CC BY
14
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
1B1
Разработанные ген-активированные матриксы на основе коллагена и PRP, импрегнированные полиплексами с геном BMP2, обладают высокой цитосовместимостью, обеспечивают высокий уровень трансфекции культур ММСК и оказывают остеоиндуктивное действие in vitro, что позволяет рассматривать данные матриксы как перспективный материал для регенерации костной ткани. Работа выполнена в рамках государственного задания Минобрнауки России для ФГБНУ «МГНЦ».
ВЛИЯНИЕ ТРИПЕПТИДА PRO-GLY-PRO НА РЕГЕНЕРАЦИЮ НЕЙРОНАЛЬНОЙ КУЛЬТУРЫ ПРИ МЕХАНИЧЕСКОЙ ТРАВМЕ IN VITRO
A.А. Некрасова1, А.Е. Згодова1, М.М. Гончаров2,
B.Г. Пинелис1, С.Е. Бадмаева3, З.В. Бакаева1, 3
1 НМИЦ здоровья детей, Москва, Россия
2 Сколковский институт науки и технологий, Москва, Россия
3 Калмыцкий государственный университет им. Б.Б. Городовикова, Элиста, Россия
e-mail: nekrasovanas@gmail.com
Ключевые слова: первичная нейроглиальная культура, черепно-мозговая травма, глутаматная эксайтотоксичность, отсроченная кальциевая дизрегуляция, митохондриальный потенциал, Pro-Gly-Pro, нейропротекторный эффект.
Черепно-мозговая травма (ЧМТ) является ведущей причиной смерти и инвалидности в детском возрасте. В среднем число случаев ЧМТ составляет 0,3% численности детской популяции и сопровождается высоким уровнем смертности [1]. Исходя из патогенеза развития ЧМТ, активные вещества, действующие сразу после развития патологических процессов и способные влиять на несколько механизмов клеточной защиты, оставаясь при этом безвредными на системном уровне, имеют терапевтический потенциал для снижения объемов повреждения вследствие ЧМТ.
Ранее нами была разработана модель механической нейротравмы in vitro [2], позволяющая посредством одновременного измерения динамики [Ca2+]i и ATm отслеживать как острые, так и отставленные во времени эффекты механической травмы. Экспериментальная модель основана на том, что травма мозга сопровождается глутаматной эксайтотоксичностью, нарушением кальциевого гомеостаза и митохондриального потенциала.
Было показано, что эндогенный трипептид Pro-Gly-Pro (PGP), в экспериментах на первичной нейроглиаль-ной культуре [3] уменьшает нарушение кальциевого гомеостаза и оказывает нейропротекторный эффект в условиях глутаматной эксайтотоксичности.
В данной работе мы исследовали влияние PGP на выживаемость нейронов и изменения [Ca2+]i и ATm клеток первичной нейроглиальной культуры коры головного мозга после механического нарушения ее целостности in vitro.
Результаты показали, что при длительном воздействии на клеточную культуру PGP (10 рМ в течение 7 дней) увеличивает lag-период развития отсроченной кальциевой дизрегуляции (ОКД), способствует более быстрому наступлению реполяризации митохондрий и восстановлению исходно низких значений [Ca2+] i в нейронах после воздействия субтоксических (33 рМ) и токсических доз Glu (100 рМ). Другим аспектом его пролонгированного влияния на травмированные культуры
является увеличение выживаемости клеток, а также усиление их способности к миграции в повреждённую область. При однократном введении PGP (10 рМ) снижает амплитуду флуктуаций [Ca2+]i, индуцируемых механической травмой.
Таким образом, PGP, предотвращая развитие кальциевой дизрегуляции и митохондриальной дисфункции, защищает нейроны от гибели, вызванной механической травмой в модели in vitro. Полученные данные указывают на перспективность его использования для ограничения патологических процессов в посттравматический период. Исследование выполнено при финансовой поддержке Минздрава России, проект № ААААА19-119012590191-3, грантов Минобрнауки России, № ФГФУ-2022-0012.
Литература:
1. Сабиров Д.М., Росстальная А.Л., Махмудов М.А. Вестник экстренной медицины. 2019. № 2.
