CC BY
173
312
Клинический опыт
ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ ВЫЯВЛЕНИЯ HELICOBACTER PYLORI У ДЕТЕЙ С ХРОНИЧЕСКОЙ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ
Р.А. Файзуллина 12,Е.В. Абдуллина 1, И.И. Ахметов 1
1 Казанский государственный медицинский университет, Казань, Россия
2 Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия
Description of methods for the detection of Helicobacter pylori in children with chronic gastroduodenal pathology
RA. Faizullina 12, E.V. Abdullina 1, I.I. Akhmetov1
1 Kazan State Medical University, Kazan, Russia
2 Kazan (Volga region) Federal University, Kazan, Russia
Частое обнаружение хеликобактерной инфекции, как среди взрослого, так и детского населения, а также ее связь с развитием хронической патологии гастродуоденальной области обосновало необходимость поиска чувствительных и точных методов диагностики. Это стимулировало появление множества различных способов обнаружения Helicobacter pylori, что создало для врачей-клиницистов и специалистов лабораторной диагностики определенные трудности в выборе адекватных и достоверных способов ее выявления.
Проведен сравнительный анализ методов диагностики инфекции Helicobacter pylori у 151 ребенка с хронической патологией гастродуоденальной области, в том числе 23 пациентов с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, 97 больных хроническим гастродуоденитом и 31 условно-здоровых детей того же возраста.
Дыхательный Хелик-тест и полимеразная цепная реакция биоптатов слизистой оболочки желудка при диагностике инфекции Helicobacter pylori имеют одинаково высокую чувствительность (94,8% и 93,6%), но низкую специфичность (80,6% и 79,5%) и высокую вероятность хеликобактериоза при отрицательных результатах методов (19,4% и 18,4%). Анализ диагностической ценности комбинации Хелик-теста и полимеразной цепной реакции при верификации инфекции Helicobacter pylori показал более высокую чувствительность (98,3%), специфичность (93,5%), общую точность (96%), а также вероятность хе-ликобактериоза при положительном результате (96,6%) и низкую вероятность при отрицательном результате (6,4%) методов. Поэтому для первичной диагностики инфекции Helicobacter pylori лучше использовать комбинацию дыхательного Хелик-теста и полимеразной цепной реакции био-птатов слизистая оболочка желудка, что уменьшит долю ложноположительных и ложноотрицательных данных, повысит чувствительность и специфичность методов.
Ключевые слова: диагностика, Helicobacter pylori, цитологический метод, полимеразная цепная реакция, дыхательный Хелик-тест, хронический гастродуоденит, язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки.
Одним из основных этиологических факторов возникновения и развития хронической гастродуоденальной патологии у детей в настоящее время является инфекция Helicobacter pylori (H. pylori) [1—5]: у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки она встречается в 87% случаев, а у детей с гастродуоденитом — в 42% [6, 7]. H. pylori обнаруживают у детей на всех континентах, во всех обследуемых популяциях. Общая инфицированность детского населения земного шара достигает 60% и варьирует в различных регионах планеты [8]. Поэтому разработка алгоритмов ранней и точной диагностики H. pylori является наиболее актуальной.
Среди всего многообразия диагностических тестов, разработанных для выявления H. pylori, выделяют несколько групп — инвазивные и неинвазивные, прямые
е-mail: r868@mail.ru
Frequent detection of Helicobacter pylori infection among both adult and child population, as well as its relationship with the development of chronic gastroduodenal pathology field justified the need to search for sensitive and accurate diagnostic methods. This has stimulated the emergence of a variety of different methods for detecting Helicobacter pylori, which created for clinicians and specialists laboratory diagnosis difficulties in choosing the adequate and reliable ways to identify.
A comparative analysis of methods for diagnosis of Helicobacter pylori infection in 151 children with chronic gastroduodenal pathology field, including 23 patients with duodenal ulcer, 97 patients with chronic gastroduodenitis and 31 conditionally healthy children of the same age.
Breathing helic — test and polymerase chain reaction of gastric mucosa biopsies for the diagnosis of Helicobacter pylori infection have equally high sensitivity (94.8% and 93.6%) but low specificity (80.6% and 79.5%) and a high probability helicobakteriosis methods with negative results (19.4% and 18.4%).The analysis of the diagnostic value of the combination helic — test and polymerase chain reaction in the verification of Helicobacter pylori infection showed a higher sensitivity (98.3%) and specificity (93.5%) overall accuracy (96%) and the probability of a positive result helicobakteriosis (96.6%) and a low probability in a negative result (6.4%) methods.
Therefore, for the primary diagnosis of Helicobacter pylori infection is better to use a combination of breathing helic -test and polymerase chain reaction biopsies gastric mucosa, reducing the proportion of false-positive and false-negative data, would increase the sensitivity and specificity of the methods.
Key words: diagnosis, Helicobacter pylori, cytological, polymerase chain reaction, respiratory helic - test, chronic gastroduodenitis, duodenal ulcer.
