CC BY
54
УДК 618.36.396. 612.017
особенности субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток плацент после преждевременной отслойки
О. С. Гребнева1*, М. Ю. Зильбер2
1 Уральский государственный медицинский университет, г. Екатеринбург, 2Медицинский центр сети «Медикал Консалтинг Групп», г. Москва, Российская Федерация
peculiarities of subpopulation composition of immunocompetent cells in placentas after premature detachment
O. S. Grebneva1*, M. Yu. Zilber2
1 Ural State Medical University, Ekaterinburg,
2Medical Center "Medical Consulting Group", Moscow, Russian Federation
Цель. Оценить особенности экспрессии СБ20+, СБ4+, СБ8+, СБ56+ в плацентах после преждевременной отслойки.
Материалы и методы. Гистологический материал плацент был разделен на четыре группы. Первая группа (п = 9) - плаценты после преждевременной отслойки в сроки гестации от 22 до 27 недель. Вторая группа (п = 9) - плаценты после преждевременной отслойки в сроки гестации от 28 до 36 недель. Третья группа (п = 9) - плаценты после преждевременной отслойки в сроки гестации от 37 до 42 недель. Четвертая группа, группа контроля (п = 15) - плаценты условно здоровых женщин, беременность и роды которых протекали без осложнений. Иммуногистохимическое исследование включало определение экспрессии СБ20 (клон L26), СБ56 (клон 123С3), СБ 8 (клон ПГ8), СБ 4 (клон №3/25). Результаты. При анализе экспрессии кластера дифференцировки СБ20+ (В-лимфоцитов) в плацентах после преждевременной отслойки достоверно чаще определяется увеличение их количества в первой и второй группах. В проведенном нами исследовании наблюдается статистически достоверное отличие экспрессии кластера дифференцировки СБ4+ плацент женщин, беременность которых закончилась преждевременной отслойкой плаценты в срок гестации от 27 до 36 недель (19,2 ± 2,4). В группе женщин, беременность которых закончилась преждевременной отслойкой плаценты в срок гестации от 37 недель и более, данный показатель равен 3,2 ± 1,1, что достоверно отличается от группы условно здоровых женщин. Обращает на себя внимание, что в плацентах после преждевременной отслойки в срок гестации от 28 до 36 недель значительно превышен индекс СБ4/СБ8 до 5,33 за счет увеличения Т-хелперов, тогда как в других случаях он составляет 0,75.
Выводы. Независимо от патогенетических аспектов, предрасполагающих к преждевременной отслойке плаценты, во всех плацентах женщин с данной патологией увеличивается число Ж-клеток 4,8 ± 1,73 в первой группе; 4,8 ± 1,2 - во второй; 6,4 ± 1,4 - в третьей; 1,4 ± 0,6 - в группе контроля. В первой и второй группах достоверно более усилена экспрессия СБ20+: 3,6 ± 1,73 и 3,3 ± 1,1 соответственно (1,0 ± 0,66 в третьей группе и 0,8 ± 1,06 в группе контроля). В плацентах второй группы статистически достоверно
© Гребнева О. С., Зильбер М. Ю., 2015 e-mail: [email protected] тел. 8 922 218 34 28
[Гребнева О. С. (*контактное лицо) - аспирант кафедры акушерства и гинекологии; Зильбер М. Ю. - доктор медицинских наук, профессор].
усилена экспрессия кластера дифференцировки CD4+: 19,2 ± 2,4 по сравнению с первой, третьей и четвертой группами (3,1 ± 0,6; 2,4 ± 0,53 и 4,6 ± 1,7 соответственно).
Ключевые слова. Плацента, отслойка плаценты, кластеры дифференцировки, CD20+, CD4+, CD 8+, CD56+.
Aim. To assess the peculiarities of CD20+, CD4+, CD8+, CD56+ expression in placentas after premature detachment.
Materials and methods. Histological material of placentas was divided into 4 groups. Group 1 (n = 9) -placentas after premature detachment in the gestation period from 22 to 27 weeks. Group 2 (n = 9) -placentas after premature detachment in the gestation period from 28 to 36 weeks. Group 3 (n = 9) -placentas after premature detachment in the gestation period from 37 to 42 weeks. Group 4 (n = 15), the control group - placentas of conditionally healthy women with uncomplicated pregnancy and labor. Immunohistochemical study included determination of CD20 (clone L26), CD56 (clone 123C3), CD8 (clone LT8), CD4 (clone W3/25) expression.
