CC BY
32
ЛИТЕРАТУРА
1. Егоров Е. А. Офтальмофармакология: руководство для врачей / Е. А. Егоров, Ю. С. Астахов, Т В. Ставицкая. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2004. — 464 с.
2. К вопросу о возможности хирургической профилактики возрастной катаракты методом коррекции гемодинамики глаза и орбиты / Г. А. Шилкин, Н. С. Ярцева, Н. И. Курышева и др. // Современные технологии хирургии катаракты : матер. науч.-практич. конф. — М., 2002. — С. 337—341.
3. Национальное руководство по глаукоме: для практикующих врачей / Под ред. Е. А. Егорова, Ю. С. Астахова, А. Г Щуко. — Изд. 2-е, испр. и доп. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. — 280 с.
4. Петраевский А. В. Исследование кровообращения переднего сегмента глаза, его клиническое значение: автореф. дис. ... д-ра мед. наук / А. В. Петраевский. — М., 2004. — 45 с.
5. Hayreh, S. S., Scott W. E. // Arch. Ophthalmol. — 1978. — Vol. 96, № 8. — P 1383—1389.
6. Hayreh, S. S., Scott W. E. // Arch. Ophthalmol. — 1978. — Vol. 96, № 8. — P 1390—1400.
Контактная информация
Гндоян Ирина Асатуровна — к. м. н., доцент кафедры офтальмологии, Волгоградский государственный медицинский университет, e-mail: [email protected]
УДК 616.61-005.6:575
ОСОБЕННОСТИ ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ ПАЦИЕНТОВ С РЕЦИДИВИРУЮЩИМИ ТРОМБОЗАМИ АРТЕРИОВЕНОЗНЫХ ФИСТУЛ, ПОЛУЧАЮЩИХ ПРОГРАММНЫЙ ГЕМОДИАЛИЗ
О. П. Гумилевская, К. П. Вахания, Н. С. Ракитина
Волгоградский государственный медицинский университет, кафедра клинической лабораторной диагностики
Изучены сывороточные уровни (IL-1, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-y, TNF-a) и распределение аллельных полиморфизмов промоторной области генов цитокинов (IL-6, IL-10, IL-1 р, TNF-a) у 104 пациентов, получающих терапию гемодиализом. Выявлено, что развитие тромботического осложнения артериовенозной фистулы связано с особенностями строения генов цитокинов IL-4 и IL-10, а также с сывороточными уровнями IL-6, IL-10, TNF-a, IFN-y.
Ключевые слова: цитокины, аллельный полиморфизм, гемодиализ, хроническая болезнь почек.
CYTOKINE PATTERN FEATURES OF PATIENTS WITH RECURRENT THROMBOSIS OF ARTERIOVENOUS FISTULA RECEIVING HEMODIALYSIS
O. P. Gumilevskaya, K. P Vakhaniya, N. S. Rakitina
Serum levels (IL-1, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-y, TNF-a) and polymorphism of the promoter region of cytokine genes (IL-6, IL-10, IL-1 p, TNF -a) from 104 patients receiving hemodialysis were studied. It was revealed that the development of thrombotic complications of arteriovenous fistula is associated with structural features of cytokine genes IL-10 and IL-4, as well as serum levels of IL-6, IL-10, TNF-a, IFN-y.
Key words: cytokines, allelic polymorphism, dialysis, chronic kidney disease.
Терминальная стадия хронических болезней почек сопровождается выраженным нарушением гомеостаза. Одним из проявлений патологии иммунной системы у этих больных является системное воспаление, сопровождаемое выраженной цитокинемией на фоне выраженного подавления иммунорезистентности [3].
В последнее время большое внимание уделяется оценке роли иммуногенетических факторов в механизмах развития различных патологических состояний [2]. Активно изучается иммуногенетический статус у пациентов, получающих заместительную почечную терапию (ЗПТ), выявляется предрасположенность к развитию сердечно-сосудистых, метаболических и других тяжелых нарушений [1]. Так, у пациентов программного гемодиализа (ПГД) носительство аллели А полиморфиз-
ма g.-308 G>A в промоторной области гена TNF-a может быть связано с повышенной восприимчивостью к сердечно-сосудистым заболеваниям [5]. Определенные полиморфизмы гена IL-1 р и гена IL-6 ассоциируется cгипертензией,атеросклерозом и прогрессированием болезни почек. Пониженная продукция IL-10 при генотипе A/A 1082G>A связана с увеличением СРБ и высокой кардиоваскулярной смертностью [5, 8].
