CC BY
8
ОСОБЕННОСТИ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА С У ДЕТЕЙ С РАЗЛИЧНЫМИ ВАРИАНТАМИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА IL28B
Матинян И.А.1, Сенцова Т.Б.1, Ворожко И.В.1, Черняк О.О.1, Строкова Т.В.1' 2, Гаппаров М.М.Г.1
1 ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии»
2 ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России
THE CLINICAL COURSE OF HEPATITIS C IN CHILDREN WITH DIFFERENT VARIANTS OF THE GENE POLYMORPHISM IL28B
Matinyan LA.1, Sentsova IB.1, Vorozhko IV.1, Chernyak O.O.1, Strokova T.V.1- 2, Gapparov M.M.G1
1 Federal Research Centre of Nutrition and Biotechnology
2 Pirogov Russian National Research Medical University of Ministry of Healthcare of the Russian Federation
Матинян Резюме
Ирина Александровна
Matinyan Irina A.
demkina_ira@maii.ru Целью исследования является изучение особенностей клинического течения вирусного гепатита С у детей
с различными вариантами полиморфизма гена IL-28B. Материалы и методы. Под наблюдением находилось 94 ребенка (46 девочек и 48 мальчиков) с хроническим гепатитом С (ХГС) в возрасте от 3 до 17 лет (средний возраст 10 лет). Выявлены достоверные различия распределения частот аллелей у детей с ХГС и в популяции. У детей с ХГС достоверно повышена частота встречаемости аллеля Т в локусе гена IL-28B rs12979860 С>Т, что дает возможность рассматривать его в качестве предиктора неэффективности противовирусной терапии. Результаты. При анализе частоты встречаемости полиморфного варианта T>G [rs8099917] гена IL-28B у детей с ХГС и у здоровых детей не выявлено различий в отношении распределения аллелей. Заключение. Персонифицированный подход к назначению противовирусной терапии ХГС у детей заключается в проведении генетических исследований, позволяющих на предсказательной основе определить особенности течения ХГС у детей на фоне проводимого лечения.
Ключевые слова: хронический гепатит С, ген ИЛ-28В, полиморфизм, противовирусная терапия, пегилированный интерферон, рибавирин.
Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология 2016; 131 (7): 52-55
Summary
Aim of investigation. The aim of the research is to study the clinical course of hepatitis C in children with different variants of the gene polymorphism of IL-28B. Materials and methods. We observed 94 children (46 girls and 48 boys) with chronic hepatitis C (CHC) in age from 3 to 17 years (mean age 10 years). There were significant differences in the distribution of allele frequencies in children with chronic hepatitis C and in the population. In children with chronic hepatitis C significantly increased the incidence of the T allele at the locus of the gene IL-28B rs12979860 C>T, which makes it possible to consider it as a predictor of antiviral therapy ineffective. Results. When analyzing the frequency of occurrence of a polymorphic variant T>G [rs8099917] IL-28B gene in children with chronic hepatitis C and healthy children revealed no differences in the distribution of alleles. Conclusion. Personalized approach to the appointment of HCV antiviral therapy in children is to carry out genetic studies to determine on the basis of predictive features of the course of HCV in children during the treatment.
Keywords: chronic hepatitis C, gen IL28B, polymorphism, antiviral therapy, PEGylated interferon, ribavirin.
Eksperimental'naya i Klinicheskaya Gastroenterologiya 2016; 131 (7): 52-55
Введение
Согласно современным представлениям персонифицированный подход к диагностике и фармакотерапии вирусного гепатита С у детей предусматривает проведение генетических исследований, позволяющих прогнозировать развитие и течение этого заболевания, а также эффективность противовирусной терапии [1]. Поскольку хронический гепатит С является инфекционным заболеванием, в различных исследованиях были предприняты попытки выявления так называемых «генов-кандидатов», в основном, они сводились к изучению генов иммунной системы: главного комплекса гистосовместимости ЫЬА, ТОТ-а, 1Ь-6, других
интерлейкинов, адгензинов и т.д. [2, 4]. Активное изучение генетической составляющей в достижении устойчивого вирусологического ответа (УВО) при лечении гепатита С пегилированным интерфероном и рибавирином нашло свое отражение при исследовании гена 1Ь28Б [3, 4].
