CC BY-ND
9
ноябрь №1 (308) ЗНиСО
27
с^ © Долгих О.В., Старкова К.Г., Казакова О.А., Кривцов А.В., Отавина Е.А., Мазунина А.А., 2018 Ц УДК 616.24:575
= ОСОБЕННОСТИ ИММУННОЙ РЕГУЛЯЦИИ И ГЕНЕТИЧЕСКОГО
^ ПОЛИМОРФИЗМА У ВЗРОСЛОГО НАСЕЛЕНИЯ, ПРОЖИВАЮЩЕГО
В УСЛОВИЯХ ВНЕШНЕСРЕДОВОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ВАНАДИЯ
—Р
О.В. Долгих1'2'3, К.Г. Старкова1, О.А. Казакова1, А.В. Кривцов1, Е.А. Отавина1, А.А. Мазунина1
1ФБУН «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения», ул. Монастырская, 82, г. Пермь, Пермский край, 614045, Россия 2ФГБОУ ВПО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»,
ул. Букирева, 15, г. Пермь, Пермский край, 614990, Россия 3ФГБОУ ВПО «Пермский национальный исследовательский политехнический университет», Комсомольский пр., 29, г. Пермь, Пермский край, 614990, Россия
Проведено обследование взрослого населения (n = 37) в возрасте (33,82 ± 0,82) лет, проживающего в экологически неблагополучных условиях (зона влияния промышленных выбросов) города Чусово-го (Пермский край). Группа сравнения включала 25 человек из района с допустимыми санитарно-гигиеническими показателями качества атмосферного воздуха. Средний возраст обследованных группы сравнения составлял (35,25 ± 1,24) лет. Особенности иммунного статуса обследованных, подверженных внешнесредовому воздействию мелкодисперсной пыли ванадия, показали снижение фагоцитоза, экспрессию уровня интерлейкина-10 и продукции сывороточного иммуноглобулина класса А (IgA). Как анализ отношения шансов, так и математическое моделирование показали достоверное увеличение содержания иммуноглобулина класса G (IgG) и иммуноглобулина класса M (IgМ) (R2 = 0,67-0,70, p < 0,05) при повышении концентрации ванадия в крови. В то же время исследование содержания металла в крови наблюдаемой группы в сравнении с допустимым уровнем показало более высокие концентрации. Выявлены особенности полиморфизма генов, которые связанны с возрастанием распространенности минорного гомозиготного генотипа по генам SULT1A1 и CYP1A1*3 - гены иммунной регуляции (MTHFR), детоксикации и эндотелиальной регуляции (VEGFА). Результаты анализа двадцати девяти полиморфных генов выявили ключевые гены мужской и женской подгрупп основной группы, распространенность полиморфизмов которых достоверно различалась с аналогичным показателем группы сравнения (p < 0,05). При этом генотипы работающих мужчин основной группы характеризовались достоверным преобладанием вариантного аллеля относительно группы контроля (HTR2A, MTHFR, CYP1A1, FAS, CPOX, TNF). Генотипы работающих женщин характеризовались доми-
iFr, ммр, ANKK1, zmPste, Tnf.
нированием таких полиморфных генов, как MTH1 Ключевые слова: иммунная регуляция, генетический полиморфизм, гены детоксикации, гомозиготный генотип, ванадий, внешнесредовое загрязнение, взрослое население. О.У. Dolgikh, KG. Starkova, О.А. Кахаквиа, А.У. Krivtsov, Е.А. Otavina, А.А. Mazunina □ PECULIARITIES OF IMMUNE REGULATION AND GENETIC POLYMORPHISM OF ADULT POPULATION LIVING IN THE CONDITIONS OF VANADIUM EXTERNAL EXPOSURE □ Federal Scientific Center for Medical and Preventive Health Risk Management Technologies, 82, str. Monastyrskaya, Perm, 614045, Russia; Perm State National Research University, 15, str. Bukireva, Perm, 614990, Russia; Perm National Research Polytechnic University, 29, Komsomolskii Avenue, Perm, 614990, Russia.
