CC BY
165
© Е.В. Сиятская, С.А. Фрисс, 2010 УДК 340.6
Е.В. Сиятская, С.А. Фрисс ОСОБЕННОСТИ ФИКСАЦИИ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ПРИ СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЙ ЭКСПЕРТИЗЕ СМЕРТЕЛЬНЫХ ОТРАВЛЕНИЙ
ОГУЗ «Челябинское областное бюро судебно-медицинской экспертизы» (нач. - к.м.н. Е.Ф. Швед)
Показана нецелесообразность обычных методов фиксации и хранения гистологического материала в 10% растворе формалина при отравлениях спиртсодержащими жидкостями на основе полигексаметиленгуанидина гидрохлорида. Применены макроскопический, гистологический методы исследования и электронная микроскопия.
Ключевые слова: патоморфология, метод фиксации, отравление, спиртсодержащие жидкости, полигексаметиленгуанидина гидрохлорид.
FEATURE OF FIXING OF THE HISTOLOGICAL MATERIAL AT A FORENSIC MEDICAL EXAMINATION OF MORTAL POISONINGS E.V. Siyatskaya, S.A. Friss
In the present study was demonstrated the inexpediency of usual fixing and storage of histological material in 10% formalin solution at poisonings of alcohol-containing liquids on the basis of the polyhexamethylenguanidine hydrochloride. Macroscopic, histological, electronic-microscopic methods of examinations were used.
Key words: pathomorphology, method of fixing, a poisoning, alcohol-containing liquids, polyhexamethylenguanidine hydrochloride.
Фиксация в патоморфологии представляет собой закрепление, сохранение в выделенном из организма кусочке тканей того строения, которое они имели при жизни, в момент погружения в фиксирующую жидкость [2, 6]. Общеизвестны методы фиксации гистологического материала, изложенные в фундаментальных руководствах по патологической гистологии, гистохимии и гистологической технике [5, 6, 8, 10]. Разнообразие методов фиксации позволяет использовать их эмпирическим путем либо подбирать оптимальный вариант фиксации после анализа результатов проводки тканевых фрагментов и окраски гистологических срезов. В отличие от научно-исследовательской работы, в государственных судебно-экспертных учреждениях РФ при проведении судебно-медицинских экспертиз общепринята фиксация органов и тканей в 10-15% растворе формалина. После подготовки (вырезки) материала для гистологического исследования, последующее хранение оставшегося сырого архива также осуществляют в свежеприготовленном растворе формалина в течение одного года [9].
Сегодня в мире синтезировано более 6 миллионов химических соединений, потенциально опасных для жизни человека, в то же время их токсикокинетика и токсикодинамика изучены недостаточно [4, 11]. При этом разрешающая способность методов судебно-химической экспертизы в определении отравляющих веществ и их метаболитов ограничена по ряду субъективных и объективных причин.
Многие химические вещества, особенно поступившие в незначительных дозах, не способны вызвать в организме характерных структурных изменений [7]. С другой стороны, в отношении отравлений суррогатным алкоголем установлено обязательное изменение морфологической картины в отсутствии положительных результатов токсикологической и химической экспертизы [11].
По нашим материалам в период массовых отравлений в 2006 году каждый третий случай смерти был эпизодом отравления неизвестной этиологии, каждый девятый - отравлением неустановленным гепатотропным ядом. Между тем анализ такого материала требовал сбора и обобщения дополнительных, экспериментальных и литературных данных, текущей и ретроспективной информации о клинико-лабораторном и инструментальном обследовании потерпевших, изучения различных аспектов морфологической картины отравления, разработки комплекса методов исследования. Пригодность 10% водного раствора
формалина для фиксации и длительного хранения сырого архива данного материала в доступной нам литературе не обсуждалась.
Целью настоящей работы стало изучение посмертных изменений ткани печени при отравлении суррогатным алкоголем на полимерной основе после фиксации и длительного хранения.
