CC BY
17
Серия «Биология. Экология»
2011. Т. 4, № 4. С. 39-45 Онлайн-доступ к журналу: http://isu. ru/izvestia
И З В Е С Т И Я
Иркутского
государственного
университета
УДК 579.841.95-092.9+612.112.94+576.367
Особенности динамики апоптоза клеток крови экспериментальных животных, иммунизированных липополисахаридом туляремийного микроба разных подвидов
В. В. Войткова, В. И. Дубровина, С. А. Татарников, В. Б. Николаев,
Ж. А. Коновалова, А. С. Сорокоумова
ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора, Иркутск E-mail: adm@chumin.irkutsk.ru
Аннотация. Проведено сравнительное изучение действия липополисахарида (ЛПС) Francisella tularensis разных подвидов, выделенных твин-экстракцией и водно-фенольным методом, на интенсивность апоптоза клеток крови экспериментальных животных в условиях in vivo. С помощью современных методов клеточной биологии установлено, что ЛПС F. tularensis, независимо от подвидовой принадлежности, оказывает влияние на уровень циркулирующих апоптотических клеток. Сравнительный анализ показал, что способность клеток крови фиксировать на своей поверхности AnV в Са2+-зависимой среде в ответ на введение этих препаратов зависит как от подвидовой принадлежности, так и вирулентности F. tularensis.
Ключевые слова: Francisella tularensis, липополисахарид, Т-лимфоциты, апоптоз, проточный цитофлуори-метр.
Введение
История изучения возбудителя туляремии -Francisella tularensis - насчитывает более ста лет, тем не менее, до настоящего времени не собраны исчерпывающие сведения о факторах патогенности этой бактерии и механизмах её действия [6; 9; 10; 12]. В связи с этим особое внимание уделяется не только изучению патогенеза и иммуногенеза самого микроорганизма, но и детерминант вирулентности, которые могут быть использованы при конструировании химической вакцины. В частности, для создания вакцин важно знать, какие антигены являются протективными, а какие компоненты бактерий подавляют защитную функцию иммунной системы организма [2; 11].
Одним из возможных факторов патогенности туляремийного микроба рассматривается липополисахарид (ЛПС), поскольку с ним традиционно связывают реализацию многих жизненно важных функций бактерий [5]. F. ШШ-rensis является внутриклеточным паразитом и ведущим звеном в защите организма хозяина является клеточный фактор, т. е. макрофаги и лимфоциты. Известно, что F. tularensis вызывает имеющий значительную роль в механизмах сохранения клеточного баланса апоптоз инфицированных культур клеток мыши и че-
ловека [8]. Влияние ЛПС на апоптоз клеток крови не изучено, в связи с чем оценка уровня апоптоза по способности этих клеток фиксировать на своей поверхности фосфолипид-связывающий протеин АппехтУ (ЛпУ) в Са2+-зависимой среде с помощью современных методов клеточной биологии [7] представляется актуальным методом исследования особенностей реагирования макроорганизма на ЛПС F. tularensis.
Цель настоящей работы - изучить интенсивность апоптоза клеток крови экспериментальных животных, иммунизированных ЛПС F. tularensis разных подвидов.
Материалы и методы
В работе использовали 144 сертифицированных (НПО «Вектор», Новосибирск) беспородных белых мыши с массой тела 15-20 г. Животных выводили из эксперимента в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г.).
В качестве объекта исследования использовали препараты ЛПС, выделенные методом твин-экстракции (ЛПСт) [4] и водно-
фенольным методом (ЛПСв) [1] из клеток F. tularensis 8иЬ8р. holarctica 15 НИИЭГ (вакцинный штамм), F. tularensis 8иЬ8р. tularensis
Schu 11 (Dd, т. е. доза антигена, вызывающая гибель 100 % животных, для белых мышей составляет 1 КОЕ), F. tularensis subsp. holarctica И-250 (Dd - 10 КОЕ), F. tularensis subsp. mediasiatica А-120 (Dd - 10 КОЕ), F. tularensis subsp. novicida Utah 112 (авирулентен для белых мышей в дозе 1000 КОЕ). В качестве типичного ЛПС использовали коммерческий препарат ЛПС Salmonella enteritidis (Sigma). Контролем служили клетки интактных животных. При исследовании действия ЛПС препараты вводили животным подкожно в дозе 10 мг в 0,5 мл физиологического раствора. Учёт результатов проводили на 3-и, 6-е и 9-е сутки.