We conducted the survey of the adult population (n = 37) at age of 33.82 ± 0.82 years, living in ecologically unfavorable conditions (influence zone of industrial emissions) of Chusovoy (Perm Territory). The comparison group included 25 people from the area with acceptable sanitary and hygienic indicators of atmospheric air quality. The average age of the comparison groups surveyed was 35.25 ± 1.24 years. The study of features of the immune status of the examined individuals exposed to the external effects of vanadium fine dust have been showed a decrease in phagocytosis, expression of the level of interleukin-10 and production of serum immunoglobulin A class (IgA). Both the odds ratio analysis and mathematical modeling showed a significant increase in the content of class G immunoglobulin (IgG) and class M immunoglobulin (IgM) (R2 = 0.67-0.70, p < 0.05) with an increase of vanadium concentration in the blood. At the same time, the study of the metal content in the blood of the observed group as compared with the permissible level showed higher concentrations. We revealed the features of gene polymorphism associated with an increase in the prevalence of the minor homozygous genotype for the ■ SULT1A1 and CYP1A1*3 genes — the immune regulation (MTHFR), detoxification and endothelial regulation (VEGFA) genes. The results of the analysis of twenty-nine polymorphic genes revealed the key genes of the male and female subgroups of the main group, which prevalence of polymorphisms was significantly different from that of the comparison group (p < 0.05). At the same time, the genotypes of working men of the main group were characterized by a significant predominance of the variant allele compared to the control group (HTR2A, MTHFR, CYP1A1, FAS, CPOX, TNF). The genotypes of working women were characterized by the dominance of such polymorphic genes as MTHFR, MMP, ANKK1, ZMPSTE, TNF. Key words: immune regulation, genetic polymorphism, detoxification genes, homozygous genotype,
vanadium, external environmental pollution, adult population.
Изменение условий среды обитания актуализирует необходимость исследования адаптационных возможностей и функциональных резервов регуляторных систем, в том числе механизмов и особенностей реа-
гирования иммунитета, а также индивидуальной генетической вариабельности, определяющей особенности индивидуальной устойчивости организма в условиях факторной экспозиции [1-3, 5-15].
28
ЗНиСО НОЯбРЬ №11 (300)
Цель исследования - дать оценку особенностей иммунологических показателей и частоты полиморфизма генов у взрослого городского населения, проживающего в условиях аэрогенной экспозиции ванадием.
Материалы и методы. В процессе исследования выполнено обследование шестидесяти двух человек (г. Чусовой, Пермский край). В группу наблюдения (n = 37) были включены обследуемые, проживающие в экологически неблагополучных условиях (зона влияния промышленных выбросов мелкодисперсной пыли, которая содержит ванадий). Средний возраст обследуемых составил (33,8 ± 0,8) лет. В группу сравнения были включены люди из района с допустимыми санитарно-гигиеническими показателями качества атмосферного воздуха в количестве 25 человек, средний возраст обследуемых составил (35,3 ± 1,2) лет. Группа наблюдения и группа сравнения были сопоставимы по возрасту, полу и соматическим болезням.
Анализ биосред на содержание металла выполняли в соответствии с МУК [4] при помощи масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой. Определение иммуноглобулинов различных классов (IgA, IgG и IgM) в сыворотке крови проводили при помощи реакции радиальной иммунодиффузии (реакция Манчини), исследование фагоцитарно активных клеток проводили с использованием формалинизиро-ванных эритроцитов барана в качестве объектов фагоцитоза. Метод основан на специфическом связывании антитела с антигеном. Методом ИФА (иммуноферментный анализ), который основан на специфическом связывании антитела с антигеном, определяли содержание ^Е общего, интерлейкина-10, интерлейкина-17, фактора некроза опухолей, сосудистого эн-дотелиального фактора роста (VEGF). Определяли изменение содержания специфических к поллютанту IgG в аллергосорбентном тесте с ферментной меткой (IgG к ванадию). Идентифицировали специфические реагины, используя конъюгированные с пероксидазой антитела.
Статистическая обработка материала проводилась с использованием «Microsoft Office Excel 2010» и многофункционального программного обеспечения (Statistica 6.0). Данные обрабатывали методом вариационной статистики с расчетом среднего арифметического, его стандартной ошибки. Достоверность различий определяли по t-критерию Стьюдента, оценку зависимостей между признаками проводили, используя корреляционно-регрессионный анализ, критерий Фишера и коэффициент детерминации (R2). При р < 0,05 различия между группами считались достоверными.
