-резонансной терапией.
Материалы и методы. Под нашим наблюдением находилось 103 ребенка с хронической гастродуаденальной патологией в периоде обострения с возрастными границами 6-17 лет. В l-ю группу вошли 47 детей с хронической гастродуаденальной патологией ассоциированной с Helicobacter pylori, во 2-ю группу вошел 41 ребенок с хронической гастродуоденальной патологией неассоциированной с Helicobacter pylori и в 3-ю группу вошли 15 детей с язвенной болезнью 12-ой кишки ассоциированной с Helicobacter pylori. При этом 50 детей с хронической гастродуаденальной патологией в периоде ремиссии находились на санаторно-курортном лечении. Были выделены 2 группы по 25 детей каждая (в l-ю группу вошли пациенты, получавшие минеральную воду «Феодосийская» в питьевом режиме; во 2-ю группу вошли пациенты, получавшие минеральную воду «Феодосийская» в питьевом режиме с параллельным применением частотно-резонансной терапии). Минеральную воду «Феодосийская» дети получали из расчета 5мл/кг массы тела 2 раза в день (утром и вечером) в течение 30 дней, в температурном режиме. Частотно-резонансную терапию проводили с помощью прибора «Паркес-Л» с использованием 7 программы. 7 программа согласно инструкции по применению является адаптогенной, улучшает иммунитет и повышает жизненный тонус. Использовали по схеме: 21 (7) 21, где 21 минута - лечебный сеанс, 7 минут - перерыв, курсом 10 дней. Группу контроля составили 20 практически здоровых детей, сопоставимых по возрасту и полу.
В соответствии с задачами работы все дети изначально проходили обследование и лечение на базе профильных гастроэнтерологических коек Крымского республиканского управле-
ния «Детская республиканская клиническая больница» г. Симферополя. Санаторно-курортную реабилитацию дети получали в условиях школы-интерната санаторного типа г. Феодосия.
В работе использованы такие методы исследования, как анамнестический, клинический, лабораторный, инструментальный, иммунологические, консультации узких специалистов.
Оценку динамики количественного содержания показателей маркеров апоптоза CD95 (Fas) и Аннексии V во всех трех группах определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА.)
При проведении ИФА использовался комплект оборудования фирмы AWARENESS Technology Inc. (USA): промыватель планшет автоматический Stat Fax 2600, микропланшетный инкубатор-шейкер Stat Fax 2200 и иммуноферментный плашечный автоматический анализатор Stat Fax 2100.
Маркер SCD95 определялся наборами ИФА sCD 95(APOi/ Fas) ELISA KIT фирмы «DI-ACLONE Research» (Франция), предназначенными для количественного измерения «in vitro» растворимого CD95 (APO-i, Fas) в плазме, сыворотке, буферизованных растворах или среде культуры клеток. Фотометрирование лунок проводили на Stat Fax 2100 при длине волны 450 нм. Для перевода полученных результатов в единицах ОП измерения в ЕД/мл строили калибровочный график.
Для количественного определения Аннексина V использован иммуноферментный набор Annexin V Elisa (кат. NBMS 252 производитель Bender Medsystems). После остановки ферментативной реакции проводили фотометрирование лунок на Stat Fax 2100 при длине волны 450 нм. Далее, с учетом значений оптической плотности контрольных проб, проводили математическую обработку результатов анализов.
Обследованным больным диагноз гастродуоденальной патологии выставлялся согласно классификации МКБ ю.
Проводилось лечение с учетом протоколов терапии по основному заболеванию.
Статистическую обработку полученных данных проводили с применением интегрированного пакета прикладных программ Statistica 6.0 for Windows ХР, в соответствии с общепринятыми методами медицинской статистики.
Результаты и их обсуждение. Результаты исследования динамики содержания титра проапоптотического маркера CD95 (Fas) и интегрального показателя общей интенсивности апоптоза клеток Аннексина V на этапе стационарного лечения при поступлении и при выписке представлены в табл. 1.
