CC BY
66
15. Ашрафян Л.А. Спорадический рак яичников: вероятная модель патогенеза. Журнал акушерства и женских болезней. 2012. Т. LXI. № 4. С. 3-10.
Ashrafyan L.A. Sporadicheskiy rak yaichnikov: veroyatnaya model' patogeneza. Zhurnal akusherstva i zhenskikh bolezney. 2012. T. LXI. № 4. S. 3-10.
16. Никогосян С.О., Кадагидзе З.Г., Шелепова В.М. и др. Современные методы иммунодиагностики злокачественных новообразований яичников. Онкогинекология. 2014. № 3. C. 49-54.
Nikogosyan S.O., KadagidzeZ.G., Shelepova V.M. idr. Sovremennyemetody immunodiagnostiki zlokachestvennykh novoobrazovaniy yaichnikov. Onkoginekologiya. 2014. № 3. C. 49-54.
17. Батурина И.Л., Орнер И.Ю., Зотова М.А. и др. Сопоставление уровня антигена плоскоклеточной карциномы в сыворотке крови и показателей местного иммунитета репродуктивного тракта у пациенток с местнораспростра-ненными формами рака шейки матки. Инфекция и иммунитет. 2014. Т. 4. № 2. С. 143-147.
Baturina I.L., Orner I.Yu., Zotova M.A. i dr. Sopostavlenie urovnya antigena ploskokletochnoy karcinomy v syvorotke krovi i pokazateley mestnogo immuniteta reproduktivnogo trakta u pacientok s mestnorasprostranennymi formamiraka sheykimatki. Infekciya i immunitet. 2014.. Т. 4. № 2. S. 143-147.
18. Denton K.J. et al. The sensitivity and specifity of р16№К4г cytology vs HPV testing for detecting high-grade cervical disease in the triage of ASCUS and LSIL. Pap cytology results. American Journal Clinical Pathology. 2010. Vol. 134 (1). P. 12-21.
19. Gu M. et al. The predictive value of and hybrid capture 2 HPV testing for high-grade cervical intraepithelial neoplasia. American Journal Clinical Pathology. 2004. Vol. 122. P. 894-901.
20. Ягудина Л.А. Применение лабораторных маркеров в прогнозировании рака шейки матки. Практическая медицина. 2014. № 3 (79). С. 46-49.
Yagudina LA. Primenenie laboratornykh markerov v prognozirovanii raka sheyki matki. Prakticheskaya medicina. 2014. № 3 (79). S. 46-49.
21. Peirson L., Fitzpatrick-Lewis D. et al. Screening for cervical cancer. Hamilton, ON: McMaster Evidence Review and Synthesis Centre. 2012.
22. Sasiene P., Castanon A. et al. Screening and adenocarcinoma of the cervix. International Journal Cancer. 2009. № 2. P. 525-529.
23. Zaenker P., Ziman M.R. Serologic Autoantibodies as Diagnostic Cancer Biomarkers - A Review. Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention. 2013. № 22 (12). P. 1-21.
24. Nilsson J., Skog J., Nordstrand A. et al. Prostate cancer-derived urine exosomes: a novel approach to biomarkers for prostate cancer. British Journal of Cancer. 2009. № 100. P. 1603-1607.
Q3
УДК: 616.33/.34-002.4-074
ОПЫТ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕТОДА ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МАРКЕРОВ HELIСOBACTER PYLORI
К.М. Перфилова, Н.В. Неумоина, Т.Ю. Бутина,
И.В. Кузнецова, И.В. Шутова, Т.В. Ларионова, Е.И. Ефимова,
ФБУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. акад. И. Н. Блохиной»
Перфилова Ксения Михайловна - e-mail: [email protected]
Совершенствование методов диагностики хеликобактериоза, поиск наименее инвазивных, быстрых и точных способов, пригодных для использования в практической медицине, а также для изучения свойств Helicobacter pylori (H. pylori), обусловливающих развитие тех или иных клинических проявлений инфекции, остаются актуальными. Цель работы: оценить возможности метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) для выявления H. pylori в различных биологических материалах: биоптатах слизистой оболочки желудка, желудочном соке, копрофильтратах. В результате обследования 130 больных с обострением заболеваний желудочно-кишечного тракта доказана возможность использования метода ПЦР как для первичной диагностики хеликобактериоза, так и для контроля эрадикации. Показана целесообразность исследования методом ПЦР проб желудочного сока как информативного субстрата, не требующего инвазивной процедуры забора по сравнению с образцами биоптатов слизистой оболочки желудка.