Полиморфизм исследуемых генов (SULT1A1 (rs9282861), CYP1A1*3 (rs4646421), MTHFR (rs1801133), VEGFА (rs2010963)) изучали методом Real-Time PCR (polymerase chain reaction) с анализом формы кинетической кривой. С его помощью можно обнаружить фрагменты ДНК путем выявления изменений меченных флуорофором олигонуклеотидных зондов на этапе денатурации и дальнейшего построения графика кинетической кривой. Генетический материал был получен со слизистой оболочки ротоглотки. Выделение ДНК прово-
дилось сорбентным методом. Обработка дан- с=р ных по генотипированию была проведена на основе диагностики однонуклеотидных полиморфизмов с использованием «Ген Эксперт».
Результаты исследования. При исследо- 1— вании проб атмосферного воздуха на наблюдаемой территории обнаружилось присутствие =F мелкодисперсной пыли РМ2,5 и РМ10, которая включала в себя ванадий. Однако превышения ^^ предельно допустимых концентраций (ПДК) ^ зарегистрировано не было. Тем не менее содержание ванадия в крови обследуемой группы имело более высокую концентрацию относительно фонового допустимого уровня более чем в 3 раза: (0,00043 ± 0,00022) мкг/см3 и (0,00013 ± 0,00012) мкг/см соответственно.
Во время клинико-лабораторного обследования состояния здоровья населения были выявлены патологические изменения со стороны иммунной системы. Таким образом, при сравнении с физиологической нормой наблюдалось угнетение фагоцитарной активности в 43 и 60 % случаев по критериям «процент фагоцитоза» и «фагоцитарное число» соответственно (p < 0,05), различия достоверны по критерию кратности превышения нормы. Также отмечалось снижение параметров фагоцитоза относительно группы сравнения, однако различия достоверными не были.
Анализ сывороточных иммуноглобулинов показал повышенный уровень ^А у 76 % обследованных (p < 0,05), однако различий с группой сравнения обнаружено не было. Содержание IgG и IgM находилось в пределах нормы. Тем не менее математическое моделирование и анализ отношения шансов показал достоверное увеличение содержания IgG и ^М (R2 = 0,67-0,70, p < 0,05) при повышении концентрации ванадия в крови.
Содержание специфических антител к ванадию в группе наблюдения составило (0,62 ± 1,10) у.е., что в 1,7 раза выше относительно референтного интервала (референтный уровень < 0,38 у.е.) и аналогичного показателя группы сравнения (0,058 ± 0,048 у.е.), однако достоверных различий выявить не удалось. Тем не менее показатель общей сенсибилизации обследованных находился в пределах физиологической нормы (содержание IgE общего составляет (32^9 ± 12,5) МЕ/см при норме < 150,0 МЕ/см ). Также прослеживается тенденция к повышению показателей IgE общего и IgG к ванадию пр2и увеличении концентрации ванадия в крови (R2 = 0,77-0,99; p < 0,05).
Установлено, что содержание цитокиновых медиаторов оставалось на референтном уровне (p < 0,05), кроме интерлейкина-10, концентрация которого достоверно превысила показатели сравниваемой группы более чем в 2 раза. Так, повышенная концентрация ванадия в крови приводит к вероятности возрастания уровня VEGF, TNF, интерлейкина-17 (R2 = 0,77-0,97, p < 0,05).
Был выполнен генетический анализ, который выявил изменение в распределении частот аллелей и генотипов у группы наблюдения по генам детоксикации, иммунной и эндотелиаль-ной регуляции (табл. 1). Наблюдалось превышение частоты вариантного аллеля фермента
ноябрь №1 (308) ЗНиСО
29
с=р детоксикации сульфтрансаминазы 8ИЬТ1Л1 в г^ 1,3 раза, связанное с возрастанием распространенности гетерозиготного и мутантного гомози зиготного генотипов. Установлено появление в 1 обследуемой группе минорного генотипа по ге-с:^ ну Р450 СУР1Л1*3 (цитохром), однако в груп-—£ пе контроля данный генотип отсутствовал. Также отмечается повышение частоты вариантного гомозиготного генотипа ТТ гена МТЫРЯ (ме-тилентетрагидрофолатредуктаза) (18 % против ^р 9 % у группы контроля) и генотипа СС гена ■—» УБОРА (сосудистый эндотелиальный фактор роста) в 1,7 раза, в то время как частота минорного аллеля УБОРА возросла в 2 раза относительно группы контроля за счет гомозиготного и гетерозиготного вариантов генотипа.
