ОСТРАЯ И ПОДОСТРАЯ ТОКСИЧНОСТЬ ПРЕПАРАТА ЭПРИМЕК Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

Вестник АПК

Ветеринария -; № 1(17), 2015 " "

УДК 619:615.284

Кузнецов Ю. Е., Павленко Г. И., Смирнов А. А.

Kuznetsov Y., Pavlenko G., Smirnov A.

ОСТРАЯ И ПОДОСТРАЯ ТОКСИЧНОСТЬ ПРЕПАРАТА ЭПРИМЕК

ACUTE AND SUB-ACUTE TOXICITY OF THE DRUG EPRIMEK

В статье приводиться доклиническое испытание нового антигельминтика препарата Эпримек, разработанного ООО НПО «АПИ-САН», в основе которого лежит эприномек-тин, имеющий высокую эффективность и широкий спектр действия. Данное средство относится к макроциклическим лактонам. ЛД50 препарата эпримек составляет 8,3±0,47 г/ кг массы тела. Согласно классификации (ГОСТ 12.1.007-76) препарат - малотоксичное соединение (4-й класс опасности). Это позволяет сделать вывод, что данный препарат может быть использован для проведения клинических испытаний на животных и внедрен в производство.

Ключевые слова: острая и подострая токсичность, кумулятивные свойства, гематологические показатели крови, антигельминтик, эприномектин, макроциклические лактоны.

This paper presents preclinical trials of a new drug Eprimek developed by API-SAN Company. One of the basic ingrediens of Eprimek is eprinomectin which has a high effectiveness and a wide spectrum of action. This drug refers to macrocyclic lactones 8,3±0,47 g/kg (of body weight) LD50 is contained in Eprimek. Referring to classification this drug is low-toxic compound (the 4th level of danger). That leads to a conclusion that this drug could be used to perform clinical trials on animals and be used in the manufacture.

Keywords: acute and sub-acute toxicity, cumulative properties, hematological parameters of blood, anthelmintic, eprinomectin, macrocyclic lactones.

Кузнецов Юрий Евгеньевич -

кандидат ветеринарных наук, ассистент кафедры

паразитологи ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская

государственная академия ветеринарной медицины»,

Fish2017@yandex.ru

Адрес: 198280, Санкт-Петербург,

ул. Черниговская, 5.

Павленко Галина Ивановна -

ведущий научный сотрудник ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. Адрес: 123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5

Смирнов Александр Анатольевич -

кандидат биологических наук, генеральный директор ООО «АПИ-САН» 143980, Московская обл., г. Железнодорожный, ул. Пролетарская, д. 2

Kuznetsov Yury Evgen^evich-

Ph.D., Assistant Professor parasitologists FGBOU VPO "St. Petersburg State Academy of Veterinary Medicine», Fish2017@yandex.ru

Address: 198280, Russia, Saint-Petersburg, Chernigovskaya. Str., 5

Pavlenko Galina Ivanovna-

a leading researcher at the All-Russia Research Institute of Veterinary Sanitation, Hygiene and Ecology.Address: 123022, Moscow, Zvenigorodskoe Highway 5

Smirnov Alexander AnatoPvna -

Ph.D., General Director of "API-SUN" 143980, Moscow Region, Railway Street. Proletarian, 2, аb/1207

Введение.В настоящее время в ветеринарии применяется огромное количество лекарственных препаратов, обладающих широким спектром действия. Однако все они обладают определенной токсичностью и могут оказывать негативное влияние на организм животного. В связи с этим складывается ситуация, требующая более детального изучения лекарственных средств перед их применением [1].

Современные антигельминтики должны характеризоваться селективной токсичностью для паразитов и низкой токсичностью для хозяев. Такая избирательность в воздействии основана на существенных физиологических и биохимических различиях между паразитом и хозяином [2].

Таким образом, разработка новых высокоэффективных антигельминтных препаратов, обладающих широким спектром действия и высокой безопасностью, при гельминтозах пушных зверей остается актуальной.