Материалом для исследования служила ге-паринизированная кровь мышей. В 100 мкл крови добавляли лизирующий буфер FACS Lysing Buffer (BD Biosciences). Через 15 мин центрифугировали при скорости 1000 об/мин в течение 5 мин, осадок ресуспендировали в 1 мл десятикратного AnV-связывающего буфера (BD Biosciences) и отмывали при 1000 об/мин в течение 5 мин. Отмывку повторяли дважды. Затем окрашивали моноклональными антителами. Фенотип лимфоцитов и их жизнеспособность определяли с использованием моноклональных антител (Becton Dickinson) в следующей панели: CD45-АРС/CD3-FITC/CD4-Alexa-700/ОТ8-АРС-Су7/ОТ19-РБ-Су7М^-РЕ/7-AAD. Анализ окрашенных образцов проводили на проточном цитофлуориметре BD FACSCanto™ II (Becton Dickinson) в программе BD Diva 6.0. В каждой пробе анализировались 10 000 событий. После выделения лимфо- и моноцитарного гейта определяли количество ранних апоптотических клеток ^nV^-AAD-) в режиме DotPlot. Тем же способом оценивали процент В-лимфоцитов (CD3-CD19), Т-лимфоцитов (CD3), Т-хелперов (CD3CD4) и цитотоксических Т-лимфоцитов (CD3CD8), находящихся на стадии раннего апоптоза.
Статистическую обработку данных проводили при помощи стандартного пакета прикладных программ «Statistica», версия 6 (StatSoft, Inc 19842001, ИПЧИ 31415926535897) с использованием U-критерия Манна-Уитни. Различия считали достоверными при уровне значимости р < 0,05. Корреляционный анализ проводили методом ранговой корреляции Спирмена (rs). Данные представлены в виде среднего арифметического значения ± стандартное отклонение (M ± s) из n = 4.
Результаты и обсуждение
Имеющиеся в литературе сведения о влиянии ЛПС туляремийного микроба на гибель
клеток крови экспериментальных животных скудны. Известно, что в реализации апоптоза клеток макроорганизма задействованы различные механизмы. Ранее нами выявлена тенденция ЛПС F. tularensis к активации бактерицидных систем фагоцитов и ключевого фермента апоптоза (каспаза-3) в условиях in vitro, тем не менее, различия между подвидами не были достоверными [3].
В результате проведённого эксперимента установлено, что доля апоптотических моноцитов и лимфоцитов в периферической крови экспериментальных животных, иммунизированных препаратами ЛПС S. enteritidis и F. tularensis, во все сроки наблюдения выше, чем в контроле (табл. 1). Так, показано, что способность клеток крови фиксировать на своей поверхности AnV в Ca^-зависимой среде достоверно повышалась к 3-м суткам наблюдения (Р = 0,025, по сравнению с контролем). Тем не менее, доля апоптотических Т-хелперов (табл. 2) при иммунизации мышей ЛПС F. tularensis subsp. holarctica и F. tularensis subsp. mediasiatica (независимо от способа получения -ЛПСт/в), а также цитотоксических Т-лимфоцитов в случае иммунизации мышей ЛПСт F. tularensis subsp. holarctica (10,3 %), была достоверно выше по сравнению с аналогичными показателями экспериментальных животных, иммунизированных препаратами ЛПС туляремийного микроба других подвидов (Р = 0,049). Наименее выраженная стимуляция апоптоза цитоток-сических Т-лимфоцитов отмечена в случае инокуляции мышам ЛПСт F. tularensis subsp. tularensis (Р = 0,049). При сравнительном анализе показателей апоптотических CD3CD4+ клеток всех групп экспериментальных животных, иммунизированных препаратами ЛПС F. tularensis разных подвидов, на 6-е сутки наблюдения достоверных различий не установлено. Для цитотоксических Т-лимфоцитов на 6-е сутки интенсивный апоптоз отмечен у животных, иммунизированных ЛПСт/в F. tularensis subsp. holarctica 15, ЛПСт F. tularensis subsp. holarctica И-250 и ЛПСв F. tularensis subsp. tularensis (Р = 0,037). Показатели содержания AnV+В-лимфоцитов на 3-и сутки у экспериментальных животных, иммунизированных ЛПСт F. tularensis subsp. tularensis, и на 6-е сутки - ЛПСт/в F. tularensis subsp. mediasiatica и ЛПСт F. tularensis subsp. holarctica И-250 были достоверно низкими по сравнению с другими ЛПС F. tularensis (Р = 0,049).