С 2009 года с момента первой публикации о значении полиморфизма гена И-28Б, как предиктора эффективности лечения вирусного гепатита С пегилированным интерфероном и рибавирином, проведены многочисленные исследования у взрослых [5, 6, 7, 16]. И-28Б как интерферон-\-3 является представителем лиганда цитокинового
рецептора II класса, которые запускают |АК/8ТАТ сигнальный каскад, активируя синтез 2',5'-олиго-аденилат-синтетазы, который активирует эндону-клеазу [8]. Эндонуклеаза, в свою очередь, участвует в процессах стимуляции образования фермента протеинкиназы, блокирующий синтез вирусных белков. В настоящее время доказано, что иммунный ответ организма на инфекцию ВГС зависит от двух изменений в нуклеотидной последовательности, локализованных в гене 1Ь28Б: замена цитозина на тимин (С>Т) — ге12979860 и тимина на гуанин (Т^) — ге8099917 [3, 9, 13]. Общепризнанно, что генотипы ге12979860 СС и ге8099917 ТТ у больных ХГС являются предикторами УВО [11, 12, 13]. Клинические наблюдения свидетельствуют о том, что наибольшее прогностическое
значение полиморфизма гена 1Ь-28Б выявлено у пациентов с 1-м генотипом [10, 11, 12]. Было показано, что полиморфные варианты ге12979860 СС и ге8099917 ТТ гена 1Ь-28Б имеют существенное значение в оценке спонтанной элиминации вируса [13]. Исследования по изучению роли генетического полиморфизма 1Ь-28Б свидетельствуют о том, что положительное предсказательное значение этого гена выше, чем другие базовые характеристики-предикторы успеха противовирусной терапии (индекс массы тела, возраст, стадия фиброза печени, степень вирусной нагрузки и другие) [14, 15].
Целью исследования является изучение особенностей клинического течения вирусного гепатита С у детей с различными вариантами полиморфизма гена 1Ь-28Б.
Материалы и методы
Под наблюдением находилось 94 ребенка (46 девочек и 48 мальчиков) с ХГС в возрасте от 3 до 17 лет, средний возраст 10 лет (таблица № 1). Имело место следующее распределение детей с ХГС по генотипам: 1 генотип выявлялся у 61 ребенка (65%), 2-й генотип — у 4 детей (4%), 3-й генотип — у 29 детей (31%). Исходно синдром цитолиза был выявлен у 47 пациентов (50%): медиана АЛТ составила 43,6 [27-64,2] ед/л, (минимальное значение — 12 ед/л, максимальное значение- 264 ед/л), повышение уровня маркеров холестаза (ГГТ, ЩФ) у 6 детей с 1-м генотипом. Курс комбинированной схемы противовирусного лечения (пегилированный интерферон 60 мкг/м2 — 1 раз в неделю + рибави-рин — 15 мг/кг/сут ежедневно) при 1 генотипе был 48 недель, при 2 и 3 генотипах — 24 недели. Всем детям с ХГС до старта терапии и на ее фоне (4, 8, 12, 16, 24, 32, 48 недели лечения) проводились антропометрические, биохимические, молекулярно-генетические и другие параклинические исследования. Контрольную группу составили здоровые дети того же возраста, обследование которых проводилось при диспансерном наблюдении.
Для выделения ДНК использовали набор Российского производства. Анализ полиморфных маркеров генетических полиморфизмов rs12979860 С>Т и rs8099917 T>G гена IL-28B проводили методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени при использовании детектирующего амплификатора ДТ-96 и наборами для ДНК-диагностики.
Статистическая обработка данных выполнена с помощью электронных таблиц «Microsoft Excel», и пакета прикладных программ «Statistica for Windows» v. 10.0, Stat Softlnc. (США). Различия в частотах аллелей или генотипов выявляли с помощью метода х2, для вычисления каждого прибегали к построению таблиц «2х2» и «2х3» соответственно.
Исследование являлось открытым, проспективным, было одобрено локальным комитетом по этике ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии» и соответствует принципам, изложенным в декларации Хельсинского соглашения. Информированное согласие было получено от всех родителей детей либо их опекунов.
Результаты и обсуждение
При изучении частоты встречаемости полиморфизмов ^12979860 С>Т и ^8099917 Т>С гена 1Ь-28Б у детей с ХГС и в контрольной группе были получены следующие результаты (таблица № 2). У больных детей была достоверно повышена частота встречаемости аллеля Т в гомозиготном (ТТ) генотипе в локусе ге12979860 (OR = 3,14, Р = 0,004) в сравнении с контрольной группой, что дает возможность рассматривать его в качестве прогностического маркера, ассоциированного с резистентностью к противовирусной терапии. Как свидетельствуют клинические наблюдения, эту группу составляют в основном дети с 1-м генотипом ХГС.