Ключевые слова: диагностика, Helicobacter pylori, полимеразная цепная реакция.
Improving methods for diagnostics Helicobacter pylori infection, the least invasive, fast and accurate methods suitable for use in the practice of medicine, as well as to study the properties of Helicobacter pylori (H. pylori), causing the development of those or other clinical manifestations of infection remain relevant. Objective: to assess the possibility of a polymerase chain reaction method to detect H. pylori in various biological materials: biopsy specimens of gastric mucosa, gastric juice, coprofiltrates. In a survey of 130 patients with exacerbation of gastrointestinal tract proved the possibility of using PCR method for primary diagnostics of Helicobacter pylori infection and monitoring eradication. The expediency of PCR studies of samples of gastric juice as informative of the substrate that do not require invasive treatment intake compared with the samples of biopsy specimens of the gastric mucosa.
Key words: diagnostics, Helicobacter pylori, polymerase chain reaction.
▲1
SSM
Введение
Совершенствование методов диагностики хеликобакте-риоза, поиск наименее инвазивных, быстрых и точных способов, пригодных для использования в практической медицине, а также для изучения свойств Helicobacter pylori (H. pylori), обусловливающих развитие тех или иных клинических проявлений инфекции, остаются актуальными, несмотря на существенный прогресс в этой области в последние годы [1, 2, 3]. Пилорический хеликобактер, попадая в слизистую оболочку желудка, вызывает повышение активности факторов агрессии (пепсин, соляная кислота) и снижение факторов защиты (бикарбонаты, простагландины, желудочная слизь). Эти процессы в слизистой оболочке вызываются цитотоксинами, адгезинами и другими факторами патогенности микроорганизма, синтез которых кодируется определенными генами. [2, 4, 5, 6, 7, 8]. В связи с признанием роли H. pylori в этиологии гастродуоденальных заболеваний появились многочисленные работы по изучению H. pylori, разработке методов его идентификации. В настоящее время диагностика хели-кобактериоза в большинстве отечественных лечебных учреждений базируется на выявлении уреазной активности Н. pylori в биопсийном материале слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки, морфологических и гистологических методах, основанных на микроскопии. Эти методы просты, малозатратны, но недостаточно объективны, чувствительны и специфичны, дают значительное количество ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Классическое бактериологическое исследование недоступно большинству клиник из-за сложности, высокой стоимости необходимого оборудования и реактивов [3, 6, 9].
Из современных технологий наиболее перспективны для диагностики и изучения хеликобактериоза методы, основанные на выявлении уникальных фрагментов генома возбудителя. Наиболее доступны и приемлемы для практики среди комплекса молекулярно-биологических методов различные модификации полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод достаточно прост и универсален - по единой схеме исследуется любой клинический материал; высокочувствителен - выявляется 10-100 микробных клеток в образце; специфичен - узнавание патогена осуществляется в реакции гибридизации гомологичных ДНК; экспрес-сен - исследование проводится в течение одного рабочего дня. Использование метода ПЦР для выявления H. pylori позволит усовершенствовать и значительно повысить эффективность диагностики хеликобактерной инфекции, своевременно проводить адекватную терапию.
К настоящему времени появились молекулярно-биоло-гические методы, позволяющие наряду с детекцией возбудителя изучать его свойства и проводить дифференци-ровку его клинических изолятов. Разработаны тесты для выявления генов факторов патогенности. Апробируются дифференцировочные тесты, основанные на сравнении фрагментов генов изолятов H. pylori с высокой гетерогенностью [2, 4, 9]. Существуют большие возможности использования молекулярно-биологических методов для решения диагностических задач, связанных с эпидемиологией хеликобактериоза.
Цель работы: оценить возможности метода полимераз-ной цепной реакции для выявления H. pylori в различных биологических материалах: биоптатах слизистой оболочки желудка, желудочном соке, фекалиях.
