CC BY
29
Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. №1. 2007г. (Т.9)
ОСОБЕННОСТИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕМЦИТАБИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ МЕТОДОМ ВЭЖХ
Паршина Н. А., Байкова В. Н., Нариманов М. Н., Плетенева Т. В.
РУДН, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, г. Москва, РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, отделение клинической фармакологии НИИ Клинической онкологии, г. Москва
Гемцитабин (2,2-дифтородезоксицитидин) - фторзамещенный аналог дезоксицитидина с широким спектром противоопухолевой активности. Для проявления цитостатического эффекта решающее значение имеет внутриклеточная концентрация гемцитабина трифосфата, накопление которого происходит по законам сатурационной кинетики. Фосфорилирование гемцитабина дезоксицитидинкиназой до монофосфата является лимитирующим условием для аккумуляции активных метаболитов.
Для изучения фармакокинетических особенностей гемцитабина проводили исследования дозозависимого режима длительных инфузий гемцитабина у больных местнораспространенным и диссеминированным раком поджелудочной железы. В связи с этим была разработана методика определения гемцитабина в плазме крови методом ВЭЖХ. Для анализа использовали жидкостной хроматограф Metrohm (Швейцария) модель 844UV/VIS с диодно-матричным УФ-детектором и аналитической колонкой Prontosil C18 (150х4,6 мм, размер частиц 5 мкм). Подвижная фаза - смесь ацетатного буфера (рН 5,0) и ацетонитрила в объемном соотношении 97,5:2,5. Скорость подачи элюента составляла 1 мл/мин; температура колонки 25°С. Специфичность метода изократической ВЭЖХ была подтверждена при анализе хроматограмм образцов донорской плазмы по сравнению с хроматограммами, полученными после добавления к плазме гемцитабина и дезоксицитидина (внутренний стандарт). Эндогенные вещества не давали перекрестной реакции с гемцитабином. Время удерживания гемцитабина в сыворотке крови (6,27±0,19) мин. При использованных условиях хроматографирования гемцитабин и дезоксицитидин полностью разделялись с разрешением более 1,5.
На основании результатов испытаний была установлена линейная зависимость (r=0,9775) аналитического сигнала от концентрации гемцитабина в образце в интервале (1^15) мкг/мл. Оценку сходимости для данного метода осуществляли путем хроматографического анализа образцов донорской плазмы с добавлением известных количеств гемцитабина (для 5 повторных измерений каждой из трех концентраций), величина стандартного отклонения не превышала 10%. Предел обнаружения составил 1мкг/мл (отношение сигнал/шум >3). Методика была использована для изучения метаболизма гемцитабина in vivo при внутривенном введении препарата в виде пролонгированной 150-минутной инфузии со скоростью введения 10мг/м2/мин. Было установлено линейное накопление гемцитабина в крови на протяжении всего периода инфузионного введения; оптимальная концентрация препарата для реализации его эффекта (20мкмоль/л) была достигнута через 60 мин от начала инфузии.
Материалы VIII Международный конгресс «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации»
Стр. [76]
