CC BY
37
Горшков А.С., Полушин A.B.
ОПЫТ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕРВИЧНЫХ КУЛЬТУР ЭПИТЕЛИЯ И ФИБРОБЛАСТОВ
Кировская государственная медицинская академия, кафедра медицинской биологии и генетики Зав. кафедрой: профессор A.A. Косых
Научный руководитель: профессор A.A. Косых
В настоящее время клеточные технологии играют все большую роль, в том числе и в практическом здравоохранении. Однако, для работы в этой области необходимы особые условия и оборудование лаборатории. На кафедре медбиологии и генетики Кировской ГМА длительное время ведется ряд работ с использованием как опухолевых, так и первичных нетуморогенных культур человека и животных - фи-бробластных, эпителиальных. Целью данной работы было получение первичных клеточных культур и их морфологический анализ. С этой целью были использованы операционные биоптаты кожно-мышеч-ного лоскута человека, полученные в урологической клинике. Биоптат переносили в раствор Хенкса с добавлением антибиотиков.
Материалы и методы. Работы велись по методу эксплантационных культур (R.I. Freshney, 2002; R.L.P Adams, 1983). Консервирование культур осуществляли на базе лаборатории криофизиологии крови НИИГиПК (выражаем благодарность за методическую помощь сотрудникам данной лаборатории и лично к.б.н., н.с. О.О.Зайцевой). В настоящее время эпителиальная культура прошла 20 пассажей и охарактеризована по некоторым параметрам роста. Клетки растили в культуральных флаконах SPL (поставщик ООО «ПанЭко») на смеси сред Игла МЕМ и 199 в соотношении 1:1 (поставщик ООО «Биолот»), Для изучения митотического режима клетки засевали в индивидуальные тест-флаконы на половинки покровных стекол, и через 48 и 72 часа культивирования фиксировали жидкостью Карнуа с последующей окраской гематоксилином Вейгарта. В препаратах оценивалась митотическая активность в пересчете на 1000 клеток, выделялись патологические митозы (классификация Алова, 1975г.), поликариоциты, рассчитывался метафазно-профазный индекс.
Результаты и обсуждение. На 2-м пассаже культура эпителия оказалась весьма неустойчивой. Митотический индекс был достаточно высок для нормального эпителия - 51,57±5,23%о, много было и патологических митозов - 19,87±1,56%о. На 7 пассаже более отчетливо стало проявляться контактное торможение, и митотический индекс находился в районе 32,8%о. С 15 по 20 пассажи митотическая активность колеблется от 32,6±2,725%о (на 48 часов) до 35,26±1,54%о (на 72 часа) культивирования. Доля патологических митозов остается довольно высокой - 12,11±4,7%о, при этом метафазно-профазный индекс колеблется в интервале 3,482 - 3,86, что говорит о достаточном количестве профаз. Полученные культуры могут быль применены в комбустиологии, оперативной урологии, а эпителиальная культура на данный момент применяется в эксперименте по влиянию хорионического гонадотропина на пролиферативную активность клеток.