Материалы и методы исследования
Работа была выполнена на практическом экспертном материале Бюро СМЭ в период с сентября 2006-го по 2007 год. Наши наблюдения охватили 50 случаев отравления спиртовым раствором полигексаметиленгуанидина гидрохлорида (ПГМГ-ГХ). Использованы секционные материалы с последующим применением гистологического метода исследования, а также электронной микроскопии. Полученные при вскрытии трупов фрагменты печени фиксированы в 10% водном растворе формалина. Для приготовления фиксирующей жидкости использовали один объем 40% формальдегида и девять объемов воды. Взятие (забор) гистологического материала для электронной микроскопии было выполнено на секции через 3,5 часа после наступления смерти и формалиновой фиксации, затем из сырого архива спустя год после его хранения в 10% растворе формалина.
Результаты и обсуждение
В секционном материале лиц с отравлением суррогатным алкоголем на полимерной основе во всех случаях регистрировалось поражение печени.
В окраске печени преобладали зеленый и зеленожелтый цвета паренхимы. После суточной фиксации в 10% растворе формалина отмечалось некоторое изменение окраски печени, зеленый цвет становился заметнее, светлее, иногда принимая ярко-зеленые тона. В отдельных эпизодах отравления после суточной фиксации проявлялся зеленый оттенок окрашивания печени в тех случаях, когда отмечались ее бурая и желтая окраска на вскрытии. Хорошо контрастировал крап желтого, зеленого, красного, коричневого, фиолетового цветов.
В судебно-химической экспертизе общеизвестны и постоянно используются на практике качественные химические пробы, отражающие сохранение или изменение окраски биологических жидкостей в присутствии отравляющих веществ и их метаболитов [3, 13]. Например, формалиновая проба Либмана при отравлении окисью углерода (СО). При разбавлении формалином в равных пропорциях, нормальная кровь приобретает коричнево-
черное окрашивание, кровь в присутствии окиси углерода сохраняет свой цвет. Фиксация гистологического материала при отравлении СО придает розовое окрашивание раствору формалина и подчеркивает изменение цвета органов и тканей в диапазоне от бледно-розового до темно-малинового. Фиксирующая жидкость в присутствии секционного материала лиц, погибших от отравления суррогатным алкоголем на полимерной основе, по нашим наблюдениям, приобретала зеленый оттенок.
При последующем гистологическом исследовании печени были установлены признаки токсического гепатита с гепатонекрозами в центрах печеночных долек. В той же локализации преобладали крупнокапельная жировая дистрофия гепатоцитов, признаки внутрипеченочного интралобулярного холестаза. В просветах желчных канальцев, в цитоплазме гепатоцитов располагались пигментные включения темно-коричневого, насыщенно и темнозеленого цветов, которые избирательно окрашивались на трехвалентное железо, липофусцин, полимеры, обладали неравномерной анизотропией. На фоне жиро-белкового детрита в центральных отделах долек пигментированные включения чаще имели определенную форму и достаточно четкие границы. При окраске пикрофуксином по ван Гизону, помимо перисинусоидального, перицеллюлярного разрастания фуксинофильных волокон, отмечалось их наличие внутри цитоплазмы гепатоцитов. Фуксинофильные структуры оплетали пигментные депозиты в гепатоцитах, а также внутриканальцевые пигментные цилиндры, формируя полный или прерывистый ободок, либо наложения зернистого вида.
Как после суточной фиксации, так и после длительного хранения материала в 10% растворе формалина при окраске печени суданом III и суданом черным В удавалось выявить жиры и липоиды (Рис. 1). Такие же результаты окраски на жир после хранения материала в формалине описаны А.Г. Сапожниковым и А.Е. Доросевичем [10], в отличие от других авторов [5, 6]. На тех же сроках фиксации и хранения нами обнаружены полосатые включения липидов при электронной микроскопии.