Материал и методы
Объект исследования. Были обследованы 130 пациентов с обострением хронических болезней органов пищеварения: язвенной болезнью желудка или 12-перстной кишки, обострением хронического холецистита, панкреатита, гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью. В их числе 75 (57,7%) женщин и 55 (42,3%) мужчин. В целях придания максимальной клинической однородности в состав выборки были включены больные, не имеющие клинически значимой сопутствующей общесоматической патологии. Базовое обследование пациентов проводилось в соответствии со стандартами диагностики и лечения больных с заболеваниями органов пищеварения, утвержденными Приказами Минздрава России. У всех пациентов, включенных в исследование с основным диагнозом обострения хронического холецистита, панкреатита, язвенной болезни желудка и/или 12-перстной кишки, при проведении эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС) были выявлены визуальные признаки эритематозной гастропатии.
Материалом для ПЦР-исследования служили биоптаты слизистой оболочки желудка антрального отдела желудка, желудочный сок, копроматериал от больных. Биопсийный материал помещается в пробирку типа эппендорф с транспортной средой, а содержимое желудка или фекалии - в стерильную сухую пробирку.
В основе метода ПЦР лежит выявление специфического фрагмента ДНК H. pylori путем амплификации данного фрагмента ДНК-мишени. Метод ПЦР включает три этапа: пробоподготовку (очистка ДНК исследуемого материала от примесей), амплификацию определенного фрагмента ДНК и регистрацию результатов с помощью детектирующего амплификатора.
Выделение тотальной ДНК из клинических проб проводили методом кипячения (набор реагентов ПРОБА РАПИД ООО «ДНК-Технология»), методом преципитации, который основан на лизисе клеток и денатурации клеточных белков раствором для лизиса с последующим осаждением нуклеиновых кислот спиртами и дальнейшей экстракцией их в раствор (набор реагентов ПРОБА НК ООО «ДНК-Технология»).
Выявление ДНК H. pylori проводили методом полиме-разной цепной реакции в режиме реального времени с помощью комплекта реагентов для ПЦР-амплификации производства ООО «ДНК-Технология». Метод Real Time PCR позволяет регистрировать результат ПЦР на протяжении всей реакции. Для этого в реакционную смесь для амплификации введены ДНК-зонды, каждый из которых содержит флуоресцентную метку и гаситель флуоресценции. При образовании специфичного продукта ДНК-зонд разрушается, действие гасителя на флуоресцентную метку прекращается, что ведет к возрастанию уровня флуоресценции. Количество разрушенных зондов и уровень флуоресценции увеличивается пропорционально количеству образовавшихся специфических ампликонов и измеряется на каждом цикле амплификации. Для повышения
чувствительности и специфичности реакции применялся «горячий старт», что исключает неспецифический отжиг праймеров на ДНК-мишени при начальном прогреве пробирки. В состав ДНК-зондов, использующихся для детекции продукта амплификации искомой ДНК, включена флуоресцентная метка FAM, а для детекции продукта амплификации внутреннего контроля - флуоресцентная метка HEX. Для детекции результатов использовался амплификатор ДТ-прайм 5.
Обработка данных. Статистическая обработка результатов исследований проводилась с применением программы Statistica, версия 6.0 и статистических функций программы Ехсе1 по стандартным формулам [10].
Результаты и их обсуждение
На первом этапе проведено выявление H. ру1оп в различных биологических субстратах: биоптатах слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, желудочном соке, фекалиях. Традиционно для выявления H. pylori рекомендуется исследовать биоптаты слизистой антрального отдела желудка и участков желудочной метаплазии двенадцатиперстной кишки. Однако забор этого материала - инвазивная процедура, требующая дорогостоящего оборудования. Кроме того, при проведении ЭГДС с целью последующего исследования на присутствие H. pylori рекомендуется производить забор биоптатов не менее чем в пяти участках, что на практике зачастую не представляется возможным. На наш взгляд, весьма перспективным материалом для ПЦР-исследования на H. pylori является желудочный сок, получение которого возможно не только при ЭГДС, но и с помощью одноразового желудочного зонда, что облегчает переносимость процедуры пациентом и значительно ее удешевляет.
Проведена оценка возможности использования желудочного сока как возможного материала для ПЦР-детекции H. pylori. Для определения эффективности выявления микроорганизма в этом субстрате анализировались образцы биоптатов слизистой желудка и пробы желудочного сока, забранные одновременно при выполнении ЭГДС.