При анализе частоты встречаемости гомозиготного генотипа СС гена 1Ь-28Б было установлено, что большая частота его встречаемости регистрировалась у детей контрольной группы (OR = 0,15,
Р = 0,004), что дает право рассматривать его но-сительство протективным в отношении развития гепатита С.
При анализе частоты носительства полиморфного варианта 1Ь28Б Т>С М099917] у детей с ХГС и у здоровых детей не выявлено различий в отношении распределения аллелей (Р = 0,32).
Клинические данные свидетельствуют о том, что быстрый вирусологический ответ (БВО) на 4-й неделе терапии отмечен у 41 ребенка (44%), ранний вирусологический ответ (РВО) на 12-й неделе терапии достигнут у 63 детей (67%), стойкая вирусологическая ремиссия при катамнестиче-ском обследовании у 64 пациентов (68%): у 36 (59%) больных с 1-м генотипом, у 28 (85%) больных со 2-м и 3-м генотипами. Динамика биохимических показателей оценивалась по результатам уровня АЛТ: при оценке на 4 неделе терапии уровень АЛТ
Таблица 1
Клиническая характеристика детей с ХГС
Показатели
Таблица 2
Распределение частот полиморфизма гена ^28Б у детей с ХГС
Таблица 3
Частота достижения вирусологического ответа у детей с ХГС в зависимости от полиморфизма генотипов ^12979860 и гя8099917 гена
а-28Б
Примечание:
1 генотип, п = 61 (65%) 2 генотип, п = 4 (4%) 3 генотип, п = 29 (31%)
Девочки/мальчики, абс.
28/33
2/2
15/14
Возраст, годы
10,5 [6-15]
10,2 [7,2-14,9]
Длительность инфицирования, г
9,0 [5,3-12,9]
8,0 [6,0-11,9]
Перинатальное инфицирование, абс.
37
16
АЛТ, ед/л 38,5 [27-60] 38 [24,5-68]
АСТ, ед/л 44,3 [34-63] 33 [27,2-55]
ГГТ, ед/л 27,6 [17,4-28,9] 18,7 [16,2-23,3]
ЩФ, ед/л 192 [140-245] 204 [164-255]
Степень фиброза (METAVIR) F0 F0
Генотипы Больные ХГС Контрольная группа OR (95% CI)
и аллели Абс. Частота Абс. Частота Р
Полиморфный локус IL28B С>Т [rs12979860]
C/C 6 0,119 12 0,480 0,15 (0,04-0,50)
C/T 27 0,667 11 0,440 11,15 0,004 2,55 (0,92-7,04)
9 0,214 2 0,080 3,14 (0,62-15,88)
Т/ Т N = 42 N = 25
Полиморфный локус IL28B 7>G [rs8099917]
Т/Т 19 0,452 16 0,640 0,46 (0,17-1,29)
Т/О 21 0,500 8 0,320 2,25 0,32 2,13 (0,75-5,98)
2 0,048 1 0,040 1,20 (0,10-13,95)
N = 42 N = 25
Генотипы С УВО Без УВО
Абс. Частота (%) Абс. Частота (%)
Полиморфный локус IL28B С>Г [rs12979860]
1. C/C 6 24 0 0
2. C/T 17 68 10 62,5
3. Т/Т 2 86 37,5
Полиморфный локус IL28B 7>G [rs8099917]
4. Т/Т 14 56 4 25
5. T/G 10 40 11 69
6. G/G 0 0 0 0
сохранялся повышенным у 11% (п = 10). На 24 неделе ПВТ нормализация значения АЛТ отмечалась у 87 (93%) детей с ХГС. К 24 неделе катамнестиче-ского обследования пациентов, достигших СВО, показатели АЛТ в пределах уровня здоровых лиц. В связи с отсутствием эффективности ПВТ лечение было отменено у 12 детей. У 8 пациентов в процессе терапии зарегистрирован «вирусологический прорыв» на 29,6 ± 3,7 неделе лечения.
Принципиально важным явилось изучение частоты вирусологического ответа у детей с ХГС в зависимости от полиморфизма генотипов ге12979860 и ге8099917 гена 1Ь-28В (таблица 3). Как показало проведенное исследование, максимальная частота достижения УВО наблюдалась у детей с ХГС — носителей гетерозиготного генотипа СТ
ге12979860 гена 1Ь-28В и гомозиготного генотипа СС ге12979860 гена 1Ь-28В. На основании полученных результатов можно предположить, что наличие аллеля С ге12979860 гена 1Ь-28В является прогностически благоприятным фактором течения ХГС у детей на фоне проводимой противовирусной терапии.
