CC BY
28
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
При изучении чувствительности к антибиотикам 352 штаммов E. coli, выделенных из кишечника здоровых лиц, устойчивыми к одному или нескольким препаратам оказались 47,2% штаммов. Отмечена резистентность к антибактериальным препаратам различных групп: бета-лактамам, аминогликози-дам, хинолонам и фторхинолонам, тетрациклинам, нитрофуранам, ко-тримоксазолу и лорамфениколу. Частота выявления устойчивых штаммов варьировала от 0,9% (нитрофураны) до 38,6% (ампициллин). Все штаммы оставались чувствительными к карба-пенемам (меропенему), амикацину и фосфомицину. Резистентность к цефалоспоринам расширенного спектра выявлена у 9,7% штаммов, и была обусловлена продукцией бета-лактамаз расширенного спектра, преимущественно СТХ-М класса. Среди изученных штаммов выявлена устойчивость к препаратам группы хинолонов: доля штаммов, резистентных к не-фторированным хинолонам (налидиксовой кислоте) составляла 11,9%, устойчивых к фторхинолонам (ци-профлоксацин) — 2,3%. Таким образом, у значительной части эшерихий — представителей нормальной микрофлоры кишечника, выделенных от здоровых лиц, была обнаружена устойчивость к препаратам, используемым при лечении острых кишечных инфекций (хинолоны и цефалоспорины).
Наличие резистентных штаммов эшерихий в составе нормальной микрофлоры кишечника человека является нежелательным, но практически неизбежным следствием широкого использования антибактериальных препаратов в медицине и сельском хозяйстве.
ЭУКАРИОТИЧЕСКИЕ МИШЕНИ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ ГЛЮКОЗИЛТРАНСФЕРАЗЫ LEGIONELLA PNEUMOPHILA
Д.И. Тартаковская
ФГБУ «НИИЭМим. Н.Ф. Гамалеи» Минздравсоцразвития России, Москва
Legionella pneumophila — грамотрицательная бактерия и возбудитель легочного заболевания человека — легионеллеза (болезни легионеров). L. pneumophila является внутриклеточным патогеном и адаптирует внутреннюю среду эукариотиче-ской клетки для своей жизнедеятельности путем синтеза многочисленных бактериальных токсических белков — эффекторов, транспортируемых в цитоплазму клетки мишени при помощи так называемой «системы секреции 4 типа». Одним из наиболее изученных эффекторов L. pneumophila является впервые описанная нами глюкозилтранс-фераза Lgt1, останавливающая синтез белка в эука-риотической клетке и обладающая, в связи с этим, цитотоксической активностью. Ранее нами было установлено, что данный фермент модифицирует два субстрата, принимающих участие в трансляционных процессах эукариотических клеток — фактор элонгации 1А (eEF1A) и структурно-родственный ему белок Hbs1. В связи с этим мы поставили задачу выяснить, глюкозилирование какого белка — eEF1A или Hbs1 приводит к гибели клетки мишени. Для решения этой задачи нами были сконструированы два генетически-измененных штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Один содержал му-тантный, неподверженный модификации вариант фактора элонгации 1А, тогда как другой не содер-
жал белка Hbs1. Оба штамма, а также контрольный штамм S. cerevisiae дикого типа, были трансформированы плазмидой, содержащей ген глюкозил-трансферазы Lgt1 легионелл. Индукция гена lgt1 приводила к гибели как штамма дрожжей дикого типа, так и штамма, не продуцирующего Hbs1. В тоже же время штамм S. cerevisiae, содержащий неглюкозилируемый вариант eEF1A оставался жизнеспособным. Таким образом, проведенная группа экспериментов свидетельствует о том, что модификация фактора элонгации 1А играет основную роль в токсическом действии Lgt1 на эукариотические клетки.
ОСОБЕННОСТИ ВОССТАНОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ БИОПЛЕНОК ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ АНТИБИОТИКОВ
В.В. Тец, Н.К. Артеменко, Н.В. Заславская, Г.В. Тец
ГБОУ ВПО Минздравсоцразвития РФ: Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург
Бактериальные биопленки формируются в ходе различных инфекций. Свойства биопленок значительно изменяются на фоне приема антибиотиков. Восстановление биопленок после отмены антибиотиков, остаются неизученными, что стало объектом настоящей работы.