и косвенные. Инвазивные методы основаны на взятии биоптатов при проведении эзофагогастродуодено-скопии (ЭГДС). К ним относятся бактериологический (культуральный), морфологический (гистологический и цитологический) и биохимический методы, а также полимеразная цепная реакция (ПЦР) биоптатов слизистой оболочки (СО) желудка. Неинвазивные тесты не требуют проведения ЭГДС, материалом для исследования являются кровь, кал, моча, слюна, выдыхаемый пациентом воздух. К ним относятся серологические и иммунологические реакции, ПЦР, исследование кала, дыхательные тесты [9—11]. Прямые методы основаны на непосредственном выявлении микроорганизма в биоптате СО желудка, косвенные — регистрируют не саму бактерию, а последствия ее персистирования в организме [10, 12].
Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014
Клинический опыт
313
«Золотым стандартом» диагностики H. pylori является морфологическое исследование биоптата СО желудка, позволяющее обнаружить бактерии и определить их расположение, наблюдать взаимоотношение с тканями «хозяина», оценить характер патологического процесса в СО, наличие воспаления, атрофии, метаплазии [13].
До настоящего времени не разработано универсального способа диагностики H. pylori. Каждый метод исследования имеет свои преимущества и недостатки, они отличаются по чувствительности и специфичности. Во время проведения многочисленных сравнительных исследований установлено, что результаты различных методов не всегда идентичны, следовательно, для более точной первичной диагностики инфекции необходимо использовать как минимум два теста [10], один из которых — определение H. pylori в биоптате СО желудка [14].
Материал и методы
Под наблюдением находился 151 ребенок в возрасте от 7 до 17 лет, в том числе 23 пациента с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ЯБ ДПК), 97 больных хроническим гастродуоденитом (ХГД) и 31 условно-здоровых детей того же возраста (группа контроля). Пациенты с ХГД, вошедшие в исследование, были госпитализированы в периоде обострения заболевания. Большинство детей с ЯБ ДПК (87%) поступили в стационар для получения противорецидивного лечения, у 3 пациентов (13%) заболевание было выявлено впервые.
Все больные были подвергнуты общепринятым клинико-инструментальным и специальным методам исследования. Специальные тесты включали методы выявление H. pylori у пациентов: дыхательный Хелик-тест, разработанный ООО «АМА» (Россия), цитологический метод исследования и ПЦР биоптатов с детекцией ureC гена микроорганизма. Мазки-отпечатки окрашивались по Романовскому — Гимзе, степень обсемененности СО желудка H.pylori оценивали по критериям Л.И. Аруин с соавт. (1998) [15]. Для молекулярно-генетического анализа использовали образцы ДНК пациентов, выделенных сорбентным методом в соответствии с прилагаемой инструкцией с помощью комплекта реагентов для выделения ДНК «Проба-ГС» ООО «НПО ДНК-Технология» (Россия).
Для оценки результатов диагностических тестов на определение H. pylori в качестве «золотого стандарта» был принят цитологический метод. Расчет ценности диагностических методов исследования Н. pylori проводили по формулам:
— Se = ИП/(ИП + ЛО), где Se — чувствительность, ИП — истинно положительный, ЛО — ложно отрицательный;
— Sp = ИО/(ИО + ЛО), где Sp — специфичность, ИО — истинно отрицательный;
— Gt = (ИП + ИО)/(ИП + ИО), где Gt — общая точность;
— Вероятность хеликобактериоза при « + » результате = ИП/(ИП + ЛП);
— Вероятность хеликобактериоза при «-» результате = ЛО/(ЛО + ИО).
Статистическую обработку, применяемую для оценки достоверности результатов, проводили при помощи программных пакетов Microsoft Excel
2003, BIOSTATISTICA и «GraphPad InStat». Для оценки связи между признаками, имеющими ненормальное распределение, применяли коэффициент ранговой корреляции Спирмена (RR), для параметрических данных — и критерий Пирсона. Для всех относительных величин были найдены ошибки репрезентативности и 95,5% вероятность безошибочного прогноза. Сравнительный анализ основывался на определении статистической значимости различий показателей по F-критерию Фишера. Критический уровень значимости (p) при проверке статистических гипотез в исследовании принимали равным 0,05.
Результаты и обсуждение
При анализе данных, полученных в результате верификации инфекции H. pylori с помощью дыхательного Хелик-теста, цитологического метода и ПЦР, выявлено, что Н. pylori являлся этиологическим фактором заболеваний желудка и ДПК у 83,9% обследованных больных (у 110 из 131 пациентов): у 100% больных, страдающих ЯБ ДПК, и 80,5% — ХГД. Распространенность хеликобактериоза у детей с хронической патологией гастродуоденальной области в г. Казани находилась в доверительном интервале 73,6% — 94,2% (р<0,05), а у пациентов с ХГД — 66% — 95% (р<0,05), что соответствует литературным данным [12, 16, 17].
