Особенности иммунных реакций у больных лекарственно-устойчивым туберкулезом легких Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Особенности иммунных реакций у больных лекарственно-устойчивым туберкулезом легких

Кононова Т.Е., Уразова О.И., Новицкий В.В., Чурина Е.Г., Игнатов М.В.

Peculiarities of immune reaction in patients with drug-resistant pulmonary tuberculosis

Kononova T.Ye., Urazova O.I., Novitsky V.V., Churina Ye.G., IgnatovM.V.

Представлены результаты исследования цитокинсекреторной активности мононуклеарных лейкоцитов, апоптоза и пролиферации лимфоцитов у больных инфильтративным туберкулезом легких (ТЛ). Показано, что у пациентов с лекарственно-устойчивым ТЛ нарушения исследуемых показателей носили более выраженный характер, что проявлялось значимым угнетением пролиферации лимфоцитов, снижением числа клеток, экспрессирующих CD95-рецептор, а также нарушением секреции иммунорегуляторных цитокинов.

Ключевые слова: лекарственно-устойчивый туберкулез легких, цитокины, пролиферация, апоптоз лимфоцитов.

The results of research the cytokine-secretion activity of mononuclear leukocytes, apoptosis and proliferation of lymphocytes for patients with infiltrative pulmonary tuberculosis has been presented in this article. It has been showed that patients with drug-resistant pulmonary tuberculosis had more evident of damages, particularly significant depression of proliferation of lymphocytes, decreased number of cells expressing CD95-receptor as well as disturbance the secretion of immunoregulatory cytokines.

Key words: drug-resistant pulmonary tuberculosis, cytokine secretion, proliferation, apoptosis of lymphocytes.

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

© Кононова Т.Е., Уразова О.И., Новицкий В.В. и др.

УДК 616.24-002.5-06:615.015.6]-097

Обзор данных литературы показывает, что конец ХХ в. охарактеризовался не только ростом заболеваемости туберкулезом, но и активизацией борьбы с этой инфекцией на глобальном уровне. Однако, несмотря на активные противоэпидемические мероприятия, существование стандартных схем комбинированной химиотерапии, проблема туберкулеза по-прежнему сохраняет свою актуальность. Особая роль в этом отводится эволюции лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis на основе генетически закрепленных мутаций [3].

дование иммунологических показателей у больных туберкулезом легких проводили однократно — до начала специфической противотуберкулезной химиотерапии. Материалом для исследования служила венозная кровь. Для стимуляции секреторной способности мононуклеарных лейкоцитов и пролиферации лимфоцитов использовали вакцинный штамм Bacillus Calmette — Guerin (BCG) в дозе 50 мкг/мл. Определение содержания интерлейкина (IL) -4, -10, трансформирующего фактора роста (TGF) ß и фактора некроза опухолей (TNF) а в супернатантах культуральных суспензий проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа. Пролиферацию лимфоцитов оценивали с помощью МТТ-теста. Определение CD95+-клеток производили лимфоцитотоксическим методом. Детекцию апопто-тических лимфоцитов периферической крови осуществляли методом люминесцентной микроскопии.

Целью настоящей работы явилось исследование особенностей иммунных реакций у больных туберкулезом легких в зависимости от лекарственной чувствительности M. tuberculosis.

В программу исследования вошли 83 впервые выявленных больных в возрасте от 18 до 55 лет с инфильтративным туберкулезом легких (ТЛ). Контрольную группу составили 25 здоровых доноров. Иссле-

Краткие сообщения

Оценку полученных результатов проводили с помо- щью пакета прикладных программ Statistica 6.0. Концентрация цитокинов (пг/мл) в супернатантах культуральных суспензий мононуклеарных лейкоцитов крови у здоровых доноров и

больных

инфильтративным туберкулезом легких (Ме (¿1—¿3)

Показатель Группа обследованных лиц

Здоровые доноры Пациенты с ЛЧТЛ Пациенты с ЛУТЛ

IL-4 Базальная При инкубации с вакцинным штаммом BCG 32,35 30,65 25,99 (21,14—55,04) (16,86—40,00) (18,50—34,57) 58,58 40,00 26,55 (26,46—68,55) (21,46—55,04) (18,62—48,74) Р2 < 0,05 р1 < 0,05; р2 < 0,05 р1 < 0,005

IL-10 Базальная При инкубации с вакцинным штаммом BCG 24,79 37,00 48,73 (22,10—34,02) (24,31—91,27) (26,21—101,10) Р1 < 0,05 р1 < 0,05 26,21 37,02 24,84 (22,74—102,20) (23,68—81,19) (23,37—29,00) Р2 < 0,05

TGF-P Базальная При инкубации с вакцинным штаммом BCG 967,10 939,79 1061,85 (929,80—1487,20) (489,30—1134,66) (774,90—1348,80) 1242,70 939,80 770,50 (1087,80—1412,60) (148,30—1250,40) (207,40—1333,60)

TNF-a Базальная При инкубации с вакцинным штаммом BCG 204,85 106,20 104,50 (186,50—273,62) (89,46—119,57) (90,85—111,20) Р1 < 0,005 р1 < 0,005 133,90 106,20 106,15 (106,20—176,40) (95,63—119,57) (45,41—124,60)

Примечание. р1 — уровень статистической значимости различий по сравнению с аналогичным показателем у здоровых доноров; р2 — по сравнению с базальной секрецией цитокина.