Таблица 1
Показатели апоптоза клеток крови мыши, иммунизированных липополисахаридом S. enteritidis и F. tularensis разных подвидов (M±s)
Объект исследования Лимфоциты, % Моноциты, %
Сроки наблюдения, сутки
3 6 9 3 6 9
Контроль 0,07±0,01 0,12±0,02
S. enteritidis 0,7±0,1* 15,3±2,2* 1,0±0,3 0,8±0,2* 5,0±0,9* 1,2±0,1*
ЛПС F. tularensis, выделенный твин-экстракцией
F. tularensis subsp. holarctica 15 4,9±0,5* 11,2±1,8* 4,6±0,6* 6,1±1,5* 3,8±0,4* 5,4±0,9*
F. tularensis subsp. holarctica И-250 8,2±1,8* 16,7±1,9* 2,3±0,7* 6,9±1,3* 3,8±1,1* 3,1±0,7*
F. tularensis subsp. mediasiatica 6,2±1,8* 11,9±2,4* 1,8±0,3* 7,3±1,7* 2,9±0,8* 2,7±0,7*
F. tularensis subsp. novicida 2,7±0,8* 17,9±1,4* 5,3±1,2* 3,9±0,6* 5,3±0,9* 4,5±0,4*
F. tularensis subsp. tularensis 3,5±0,8* 15,1±2,1* 2,6±0,7* 2,7±0,5* 2,4±0,5* 4,3±0,9*
ЛПС F. tularensis, выделенный водно-фенольным методом
F. tularensis subsp. holarctica 15 3,9±0,6* 14,7±1,2* 3,9±0,9* 4,3±1,2* 4,1±1,0* 4,2±1,0*
F. tularensis subsp. holarctica И-250 5,4±1,4* 17,1±2,2* 5,8±1,1* 7,0±1,1* 5,1±0,8* 5,7±1,6*
F. tularensis subsp. mediasiatica 6,5±1,5* 16,2±1,1* 8,8±1,7* 6,0±1,7* 3,1±0,2* 8,7±2,5*
F. tularensis subsp. novicida 2,2±0,5* 18,7±1,7* 4,7±1,0* 4,2±0,7* 6,1±0,9* 5,6±0,7*
F. tularensis subsp. tularensis 2,8±0,5* 15,5±2,4* 3,8±0,9* 3,2±0,6* 3,8±0,7* 4,9±1,2*
Сравнительный анализ влияния ЛПС, выделенных из бактерий двух штаммов подвида holarctica, показал, что ЛПСт F. tularensis subsp. holarctica И-250 стимулирует апоптоз субпопуляций лимфоцитов на 3-и сутки в большей степени, чем ЛПСт F. tularensis 15, а на 6-е сутки статистически значимое различие было отмечено только для В-лимфоцитов, при-этом уровень апоптоза этих клеток был выше у мышей, иммунизированных ЛПС вакцинного штамма (Р = 0,047). Установлено, что ЛПС F. tularensis 15, полученный водно-фенольным методом, на 6-е сутки оказывает влияние на содержание AnV+ цитотоксических Т-лимфоцитов в большей степени, чем ЛПС F. tularensis subsp. holarctica И-250 (Р = 0,040).