Методы. Использованы Staphylococcus aureus VT-209, Escherichia coli ATCC 25922. Жизнеспособность бактерий оценивали, определяя число ко-лониеобразующих единиц (КОЕ). Биопленки получали в 96 луночных планшетах. Бактерии биопленок отделяли от матрикса трехкратным центрифугированием. Оптическую плотность клеточной части бактериальных биопленок определяли спектрофотометрически (SmartSpec Plus, Bio-Rad). Антибиотики — Левофлоксацин (Sigma), азитро-мицин (Pfizer).
Результаты. Инкубация в присутствии антибиотиков приводила к определенным изменениям свойств биопленок. Биомасса биопленки, отражающая количество клеток и внеклеточного ма-трикса, после воздействия антибиотиков изменялось у всех исследованных штаммов. В биопленках E coli снижение биомассы было незначительно, и мало отличалось после воздействия левофлокса-цина или азитромицина. В биопленках S. aureus ле-вофлоксацин и азитромицин вызывали значительное снижение биомассы. Полученные результаты, свидетельствуют, что обработка сформированных биопленок левофлоксацином и азитромицином не приводит к гибели биопленки, но вызывает изменения ее свойств, проявляющееся снижением биомассы, числа КОЕ и количества клеток, выявляемых спектрофотометрически. Инкубация биопленок в течение 168 часов после воздействия антибиотиков показала, что большая часть изменений биопленки исчезает, и исследованные показатели соответствуют контрольным пробам. Стойко сохраняется только снижение биомассы клеток, возникающее в биопленках стафилококка и кишечной палочки.
Обсуждение. Азитромицин и левофлоксацин в количестве 10 МПК не вызывают гибель биопленок испытанных штаммов. Возникающие при этом изменения имеют схожий характер у неродственных
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
грамположительных и грамотрицательных бактерий. Больше всего биопленки теряют биомассу клеток, очевидно, не дающих рост на питательной среде. Изменения клеток биопленок после воздействия азитромицина и левофлоксацина имеют стойкий характер и не исчезают после 168 часов инкубации после удаления антибиотиков.
АНАЛИЗ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ЗА ЦИРКУЛЯЦИЕЙ ИЕРСИНИЙ В ДЕТСКИХ ДОШКОЛЬНЫХ УЧРЕЖДЕНИЯХ ГОРОДА ЧЕЛЯБИНСКА 2008-2011 гг.
H.М. Ткаченко, Т.М. Кривдина, В.А. Бычкова, Т.А. Щербакова, Н.Н. Дубовая, А.И. Терентьева
ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Челябинской области», г. Челябинск
Интерес к проблеме кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза возрастает с каждым годом, что обусловлено не только широким распространением этих заболеваний, но большим экологическим значением возбудителя. Доказано, что ведущий путь передачи иерсиниоза пищевой, из всех продуктов наибольшее значение имеют овощи и корнеплоды, в меньшей степени фрукты. Иерсиниозы распространены повсеместно, но чаще в странах с более прохладным климатом. Заболеваемость иерсиниозов в РФ на протяжении многих лет остается на достаточно высоком уровне.
По статистическим данным за период 2008— 2010 гг. в городе Челябинске регулярно регистрируется иерсиниоз среди населения, причем доля детей среди заболевших составляет 70%. За последние годы наблюдается рост заболеваемости по городу Челябинску с 0,55 на 100 тыс. населения в 2008 г. до 1,19 в 2010 г., а среди детей с 1,94 в 2008 г. до 4,93 в 2010 г.