Провоспалительные цитокины (IL-1, IL-6 и TNF-a) играют ключевую роль в экспрессии тканевого фактора на моноцитах и эндотелиальных клетках и способствуют поддержанию баланса в системе гемостаза при физиологических и патологических состояниях [6]. А ведь известно, что у пациентов на гемодиализе отмечается активация коагуляции и воспалительных процес-
Выпуск 1 (49). 2014
31
сов. Тесная связь между воспалением и гемостазом помогает объяснить протромботическую тенденцию в этих двух клинических условиях, в которых воспаление сдвигает гемостатическую активность по отношению к прокоагулянтному состоянию с помощью способности провоспалительных медиаторов активировать систему коагуляции и ингибировать антикоагулянтную и фибринолитическую деятельности [7].
Тромбозы артериовенозной фистулы (АВФ), иногда приводящие к невозможности проводить программный гемодиализ, являются большой проблемой для врачей и пациентов. Несмотря на то, что уделяется много внимания изучению молекулярно-генетических механизмов развития дисфункции АВФ у пациентов гемодиализа, полученные данные не систематизированы и иногда противоречивы. Это связано с особенностями исследуемых популяций, выборов методов исследования и статистической обработки полученных данных.
Все это определяет актуальность исследований, посвященных комплексному изучению и выявлению факторов риска развития тромботических осложнений сосудистого доступа.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Изучение спектра про- и противовоспалительных цитокинов и оценка связи аллельных вариантов полиморфизма генов цитокинов с развитием рецидивирующих тромбозов артериовенозной фистулы при лечении программным гемодиализом.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Обследовано 104 пациента с хронической болезнью почек (ХБП) 5-й стадии, находящихся на лечении ПГД, из них 75 пациентов без тромбозов артериовенозной фистулы в анамнезе (первая группа) и 29 пациентов с рецидивирующими тромбозами АВФ (вторая группа). Причиной ХБП являлся диффузный склерозирующий хронический гломерулонефрит. Контрольную группу составили 65 условно здоровых лиц без клинических и лабораторных признаков патологии почек.
Оценка уровня сывороточных цитокинов (IL-1, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-y, TNF-a) проводилась методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием реагентов фирмы «Вектор Бест» (Россия). Генотипи-рование промоторных участков генов цитокинов (IL-10 G1082A, IL6 C174G, IL-ip T31C, TNF-a G308A) осуществляли методом ПЦР с аллель-специфичными праймерами. Геномную ДНК выделяли из лейкоцитов цельной крови с использованием реагента «ДНК-экспресс-кровь» («Литех», Россия).
Статистическая обработка данных проведена с использованием пакета прикладных программ «STATISTICA for Windows 6.0». Для сравнения частот признаков в анализируемых группах использовали двусторонний точный критерий Фишера. Для оценки различия средних величин в попарно не-
связанных выборках использовали U-критерий Манна-Уитни. Статистически значимыми различия считали при p < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Исследование цитокинового статуса у пациентов с ХБП, получающих терапию гемодиализом, позволило выявить наличие активации провоспалительных механизмов в течение ЗПТ. Так, наблюдается значимое увеличение сывороточных уровней про- и противовоспалительных цитокинов у пациентов обеих групп (рис. 1).
Без тромбозов АВФ С тромбозами АВФ ^—здоровые
%
IL-1 IL-6 TNF-a IFN-y IL-10 IL-4
*Значимые отличия от здоровых (р < 0,05);
#значимые различия между пациентами с наличием и отсутствием тромбозов АВФ (р < 0,05).
Рис. 1. Содержание цитокинов в периферической крови пациентов, получающих программный гемодиализ (% от контрольной группы)
Однако у пациентов с тромботическими осложнениями сосудистого доступа цитокинемия носила более выраженный характер в сравнении с пациентами без тромбозов АВФ. Так, у больных на гемодиализе с наличием тромбозов АВФ наблюдалось более высокое содержание таких провоспалительных цитокинов, как IL-6 [(48,4 ± 11,6) пг/мл против (19,8 ± 4,6) пг/мл; p < 0,05] и IFN-y [(6,8 ± 1,4) пг/мл против (3,9 ± 0,38) пг/мл; p < 0,05]. Оценка уровня противовоспалительных цитокинов выявила более высокое содержание IL-10 в сыворотке пациентов с тромбозами АВФ в сравнении с группой пациентов без тромбозов [(11,7 ± 3,0) пг/мл против (4,9 ± 0,7) пг/мл; p < 0,05].