У мышей, иммунизированных препаратами ЛПС F. tularensis, независимо от подвидовой принадлежности и способа их выделения на 9-е сутки наблюдения имели место высокие значения числа апоптотических клеток по сравнению с контролем (Р = 0,025). Тем не менее, в случае ЛПСт F. tularensis subsp. holarctica и mediasiatica (см. табл. 1) отмечалось значи-
тельное снижение содержания ЛпУ+ моноцитов и субпопуляций лимфоцитов не только по сравнению с 3-ми и 6-ми сутками (Р = 0,040), но и с показателями для животных, иммунизированных препаратами ЛПС туляремийного микроба других подвидов (Р = 0,049). Тем не менее, эти значения были достаточно высоки относительно контроля (Р = 0,025). Установлено, что на 9-е сутки наблюдения у мышей, иммунизированных препаратами ЛПС туляре-мийного микроба разных подвидов, апоптоз СБ3+СБ4+ и СБ3+СБ8+-лимфоцитов по сравнению с В-лимфоцитами был интенсивней в 1,4-4,2 раза (Р = 0,040). Следует отметить, что в случае иммунизации мышей ЛПС S. єШєгШ-dis к 9-м суткам отмечалось снижение содержания лимфоцитов и их субпопуляций, связанных с ЛпУ, до контрольных значений (см. табл.
1, 2). Наибольшие показатели процентного содержания моноцитов и субпопуляций лимфоцитов на стадии апоптоза выявлены у мышей, иммунизированных ЛПСв F. tularensis 8иЬ8р. mediasiatica (Р = 0,049). Кроме того, на 9-е сутки наблюдения установлена способность
ЛПСв К. tularensis 8иЬ8р. mediasiatica влиять на интенсивность апоптоза в большей степени, чем аналогичного ЛПС, выделенного твин-экстракцией (Р = 0,049). На 6-е и 9-е сутки у мышей, иммунизированных ЛПСв К. tularensis 8иЬ8р. holarctica, выявлен интенсивный апоптоз В-лимфоцитов. Высокие показатели апоптоти-ческих цитотоксических Т-лимфоцитов отмечены на 6-е сутки в случае ЛПСт К. tularensis 8иЬ8р. holarctica и ЛПСв К tularensis 8иЬ8р. Ш-larensis (Р = 0,049).
Сравнительный анализ полученных значений показал, что показатели содержания циркулирующих ЛпУ -моноцитов во все сроки наблюдения между группами экспериментальных животных, иммунизированных препаратами ЛПС К. tularensis, не имели статистически приходится на 6-е сутки (Р = 0,040).
Таблица 2
Показатели апоптоза субпопуляций лимфоцитов мыши, иммунизированных липополисахаридом S. enteritidis и F. tularensis разных подвидов (M±s)
Объект исследования В-лимфоциты, % Т-хелперы (CD3+CD4+), % Цитотоксические Т-лимфоциты (CD3+CD8+), %
Сроки наблюдения, сутки
3 6 9 3 6 9 3 6 9
Контроль 0,12±0,03 0,34±0,07 0,15±0,04
ЛПС S. enteritidis 0,8±0,2* 16,0±0,6* 0,4±0,1 1,7±0,1* 15,9±1,7* 1,2±0,1 0,6±0,1* 12,9±2,1* 1,4±0,2*
ЛПС F. tularensis, выделенный твин-экстракцией
F. tularensis subsp. holarctica 15 4,6±1,2* 15,3±1,5* 4,1±0,7* 7,8±1,3* 14,9±1,1* 9,4±1,9* 6,2±1,9* 12,9±2,2* 7,2±1,4*
F. tularensis subsp. holarctica И-250 7,1±1,4* 9,5±2,1* 1,9±0,3* 11,4±0,5* 17,7±2,7* 6,1±1,2* 10,3±0,9* 14,7±3,4* 3,3±0,6*
F. tularensis subsp. mediasiatica 6,1±1,1* 8,3±2,3* 1,4±0,3* 9,6±1,6* 10,9±1,3* 5,9±0,8* 7,8±1,9* 6,2±1,1* 3,7±0,8*
F. tularensis subsp. novicida 3,4±0,8* 15,8±3,7* 2,3±0,5* 5,6±1,0* 16,9±0,9* 7,1±1,1* 6,3±1,2* 7,7±1,8* 5,8±0,9*
F. tularensis subsp. tularensis 2,9±0,5* 12,5±2,1* 2,1±0,4* 4,9±0,9* 14,4±1,5* 7,5±1,9* 3,5±0,6* 9,4±1,1* 5,1±0,9*
ЛПС F. tularensis, выделенный водно-фенольным методом
F. tularensis subsp. holarctica 15 5,0±1,3* 15,7±2,1* 3,5±0,8* 6,8±1,9* 14,8±1,9* 8,2±2,9* 4,7±1,2* 12,7±2,9* 4,9±1,0*