В табл. 1 представлены результаты анализа полиморфизма генов детоксикации, нервной и иммунной регуляции.
По результатам анализа двадцати девяти полиморфных генов были обнаружены ключевые гены женской и мужской подгрупп основной группы. Данная распространенность полиморфизмов подгрупп была достоверной относительно группы сравнения (р < 0,05).
В генотипе женщин был отмечен повышенный полиморфизм следующих генов: метилен-тетрагидрофолатредуктаза (МТЫБЯ), рецептор
дофамина (ANKK1), металлопротеиназа (ММР), цинк-металлопептидаза (ZMPSTE) и рецептор фактора некроза опухоли (TNF). Представленные гены отвечают за регуляцию иммунитета, детоксикацию, нервную и эндокринную регуляцию.
У мужчин основной группы наблюдалось достоверное доминирование вариантного алле-ля относительно показателей группы контроля по таким полиморфизмам генов, как: метилен-тетрагидрофолатредуктаза (MTHFR), копропор-фириногеноксидаза (CPOX), рецептор серото-нина (HTR2A), цитохром (CYPlAl), рецепторы запуска процедуры апоптоза (FAS и TNF). Эти гены отвечают за детоксикацию, эндокринную и нервную регуляцию, энергетический и жировой обмен в организме.
По данным из табл. 2 и 3, где приведены результаты анализа SNP гена ТNF-aльфа между наблюдаемой группой («случаи») и группой сравнения («контроли»), выявлены достоверные различия между анализируемыми группами по генетическим маркерам апоптоза и иммунной регуляции, которые указывают на вероятность нарушений в иммунитете в условиях влияния промышленных выбросов. Данные различия можно описать как аддитивной, так и мультипликативной моделями.
Таблица 1. Особенности полиморфизма генов у городского населения в условиях аэрогенного воздействия ванадия Table 1. Features of gene polymorphism in the urban population under the conditions
of the aerogenic effects of vanadium
Ген (полиморфизм) Генотип/аллель Группа сравнения, % Группа наблюдения, %
SULT1A1 (rs9282861) GG 39 26
GA 43 50
AA 18 24
G 61 51
A 39 49
CYP1A1*3 (rs4646421) СС 70 65
СТ 30 32
ТТ 0 3
С 85 81
Т 15 19
MTHFR (rs1801133) СС 65 44
СТ 26 38
ТТ 9 18
С 78 63
Т 22 37
VEGFА (rs2010963) GG 78 44
GC 13 41
CC 9 15
G 85 65
C 15 35
Таблица 2. SNP-различия гена TNF-альфа между группами наблюдения и сравнения (мультипликативная модель наследования — тест хи-квадрат, df = 1)
Table 2. SNP-differences of the TNF-alpha gene between the observation and comparison groups (multiplicative inheritance model - chi-square test, df = 1)
Аллели Случаи Контроли 2 хи2 p Коэффициент оценки шансов - OR
n = 29 n = 29 значения 95 % CI
Аллель g 0,816 0,970 14,51 0,0001 0,14 0,04-0,44
Аллель a 0,184 0,030 7,23 2,28-22,92
30
ЗНиСО ноябрь №11 (300)
Таблица 3. SNP-различия гена TNF-альфа между группами наблюдения и контроля (аддитивная модель наследования - тест Кохрана-Армитаджа для линейных трендов, хи-квадрат = [0,1,2], df = 1) Table 3. SNP-differences of the TNF-alpha gene between the observation and control groups (additive inheritance model - Cochran-Armitage test for linear trends, chi-square = [0,1,2], df = 1)
Генотипы Случаи Контроли хи2 p Коэффициент оценки шансов - OR
n = 29 n = 29 значения 95 % CI
Генотип g/g 0,737 0,939 11,45 0,0007 0,18 0,05-0,67
Генотип g/a 0,158 0,061 2,91 0,66-12,82
Генотип a/a 0,105 0,000 28,43 1,31-617,71
Заключение. Таким образом, при обследовании городского населения, проживающего в условиях экспозиции промышленными выбросами ванадия, наблюдались изменения функциональных показателей иммунной регуляции, связанные с угнетением фагоцитарной активности, возрастанием показателей сывороточных иммуноглобулинов, специфических антител к ванадию и цитокиновых медиаторов. Особенности полиморфизма генов группы наблюдения указывают на связь эндотелиальной и иммунной регуляции с повышенной распространенностью минорного варианта генотипа по генам детоксикации.