ООО НПО «АПИ-САН» разработан отечественный препарат эпримек, в основе которого лежит эприномектин, имеющий высокую эффективность и широкий спектр действия. Эприномектин - синтетическое производное авермектина, продуцентом которых является актиномицет Streptomycesavermitilis. Данное вещество относится к макроциклическим лактонам. В отличие от зарубежных, отечественный препарат создан на основе природного авермектинового комплекса, состоящего из двух компонентов В1а (не менее 90 %) и В1Ь (не более 10 %), которые образуются в процессе жизнедеятельности этого почвенного микроорганизма [1-6]. Механизм действия эприномектина заключается в усилении пресинаптического выделения и связывания с постсинаптическими рецепторами гаммаами-номаслянной кислоты (ГАМК), управляющей у позвоночных животных периферической мускулатурой, что приводит к повышению прони-

Ежеквартальный

научно-практический

журнал

цаемости мембраны для ионов хлора и, в итоге, к параличу и гибели гельминтов [4].

Учитывая все вышесказанное, а также тот факт, что токсичность препаративной формы может отличаться от компонентов, входящих в состав препарата, нами было проведено настоящее исследование.

Материалы и методы.Для проведения экспериментов использовано три вида подопытных животных: 36 белых крыс - самцов весом 200230 г и 20 белых мышей весом -23-28 г При проведении исследований руководствовались методическими рекомендациями [7, 8].

Для изучения субхронической токсичности препарат в чистом виде вводили в желудок крыс с помощью металлического зонда. В ходе опыта было испытано 5 доз: 5.0, 7.0, 9.0, 11.0 г/кг массы тела. Каждая доза вводилась 6 животным. Контрольным животным вводили воду. За животными устанавливали наблюдение в течение 2-х недель, отмечая сроки гибели или нарушения их жизнедеятельности. Учитывали общее состояние подопытных животных, сохранение двигательных функций, аппетит, состояние шерстного покрова, дыхания, реакцию на внешние раздражители.

При изучении кумулятивных свойств препарата использовали метод Лима и соавторов [9], который предусматривает введение в условиях повторного эксперимента (24+4 дня) первоначальной дозы, равной 1/10 ЛД50, с последующим увеличением через каждые 4 дня в 1,5 раза. Учитывали как материальную (гибель), так и функциональную кумуляцию (функциональные изменения).

В качестве интегральных показателей были взяты определение массы тела, оценка периферической крови, весовые коэффициенты внутренних органов. Специфической можно считать оценку функционального состояния центральной нервной системы, печени, почек. Подопытные-группы состояли из 6-10 голов. Статистическая обработка результатов проводилась по методу Стьюдента в модификации Типпета [10].

Результаты исследования. Для определения острой токсичности при введении в желудок крыс были испытаны дозы в диапазоне - 5,0-11,0 г/кг. В течение 2-х недель за животными велось наблюдение. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Показатели острой токсичности препарата эпримек

Доза, г/кг 5,0 7,0 8,0 9,0 11,0

Выжило 6 4 3 2 0

Погибло 0 2 3 4 6

Z 1,0 2,0 2,0 2,5 1,0 2,5 3,5 1,0 3,5 5,0 2,0 10,0

D

Zd

Условные обозначения: Z - среднее арифметическое из числа животных, у которых отмечен учитываемый эффект под влиянием 2-х смежных доз; с1 - интервал между двумя смежными дозами.

Для определения ЛД50 использовали формулу Кёрбера. ЛД50, составила - 8,3 г/кг. С помо-

щью графического метода анализа зависимости «доза-эффект» определяли ЛД16 и ЛД84, которые составили 6,7 г/кг и 10,3 г/кг, соответствен-но.Стандартная ошибка устанавливалась по формуле Гаддама и составила 0,47 г/кг [10].

Таким образом, ЛД50 препарата эпримексо-ставляет 8,3±0,47 г/кг массы тела. Согласно классификации (ГОСТ 12.1.007-76) препарат - малотоксичное соединение (4-й класс опасности) [11].