2. Bakaeva Z.V., Surin A.M., Pinelis V.G. et al. Dokl. Biochem. Bio-phys. 2020. V. 491(1).
3. Bakaeva Z., Goncharov M., Krasilnikova I. et al. Int. J. Mol. Sci. 2022. V. 23. P. 3858.
ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ
NOD-1, TLR8, ZBP-1, RIG-1 В МИОМЕТРИИ
ПРИ ПРЕЭКЛАМПСИИ
Н.В. Низяева1, Э.Ю. Амирасланов2,
К.А. Артемьева1, И.А. Степанова1,
М.В. Шамаракова3, Н.Б. Тихонова1
1 НИИМЧ им. А.П. Авцына ФГБНУ РНЦХ им. Б.В. Петровского, Москва, Россия
2 ФГБУ НМИЦ акушерства, гинекологии
и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава РФ, Москва, Россия
3 Центр Планирования семьи и Репродукции (ЦпСиР), Москва, Россия
e-mail: sunset_whitch@mail.ru
Ключевые слова: преэклампсия, миометрий, паттерн-рас-
познающие рецепторы.
Патогенез ПЭ связывают с неполноценностью тро-фобласта и недостаточной трансформацией спиральных артерий [1]. Экспрессия паттерн-распознающих рецепторов (ПРР) в миометрии при ПЭ практически не изучена.
Работа выполнена на образцах миометрия 22 женщин 18-43 лет, на сроке 27-39 недель гестации. У 12 пациенток диагностировали ПЭ (6 — тяжелое течение, 6 — умеренное), группу контроля составили 10 женщин с не-осложнённой доношенной беременностью. Этическая экспертиза: протокол заседания комитета по этике биомедицинских исследований ФГБУ «НМИЦАГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России № 6 от 09.06.2016. Все женщины подписали добровольное информированное согласие на участие в исследовании. Фрагменты миометрия размерами 1 х0,5-0,7х0,3 см получали во время кесарева сечения с передней стенки матки. На парафиновых срезах выполняли иммуногистохи-мическое (ИГХ) исследование с применением антител (АТ) к TLR (Toll-like receptor) 8, NOD (nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein)-1, RIG (retinoic acid-inducible gene)-1, ZBP (zip-code-binding protein)-1. Интенсивность ИГХ окрашивания оценивали в единицах оптической плотности с помощью микроскопа Nikon Eclipse (х400) и программного обеспечения NIS-Elements
162
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
(Czech Republic). Данные анализировали в программе Sigmastat 3.5.
У пациенток группы контроля выявили умеренную экспрессию ПРР в структурах миометрия, эндотелии сосудов и ФБК. При ПЭ отмечали чередование участков с выраженным окрашиванием и его потерей. Выявили снижение окрашивания NOD1 и RIG1 в миометрии и ФБК, особенно при тяжелой ПЭ (р<0,05), тенденцию к снижению в эндотелии (р<0,1). Отмечали тенденцию к усилению окрашивания в миометрии ZBP1 и TLR8 (р<0,1), в ФБК и эндотелии — значимое усиление окрашивания ZBP1 (р<0,05). Т.о., нарушение экспрессии ПрР при ПЭ в структурах миометрия, показывает, что при этой патологии изменяются как инвазивные свойства трофобласта, так и характеристики миометрия, что демонстрирует его важную роль в патогенезе ПЭ. Работа выполнена в рамках темы ГЗ № ЕГИСУ НИОКТР — 122030200534-4
Литература:
1. Dong X., Gou W., Li C., et al. Pregnancy Hypertens. 2017. N 8.
P. 60-64.
МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ ПТГ-ЗАВИСИМОЙ КАЛЬЦИЕВОЙ СИГНАЛИЗАЦИИ В ПОСТНАТАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТКАХ
М.Ю. Николаев1, П.А. Тюрин-Кузьмин1,
К.Ю. Кулебякин1' 2, Д.А. Найда3, М.В. Воронцова2
1 Кафедра биохимии и молекулярной медицины, Факультет фундаментальной медицины МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
2 Институт регенеративной медицины, МНОЦ МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: ЗГлавный клинический военный госпиталь им. Н.Н. Бурденко, Москва, Россия mikhail.nikolaev01@bk.ru
Ключевые слова: кальциевая сигнализация, МСК, парат-гормон, ингибиторный анализ.