Results. While analyzing the expression of CD20+ (B-lymphocytes) differentiation cluster in placentas after premature detachment, increase in their quantity is reliably more often assessed in groups 1 and 2. In the study conducted by us, there is statistically reliable difference in the expression of CD4+ differentiation cluster in placentas of women with premature detachment of placenta in the gestation period from 27 to 36 weeks, 19,2 ± 2,4. In the group of women, whose pregnancy resulted in premature detachment of placenta in the gestation period beginning from 37 weeks, this parameter is equal to 3,2 ± 1,1 that significantly differs from the group of conditionally healthy women. It is evident that premature detachment of placentas in the gestation period from 28 to 36 weeks CD4/CD8 index is significantly elevated till 5,33 at the expense of increased T-helpers, whereas in the other cases it is 0,75.
Conclusions. 1. Irrespective of pathogenetic aspects predisposing to premature detachment of placenta, the number of NK-cells is growing in all placentas of women with this pathology: group 1 - 4,8±1,73, group 2 -4,8 ± 1,2, group 3 - 6,4 ± 1,4, vs control - 1,4± 0,6. In groups 1 and 2, CD20+ expression is reliably more marked: 3,6 ± 1,73 and 3,3 ± 1,1, respectively, vs 1,0 ± 0,66 in group 3 and 0,8 ± 1,06 in the control group. In placentas of group 2, expression of CD4+ differentiation cluster is statistically significantly strengthened: 19 ± 2,4, vs 3,1 ± 0,6; 2,4 ± 0,53 and 4,6 ± 1,7 in groups 1, 3 and 4, respectively. Key words. Placenta, placental detachment, differentiation clusters, CD20+, CD4+, CD8+, CD56+.
Введение
Частота акушерских кровотечений колеблется от 3,5 до 13,8 % и в среднем составляет 8,5 % [3-5]. Кровотечения во время беременности возникают у 2-3 % женщин. Наиболее частые причины данного осложнения - предле-жание и преждевременная отслойка плаценты [3]. По данным отечественных и зарубежных авторов, частота преждевременной отслойки плаценты различной степени тяжести колеблется от 0,05 до 3 %, данная патология является существенным фактором материнской и перинатальной заболеваемости и смертности во всем мире [4, 5, 13, 14]. Проблема патогенеза преждевременной отслойки плаценты не
может считаться окончательно решенной. В настоящее время известно, что иммунные механизмы играют крайне важную роль в развитии беременности, определяя формирование маточно-плацентарного комплекса и обеспечивая сосуществование двух семиаллоген-ных организмов [8]. Нарушение тех или иных звеньев в сложной цепочке иммунорегуляции ведет к возникновению патологических процессов в системе мать-плацента-плод [6]. В связи с этим вопрос об изменении иммунологического статуса в плаценте при преждевременной отслойке является актуальным.
Цель исследования - оценить особенности экспрессии СБ20+, СБ4+, СБ8+, СБ56+ в плацентах после преждевременной отслойки.
Материалы и методы
ИССЛЕДОВАНИЯ
Иммуногистохимическое исследование включало определение экспрессии CD 20 (клон L26), CD56 (клон 123C3), CD8 (клон LT8), CD4 (клон W3/25). Для иммунологического исследования брали 6 кусочков: из центральной, парацентральной зон плаценты, а также из участка, непосредственно отслоившегося во время беременности. Размер вырезанных кусочков составлял 1,5-2,0 см3. Предварительно гистологические срезы обрабатывались в барокамере «Paskal DAKO Cytomation» в течение 10 минут при давлении 22 Па и температуре 127 °С. Оценку реакции осуществляли на световом микроскопе Zeiss Ymager M (Германия). Парафиновые срезы оценивались при увеличении в 400 раз в 30 полях зрения. Количественная оценка проводилась по системе Автандолова. Полученные данные заносились в таблицу формата Microsoft Excel, Version 2003 (Microsoft Software, USA). Для статистического анализа использовалась демоверсия MedCalc. Сравнительный анализ параметрических данных между группами проводился с помощью критерия Стьюдента, непараметрических данных - Манна-Уитни. Для трех групп использовалась поправка Бон-феррони.