Таблица 1
Динамика показателя маркера CD95 (Fas) (пг/мл) и Аннексина V (U/мл) в сыворотке крови у детей с хронической гастродуоденальной патологией на этапе стационарного лечения (М±т)
Показатель Контроль (п = 20) l-я i'p\ (n = ¿ ппа 1-7) 2-я группа (п = 41) 3-я группа (п = 15)
ДО после ДО после ДО после
Fas (CD95) пг/мл 400,67 ± 4,05 553,29 ±8,01 р<0,001 432,89 ±5,52 р < 0,01 Рз<0,001 539,41 ±5,53 р < 0,001 Pi > 0,05 439,64 ±5,98 р < 0,01 Pi >0,05 Рз<0,001 638,00 ± 8,8о р <0,001 р i<0,001 р2<0,001 470,00 ±7,84 р <0,001 Pl< 0,05 р2< 0,05 р3<0,001
Аннексии V U/мл 6,25 ± 0,44 12,37 ±0,47 р<0,001 8,03 ±0,30 Р < 0,05 р3<0,001 14,11 ±0,66 р < 0,001 Р1 < 0,05 7,61 ±0,25 Р < 0,05 Р i >0,05 р3<0,001 16,98 ±0,95 р <0,001 р 1 <0,01 р 2 <0,05 9,04 ±0,60 Р < 0,05 Pi >0,05 Р 2 <0,05 р3<0,001
п - абсолютное количество случаев;
р - достоверность различия с аналогичными показателями контроля; р i-достоверность различия с аналогичными показателями 1-й группы; р 2-достоверность различия с аналогичными показателями 2-й группы. р3 - достоверность различия с аналогичными показателями при поступлении.
Анализируя полученные данные, как видно из табл. 1, у всех обследуемых больных, во всех трех группах при поступлении в стационар отмечалось достоверное повышение титра Fas (CD95) и Аннексина V превышающие средние значения в группе здоровых детей (p<o,ooi), что свидетельствует об усиленных процессах апоптоза. Также мы отмечали достоверно более высо-
кие показатели Fas (CD95) и Аннексина V у пациентов, имеющих деструктивные процессы в слизистой (ЯБДПК) в сравнении с детьми i-й и 2-й группы (p<o,ooi).
Кроме того нами обнаружена прямая корреляционная связь средней силы между показателями Fas (CD95) группы детей с ЯБ ДПК ассоциированной с Helicobacter pylori и группы детей с ХГДП неассоциированной с Helicobacter pylori (г = 0,59, р<0,05).
После проведенной базисной терапии всем пациентам повторно провели определение апоптотической активности. Так, во всех трех группах у всех обследуемых больных отмечалось достоверное снижение показателей Fas (CD95) и Аннексина V (р<0,05); это говорит об эффективном лечении, но показатели оставались достоверно выше, превышая средние значения в группе здоровых детей (p<o,ooi). Также как и при поступлении, мы отмечали достоверно более высокие показатели Fas (CD95) и Аннексина V у детей в группе с деструктивными изменениями слизистой (ЯБ ДПК) в сравнении с детьми i-й и 2-й группы (р<0,05).
На санаторно-курортном этапе реабилитации также проводили анализ динамики содержания титра проапоптотического маркера CD95 (Fas) и интегрального показателя общей интенсивности апоптоза клеток Аннексина V представлены в табл. 2.
Таблица 2
Динамика показателя маркера CD95 (Fas) (пг/мл) и Аннексина V (U/мл) в сыворотке крови у детей с хронической гастродуоденальной патологией на этапе санаторно-курортной реабилитации (М±т)
Этап исследования Минеральная вода «Феодосийская» (п =25) Минеральная вода «Феодосийская» + частотно-резонансная терапия (п =25)
CD95 (Fas) Аннексии CD95 (Fas) Аннексии
Поступление 453,56 ± 10,22 Р < 0,01 8,34 ± 0,47 Р < 0,05 451,96 ± 10,16 Р < 0,01 Pi > 0,05 8,50 ± 0,49 Р < 0,05 Pi > 0,05
Выписка 433,48 ± 7,79 Р < 0,05 7,28 ± 0,24 Р < 0,05 Pi < 0,05 410,92 ± 4,42 Р > 0,05 Pi < 0,05 6,61 ± 0,14 Р > 0,05 Рк 0,01
Контрольная группа (п =20) 400,67 ± 4,05 6,25 ± 0,44 400,67 ± 4,05 6,25 ± о,44
11 - абсолютное количество случаев;
р - достоверность различия с аналогичными показателями контроля; р 1-достоверность различия с аналогичными показателями 1-й группы.
Анализируя полученные данные можно говорить о том, что у обследуемых детей обеих групп имело место достоверное повышение показателей CD95 (Fas) и Аннексина V в сравнении с группой контроля (Р<0,01;<0,05). При этом показатели i-ой и 2-ой группы достоверно не отличались друг от друга.