Известно, что уровни синтеза цитокинов определяются многими факторами, в частности однонуклеотидными заменами в генах. Так, наличие аллели А гена IL-10 связано с повышенной сывороточной продукцией этого цитокина [9]. Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных локусов гена IL-10 у пациентов на гемодиализе показал, что генотип А/А IL-10 в позиции -1082 встречался в 3 раза чаще в группе пациентов с наличием тромботического осложнения АВФ, в сравнении с пациентами без патологического состояния сосудистого доступа (рис. 2).
32
Выпуск 1 (49). 2014
*Значимые отличия от здоровых (р < 0,05);
Значимые различия между исследуемыми группами (р < 0,05).
Рис. 2. Частота встречаемости генотипа IL-10-1082AA у пациентов, получающих программный гемодиализ
Таким образом, аллель А и повышенный уровень IL-10 являются неблагоприятными прогностическими признаками возникновения тромботических осложнений АВФ.
Исследование распределения аллельных вариантов полиморфизма гена IL-6 d74G у обследованных пациентов позволило установить, что носительство СG генотипа ассоциируется с тромбозами АВФ (рис. 3). Известно, что аллель G обладает высокой транскрипционной активностью, что связано с увеличением сывороточного уровня IL-6 и высокой частотой сердечнососудистых осложнений и смертности у пациентов на гемодиализе [4].
#Значимые различия между группами пациентов с наличием и отсутствием тромбозов АВФ (р < 0,05).
Рис. 3. Частота встречаемости генотипа IL-6 174СО у пациентов, получающих программный гемодиализ
Изучение распределения полиморфных вариантов TNF -а у обследованных пациентов не позволило
установить значимых различий между группами пациентов, однако выяснилось, что аллель А варианта TNF-a 308GА встречалась значимо чаще при ХБП в гетерозиготном состоянии (25,8 и 28 % против 11,5 %). Вероятно, что у наших пациентов это приводит к более высокому уровню воспаления и прогрессированию основ-ногозаболевания.
Таким образом, индивидуальные особенности синтеза цитокинов пациентов могут увеличивать активность воспаления и быть причиной гиперактивации системы свертывания крови с последующим развитием тромбоза сосудистого доступа.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Результаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что развитие тромботических осложнений АВФ связано с выраженной гиперпродукцией IL-6, IL-10, TNF-a, IFN-y и повышением частоты встречаемости генотипа А/А гена IL-10 (в позиции -1082) и генотипа С/G гена IL-6 (в позиции -174). Полученные лабораторные маркеры могут использоваться на этапе начала заместительной почечной терапии с целью выявления пациентов, предрасположенных к развитию тромботических осложнений сосудистого доступа.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гумилевский Б. Ю., Гумилевская О. П. // Вестник ВолгГМУ. — 2010. — № 3. — С. 62—65.
2. Коненков В. И., Смольникова М. В. // Медицинская иммунология. — 2003. — Т 5 — № 1—2. — С. 11—28.
3. Петров В. И., Гумилевский Б. Ю., Гумилевская О. П. // Вестник ВолгГМУ. — 2007. — № 4. — С. 22—25.
4. Aker S., et al. // Nephrol Dial Transplant. — 2009. — Vol. 24, № 9. — P 2847—2851.
5. Bloudikova S., Kuthanova L., Hubacek J. // Folia Biol (Praha). — 2011. — Vol. 57, № 1. — P 30—34.
6. Grignani G., Maiolo A. //. Haematologica. — 2000. — Vol. 85, № 9. — P 967—972.
7. Margetic S. // Biochem Med (Zagreb). — 2012. — Vol. 22, № 1. — P 49—62.
8. Ryu J. H., Kim S. J. // Korean J Intern. — 2012. — Vol. 27, № 3. — P 327—337.
9. Wang A. H., Lam W. J., Han D. Y. // Hum Immunol. — 2011. — Vol. 72, № 5. — P 431—435.
Контактная информация
Гумилевская Оксана Петровна — профессор кафедры клинической лабораторной диагностики с курсом КЛД ФУВ, Волгоградский государственный медицинский университет, e-mail: [email protected].
Выпуск 1 (49). 2014
33