Гистологический материал плацент был разделен на четыре группы. Первая группа (n = 9) - плаценты после преждевременной отслойки в сроки гестации от 22 до 27 недель. Вторая группа (n = 9) - плаценты после преждевременной отслойки в сроки геста-ции от 28 до 36 недель. Третья группа (n = 9) - плаценты после преждевременной отслойки в сроки гестации от 37 до 42 недель. Четвертая группа, группа контроля (n = 15) - плаценты условно здоровых женщин, беременность и роды которых протекали без осложнений.
Результаты и их обсуждение
При анализе экспрессии кластера диф-ференцировки СБ20+ (В-лимфоцитов) в плацентах после преждевременной отслойки достоверно чаще определяется увеличение их количества в первой и второй группах. В первой группе этот показатель составил 3,6 ± 1,73, во второй 3,3 ± 1,1, тогда как в третьей и четвертой группах 1,0 ± 0,66 и 0,8 ± 1,06 соответственно. По некоторым данным, В-лимфоциты в плаценте практически отсутствуют. Это связывают с синтезом ИЛ-10 тканью плаценты, оказывающим супрессорное действие на данную группу клеток. В норме число В-лимфо-цитов плаценты на протяжении беременности не меняется [1, 2]. Увеличение их количества связано с антителобразующей функцией. Активация В-лимфоцитов может осуществляться двумя сигналами: связывание антигена с рецепторами В-лимфоцитов (Т-независимымый ответ) и связывание В-лимфоцитов с Т-лимфо-цитами (Т-зависимый ответ). К Т-независимым антигенам относят многие компоненты бактериальных патогенных микроорганизмов. Тимусзависимыми антигенами являются экзогенные и эндогенные антигены. Эндогенные антигены образуются клетками организма в ходе естественного метаболизма или в результате вирусной или внутриклеточной бактериальной инфекции, аутоантигены. Экзогенные антигены: неинфекционные чужеродные белки и белоксодержащие соединения (например, клетки плода, которые выступают в роли аллоантигена [10]), антигены и гаптены в составе пыли, пищевых продуктов, пыльцы растений, ряда лекарственных средств [8].
В проведенном нами исследовании наблюдается статистически достоверное отличие экспрессии кластера дифференцировки СБ4+ плацент женщин, беременность которых закончилась преждевременной отслойкой плаценты в срок гестации от 27 до 36 недель (19,2 ± 2,4). В то же время для первой
группы этот показатель равен 3,1 ± 0,6, для третьей - 2,4 ± 0,53, для группы контроля -4,6 ± 1,7. Статистически достоверной разницы в экспрессии кластера дифференцировки СБ8+ в первой (3,6 ± 1,13) и второй (4,1 ± 0,7) группах, группе контроля (6,4 ± 1,1) нет. В группе женщин, беременность которых закончилась преждевременной отслойкой плаценты в срок гестации от 37 недель и более, данный показатель равен 3,2 ± 1,1, что достоверно отличается от группы условно здоровых женщин. Обращает на себя внимание, что в плацентах после преждевременной отслойки в срок гестации от 28 до 36 недель значительно превышен индекс СБ4/СБ8 до 5,33 за счет увеличения Т-хелперов, тогда как в других случаях он составляет 0,75. В норме соотношение СБ4+/СБ8+ составляет 0,32-1,1 [2, 7, 9, 11].