Были получены следующие результаты (таблица 1). H. pylori выявлялся в 95 пробах биоптатов (73,1±3,9%) и в 94 пробах желудочного сока (72,3±3,9%). В 125 случаях (96,2±1,7%) наблюдалось совпадение результатов ПЦР по выявлению H. pylori в обоих субстратах. Варианты, когда в одном из субстратов H. pylori выявлялся, а в другом - нет (3,8% - 5 случаев), можно объяснить неудачным забором материала при ЭГДС (биоптат взят из неколонизированно-го возбудителем участка) и ингибированием Taq-полимеразы компонентами проб.
Из полученных результатов следует, что определение Н. pylori в образцах желудочного сока по сравнению с исследованием биоптатов слизистой желудка имеет чувствительность 96,8% и специфичность 94,3%.
Результаты выявления H. pylori в образцах биоптатов и желудочного сока, полученных от одного пациента, имеют высокую степень совпадения (96,2%). Кроме того, следует отметить, что при работе с желудочным соком не наблюдается неспецифического синтеза ДНК, что объясняется незначительным количеством эукариотической ДНК в данном субстрате.
ТАБЛИЦА 1.
Результаты исследования разных субстратов на наличие ДНК Н. pylori
Биоптат ДНК Н. pylori ДНК Н. pylori всего
Желудочный сок^-^^ выявлена не выявлена
ДНК Н. pylori выявлена 92 2 94
ДНК Н. pylori не выявлена 3 33 36
Всего 95 35 130
ТАБЛИЦА 2.
Частота выявления H. pylori в биоптатах и образцах желудочного сока у больных
Основной диагноз о X т о * Частота выявления H. pylori в желудочном соке Частота выявления H. pylori в биоптатах
0> X с; л и ^ \о о о \о абс. число % (M±m) абс. число % (M±m)
Хронический холецистит 22 15 68,2 ± 9,9 16 72,7 ± 9,5
Хронический панкреатит 58 43 74,1 ± 5,7 42 72,4 ± 5,8
Язвенная болезнь желудка или 12-перстной кишки 36 29 80,6 ± 6,6 29 80,6 ± 6,6
Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь 14 8 57,1 ± 13,2 7 50,0 ± 13,3
Итого 130 95 73,1 ± 3,9 94 72,3 ± 3,9
ТАБЛИЦА 3.
Частота выявления H. pylori в фекалиях
Основной диагноз Всего обследовано больных Частота выявления H. pylor в фекалиях
абс.число % (M±m)
Хронический холецистит 8 5 62,5 ± 17,1
Хронический панкреатит 32 18 56,3 ± 8,8
Язвенная болезнь желудка или 12-перстной кишки 27 19 70,4 ± 8,7
Итого 67 42 62,7 ± 5,9
Сравнительный анализ частоты выявления ДНК Н. pylori в группах больных с разными основными диагнозами показал отсутствие значимых отличий при исследовании желудочного сока и биоптатов (таблица 2). Полученные результаты позволяют рекомендовать исследование желудочного сока как менее инвазивного и более интегратив-ного материала при обследовании пациентов на наличие H. ру1оп во всех случаях, когда невозможно проведение ЭГДС, взятие биоптатов.
Наиболее доступным материалом для выявления H. pylori являются фекалии, их забор не требует дополнительного оборудования и инвазивной процедуры. С целью определения возможности использовании неинвазивных методов диагностики H. pylori-инфекции проведено исследование частоты выявления H. pylori в фекалиях в период обострения хронических болезней органов пищеварения (таблица 3).
Как видно из представленных результатов, частота выявления H. pylori в копрофильтратах у больных с воспалительными заболеваниями панкреатобилиарной системы и гастродуоденальной патологией была ниже, чем в желудочном соке. Результаты выявления ДНК H. pylori в
▲1
SSM
биоптатах, образцах желудочного сока и фекалий, полученных от одного пациента, имели невысокую степень совпадения (64%), в связи с чем дальнейшее исследование копрофильтратов не проводилось.