F. tularensis subsp. holarctica И-250 4,9±1,2* 16,9±1,9* 3,5±1,1* 9,2±1,9* 16,9±0,7* 6,9±1,9* 7,7±0,7* 4,9±0,6* 7,6±1,8*
F. tularensis subsp. mediasiatica 7,6±1,8* 10,9±1,0* 6,6±1,4* 10,1±2,6* 10,6±1,9* 13,6±2,7* 7,9±1,2* 5,4±0,9* 10,8±3,4*
F. tularensis subsp. novicida 4,8±0,9* 16,5±4,2* 3,2±0,6* 5,9±1,0* 17,7±1,9* 8,4±2,0* 7,6±0,9* 8,3±0,8* 5,9±1,4*
F. tularensis subsp. tularensis 3,4±0,6* 14,7±1,8* 2,6±0,5* 5,8±1,6* 16,4±1,1* 8,5±2,6* 4,1±1,0* 11,5±1,3* 6,2±0,9*
значимых различий. Следует отметить, что при иммунизации мышей ЛПС S. enteritidis и К. tularensis (независимо от подвидовой принадлежности) на 6-е сутки показатели апоптоза лимфоцитов превышали эти показатели моноцитов в среднем в 3,8 раза (Р = 0,049), в то время как на 3-и (кроме К. tularensis 8иЬ8р. novicida) и 9-е сутки достоверных различий не выявлено (см. табл. 1). Обращает внимание, что в случае ЛПСт/в К. tularensis 8иЬ8р. шШ^п-sis и ЛПСв К. tularensis 8иЬ8р. mediasiatica у экспериментальных животных на 9-е сутки отмечается повышение апоптоза моноцитов по сравнению с 3-ми и 6-ми сутками в 1,3—2,8 раз (Р = 0,040). Установлено, что в случае воздействия на мышей ЛПС S. enteritidis пик числа циркулирующих ЛпУ моноцитов.
При анализе динамики апоптоза лимфоцитов (В-лимфоциты и Т-хелперы) установлено, что у всех групп экспериментальных животных пик апоптотической гибели клеток отмечается на 6-е сутки (Р = 0,040). Исключение составили мыши, иммунизированные ЛПСв F. tularensis subsp. mediasiatica, для которых достоверных различий в динамике численности этих клеток не было выявлено. Тем не менее, отмечена тенденция к стимуляции апоптоза Т-лимфоцитов относительно ЛПСв F. tularensis subsp. mediasiatica на 9-е сутки (в 1,3-2,0 раза больше, чем на 3-и и 6-е). Сравнительный анализ влияния ЛПС S. enteritidis и F. tularensis на апоптоз моноцитов и лимфоцитов периферической крови мышей показал, что способность этих клеток фиксировать AnV относительно ЛПС F. tularensis на 3-и сутки, а также на 9-е сутки (кроме ЛПСт F. tularensis subsp. mediasiatica), была выше в 2,2-11,7 раза, чем у мышей, иммунизированных ЛПС S. enteritidis (Р = 0,049). Кроме того, на 3-и и 9-е сутки в эксперименте с ЛПС F. tu-larensis апоптоз Т- и В-лимфоцитов у экспериментальных животных выражен в большей степени по сравнению с мышами, иммунизированными ЛПС S. enteritidis (Р = 0,049).
В целом у мышей, иммунизированных препаратами ЛПС F. tularensis, отмечена прямая корреляционная связь показателей вирулентности туляремийного микроба (Dcl) c количеством циркулирующих апоптотических клеток крови (табл. 3). Показано, что содержание В-лимфоцитов, связанных с AnV, не зависит от величины Dcl.
Таблица 3 Корреляционная связь вирулентности F. tularensis с апоптозом иммунизированных его липополисахаридом клеток крови мыши
Показатель Ап^РІ-
rs P
Моноциты 0,45 0,026
CD3+ 0,57 0,004
CD3+CD4+ 0,60 0,002
CD3+CD8+ 0,47 0,021
Заключение
Таким образом, сравнительное изучение действия ЛПС F. tularensis разных подвидов, выделенных с помощью твин-экстракции и водно-фенольным методом, на интенсивность апоптоза клеток крови экспериментальных животных в условиях in vivo показало, что ЛПС туляремийного микроба независимо от подви-довой принадлежности оказывает влияние на
уровень циркулирующих апоптотических клеток. При этом препараты ЛПС, выделенные водно-фенольным методом, в большинстве случаев способствуют повышению апоптоти-ческих клеток крови по сравнению с ЛПС, выделенным первым методом.