При изучении частоты достижения УВО у детей — носителей полиморфизма сайта ге8099917 гена 1Ь-28В достоверных данных выявлено не было.
Таким образом, персонифицированный подход к назначению противовирусной терапии ХГС у детей заключается в проведении генетических исследований, позволяющих на предсказательной основе определить особенности течения этого заболевания на фоне проводимого лечения.
P1-3 < 0,05, P2-3 < 0,05
P4-5 > 0,05.
Выводы
1. Выявлены достоверные различия распре- предиктора резистенотности противовирусной
деления частот аллелей у детей с ХГС и в по- терапии.
пуляции. У детей с ХГС достоверно по- 2. При анализе частоты встречаемости полимор-
вышена частота встречаемости аллеля Т фного варианта Т>С [г88099917] гена 1Ь-28Б
в локусе гена 1Ь-28Б ге12979860 С>Т, что дает у детей с ХГС и у здоровых детей не выявлено
возможность рассматривать его в качестве различий в отношении распределения аллелей.
Литература
1. Suzuki M, Tajiri H. Peginterferon Therapy in Children with Chronic Hepatitis C: A Nationwide, Multi-center Study in Japan, 2004-2013. J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2016 Jan 27.
2. Robinson MW, Hughes J. Tracking TCR|3 sequence clonotype expansions during antiviral therapy using high-throughput sequencing of the hypervariable region. Front Immunol. 2016 Apr 5;7:131.
3. Tanaka Y, Nishida N, Sugiyama M, et al. Genome-wide association of IL28B with response to pegylated interferon-alpha and ribavirin therapy for chronic hepatitis C. Nat Genet. 2009;41:1105-1109.
4. Kelly C, Klenerman P, Barnes E. Interferon lambdas: the next cytokine storm. [PubMed].
5. Stattermayer AF, Stauber R, Hofer H, et al. Impact of IL28B genotype on the early and sustained virologic response in treatment-naive patients with chronic hepatitis C. Clin Gastroenterol Hepatol.2011;9:344-350.
6. Rauch A., Kutalik Z., Descombes P. et al. Genetic variation in IL28 B is associated with chronic hepatitis C and treatment failure: a genome-wide association study. Gastroenterology. 2010. Vol. 138, № 4. P. 1338-1345
7. Ge D, Fellay J, Thompson AJ, et al. Genetic variation in IL28B predicts hepatitis C treatment-induced viral clearance. Nature. 2009;461:399-401.
8. Gale M, Jr, Foy EM. Evasion of intracellular host defence by hepatitis C virus. Nature. 2005;436:939-945.
9. Симанкова Т. В., Гармаш И. В., Аришева О. С. и др. Генетический полиморфизм гена ИЛ-28В как предиктор успеха ПВТ хронического гепатита С. Клиническая фармакология и терапия. 2012. Т. 21. No 1. С. 1-6.
10. Moghaddam A., Melum E., Reinton N. et al. Hepatology. 2011. V. 53. P. 746-754.
11. Fried MW, Shiffman ML, Reddy KR, et al. Peginterferon alfa-2a plus ribavirin for chronic hepatitis C virus infection. N Engl J Med. 2002;347:975-982.
12. Hadziyannis SJ, Sette H, Jr, Morgan TR, et al. Pegin-terferon-alpha2a and ribavirin combination therapy in chronic hepatitis C: a randomized study of treatment duration and ribavirin dose. Ann Intern Med. 2004; 140:346-355.
13. Ge D, Fellay J, Thompson AJ, et al. Genetic variation in IL28B predicts hepatitis C treatment-induced viral clearance. Nature. 2009;461:399-401.
14. David L. Thomas, M. D. Predicting the Response to the Treatment of Hepatitis C Virus Infection. Clinical Liver Disease, Vol. 1, No. 2, April 2012: 46-48.
15. A. J. Thompson. Genetic factors and hepatitis C virus infection. Gastroenterology. 2012. Vol. 142. P. 1335-1339.
16. Stevan A. Gonzalez, Emmet B. Keeffe. IL-28B As a Predictor of Sustained Virologic Response in Patients with Chronic Hepatitis C Virus Infection. Gastroenterol Hepatol (N Y). 2011 Jun; 7 (6): 366-373.