Совпадение результатов выявления ДНК H. pylori в биоптатах, желудочном соке и копрофильтрате было типично при высокой концентрации ДНК в желудочном соке (при значениях Ct менее 30), при низкой концентрации ДНК в желудочном соке (при значениях Ct более 30) H. pylori в фекалиях обнаруживался реже. Таким образом, чувствительность метода определения ДНК H. pylori в копрофильтрате уступает чувствительности обнаружения этого маркера в биоптатах и желудочном соке. Низкая выявляемость возбудителя в копроматериале объясняется невысокой концентрацией возбудителя в данном материале и инги-бированием ПЦР компонентами пробы. Отсутствие простых и доступных методов концентрации H. pylori в фекалиях и удаления ингибиторов не позволяют рекомендовать копроматериал как информативный субстрат для детекции.
Сходные результаты получены и другими исследователями. Так, в последние годы была разработана методика обнаружения антигена Н. руЫ в кале, в которой используются моноклональные антитела. Это стало возможным с получением реагентов стабильно высокого качества. Существует два варианта данного теста: лабораторное исследование (ИФА) и быстрое тестирование во время амбулаторного приема с использованием иммунохрома-тографического метода. Мета-анализ 22 исследований с участием 2499 пациентов показал, что ИФА с применением моноклональных антител является высокоточным методом как для первичной диагностики Н. руЬп, так и для контроля результатов лечения [11]. Напротив, быстрый «амбулаторный» тест имеет ограниченную точность [12]. Предлагавшийся альтернативный метод выявления антигена Н. руЬп в кале с помощью ПЦР, по данным Е.Н. Корниенко [13], Н.И. Пароловой [14], Л.В. Кудрявцевой с соавт. [15], также оказался недостаточно чувствительным, в отличие от ПЦР в биоптате слизистой оболочки желудка.
Больным с язвенной болезнью, ассоциированной с Н. pylori (29 пациентов), был проведен курс эрадикацион-ной терапии в соответствии с рекомендациями консенсуса Маастрихт-4 и Российской гастроэнтерологической ассоциации [16, 17, 18]. С целью контроля заживления язвенного дефекта этим больным выполнено эндоскопическое исследование перед выпиской из стационара (через 10-14 дней после окончания эрадикации), проведен повторный забор проб желудочного сока и биоптатов из антрального отдела желудка. Выявлено полное рубцевание язв и эпителизация эрозий во всех случаях. ДНК H. pylori выявлена в обоих субстратах у одного пациента.
Выводы
Высокая чувствительность, специфичность, относительная простота и относительно невысокая стоимость метода полимеразной цепной реакции позволяют широко использовать его как при первичной диагностике хеликобактер-ной инфекции, так и для оценки эффективности лечения.
Показана целесообразность исследования методом ПЦР проб желудочного сока как информативного субстрата, не
требующего инвазивной процедуры забора по сравнению с образцами биоптатов слизистой оболочки желудка.
ЛИТЕРАТУРА
1. Исаков В.А., Домрадский И.В. Хеликобактериоз. М.: Медпрактика, 2003. 412 с.
Isakov V.A., Domradskiy I.V. Khelikobakterioz. M.: Medpraktika, 2003.412s.
2. Барышникова Н.В., Успенский Ю.П., Балукова Е.В., Суворов А.Н. Оценка изменения уровня интерлейкинов при инфицировании CAGA (+) и CAGA (-) штаммами Helicobacter pylori. Российский журнал гастроэнтерологии, гепато-логии, колопроктологии. 2015. Прил. № 46. Т. 25. № 5. С. 16.
Baryshnikova N.V., Uspenskiy Yu.P., Balukova E.V., Suvorov A.N. Ocenka izmeneniya urovnya interleykinov pri inficirovanii CAGA (+) i CAGA (-) shtammami Helicobacter pylori. Rossiyskiy zhurnal gastroenterologii, gepatologii, koloproktologii. 2015. Pril. № 46. T. 25. № 5. S. 16.
3. Исаева Г.Ш. Проблемы совершенствования диагностики Helicobacter pylori инфекции. Казанский медицинский журнал. 2011. Т. 92. № 2. С. 257-260.
Isaeva G.Sh. Problemy sovershenstvovaniya diagnostiki Helicobacter pylori infekcii. Kazanskiy medicinskiy zhurnal. 2011. T. 92. № 2. S. 257-260.
