CC BY
31
Тахчиди Х.П., Тахчиди Е.Х., Новиков С.В., Шацких A.B.
ФГУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова Росмедтехнологии», г. Москва
ОСОБЕННОСТИ ВЛИЯНИЯ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ НА РОСТ ФИБРОБЛАСТОВ В ВЫДЕЛЕННОЙ КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК
Авторами экспериментально обосновано влияние экзогенных гликозаминогликанов на рост фибробластов. Выполнены исследования по выделенной культуре фибробластов. Морфологически доказан двоякий эффект гликозаминогликанов - стимуляция размножения фибробластов подавление их роста.
Актуальность
Фибропластические процессы в ране и возможности их регуляции всегда вызывали интерес у хирургов. Избыточное рубцевание, риск повторных операций приводили к необходимости применения антипролифератив-ных препаратов, чаще всего цитостатиков. Сложнее способствовать ускорению раноза-живления. Поэтому в последнее время возрастает актуальность применения естественных регуляторов (цитокины, гликозаминоглика-ны), способных модулировать процесс заживления раны, в том числе и в склере [1]. Комплекс естественных цитокинов представляет собой нестойкое соединение, быстро разрушающееся в окружающей среде и требует неоднократного применения для получения результата [2,3]. Сегодня в медицинской фармакотерапии применяются различные препараты на основе гликозаминогликанов для лечения и профилактики заболевания опорнодвигательного аппарата [4,5]. Гликозаминогли-каны в составе протеогликанов входят в состав межклеточного вещества соединительной ткани и вместе с волокнами коллагена и эластина образуют соединительнотканный матрикс и принимают непосредственное участие во всех фибропластических процессах.
Целью настоящего исследования явилось получение новых данных о влиянии гли-козаминогликанов (ГАГ) на рост фибробла-стов в выделенной культуре (экспериментально - морфологическое исследование).
Эксперимент был посвящен изучению влияния возрастающей концентрации ГАГ на рост культуры фибробластов мыши линии L929 (исследования выполнены на базе Центра по исследованию биоматериалов ФГУ «НИИТи ИО» Росздрава - Перова Н.В., Дов-жик И.А., Егорова В.А.).
Результаты
Динамику роста культуры фибробластов мыши линии L929 оценивали с использованием автоматического цифрового иммерсионного конфокального микроскопа ConfoScan3 (Nidek Technologies, Италия) через промежутки времени культивирования, равные 24 ч., 72 ч. и 96 (144) ч., после добавления образцов Г АГ в культуру. Образцы были представлены в двух формах: раствор и гель, насыщенные ГАГ.
Существенной разницы в плотности и морфологии клеток через 24 ч. и 72 ч. после добавления в культуру фибробластов образцов раствора ГАГ визуально выявлено не было. Через 144 ч. в лунках, содержащих образцы с низкой концентрацией активного вещества (0,1%, 0,5%), а также в контроле образовался монослой, поэтому эксперимент был прекращен. Были построены линейные графики параметров роста фибробластов в течение времени. Через 144 ч количество клеток при концентрации 0.5% превышало контрольное, а в лунках, содержащих образцы с высокой концентрацией активного компонента (1%, 2%, 3%, 5%), наблюдали обратную зависимость: плотность клеток уменьшалась с возрастанием концентрации ГАГ. Результаты показали, что низкие концентрации ГАГ способны стимулировать рост фиб-робластов, в то время как применение высоких концентраций приводило к торможению этого процесса.
Эксперимент повторили уже с применением гелевой формы ГАГ. Через 24 ч. после добавления в культуру фибробластов образцов ГАГ наблюдалась повышенная плотность клеток в контроле и в присутствии образцов, также содержащих низкие дозы активного вещества. Через 96 часов существен-
ных визуальных различий в плотности и морфологии клеток в присутствии всех образцов, кроме максимальной 5%, не наблюдалось, поэтому эксперимент был прекращен. B присутствии образца с максимальной концентрацией ГАГ плотность фиброб-ластов была наименьшей, также как и при дополнительном контроле с применением индифферентного геля без насыщения активным веществом. По результатам количественной обработки были построены аналогичные линейные графики зависимости изменения параметров роста фибробластов от времени. Наилучший рост фибробластов наблюдали в присутствии образцов ГАГ с малой концентрацией активного вещества 0,5% и 1%, несмотря на то, что через 72 ч. количество клеток в присутствии образца «1%» значительно меньше по сравнению с
контролем и образцом «0,5%». Через 96 ч. плотности клеток для этих двух образцов становятся равными. Начиная с образца «2%» наблюдается подавление роста клеток. Медленнее всего фибробласты растут в присутствии образца «5%». Таким образом, высокие концентрации (2-5%) действующего вещества в образцах вызывало угнетение роста фибробластов, в то время, как низкие концентрации (до 1%) способствовали размножению клеток.
Заключение
Учитывая все вышесказанное, установлено: ГАГ обладают бимодальным эффектом, способны улучшать репарацию при ра-нозаживлении и предотвращать грубое рубцевание, в зависимости от применяемой концентрации.
Список использованной литературы:
1. Анисимов С.И., Анисимова С.Ю., Ларионов Е.В., Автандилов Г.Г., Дроздова Г.Н., Рогачева И.В. Морфологические исследования коллагенового дренажа, используемого при антиглаукоматозных операциях после его имплантации в ткани глаза кролика// Российские мед. Вести.-2006.-№2.-С.69-72.
2. Василенкова Л.В. Коррекция репаративных процессов методом локальной цитокинотерапии при антиглаукоматозных операциях/ Автореф. ... канд. мед. наук. - М., 2005. - 24 с.
3. Василенкова Л.В., Хорошилова-Маслова И.П., Ганковская Л.В., Калинина О.М., Андреева Л.Д. Антипролифератив-ный эффект цитокинотерапии при фистулизирующих антиглаукоматозных операциях// VIII съезд офтальмол. России: Тез. докл. - М.: 2005. - С. 155 - 156.
4. Volpi N. Therapeutic Application of Glycosaminoglycans //Current Medicinal Chemistry.- 2006. - 13, 1799-1810
5. Volpi N. Advances in Chondroitin Sulfate Analysis: Application in Physiological
and Pathological States of Connective Tissue and During Pharmacological Treatment of Osteoarthritis //Current Pharmaceutical Design, 2006.- 12.- P.639-658.