ЛИТЕРАТУРА (п. 12—15 см. References)
1. Долгих О.В., Кривцов А.В., Старкова К.Г., Бубнова О.А., Дианова Д.Г., Вдовина Н.А., Ухабов В.М. Иммуногенети-ческие изменения у работающих в условиях сочетанного воздействия производственного шума и пыли // Медицина труда и промышленная экология. 2015. № 12. С. 21-25.
2. Долгих О.В., Кривцов А.В., Харахорина Р.А. Иммунные и ДНК-маркеры воздействия техногенной нагрузки // Вестник Уральской медицинской академической науки. 2012. № 4. C. 240-241.
3. Долгих О.В., Старкова К.Г., Кривцов А.В., Бубнова О.А Вариабельность иммунорегуляторных и генетических маркеров в условиях комбинированного воздействия факторов производственной среды // Гигиена и санитария. 2016. Т. 95. № 1. С. 45-48.
4. Измерение массовых концентраций химических элементов в биосредах (кровь, моча) методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой: МУК 4.1.3230-14 (утв. Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А.Ю. Поповой от 19.12.2014). Москва, 2014.
5. Казанцева Л.К., Тагаева Т.О. Состояние окружающей среды и здоровья населения в российских регионах // Современные исследования социальных проблем. 2011. Т. 8. № 4. С. 46-59.
6. Коленчукова О. А., Савченко А. А. Особенности иммуно-метаболического статуса у лиц, подверженных воздействию техногенных факторов промышленного производства // Гигиена и санитария. 2011. № 2. С. 19-22.
7. Куценко С.А. Основы токсикологии. СПб.: Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, 2002. 395 с.
8. Масягутова Л.М., Бакиров А.Б. Показатели локального и системного иммунитета в условиях воздействия производственных факторов // Общественное здоровье и здравоохранение. 2012.№ 1. С. 25-28.
9. Рахманин Ю.А., Михайлова Р.И. Окружающая среда и здоровье: приоритеты профилактической медицины // Гигиена и санитария. 2014. № 5. С. 5-10.
10. Ревич Б. А. Экологические приоритеты и здоровье: социально уязвимые территории и группы риска // Экология человека. 2010. № 7. С. 3-9.
11. Фундаментальные и прикладные аспекты анализа риска здоровью населения. Материалы Всероссийской научно-практической интернет-конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора / Под ред. проф. А.Ю. Поповой, акад. РАН Н.В. Зайцевой. Пермь: Книжный формат, 2016. 253 с.
REFERENCES
1. Dolgikh O.V., Krivtsov A.V., Starkova K.G., Bubnova O.A., Dianova D.G., Vdovina N.A., Ukhabov V.M. Immunogeneticheskie izmeneniya u rabotayushchikh v usloviyakh sochetannogo vozde-istviya proizvodstvennogo shuma i pyli [Immunogenetic changes in workers under the combined effects of occupational noise and dust]. Meditsina truda i promyshlennaya ekologiya, 2015, no. 12, pp. 21-25. (In Russ.)
2. Dolgikh O.V., Krivtsov A.V., Kharakhorina R.A. Immunnye i DNK-markery vozdeistviya tekhnogennoi nagruzki [Immune and DNA markers of anthropogenic stress]. Vestnik Ural'skoi meditsin-skoi akademicheskoi nauki, 2012, no.4, pp. 240-241. (In Russ.)
3. Dolgikh O.V., Starkova K.G., Krivtsov A.V., Bubnova O.A. Varia-bel'nost' immunoregulyatornykh i geneticheskikh markerov v us-loviyakh kombinirovannogo vozdeistviya faktorov proizvodst-vennoi sredy [Variability of immunoregulatory and genetic markers in conditions of the combined influence of the production environment factors]. Gigiena i sanitariya, 2016, Vol. 95, no. 1, pp. 45-48. (In Russ.)