Мониторинг циркуляции иерсиний в детских и подростковых учреждениях города проводится в соответствии с методические указаниями МУ 3.1.1.2438-09 «Эпидемиологический надзор и профилактика пседотуберкулеза и кишечного иерсиниоза». За 2008—2011 гг. отобрано 2472 пробы методом смыва с инвентаря, оборудования, тары, овощей, фруктов. Из них выделено 36 иерсиний, что составило 1,5%. Из выделенных иерсиний 32 культуры I. enterocolitica 1а биотипа и 4 культуры
I. enterocolitica не типируемые.
Выводы:
— высеваемость иерсиний с овощей и фруктов на пищеблоках ДДУ и подростковых учреждений составляет 2,6%, что значительно выше, чем с инвентаря и оборудования 0,5%
— % высеваемости варьирует по годам от 0,7 до 2,2%
— из 29 выделенных иерсиний с овощей, наибольшее количество приходится на картофель — 14 культур, капусту — 5, морковь — 5, лук — 3, свеклу — 2.
— только 7 иерсиний выделено с объектов внешней среды (тара для картофеля и капусты, подтоварник, ванна для сырых овощей)
— основная часть иерсиний выделялась в зимне-весенний период (до 80%), и только 20% культур выделено в осенний период.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МОЧИ ЖЕНЩИН В ПЕРИОДЕ БЕРЕМЕННОСТИ
В.М. Товарищев
БУ «Аликовская ЦРБ» Минздравсоцразвития Чувашии
Инфекции мочевыводящих путей (ИМП) являются наиболее распространенными заболеваниями во время беременности. Известно, что развитие ИМП может приводить к нарушению течения беременности, родов и послеродового периода.
Лечение ИМП подразумевает проведение эффективной антибактериальной терапии, направленной на эрадикацию этиологически значимых возбудителей инфекции. В этой связи микробиологическое исследование мочи у беременных, предусматривающая определение спектра уропатогенов, их чувствительность к антибактериальным препаратам, имеет важное значение при рациональной терапии ИМП.
Исследованию подвергалась моча беременных при циститах, пиелонефритах, а также при бессимптомной бактериурии.
Было исследовано 60 проб мочи в период с 2009 по 2011 гг. Изучалась средняя порция свободно выпущенной мочи. Посев производился на следующие питательные среды: 5% кровяной агар, энтерококк-агар, кандида-агар, агар Эндо ГРМ, желточно-солевой агар. Исследование проводилось количественным методом. Подсчет степени бактериурии производился по таблице Гольда.
Под бессимптомной бактериурией понимали выделение одного и того же микроорганизма в количестве 105 и выше колониеобразующих единиц в 1 мл. (КОЕ/мл) нецентрифугированной мочи в двух пробах мочи и более, взятых с интервалом не менее 24 часов, при бессимптомном течении ИМП.
Определение чувствительности выделенных штаммов микроорганизмов к антибактериальным препаратам проводили диско-диффузионным методом на агаре Мюллера-Хинтон («Научно-исследовательский центр фармакотерапии» (НИЦФ) ЗАО, Санкт-Петербург). Использовались диски антибактериальных препаратов вышеуказанного производителя.
Независимо от срока беременности и характера течения заболевания среди возбудителей ИМП преобладали энтеробактерии (58,3%, у 35 из 60 пациентов), при этом самым частым возбудителем являлась Е.соН (28 из 35 пациентов). Klebsiella pneumoniae выделалась у 3 пациентов, Serratia marcescens — у 2, Enterobacter cloacae — у 1, Citrobacter freundii — у 1. Из грамположительных микроорганизмов наиболее часто выделялись энтерококки (18,3%, у 11 пациентов из 60), реже стафилококки (15%, у 9 из 60 пациентов), в том числе S. aureus у 2 пациентов из 9. У 10% (у 6 из 60 больных, была выделена микст-инфекция (ассоциация из двух микроорганизмов). Во всех случаях ассоциация состояла из энтеробактерии и энтерококков. В 6,6% случаев (у 4 пациентов из 60) выделялись дрожжеподобные грибы Candida albicans. В 1,8% (у 1 пациента из 60) были выделены НГОБ (не-ферментирующие грам отрицательные бактерии — Acinetobacter calcoaceticus var. lvoffi).
На следующем этапе исследования проводилось определение чувствительности выделенных штампов к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом. Чувствительность бактерий семейства Enterobacteriaceae определяли к ампициллину (АМ), амоксициллин/клавунату (АМС), цефазолину