Основной функцией СБ 8 (цитотокси-ческих лимфоцитов) является распознавание пептидных фрагментов чужеродных белков, встроенных в аутологичные молекулы гистосовместимости, т.е. Т-лимфоциты распознают не чужеродные клетки, а измененные клетки собственного организма [1]. Т-хелперы (СБ4) распознают чужеродные антигены при их взаимодействии, в том числе антигены плода. Этот специфический иммунный ответ на отцовские антигены приводит к пролиферации и накоплению определенных клонов Т-лимфоцитов [7, 8]. Учитывая повышение экспрессии СБ20 в первой группе наряду с сохранением нормального соотношения СБ8/СБ4, можно предположить возможность активации иммунной реакции в ответ на бактериальную инфекцию. В плацентах женщин, беременность которых прервалась в результате преждевременной отслойки плаценты в срок геста-ции 28-36 недель, мы видим повышение как СБ20, так и СБ4-лимфоцитов. Данные изменения могут свидетельствовать о срыве иммунологической толерантности матери по отношению к плоду. Эта толерантность обусловлена рядом факторов. Большую роль
играют гормоны и специфические белки плаценты. Выраженными иммунодепрессив-ными свойствами обладает хорионический гонадотропин, плацентарный лактоген, глю-кокортикоиды, прогестерон и эстрогены, которые в возрастающем количестве вырабатываются плацентой на протяжении беременности. Кроме гормонов, подавлению реакций иммунитета материнского организма способствуют альфа-фетопротеин - белок, продуцируемый эмбриональными клетками печени, а также некоторые белки плаценты зоны беременности (альфа-2-гликопротеин и трофобластический бета-1-гликопротеид). Наличие трофобластического, а затем и плацентарного барьеров, разделяющих организм матери и плода, обусловливает выраженные защитные функции. Кроме того, трофобласт со всех сторон окружен слоем аморфного фибриноидного вещества, состоящего из мукополисахаридов. Этот слой надежно защищает плод от иммунологической агрессии организма матери [6, 9, 10, 11, 13].
Также в данном исследовании нами были проанализированы наиболее многочисленные иммунокомпетентные клетки в плаценте - Ж-киллеры (СБ 56+). В основной группе, независимо от триместра, в котором произошла преждевременная отслойка плаценты, экспрессия СБ56+ ^К-киллеры) преобладает. Так, в первой подгруппе этот показатель составил 4,8 ± 1,73; во второй -4,8 ± 1,2; в третьей - 6,4 ± 1,4; в группе контроля - 1,4 ± 0,6. Ж-клетки участвуют в имплантации, в децидуализации и признаются в качестве важных регуляторов ремоделиро-вания спиральных артерий и поддержания децидуальной целостности. С развитием беременности они постепенно теряют цито-токсическую активность. При патологическом течении беременности они способны активно продуцировать интерферон-альфа, интерферон-гамма, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-альфа, ФНО-бета и другие медиаторы. Рядом авторов показано, что высокий уровень
ФНО-альфа и ЮТ-гамма в зоне плацентарного ложа коррелирует с высокой частотой случаев прерывания беременности. Данные цитокины активизируют и свертывающий процесс, способствуя образованию локальных тромбов, инфарктов и некрозов. Так, некоторые авторы проводят связь между увеличением количества Ж-клеток в слизистой оболочке матки и недостаточной выработкой природных стероидов. Ж-клетки могут быть использованы в качестве индикатора стероидной недостаточности [10, 12].
Активизация иммунологического ответа любой этиологии (инфекционной, аутоиммунной, тромбообразование) может привести к увеличению производства провоспалитель-ных цитокинов, которые могут стимулировать производство матричной металлопро-теиназы путем активизации трофобласта и других типов клеток. Увеличение производства матричной металлопротеиназы может привести к разрушению внеклеточного мат-рикса и межклеточных взаимодействий, которые приводят к нарушению целостности тканей плаценты и, как результат, к преждевременной отслойке [12-14]. Полученные результаты занесены в таблицу.
Первичные иммуногистохимические данные со средними ошибками
Выводы
1. Независимо от патогенетических аспектов, предрасполагающих к преждевременной отслойке плаценты, во всех плацентах женщин с данной патологией увеличивается число Ж-клеток 4,8 ± 1,73 в первой группе, 4,8 ± 1,2 во второй; 6,4 ± 1,4 - в третьей; 1,4 ± 0,6 в группе контроля.
2. В первой и второй группах достоверно более усилена экспрессия СБ20+: 3,6 ± 1,73 и 3,3 ± 1,1 соответственно, 1,0 ± 0,66 в третьей группе и 0,8 ± 1,06 в группе контроля.
3. В плацентах второй группы статистически достоверно усилена экспрессия кластера дифференцировки СБ4+: 19,2 ± 2,4 против 3,1 ± 0,6; 2,4 ± 0,53 и 4,6 ± 1,7 в первой, третьей и четвертой группах соответственно.