Это, по нашему мнению, указывает на то, что в периоде ремиссии, не смотря на проведенную базисную терапию и отсутствие признаков воспаления при эндоскопическом исследовании, сохраняется активность апоптотических процессов, что косвенно свидетельствует о неполном выздоровлении.
После проведенной терапии имеет место снижение показателей апоптической активности CD95 (Fas) и Аннексина V и приближение их к показателям контрольной группы, более выраженное во 2-ой группе, где применялось сочетанное применение минеральной воды «Феодосийская» и частотно-резонансной терапии, это косвенно свидетельствует о регенерации слизистой гастродуоденальной зоны.
Выводы
1. При поступлении в стационар у детей с хронической гастродуоденальной патологией имеет место усиление процессов апоптотической активности в сравнении с группой здоровых детей, более выраженное у пациентов с деструктивными изменениями в слизистой гастродуоденальной зоны.
2. В результате лечебных мероприятий наблюдалось снижение уровня показателей sCD 95 и Аннексина V у детей всех групп, подтверждающее снижение апоптотической активности и косвенно свидетельствующее об усилении репаративных процессов в слизистой гастродуоде-альной зоны, что подтверждалось исчезновением жалоб и улучшением клинической картины.
3. У детей с гастродуоденальной патологией на этапе санаторно-курортной реабилитации до начала курса терапии сохранялась активность апоптических процессов, которая отражалась в повышении показателей sCD 95 и Аннексина V в сравнении с группой контроля.
4. После проведенной санаторно-курортной реабилитации детей с гастродуоденальной патологией имеет место снижение показателей апоптической активности sCD 95, Аннексина V и приближение их к показателям контрольной группы, более выраженное во 2-ой группе, где применялось сочетанное применение минеральной воды «Феодосийская» и частотнорезонансной терапии.
Литература
1. Абатуров А.Е. Хронические гастриты, ассоциированные с внутриклеточными вирусными инфекциями / А.Е. Абатуров // Педиатрия, акушерство и гинекология. 2011. Т.73; №4; С. 7-8.
2. Шульгай О.М. Зміни імунологічного статусу у дітей, хворих на хронічний гастродуоденіт, асоційований з Нр / О.М. Шульгай // Педіатрія, акушерство та гінекологія. - 2000. - №l. - С. 29-30.
3. Ціборовский О.М. Росповсюдження хвороб органів травлення у дітей дошкільного віку залежно від впливу соціальних, екологічних та медико-біологічних факторів / О.М. Ціборовский, М.Ф. Денисова // Педіатрія, акушерство та гінекологія -1996. - № 3. - С. 14-16.
4. Ивашкин В.Т. Процессы апоптоза и пролиферации при патологии желудочно- кишечного тракта и печени / В.Т.Ивашкин, Т.Л. Лапина, АО. Бондаренко, А.М. Буеверов, А.М. Осадчук, Е.А. Коган, О.А. Склянская, Е.Ю. Москалева, Е.В. Дмитриева, С.Е. Северин, И.М. Креветный // РЖГГК. 2002.; 6; С 38-435. Арин Л.И. Апоптоз при патологических процессах в органах пищеварения / Л.И. Арин //
Клин. Мед. - 2000. - Т.78, №1. - С. 5-10.
6. Белушкина H.H. Молекулярные основы патологии апоптоза / H.H. Белушкина, С.Е. Северин // Арх. Пат. - 2001. - №1. С. 51-60.
7. Белушкина H.H. Молекулярные основы апоптоза / H.H. Белушкина, Хасан Хамад Али, С.Е. Северин // Вопр. биол. мед. и фарм. химии. - 1998. - №4. -С. 15-23.
8. Amous D. Antiphospholipid antibodies : clinical significance and biological diagnosis/ D. Amous, B. Bontiere, M. Sanmarco // Ann.Biol.Clin. (Paris) - 2000 - Vol. 58-№5- p. 557-574.
ESTIMATION OF APOPTOTIC ACTIVITY IN CHILDREN WITH CHRONIC GASTRODOODENAI PATHOLOGY ON THE DIFFERENT STAGES OF REHARIIITATION
N.V. LAGUNOVA Д.О.КОТ
Crimea State Medical University named iff ter S.I. Georgievsky, Simferopol
e-mail: k0t.andrey200g@yandex.ru
In the article the results of own researches are driven on determination of apoptosis activity through the review of the indicators markers of apoptosis sCD 95 and Annexin V in children with chronic gastroduodenal pathology on the stage of hospital treatment and sanatorium-resort rehabilitation.
Keywords: children, gastroduodenal pathology, apoptosis.