Ультраструктурное исследование пигментного обмена, пигментированных патологических включений выявило повреждение материала после длительного хранения. После кратковременной фиксации на фоне
Рис. 1. Наличие жиров и липоидов в центральных отделах долек печени при токсическом гепатите с холестазом. Ок.х10, об.х40. Окраска суданом черным В.
- Суданофильные крупные и мелкие капли в цитоплазме
гепатоцитов;
- суданофильные включения в некротическом детрите.
посмертных изменений определялись включения высокой электронной плотности в расширенных просветах канальцев, в гепатоцитах (Рис. 2). Учитывая результаты исследования на светооптическом уровне, проявления холестаза и смешанной дистрофии, мы отождествили эту
Рис. 2. Электронная микроскопия желчного канальца при токсическом гепатите с холестазом. Ув. х8000.
- Скопление неоднородного материала высокой электронной
плотности в просвете желчного канальца;
- наличие мелких включений высокой электронной плотности в
цитоплазме гепатоцитов, образующих стенку канальца.
Рис. 3. Электронная микроскопия гепатоцита при отравлении суррогатным алкоголем на полимерной основе. Ув.х4000.
- Оптически пустое включение в цитоплазме гепатоцита,
сохранившиеся краевые отделы которого представлены материалом неравномерно высокой электронной плотности;
- вокруг растворенного в 10% формалине внутрицитоплазмат
ического включения и инородного материала умеренной неравномерной электронной плотности лежат закладки коллагеновых волокон.
картину с накоплением желчных кислот, которые обычно хорошо связывают осмий, нитрат свинца, что и придает им высокую электронную плотность. Мы отметили также неоднородность материала внутри канальцев по сравнению с холестазом, описанным на ультраструктурном уровне у
В.В. Серова, К. Лапиша [12]. Длительное хранение привело к вымыванию этого материала из просветов желчных канальцев. В единичных канальцах удалось обнаружить пристеночные мелкие глыбчатые скопления материала высокой электронной плотности. В цитоплазме гепатоцитов формировались пустоты с четкими границами (Рис. 3). Вымывание внутриклеточных патологических включений было неполным, сохранились их краевые фрагменты, характеризующиеся высокой электронной плотностью. Массы неоднородной умеренной электронной плотности и растворившиеся внутрицитоплазматические включения овоидной формы окаймлялись закладками разнонаправленных коллагеновых волокон. Это позволило думать об инородной природе данного материала, неравномерно накапливающего пигмент.
Известно, что в патогистологии универсальных фиксирующих веществ и фиксирующих смесей в настоящее время нет. Один и тот же фиксатор может дать совершенно пр отив опо ложный р езультат при иссле дов ании различных компартментов клеток и тканей, исказить морфологическую картину, привнести артефициальные изменения [1]. Формалин хорошо сохраняет форму, окраску и структуру препарата, обладает хорошей диффузионной способнос-
тью, относительно быстро проникает в глубокие отделы крупных органов [2, 5, 6, 8, 10].
Фрагменты тканей и органов могут сохраняться в формалине годами, не теряя способности к гистологическому окрашиванию [10]. Для исследования нарушений пигментного обмена этот простой фиксатор мало предпочтителен [5]. Установлено, что под влиянием формальдегида белковые коллоиды микроскопических структур становятся кислее, следовательно - базофильнее при гистологическом окрашивании [10]. Влияние 10% водного раствора формалина на катиониты, к которым относится ПГМГ-ГХ, не описано. Нужно отметить, что ПГМГ-ГХ при охлаждении до 24°С приобретает стекловидную плотность, существует в кристаллоидном и аморфном виде. По мнению А.Г. Сапожникова и А.Е. Доросевича [10], для лабильных структур, которые при жизни находятся в состоянии обратимых гелей, золей или промежуточных между ними состояниях, пока не известно ни одной жидкости, способной сохранить их.