4. Wu C., Chou Р., Le С. Clinical Relevance of the vacA, iceA, cagA, and flaA genes of Helicobacter pylori strains isolated in Eastern Taiwan. J. Clin. Microbiol. 2005. Vol. 43. № 6. P. 2913-2915.
5. Жебрун А.Б., Сварваль А.В., Балабаш О.А. Характеристика популяции Helicobacter pylori у пациентов с заболеваниями желудочно-кишечного тракта. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2013. № 2. С. 90-96.
Zhebrun A.B., Svarval' A.V., Balabash O.A. Kharakteristika populyacii Nelicobacter pylori u pacientov s zabolevaniyami zheludochno-kishechnogo trakta. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii. 2013. № 2. S. 90-96.
6. Барышникова Н.В. Актуальные проблемы диагностики хеликобактерио-за. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2009. № 2. С. 50-58.
Baryshnikova N.V. Aktual'nye problemy diagnostiki helikobakterioza. EHksperimental'naya i klinicheskaya gastroehnterologiya. 2009. № 2. S. 50-58.
7. Suzuki T., Matsuo К., Sawaki А. Systematic review and meta-analysis: importance of CagA status for successful eradication of Helicobacter pylori infection. Aliment. Pharmacol. Ther. 2006. V. 24. P. 273-280.
8. Umit H., Tezel А., Bukavaz С. The relationship between virulence factors of Helicobacter pylori and severity of gastritis in infected patients. Dig. Dis. Sci. 2009. V. 54. P. 103-110.
9. Маев И.В., Самсонов А.А., Андреев Д.Н. Инфекция Helicobacter pylori: [монография]. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2016. 256 с.
Maev I.V., Samsonov A.A., Andreev D.N. Infekciya Helicobacter pylori: [monografiya]. M.: GEOTAR-Media, 2016. 256 s.
10. Гланц С. Медико-биологическая статистика / пер. с англ. М.: Практика, 1998. 459 с.
Glanc S. Mediko-biologicheskaya statistika / per. s angl. M.: Praktika, 1998. 459 s.
11. Gisbert J.P., de La M.F., Abraira V. Accuracy of monoclonal stool antigen test for the diagnosis of H.pylori infection: a systematic review and meta-analysis. Am. J. Gastroenterol. 2006. V. 101. Р. 1921-1930.
12. Calvet X., Lario S., Ramirez-Lazaro M.J. Accuracy of monoclonal stool tests for determining cure of Helicobacter pylori infection after treatment. Helicobacter. 2010. V. 15. Р. 201-205.
13. Корниенко Е.А., Паролова Н.И. Проблема диагностики и лечения инфекции Helicobacter pylori у детей в свете рекомендаций международного консенсуса Маастрихт-IV. Вестник практического врача. 2012. Спецвып. № 1. С. 5-9.
Kornienko E.A., Parolova N.I. Problema diagnostiki i lecheniya infekcii Helicobacter pylori u detey v svete rekomendaciy mezhdunarodnogo konsensusa Maastrikht-IV. Vestnik prakticheskogo vracha. 2012. Specvyp. № 1. S. 5-9.
14. Паролова Н.И. Сравнительная оценка эффективности эрадикационной терапии инфекции Helicobacter pylori у детей: автореф. дисс. ... канд. мед. наук. Санкт-Петербург, 2008. 22 с.
Parolova N.I. Sravnitel'naya ocenka effektivnosti eradikacionnoy terapii infekcii Helicobacter pylori u detey: avtoref. diss. ...kand. med. nauk. Sankt-Peterburg, 2008. 22 s.
15. Кудрявцева Л^., Щербаков П.Л., Иваников И.О., Говорун BM. Helicobacter pylory-инфекция: современные аспекты диагностики и терапии. Пособие для врачей. М. 2004. 43 с.
Kudryavceva L.V., Scherbakov P.L., Ivanikov I.O., Govorun V.M. Helicobacter pylory-infekciya: sovremennye aspekty diagnostiki i terapii. Posobie dlya vrachey. M. 2004. 43 s.
16. Malfertheiner P., Megraud F., O'Morain CA. Management of Helicobacter pylori infection - the Maastricht IV/Florence Consensus Report. Gut. 2012. V. 61. № S. P. 646-664.