Клиническая картина острого отравления животных характеризовалась выраженным угнетением, вялостью животных, пониженной подвижностью. У подопытных животных наблюдались нарушения дыхания и координации движения. Смерть наступала от остановки дыхания. У выживших животных явления токсикоза постепенно исчезали, но шерсть оставалась взъерошенной.

При проведении патологоанатомического вскрытия у погибших животных было отмечено некоторое полнокровие внутренних органов и умеренная гиперемия слизистой желудка и печени.

Для характеристики степени развития острого смертельного отравления, помимо величины ЛД50,указывающей на степень токсичности, определялась величина Э (функция угла наклона прямой смертельных доз к оси абсцисс), характеризующая опасность препарата вусловиях введения в желудок. В результате эта величина составила 1.24, что свидетельствует о незначительной опасности развития острого отравления препаратом в условиях однократного применения [8].

Учитывая, что в практике препарат будет вводиться внутримышечно, проведён аналогичный эксперимент на крысах. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Показатели острой токсичности препарата эпримек при внутримышечном введении

Доза, г/кг 1,0 3,0 5,0 7,0 9,0

Выжило 6 3 2 1 0

Погибло 0 3 4 5 6

Z 1,5 2,0 3,0 3,5 2,0 7,0 4,5 2,0 9,0 5,5 2,0 11,0

D

Zd

В результате среднесмертельная доза препарата эпримек при внутримышечном введении составила 4,0±0,13 г/кг массы тела. Согласно классификации (ГОСТ 12.1.007-76) [11] препарат - умеренно токсичен при внутримышечном введении.

При изучении кумулятивных свойств препарата эпримек в подостром экспериментепрепарат вводился в желудок белых крыс первые 4 дня в дозе, составляющей 1/10 от ЛД50 per. (0,83 г/кг). Через каждые 4 дня эту дозу увеличивали в 1,5 раза. Длительность эксперимента - 20 дней. Полученные результаты представлены в таблице 3.

Как следует из таблицы, гибель животных начинается с 12 дня эксперимента, при введении суммарной дозы 15,2 г/кг. Расчет ЛД50п по ре-

в

: № 1(17), 2015

зультатам данного опыта проводился аналогично обработке данных однократного опыта. Результаты представлены в таблице 4.

Таблица 3 - Данные к определению Ккум в условиях повторного введения препарата эпримек в желудок белых крыс

Суммарная доза, г/кг Гибель животных Дни гибели

Количество %

11,6 0/10 0 10

15,2 2/10 20 12

20,6 3/10 30 14

26,0 4/10 40 16

30,1 6/10 60 17

38,3 8/10 80 19

42,4 10/10 100 20

Таблица 4 - Определение Ккум препарата эпримек в подостром эксперименте

Доза, г/кг

Выжило

Погибло

Z

Zd

15,2

20,6

2,5 5,4 13,5

26,0

30,1

38,3

3,5 5,0 7,0 9,0

5,4 4,1 8,2 4,1

18,9 20,5 57,4 36,9

42,4

10

Ветеринария

109

В результате ЛД50п составила 27,7. Коэффициент кумуляции рассчитывался в отноше-ниисредних эффективных доз подострого и острого опытов.Данный коэффициент составил - 3,3. Согласно классификации Ю.С. Кагана [7], препарат относится к 3-ему классу опасно-

сти по способности накапливаться в организме, т.е.препарат обладает умеренно кумулятивными свойствами.

Для выявления функциональной кумуляции животные обследовались через каждые 4 дня на протяжении 16 дней (пока количество подопытных животных было достаточным для проведения статистической обработки). Определялась масса животных, регистрировался суммационно-пороговый показатель (СПП) [12], анализировалась кровь (лейкоциты, эритроциты и гемоглобин), измерялась ректальная температура и оценивалась статическая и динамическая работа [7]. Результаты представлены в таблицах 5 и 6.

Как следует из таблицы, на 12-й и 16-й дни у крыс наблюдается достоверное(Р<0,05) снижение массы тела и повышение СПП.

