CC BY
28
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
При изучении чувствительности к антибиотикам 352 штаммов E. coli, выделенных из кишечника здоровых лиц, устойчивыми к одному или нескольким препаратам оказались 47,2% штаммов. Отмечена резистентность к антибактериальным препаратам различных групп: бета-лактамам, аминогликози-дам, хинолонам и фторхинолонам, тетрациклинам, нитрофуранам, ко-тримоксазолу и лорамфениколу. Частота выявления устойчивых штаммов варьировала от 0,9% (нитрофураны) до 38,6% (ампициллин). Все штаммы оставались чувствительными к карба-пенемам (меропенему), амикацину и фосфомицину. Резистентность к цефалоспоринам расширенного спектра выявлена у 9,7% штаммов, и была обусловлена продукцией бета-лактамаз расширенного спектра, преимущественно СТХ-М класса. Среди изученных штаммов выявлена устойчивость к препаратам группы хинолонов: доля штаммов, резистентных к не-фторированным хинолонам (налидиксовой кислоте) составляла 11,9%, устойчивых к фторхинолонам (ци-профлоксацин) — 2,3%. Таким образом, у значительной части эшерихий — представителей нормальной микрофлоры кишечника, выделенных от здоровых лиц, была обнаружена устойчивость к препаратам, используемым при лечении острых кишечных инфекций (хинолоны и цефалоспорины).
Наличие резистентных штаммов эшерихий в составе нормальной микрофлоры кишечника человека является нежелательным, но практически неизбежным следствием широкого использования антибактериальных препаратов в медицине и сельском хозяйстве.
ЭУКАРИОТИЧЕСКИЕ МИШЕНИ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ ГЛЮКОЗИЛТРАНСФЕРАЗЫ LEGIONELLA PNEUMOPHILA
Д.И. Тартаковская
ФГБУ «НИИЭМим. Н.Ф. Гамалеи» Минздравсоцразвития России, Москва
Legionella pneumophila — грамотрицательная бактерия и возбудитель легочного заболевания человека — легионеллеза (болезни легионеров). L. pneumophila является внутриклеточным патогеном и адаптирует внутреннюю среду эукариотиче-ской клетки для своей жизнедеятельности путем синтеза многочисленных бактериальных токсических белков — эффекторов, транспортируемых в цитоплазму клетки мишени при помощи так называемой «системы секреции 4 типа». Одним из наиболее изученных эффекторов L. pneumophila является впервые описанная нами глюкозилтранс-фераза Lgt1, останавливающая синтез белка в эука-риотической клетке и обладающая, в связи с этим, цитотоксической активностью. Ранее нами было установлено, что данный фермент модифицирует два субстрата, принимающих участие в трансляционных процессах эукариотических клеток — фактор элонгации 1А (eEF1A) и структурно-родственный ему белок Hbs1. В связи с этим мы поставили задачу выяснить, глюкозилирование какого белка — eEF1A или Hbs1 приводит к гибели клетки мишени. Для решения этой задачи нами были сконструированы два генетически-измененных штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Один содержал му-тантный, неподверженный модификации вариант фактора элонгации 1А, тогда как другой не содер-
жал белка Hbs1. Оба штамма, а также контрольный штамм S. cerevisiae дикого типа, были трансформированы плазмидой, содержащей ген глюкозил-трансферазы Lgt1 легионелл. Индукция гена lgt1 приводила к гибели как штамма дрожжей дикого типа, так и штамма, не продуцирующего Hbs1. В тоже же время штамм S. cerevisiae, содержащий неглюкозилируемый вариант eEF1A оставался жизнеспособным. Таким образом, проведенная группа экспериментов свидетельствует о том, что модификация фактора элонгации 1А играет основную роль в токсическом действии Lgt1 на эукариотические клетки.
ОСОБЕННОСТИ ВОССТАНОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ БИОПЛЕНОК ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ АНТИБИОТИКОВ
В.В. Тец, Н.К. Артеменко, Н.В. Заславская, Г.В. Тец
ГБОУ ВПО Минздравсоцразвития РФ: Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Санкт-Петербург
Бактериальные биопленки формируются в ходе различных инфекций. Свойства биопленок значительно изменяются на фоне приема антибиотиков. Восстановление биопленок после отмены антибиотиков, остаются неизученными, что стало объектом настоящей работы.
Методы. Использованы Staphylococcus aureus VT-209, Escherichia coli ATCC 25922. Жизнеспособность бактерий оценивали, определяя число ко-лониеобразующих единиц (КОЕ). Биопленки получали в 96 луночных планшетах. Бактерии биопленок отделяли от матрикса трехкратным центрифугированием. Оптическую плотность клеточной части бактериальных биопленок определяли спектрофотометрически (SmartSpec Plus, Bio-Rad). Антибиотики — Левофлоксацин (Sigma), азитро-мицин (Pfizer).
Результаты. Инкубация в присутствии антибиотиков приводила к определенным изменениям свойств биопленок. Биомасса биопленки, отражающая количество клеток и внеклеточного ма-трикса, после воздействия антибиотиков изменялось у всех исследованных штаммов. В биопленках E coli снижение биомассы было незначительно, и мало отличалось после воздействия левофлокса-цина или азитромицина. В биопленках S. aureus ле-вофлоксацин и азитромицин вызывали значительное снижение биомассы. Полученные результаты, свидетельствуют, что обработка сформированных биопленок левофлоксацином и азитромицином не приводит к гибели биопленки, но вызывает изменения ее свойств, проявляющееся снижением биомассы, числа КОЕ и количества клеток, выявляемых спектрофотометрически. Инкубация биопленок в течение 168 часов после воздействия антибиотиков показала, что большая часть изменений биопленки исчезает, и исследованные показатели соответствуют контрольным пробам. Стойко сохраняется только снижение биомассы клеток, возникающее в биопленках стафилококка и кишечной палочки.
Обсуждение. Азитромицин и левофлоксацин в количестве 10 МПК не вызывают гибель биопленок испытанных штаммов. Возникающие при этом изменения имеют схожий характер у неродственных