Библиографический список
1. Айламазян Э. К, Полякова В. О, Квет-ной И. М. Функциональная морфология плаценты человека в норме и при патологии (нейроиммуноэндокринологические аспекты). СПб.: Н-Л 2012; 176.
2. Алешкин В. А., Ложкина А. Н. Иммунология репродукции: пособие для врачей, ординаторов и научных работников. Чита 2004; 79.
3. Женская консультация: руководство / под ред. В. Е. Радзинского. 3-е изд., испр. и доп. М.: ГЭОТАР-Медиа 2010; 482.
4. Жилин А. В, Слабинская Т. В, Беломестное С. Р, Ильинъх В. В. Органосохраняющая тактика при аномалиях плацентации // Здоровье женщины - здоровье нации: тезисы докладов III общероссийского научно-образовательного семинара «Репродуктивный потенциал России»: казанские чтения 2013; 128-131.
5. Замалеева Р. С, Букатина С. В, Черепанова Н. А. Новое в оценке риска развития
Показатель 1-я группа (п = 9) 2-я группа (п = 9) 3-я группа (п = 9) 4-я группа (п = 15) Достоверность Р
СБ20 3,6 ± ± 1,73 3,3 ± ± 1,1 1,0 ± ± 0,66 0,8 ± ± 1,06 р1-4 < 0,001 р2-4 < 0,001 р3-4 = 0,67
СБ56 4,8 ± ± 1,73 4,8 ± ± 1,2 6,4 ± ± 1,4 1,4 ± ± 0,6 р1-4 = 0,027 р2-4 = 0,014 р3-4 < 0,001
СБ8 3,6 ± ± 1,13 4,1 ± ± 0,7 3,2 ± ± 1,1 6,4 ± ± 1,1 р1-4 = 0,16 Р2-4 = 0,27 р3-4 = 0,036
СБ4 3,1 ± ± 0,6 19,2 ± ± 2,4 2,4 ± ± 0,53 4,6 ± ± 1,7 Р1-4 = 0,39 Р2-4 < 0,001 Р3-4 = 0,091
СБ4/СБ8 0,75 5,33 0,75 0,7 -
кровотечений в родах. Практическая медицина 2010; 4 (43): 79-82.
6. Иваненкова Н. И, Борзова Н. Ю, Сотнико-ва Н. Ю, Кудряшова А. В. Особенности дифференцировки Т-лимфоцитов при угрозе прерывания беременности. Мать и дитя в Кузбассе 2014; 2: 43-46.
7. Линькова Н. С, Костълев A. B, Костю-чек И. Н, Полякова В. О. Экспрессия CD 8 как маркера риска невынашивания беременности у женщин с гестозом. Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. Акушерство и гинекология 2009; 6: 326-331.
8. Мешкова Р. Я. Руководство по иммунопрофилактике для врачей: учебное пособие. Смоленск: ГМА 1998; 133.
9. Парфенова Е. В., Камзалакова Н. И. Иммунология беременности: методические рекомендации для обучающихся к внеаудиторной (самостоятельной) работе. Красноярск 2013; 13.
10. Сидельникова В. М. Эндокринология беременности в норме и при патологии. 2-е изд. М.: МЕДпрес-информ 2009; 352.
11. Соколов Д. И, Сельков С. А, Полякова В. О., Полянин А. А, Лапина Е. А, Колобов А. В, Пальцев М. А., Кветной И. М. Нейроимму-ноэндокринология плаценты: руководство по нейроиммуноэндокринологии. 2-е изд. М.: Медицина 2008; 417-442.
12. Сухих Г. Т. Преэклампсия. М.: ГЭОТАР-Медиа 2010; 576.
13. Lockwood C.J, Murk W. Progestin and thrombin regulate tissue factor expression in human term decidual cells. The Journal Of Clinical Endocrinology And Metabolism. 2009; 94 (6): 2164-2170.
14. Stafford I, Michael A. Etiology and management of hemorrhage critical care obstetrics. 1 ed. 2011; l.6 (14): 308-326.
Материал поступил в редакцию 10.12.2014