4. Izmerenie massovykh kontsentratsii khimicheskikh elementov v biosredakh (krov', mocha) metodom mass-spektrometrii s induk-tivno svyazannoi plazmoi: MUK 4.1.3230-14 (utv. Postanovle-niem Glavnogo gosudarstvennogo sanitarnogo vracha Rossiiskoi Federatsii A.Yu. Popovoi ot 19.12.2014) [Methodological guidelines 4.1.3230-14 Measurement of mass concentrations of chemical elements in biological media (blood, urine) by mass spectrome-try with inductively coupled plasma (approved by the Resolution of the Chief State Sanitary Doctor of the Russian Federation A.Yu. Popova dated 12.19.2014). Moskva, 2014. (In Russ.)
5. Kazantseva L.K., Tagaeva T.O. Sostoyanie okruzhayushchei sredy i zdorov'ya naseleniya v rossiiskikh regionakh [The state of the environment and public health in the Russian regions]. Sovremennye issledovaniya sotsial'nykh problem, 2011, Vol. 8, no.4, pp. 46-59. (In Russ.)
6. Kolenchukova O.A., Savchenko A.A. Osobennosti immunome-tabolicheskogo statusa u lits, podverzhennykh vozdeistviyu tekh-nogennykh faktorov promyshlennogo proizvodstva [Features of immunometabolic status in individuals exposed to technogenous factors of industrial production]. Gigiena i sanitariya, 2011, no.2, pp. 19-22. (In Russ.)
7. Kutsenko S.A. Osnovy toksikologii [Fundamentals of toxicology]. Saint Petersburg: Voenno-meditsinskaya akademiya im. S.M. Ki-rova Publ., 2002. 395 p. (In Russ.)
8. Masyagutova L.M., Bakirov A.B. Pokazateli lokal'nogo i sistem-nogo immuniteta v usloviyakh vozdeistviya proizvodstvennykh faktorov [Indicators of local and systemic immunity under the influence of production factors]. Obshchestvennoe zdorov'e i zdra-vookhranenie, 2012, no. 1, pp. 25-28. (In Russ.)
9. Rakhmanin Yu.A., Mikhailova R.I. Okruzhayushchaya sreda i zdorov'e: prioritety profilakticheskoi meditsiny [Environment and health: priorities for preventive medicine]. Gigiena i sanitariya, 2014, no.5, pp. 5-10. (In Russ.)
10. Revich B.A. Ekologicheskie prioritety i zdorov'e: sotsial'no uyaz-vimye territorii i gruppy riska [Ecological priorities and health: socially vulnerable areas and risk groups]. Ekologiya cheloveka, 2010, no. 7, pp. 3-9. (In Russ.)
11. Fundamental'nye i prikladnye aspekty analiza riska zdorov'yu naseleniya [Fundamental and applied aspects of risk analysis to population health]. Materialy Vserossiiskoi nauchno-prakticheskoi internet-konferentsii molodykh uchenykh i spetsialistov Rospot-rebnadzora. In: prof. A.Yu. Popovoi, akad. RAN N.V. Zaitsevoi ed.. Perm: Knizhnyi format Publ., 2016, 253 p. (In Russ.)
12. Andrezlov L., Gbelcov H., Urakov Z. DNA damage induction and antiproliferative activity of vanadium (V) oxido monoperoxido complex containing two bidentate heteroligands. J. Trace Elements Med. Biol, 2013, no. 27, pp. 21-26.
13. Duramad P., Holland N.T. Biomarkers of immunotoxicity for environmental and public health research. Int. J. Environ. Res. Public Health, 2011, vol. no. 8(5), pp. 1388-1401.
14. Korbecki J., Baranowska-Bosiacka I., Gutowska I., Chlubek D. Biochemical and medical importance of vanadium compounds. Acta Biochim. Polon, 2012, no. 59, pp. 195-200.
15. MacGillivray D.M., Kollmann T.R. The role of environmental factors in modulating immune responses in early life. Front. Immunol, 2014, no. 5, 434 p.
Контактная информация:
Долгих Олег Владимирович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий отделом иммунобиологических методов диагностики e-mail: oleg@fcrisk.ru
Contact information:
Dolgikh Oleg, MD, Professor, Head of the Department of Immunobiological Diagnostic Methods e-mail: oleg@fcrisk.ru