Таким образом, общепринятый для фиксации и хранения в государственных судебно-экспертных учреждениях РФ 10% водный раствор формалина не является предпочтительным в случаях отравления спиртсодержащими жидкостями на основе ПГМГ-ГХ. При длительном хранении гистологического материала происходит вымывание патологических пигментсодержащих включений в печени, что стирает гистоморфологические особенности картины токсического гепатита с холестазом.
Литература:
1. Витер В.И., Пермяков A.B. Судебно-медицинская гистология:руководство для врачей - Ижевск-Новосибирск, 2005. - 214 с.
2. Волкова О.В. Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. -М.: Медицина, 1982. -304с.
3. Крамаренко В.Ф. Токсикологическая химия. - К.: Выща шк., Головное изд-во, 1989. -447 с.
4. КучинаЕ.В. Судебно-медицинская диагностика отравлений некоторыми суррогатами алкоголя: автореф. дисс. ... к.м.н. - Москва, 2009.
5. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. - Москва, 1969. - 645 с.
6. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. - Ленинградское отделение, «Медицина», 1969. - 423 с.
7. Мусийчук Ю.И. Куценко С.А., Бушуев Е.С., Рыбалко В.М. Врачебная экспертиза при отравлениях химическими веществами. - СПб: ООО «Издательство ФОЛИАНТ», 2007. - 208 с.
8. Пирс Э. Гистохимия теоретическая и прикладная: пер. с англ. /Подред. В.В. Португалова. - М.: Изд. иностр. лит., 1962. - 925 с.
9. Приказ №346н от 12.05.10 г. «Об утверждении порядка организации и производства судебно-медицинских экспертиз в государственных судебно-экспертныхучреждениях Российской федерации» //Росс, газета, от 20.08.2010 г.
10. СапожниковА.Г.,Доросевич А.Е. Гистологическая имикроскопическая техника:руководство. - Смоленск, «SAU», 2000. - 476 с.
11. Сафрай А.Е. Судебно-медицинские аспекты отравлений некоторыми спиртсодержащими жидкостями: автореф. дисс. ... канд. мед. наук. - СПб, 1996.
12. Серов В.В., Лапиш К. Морфологическая диагностика заболеваний печени. - М.: Медицина, 1989. - 336 с.
13. Швайкова М.Д. Судебная химия. - М., Медгиз, 1959. -410 с.
© С.А. Фрисс, 2010 УДК 340.6
С.А. Фрисс
ВОЗМОЖНОСТИ МЕТОДА ПОЛЯРИЗАЦИОННОЙ МИКРОСКОПИИ В ЭКСПЕРТИЗЕ ОТРАВЛЕНИЙ СУРРОГАТНЫМ АЛКОГОЛЕМ НА ПОЛИМЕРНОЙ ОСНОВЕ
ОГУЗ «Челябинское областное бюро судебно-медицинской экспертизы» (нач. - к.м.н. Е.Ф. Швед) Представлено патоморфологическое исследование печени и почек при отравлении спиртовыми растворами полигексаметиленгуанидина гидрохлорида. Отражены возможности метода поляризационной микроскопии.
Ключевые слова: отравление, полигексаметиленгуанидина гидрохлорид, печень, почки, поляризационная микроскопия.
POSSIBILITIES OF A METHOD OF POLARISING MICROSCOPY AT EXAMINATION OF POISONINGS BY SUBSTITUTE ALCOHOL ON A POLYMERIC BASIS
S.A. Friss
Pathomorphological research of the poisoning spirit solution of the polyhexamethylenguanidine hydrochloride in Cheljabinsk region is presented. Posibilities of polarising microscopy of a kidney and a liver are revealed.
Key words: a poisoning, polyhexamethylenguanidine hydrochloride, a liver, a kidney, polarising microscopy.
В последнее время усилился интерес к возможности низмами, создания антибактериальных, антивирусных
использования полимеров для борьбы с микроорга- и противогрибковых полимерных препаратов, среди