17. Исаков В.А. Новые рекомендации по диагностике и лечению инфекции H. pylori - Маастрихт IV / под ред. В.А. Исакова. Best Clinical Practice (русское издание). 2012. Вып. 2. С. 4-23.
Isakov V.A. Novye rekomendacii po diagnostike i lecheniyu infekcii H. pylori - Maastrikht IV / pod red. V.A. Isakova. Best Clinical Practice (russkoe izdanie). 2012. Vip. 2. S. 4-23.
18. Ракитин Б.В. Helicobacter pylori - Маастрихт IV [Электронный ресурс] // Режим доступа: www.gastroscan.ru (добавлено 27.11.2013).
Rakitin B.V. Helicobacter pylori - Maastrikht IV [Elektronniy resurs] // Rezhim dostupa: www.gastroscan.ru (dobavleno
УДК: 616.146-006-074:615.37
СОСТАВ МИКРОБИОЦЕНОЗА УРОГЕНИТАЛЬНОГО БИОТОПА И ОСОБЕННОСТИ ЛОКАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ТЯЖЕСТИ ПЛОСКОКЛЕТОЧНОГО ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНОГО ВПЧ-АССОЦИИРОВАННОГО ПОРАЖЕНИЯ ШЕЙКИ МАТКИ
Л.Д. Андосова, К.Н. Конторшикова, К.А. Шахова,
ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия»
Андосова Лариса Дмитриевна - e-mail: [email protected]
Состояние «дисбиоз» на стадии плоскоклеточных интраэпителиальных поражений высокой степени (HSIL) связано с локальными иммунными нарушениями. Дисбиоз, будучи сопутствующим фактором, не является непосредственной причиной развития и прогрессирования цервикальной неоплазии, но на фоне снижения локальной иммунной защиты создаются условия как для дисбаланса биоты, так и для прогрессирования неопластических процессов шейки матки, ассоциированных с ВПЧ-инфекцией.
Ключевые слова: интраэпителиальные поражения шейки матки, папилломавирусная инфекция, микробиоценоз, локальный иммунитет.
The state of «dysbiosis» at the stage of squamous intraepithelial lesions of high degree (HSIL) are associated with local immune impairment. Dysbiosis, being a facilitating factor, is not a direct cause of development and progression of cervical neoplasia, but against decrease in local immune protection, both for a biota imbalance and for progression of the neoplastic processes of the cervix, associated with HPV infection, are created.
Key words: intraepithelial cervical lesions, HPV infection, microbiocenosis, local immunity.
В настоящее время имеется достаточно данных, подтверждающих причинную связь между папилломави-русной инфекцией (ПВИ) и предраковыми заболеваниями шейки матки [1, 2, 3]. Считая вирус папилломы человека (ВПЧ) главным фактором риска предрака и рака шейки матки (РШМ), нельзя не учитывать другие возможные влияния. Развитие заболеваний на фоне вирусной инфекции во многом определяется состоянием иммунной реактивности организма, в первую очередь, локальной зашиты репродуктивного тракта женщины [4, 5]. Одним из физиологических барьеров, обеспечивающих инфекционную резистентность, является микроэкология влагалища [6]. Микробиоценоз является весьма чувствительным индикатором, реагирующим количественными и качественными изменениями на любые сдвиги внешней и внутренней среды [7, 8].
Цель исследования: установить связь вагинального микробиоценоза с нарушениями в системе локального
иммунитета и со степенью выраженности деструктивных изменений в шейке матки.
Материал и методы
Для исследования в результате целенаправленного отбора под наблюдение были взяты женщины с патологическими, невоспалительными процессами шейки матки, обусловленными ПВИ, были обследованы 322 женщины, средний возраст которых составил 35,1±1,5 года. Клиническое обследование пациенток включало применение кольпоскопического, цитологического (традиционный метод) и гистологического исследований. Гистологическую верификацию проводили по материалам тканей шейки матки, полученным путем прицельной биопсии и (или) кюретажа, петлевой эксцизии, конизации. По результатам цитоморфологического исследования, в зависимости от наличия или отсутствия цервикальной интраэпителиальной неоплазии (ЦИН), степени тяжести эпителиального поражения шейки матки выборочная совокупность составила