Ранее в нашем коллективе была выявлена гетерогенность кальциевых ответов при воздействии парат-гормона у популяций мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (МСК), выделенных из жировой ткани и надкостницы. Преобладание определенного вида кальциевого ответа соотносится с различиями в последующей дифференцировке клеток. В МСК, выделенных из жира живота, регистрируется плавное повышение уровня внутриклеточного кальция, паратгормон влияет на клетки проостеогенно. Культуры МСК, выделенные из надкостницы, в ответ на действие паратгормона отвечают преимущественно осциллирующими кальциевыми ответами, и остеогенная дифференцировка подавляется. При активации основного рецептора паратгормона ПТГР1 запускаются по меньшей мере два сигнальных пути: Gq/фосфолипаза С/кальций и Gs/аденилатцикла-за/цАМФ. В данной работе был проведен игибиторный анализ сигнальных путей ПТГР1 для выяснения молекулярных механизмов формирования различных сигнальных ответов при действии на клетки ПТГ [1,2].
Из полученных данных можно сделать вывод, что осциллирующие всплески кальция зависят от базального уровня внутриклеточного кальция. При его снижении, путем блокирования поступления ионов из лизосомаль-ных источников и канлов L-типа, кальция недостаточно в цитоплазме для запуска осцилляций. Плавный прирост
может быть обусловлен притоком кальция из саркоплаз-матического ретикулума через рианодин-чувствитель-ные каналы. Это подтверждается уменьшением ответов данного типа при использовании рианодина, и их увеличением при нарушении механизмов кратковременных кальциевых ответов. Так блокатор кальциевых каналов L-типа несколько снижает базальный уровень внутриклеточного кальция, которого становиться недостаточно для запуска пикового ответа, но, по-видимому, достаточно для открытия кальций-зависимых рианодин-чувствитель-ных каналов. Во всех типах кальциевых ответов задействованы И3ФР, так как при использовании блокатора И3ФР (2APB) изменение уровня кальция в цитоплазме перестало наблюдаться. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ № 19-75-30007.
Литература:
1. Kotova P.D. и др. Biochim. Biophys. Acta - Mol. Cell Res. 2014.
Т. 1843. № 9. С. 1899-1908.
2. Воронцова М.В. и др. Гены и клетки. 2019. Т. 14. С. 57.
ОСОБЕННОСТИ ИЗМЕНЕНИЯ ХАРАКТЕРИСТИК КОСТНЫХ ИМПЛАНТАТОВ ПРИ КОМБИНИРОВАННОЙ СТЕРИЛИЗАЦИИ
Н.А. Николаева1, В.В. Розанов1, 2 3, И.В. Матвейчук3, А.П. Черняев1, 2
1 Северо-Восточный Федеральный Университет им.М.К. Аммосова, Якутск, Россия
2 МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
3 ФГБНУ Всероссийский НИИ лекарственных и ароматических растений, Москва, Россия
e-mail: larsoon696@mail.ru
Ключевые слова: костные имплантаты, комбинированная стерилизация, радиационная обработка, озоновое воздействие, биоимплантология.
Общим недостатком большинства известных методов стерилизации костных имплантатов является высокая вероятность побочных эффектов, связанных с химическими, термическими и другими воздействиями и проявляющихся в изменении структуры, морфомехани-ческих параметров и характеристик, а также нарушении остеоиндуктивных свойств образца [1].
При стандартных для радиационной стерилизации дозах облучения (25 кГр), и даже при более щадящих дозах (15 кГр), пучок ускоренных электронов деминерализует и вызывает пористость образцов, что приводит к снижению эффективности свойств биоимплантатов [2], подтверждает необходимость уменьшения дозы облучения при сохранении эффективности стерилизации. Результаты исследования указывают на эффективность предложенной ранее методики комбинированной двух-этапной обработки костных биоимплантатов с использованием озоновой стерилизации на первом этапе и воздействием ионизирующего излучения на втором этапе, позволяющей достичь стерилизующего эффекта при величине поглощенной дозы 11-12 кГр [3].
С помощью ИК-спектроскопии, растровой электронной и атомно-силовой микроскопии проведен сравнительный анализ влияния озонового воздействия на образцы на первом этапе обработки. Показано, что в выбранном диапазоне параметров такое воздействие не приводит к морфологическим изменениям поверхности образца, но существенно изменяет элементный состав [4]. В частности, отмечен рост