Результаты проведенного исследования показали, что течение инфильтративного лекарственно-чувствительного (ЛЧ) и лекарственно-устойчивого (ЛУ) туберкулеза легких сопровождалось увеличением спонтанной секреции IL-10 и снижением базальной продукции TNF-a мононуклеарными лейкоцитами in vitro (таблица). Учитывая, что баланс секреции про- и противовоспалительных цитокинов во многом определяет направленность и силу развития протективного анти-генспецифического Т-клеточного ответа при туберкулезной инфекции, установленное у больных ТЛ изменение продукции данных цитокинов может предрасполагать к активному размножению M. tuberculosis и, как следствие, диссеминации возбудителя и прогрес-сированию инфекционного процесса. Обращало на себя внимание, что базальная секреция IL-4 и TGF-P in vitro у больных с ЛЧТЛ и ЛУТЛ варьировала в пределах контрольных значений (таблица). При инкубации мононуклеарных лейкоцитов с вакцинным штаммом BCG у больных ЛУТЛ отмечалось снижение секреции IL-10 (таблица). По-видимому, угнетение

антигениндуцированной секреции IL-10 находится под влиянием различных факторов: количества и активности секреторных клеток, соотношения рецепторов агонистов и антагонистов, связи с компонентами внутриклеточного матрикса и т.д. [1, 2]. Кроме того, у пациентов с ЛУТЛ, равно как и у больных ЛЧТЛ, уровень секреции IL-4 был существенно ниже, чем у здоровых лиц (таблица).

Известно, что о функциональной активности им-мунокомпетентых клеток (ИКК) можно судить по уровню их пролиферации, которая напрямую определяет способность ИКК к оптимальной реализации специфического иммунного ответа. Поскольку появление и размножение лекарственно-резистентных форм M. tuberculosis наиболее часто встречаются у больных со сниженными иммунными реакциями организма, то вполне закономерным представляется обнаруженное угнетение базальной пролиферации лимфоцитов в группе пациентов с ЛУТЛ. Обращало на себя внимание, что у больных ЛУТЛ пролиферативная активность лимфоцитов была ниже, чем при лекарст-

Кононова Т.Е., Уразова О.И., Новицкий В.В. и др.

венно-чувствительном варианте заболевания, что могло быть обусловлено биологическими особенностями устойчивых штаммов M. tuberculosis. Необходимо отметить, что показатели пролиферативного ответа лимфоцитов на BCG у пациентов с лекарственно -устойчивой формой заболевания варьировали в пределах исходных значений, однако были ниже, чем в группе контроля и у больных ЛЧТЛ, что свидетельствует о пониженной реактивности антигенспецифиче-ских лимфоцитов.

В результате оценки спонтанного апоптоза лимфоцитов периферической крови обнаружено, что у пациентов с ЛЧТЛ и ЛУТЛ число апоптотических лимфоцитов (annexin V+-клеток) оставалось в пределах контрольных значений. При этом у пациентов с ЛУТЛ содержание CD95+-клеток было ниже, чем при лекарственно-чувствительной форме заболевания. По-видимому, это связано с тем, что туберкулез, вызванный лекарственно-резистентными штаммами M. tuberculosis, сопровождается (как указывалось ранее) более глубокими нарушениями механизмов иммунной защиты, в том числе и способности клеток к активации.

Таким образом, выявленные изменения секреции цитокинов, угнетение пролиферации и повышение числа клеток, предуготовленных к апоптозу, у больных ЛУТЛ свидетельствуют о неадекватности анти-

Особенности иммунных реакций у больных ЛУТЛ

генспецифического иммунного ответа, что в значительной степени может сказаться на клинической картине заболевания, особенностях реагирования имму-нокомпетентных клеток крови и впоследствии может привести к формированию комбинированной иммунологической недостаточности и дальнейшему прогрес-сированию туберкулезного процесса.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (ГК № 16.512.11.2046 от 14.02.2011 г.) и РФФИ (проект № 11-04-98057-р).

Литература

1. Новицкий В.В., Стрелис А.К., Серебрякова В.А. и др. Иммунный статус больных инфильтративным лекарственно-устойчивым туберкулезом легких на фоне противотуберкулезной терапии // Иммунология. 2007. Т. 28, № 1. С. 27—30.

2. Сахно Л.В., Тихонова М.А., Курганова Е.В. и др. Т-кле-точная анергия в патогенезе иммунной недостаточности при туберкулезе легких // Проблемы туберкулеза. 2004. № 5. С. 23—28.

3. Velayati A.A., Masjedi M.R., Farnia P.P. et al. Emergence of new forms of totally drug-resistant tuberculosis bacilli: super extensively drug-resistant tuberculosis or totally drug-resistant strains in iran // Chest. 2009. V. 136, № 2. P. 420— 425.

Поступила в редакцию 31.01.2012 г. Утверждена к печати 30.05.2012 г.

Сведения об авторах

Т.Е. Кононова — канд. мед. наук, докторант кафедры патофизиологии СибГМУ (г. Томск). О.И. Уразова — д-р мед. наук, профессор кафедры патофизиологии СибГМУ (г. Томск).

В.В. Новицкий — заслуженный деятель науки РФ, д-р. мед. наук, профессор, академик РАМН, зав. кафедрой патофизиологии СибГМУ (г. Томск).

Е.Г. Чурина — канд. мед. наук, ассистент кафедры патофизиологии СибГМУ (г. Томск). М.В. Игнатов — аспирант кафедры патофизиологии СибГМУ (г. Томск).

Для корреспонденции

Кононова Татьяна Евгеньевна, тел.: 8 (3822) 41-30-59, 8-913-824-1286; е-mail: [email protected]