Препараты ЛПС К. tularensis 8иЬ8р. шШгєп-яія, holarctica, mediasiatica, novicida (в дозе 10 мкг/мл фагоцитов) обладают слабым антигенным стимулом для активации кислородзависи-мого метаболизма [3], что, на наш взгляд, может свидетельствовать об экранирующей способности ЛПС туляремийного микроба в отношении антигенпрезентирующих клеток. Иммунная реакция макроорганизма в ответ на введение этих препаратов зависит от подвидо-вой принадлежности и сроков наблюдения. Так, у мышей, иммунизированных ЛПС К. ШШ-гєшіи 8иЬ8р. tularensis, на 3-и сутки отмечены наименьшие значения содержания апоптотиче-ских клеток (моноциты, субпопуляции лимфоцитов) по сравнению с другими препаратами ЛПС. Максимальные значения процентного содержания клеток, несущих на поверхности ЛпУ, установлены на 6-е сутки наблюдения, что возможно, связано с особенностями течения инфекционного процесса при туляремии. При иммунизации мышей ЛПСв К tularensis 8иЬ8р. mediasiatica на 9-е сутки по сравнению с другими сроками наблюдения (3-е и 6-е сутки) выявлен наиболее интенсивный апоптоз клеток крови.
Известно, что гибель клеток, в частности, Т-лимфоцитов, по апоптозному пути характеризуется низким уровнем ферментов «окислительного взрыва». Полученные в ходе экспериментов данные подтверждают результаты наших исследований влияния ЛПС туляремий-ного микроба на функциональную способность клеток иммунофагоцитарной системы и, возможно, указывают на участие ЛПС в механизмах уклонения от действия неспецифических факторов резистентности макроорганизма [3].
Результаты сравнительного анализа влияния препаратов ЛПС К. tularensis разных подвидов на активацию апоптоза клеток экспериментальных животных с помощью современных методов клеточной биологии способствуют пониманию механизмов иммуно- и патогенеза туляремии и открывают перспективы для дальнейшего более подробного изучения отдельных компонентов липополисахарида возбудителя туляремии разных подвидов.
Литература
1. Адамс Г. А. Выделение липополисахаридов из грамотрицательных бактерий / Г. А. Адамс // Методы исследования углеводов : пер. с англ. - М. : Мир, 1975. - С. 126-130.
2. Домарадский И. В. Проблемы патогенности франсиселл и пути их решения / И. В. Домарадский // Журн. микробиол. - 2005. - № 1. - С. 106-110.
3. Особенности влияния липополисахарида ту-ляремийного микроба разных подвидов на метаболическую активность фагоцитов в условиях in vitro /
B. И. Дубровина [и др.] // Проблемы особо опасных инфекций. - Саратов, 2011. - Вып. 108, № 2. -
C. 57-60.
4. Получение липополисахаридного антигена туляремийного микроба : метод. рекомендации / В. Б. Николаев [и др.] / Иркут. науч.-исслед. проти-вочум. ин-т Сибири и ДВ. - Иркутск, 2010. - 5 с.
5. Павлович Н. В. Быстрый метод оценки вирулентности Francisella tularensis in vitro / Н. В. Павлович, М. В. Цимбалистова, Н. Н. Маслова // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -1997. - № 2. - С. 17-20.
6. Biosafety and selectable markers / R. W. Titball [et al.] // Ann. N. Y. Acad. Sci. - 2007. - Vol. 1105. -P. 405-417.
7. Gerke V. Annexins: from structure to function / V. Gerke, S. E. Moss // Physiol. Rev. - 2002. -Vol. 82. -P. 331-371.
8. Grunov K. Apoptosis versus necrosis of host cells after infection with F. tularensis / K. Grunov, W. Spletstoesser // The 3-rd Int. Conf. on Tularemia. Umea, Sweden, August 27-30. - 2000. - Р. 53.
9. Oyston P. C. Tularaemia: bioterrorism defense renews interest in Francisella tularensis / P. C. Oyston, A. Sjostedt, R. W. Titball // Nat. Rev. Microbiol. -2004. - Vol. 2. - P. 967-978.