Результаты измерения ректальной температуры, анализ гематологических показателей и некоторых поведенческих реакций животных представлены на таблице6.

Как следует из представленных данных, на 12 день наблюдалось достоверное повышение лейкоцитов. Однако нормализация данного показателя к 16 сут свидетельствует об отсутствии критерия вредности данного изменения. Снижение эритроцитов к 16 сут может свидетельствовать о развитии у животных анемии, однако нормальное содержание гемоглобина у животных на протяжении всего эксперимента ставит под сомнение вредное действие препарата на кровь. На 16 сут было отмечено также снижение ректальной температуры и мышечной силы животных.

Таким образом, учитывая, что в процессе данного опыта все достоверно изменившиеся показатели проявлялись на фоне гибели животных, можно считать, что и по степени функцио-

Таблица 5 - Масса тела и суммационно-пороговый показатель (СПП) крыс в условиях подострого

воздействия препарата эпримек(М±т)

8

7

6

4

2

0

О

Показатели Группы 8 день (п = 10) 12 день (п = 8) 16 день (п = 6)

Масса тела, г Контроль 221,0±2,0 229,0±1,8 231,0±2,3

Опыт 219,0±2,1 220,0±2,0 Р<0,05 222,0±2,1 Р<0,05

СПП, усл.ед. Контроль 2,8±0,5 3,2±0,3 3,0±0,5

Опыт 3,1±0,5 4,3±0,5 Р = 0,05 4,9±0,5 Р<0,05

Таблица 6 - Некоторые функциональные показатели крыс в подостром эксперименте

Показатели Группы 8 день (п = 10) 12 день (п = 8) 16 день (п = 6)

Гемоглобин, г/л Контроль 151,5±4,8 143,1 ±2,1 138,4±3,5

Опыт 148,0±3,5 149,9±3,1 141,0±3,8

Лейкоциты, х109/л Контроль 14,8±1,5 12,9±1,4 13,3±1,5

Опыт 13,9±1,8 18,9±1,5 (Р<0,05) 15,3±2,1

Эритроциты,х1012/л Контроль 5,7±0,60 6,5±0,61 7,9±0,3

Опыт 6,1±0,55 5,7±0,35 5,5±0,5 (Р<0,05)

Ректальная температура,0С Контроль 38,1±0,35 38,8±0,5 38,9±0,5

Опыт 37,9±0,30 37,2±0,9 36,1±0,5 (Р<0,05)

«Тест вставания» (за 3 мин) Контроль 8,5±1,5 8,9±0,8 9,0±0,8

Опыт 7,5±1,5 7,1±0,9 8,5±0,5

«Горизонтальный стержень» (сек.) Контроль 29,5±3,0 28,3±2,5. 30,9±2,5

Опыт 30,5±2,0 29,4±2,1 26,5±2,0 (Р = 0,05)

Ежеквартальный

научно-практический

журнал

нальной кумуляции, эпримек относится к классу умеренно-опасных препаратов. А поскольку эти изменения наблюдались в условиях более жёстких, чем реальные, опасность практического применения препарата можно исключить.

Обсуждения и выводы.

1. Эпримекотносится к 4-му классу малотоксичных соединений при однократном введении в желудок (ЛД50 = 8,3+0,47 г/кг м. т.) и к 3-му классу умеренно токсичных при внутримышечном введении (ЛД50 = 4,0±0,13 г/ кг массы тела), (ГОСТ 12.1007-76).

Литература:

1. Зубарев В. Н. Оценка эффективности препаратов группы альбендазола при основных гельминтозах овец и их влияние на качество продуктов убоя : автореф. дис. ... вет. наук. Саратов, 2012. 19 с.

2. Кузнецов Ю. Е., Смирнов А. А. Клиническое испытание антигельминтика широкого спектра действия - эпримек на песцах // Ветеринария. 2015. №? С.?