10. Public health assessment of potential biological terrorism agents / L. D. Rotz [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2002. - Vol. 8. - P. 225-230.
11. Sjоstedt A. B. Tularemia: history, epidemiology, pathogen physiology, and clinical manifestations / A. B. Sjоstedt // Ann. N. Y. Acad. Sci. - 2007. - Vol. 1105. - P. 1-29.
12. Tularemia as a biological weapon: medical and public health management / D. T. Dennis [et al.] // JAMA - 2001. - Vol. 285. - P. 2763-2773.
Dynamics of blood cells apoptosis of experimental animals immunized by tularemia lipopolysaccharide
V. V. Voitkova, V. I. Dubrovina, S. A. Tatarnikov, V. B. Nikolaev,
Sh. A. Konovalova, A. S. Sorokoumova
Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East of Rospotrebnadzor, Irkutsk
Annotation. Action of a lipopolysaccharide (LPS) Francisella tularensis various subspecies, extracted by classic water-phenolic method and the twin-extraction on intensity of blood cells apoptosis of experimental animals in vivo is studying. Using modern methods of cellular biology LPS of tularemia agent, independently of a subspecies belonging, exert ambiguous influence on a level circulating apoptotic cells. The comparative analysis has showed that immune reactivity of macroorganism after inoculation of these preparations depends on a subspecies belonging as well as on virulence of F. tularensis.
Key words: Francisella tularensis, lipopolysaccharide, T-lymphocyte, apoptosis, cellular biology, flow cytometry
Войткова Валентина Владимировна
Иркутский научно-исследовательский
противочумный институт Роспотребнадзора
664047, Иркутск, Трилиссера, 78
младший научный сотрудник
тел. (3952)22-13-12
E-mail: adm@chumin.irkutsk.ru
Voitkova Valentina Vladimirovna Irkutsk Antiplague Research Institute of Rospotrebnadzor 78 Trilisser St., Irkutsk, 664047 junior research scientist phone: (3952)22-13-12 E-mail: adm@chumin.irkutsk.ru
Дубровина Валентина Ивановна Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора 664047, Иркутск, Трилиссера, 78 доктор биологических наук, заведующий лабораторией патофизиологии тел. (3952)22-13-12 E-mail: adm@chumin.irkutsk.ru
Dubrovina Valentina Ivanovna Irkutsk Antiplague Research Institute of Rospotrebnadzor 78 Trilisser St., Irkutsk, 664047
D. Sc. in Biology, Head of laboratory phone: (3952)22-13-12 E-mail: adm@chumin.irkutsk.ru
Татарников Станислав Александрович Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора бб404У, Иркутск, Трилиссера, УЗ кандидат медицинских наук, научный сотрудник тел. (3952)22-13-12
Николаев Валерий Борисович Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора бб404У, Иркутск, Трилиссера, УЗ кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник тел. (3952)22-13-12
Коновалова Жанна Анатольевна Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора бб404У, Иркутск, Трилиссера, УЗ кандидат биологических наук, старший научный сотрудник тел. (3952)22-13-12
Сорокоумова Алёна Сергеевна Иркутский государственный медицинский университет Росздрава бб4003, г. Иркутск, ул. Красного восстания, 1 студент
тел. (3952)24-3З-25
Tatarnikov Stanislav Aleksandrovich Irkutsk Antiplague Research Institute of Rospotrebnadzor 78 Trilisser St., Irkutsk, 664047 Ph.D. in Medicine, research scientist phone: (3952)22-13-12
Nikolaev Valeriy Borisovich
Irkutsk Antiplague Research Institute
of Rospotrebnadzor
78 Trilisser St., Irkutsk, 664047
Ph.D. in Medicine, senior research scientist
phone: (3952)22-13-12
Konovalova Zhanna Аnatolyevna
Irkutsk Antiplague Research Institute
of Rospotrebnadzor
78 Trilisser St., Irkutsk, 664047
Ph.D. in Biology, senior research scientist
phone: (3952)22-13-12
Sorokoumova Alena Sergeevna Irkutsk State Medical University
1 Krasnogo Vosstaniya St, Irkutsk, 664003 student
phone: (3952)24-38-25