3. Багамаев Б. М. Комплексные методы диагностики, профилактики и лечения паразитарных дерматитов овец : автореф. дис. ... д-ра вет. наук. Ставрополь, 2013. 40 с.

4. Березкина С. В., Головкина Л. П., Дриня-ев В. А. Природные авермектины для лечения экто- и эндопаразитов животных // Систематика, таксономия и фауна паразитов : материалы конф. М., 1996. С. 15-16.

5. Енгашев С. В. Ларионов С. В. Новые лекарственные формы ветеринарных препаратов при паразитарных болезнях. Саратов, 2002. 322 с.

6. Понамарев Н. М. Эпизоотология и терапия основных гельминтозов лошадей в Западной Сибири : автореф. дис. ... д-ра вет. наук. 1999. с. ?.

7. Методические рекомендации по исследованию поведенческих реакций животных в токсикологичеких исследованиях для целей гигиенического нормирования. М., 1979. 75 с.

8. Саноцкий И. В. Методы определения токсичности и опасности химических веществ (Токсикометрия) // Медицина. 1970. № ?. ?с.

9. Lim K. C., Rink K. G. // Arch. Intern. Pharmacodyn. 1961. № 130. P. 336-353.

10. Беленький М. А. Эксперименты количественной оценки фармакологического эффекта. Л., 1983. 71 с.

11. ГОСТ 12.1.007-76. ССБТ Вредные вещества. Классификация и общие требования к безопасности. Введен в действие. М. : Госстандарт, 1976. с.?

12. Сперанский С. В. О преимуществах использования нарастающего тока при изучении способности белых мышей к суммации подпороговых импульсов // Фармакология и токсикология. 1965. Т. 1. С. 123-124.

2. Величина, характеризующая вариабельность смертельных доз, свидетельствует о незначительной опасности развития острого смертельного отравления препаратом в условиях однократного введения в желудок.

3. В условиях субхронического эксперимента средство обладает умеренными кумулятивными свойствами. Коэффициент кумуляции препарата эпримек составил - 3,3, что относит средство к 3 классу опасности.

References:

1. Zubarev V. Assessment of the effectiveness of drugs in the albendazole group main helminthiasis of sheep and their impact on the quality of products of slaughter: Author. Dis. ... Vet. Sciences. Saratov, 2012. 19 p.

2. Kuznetsov Y.E., Smirnov A.A. clinical trial of broad-spectrum deworming - eprimek polar fox // Veterinary Medicine. 2015. №? S.?

3. Bagamaev B.M. Complex methods of diagnosis, prevention and treatment of parasitic dermatitis of sheep: Author. Dis. ... Dr. vet. Sciences. Stavropol, 2013. 40 p.

4. Berezkina S.V., Golovkin L.P., Drinyaev V.A. Natural avermectins for the treatment of ecto and endoparasites // Animal Systematics, taxonomy and fauna of parasites: Materials Conf. M., 1996, pp 15-16.

5. Engashev S.V. Larionov S.V. new formulations of veterinary drugs for parasitic diseases. Saratov, 2002. 322 pp.

6. Ponomarev N.M. Epizootology and therapy of major helminthisms horses in Western Siberia: Author. Dis. ... Dr. vet. Sciences. 1999. p. ?.

7. Guidelines on the study of behavioral responses of animals in research TOXICOLOGICAL for hygienic regulation. M., 1979. 75 p.

8. Sanotsky I.V. Methods for the determination of toxicity and hazards of chemicals (Toximeter) // Medicine. 1970. №?. ? S.

9. Lim K. C., Rink K. G. // Arch. Intern. Pharmacodyn. 1961. № 130. P. 336-353.

10. Belenky MA experiments quantify the pharmacological effect. L., 1983. 71 p.

11. GOST 12.1.007-76. OSSS harmful substances. Classification and general safety requirements. Enacted ... M.: State Standard 1976: p.?

12. Speransky S.V. about the benefits of increasing the current in the study of the ability of white mice to the summation of subthreshold impulses // Pharmacology and Toxicology. 1965. T. 1. P. 123-124.