При формировании группы контроля нами были выявлены 6 пациентов (19%), у которых при отсутствии хронической гастродуоденальной патологии в анамнезе и воспалительных изменений СО желудка при цитологическом исследовании в настоящее время, было выявлено бессимптомное персистирование H. pylori [18-20].
При анализе специфических эндоскопических признаков хеликобактерной инфекции 100% чувствительность и специфичность была подтверждена при обнаружении эрозий гастродуоденальной области и ЯБ ДПК. Н. pylori был выявлен у 86,4% пациентов с гипертрофическим гастродуоденитом, у 36,8% из них при ЭГДС была обнаружена картина «булыжной мостовой», при которых Н. pylori выявлялся в 100% случаев.
Сравнительный анализ данных, полученных при диагностике хеликобактериоза, показал, что наибольшее количество ИП результатов выявлено при исследовании с помощью дыхательного теста (ИП = 110), меньше — при диагностике ПЦР (ИП = 103). При исследовании с помощью ПЦР было обнаружено наибольшее число ИО результатов ( ИО = 31), в отличие от Хелик-теста (ИО = 25) (табл. 1). ЛП данные чаще всего были получены при исследовании дыхательным тестом (ЛП = 21), реже при ПЦР (ЛП = 10). При диагностике сравниваемыми методами было выявлено большое количество ЛО ответов (при применении Хелик-теста ЛО = 6, при ПЦР ЛО = 7, соответственно).
Таким образом, дыхательный Хелик-тест и ПЦР при диагностике инфекции H. pylori показали одинаково высокую Se (94,8% и 93,6%), но низкую Sp (80,6% и 79,5%) и высокую вероятность хели-кобактериоза при отрицательных результатах методов (19,4% и 18,4%). Было выявлено, что общая точность и прогностическая ценность положительного ответа при ПЦР (88,7% и 91,2%) выше, чем Хелик-теста (83,3% и 84%) (табл. 2).
Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014
314
Клинический опыт
Таблица 1. Количество истинно положительных (ИП), истинно отрицательных (ИО] и ложно отрицательных (ЛО) результатов при диагностике хеликобактериоза различными методами
Результат Хелик-тест ПЦР-диагностика Хелик-тест + ПЦР
«+» «-» «+» «-» «+» «-»
Н. pylori«+» ИП = 110 CD II О ИП = 103 ЛО = 7 ИП = 116 ЛО = 2
Н. pylori«-» ЛП = 21 LO CNJ II О о II 1= о II со ЛП = 4 О) CNJ II о
Таблица 2. Характеристика методов диагностики Н. ру/оп-инфекции при хронической гастродуоденальной патологии у детей
Показатели Хелик-тест ПЦР Хелик-тест + ПЦР
Se 94,8% 93,6% 98,3%
Sp 80,6% 79,5% 93,5%
Вероятность хеликобактериоза при положительном результате 84% 91,2% 96,6%
Вероятность хеликобактериоза при отрицательном результате 9,4% 18,4% 6,4%
Общая точность 83,3% 88,7% 96%
В связи с выявлением низкой Sp (Хелик-тест = 80,6%, ПЦР = 79,5%) и высокой вероятности H. ру/ог/-инфекции при отрицательных результатах методов (Хелик-тест = 19,4%, ПЦР = 18,4%) было решено оценить диагностическую ценность тестов при их комбинации.
Сравнительный анализ выявил, что ИП результаты при диагностике с помощью комбинации методов обнаружены у 116 пациентов. Это выше чем при верификации инфекции с помощью Хелик-теста (ИП = 110) и ПЦР (ИП = 103). При исследовании двумя методами было выявлено меньше ЛО (2) и ЛП (4) данных, в отличие от диагностики с помощью дыхательного теста (ЛО = 6, ЛП = 21) и ПЦР (ЛО = 7, ЛП = 10).
Анализ диагностической ценности комбинации Хелик-теста и ПЦР при верификации инфекции H. ру/ог/ показал более высокую Se (98,3%), Sp (93,5%), общую точность (96%), а также вероятность хеликобактериоза при положительном результате (96,6%) и низкую вероятность при отрицательном результате (6,4%) методов. Поэтому для первичной диагностики инфекции H. ру/ог/ лучше использовать комбинацию тестов (Хелик-тест и ПЦР биоптатов СО желудка), что уменьшит долю ЛП и ЛО результатов.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Абузарова Э.Р. Особенности генотипов H. pylori и полиморфных локусов генов цитокинов [IL1 и IL10) у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки [диссертация]. Казань: КФУ; 2008.
2. Волков А.И. Актуальные вопросы детской гастроэнтерологии. Сборник материалов и тезисов педиатрического форума Приволжского Федерального округа. Ремедиум Приволжье 2007; 6-7: 73-6.
3. Корниенко Е.А. Ранняя диагностика H. pylori — важный шаг к лечению заболеваний желудочно-кишечного тракта у детей. Медицинский вестник 2007; 31: 9.
4. Kate V., Ananthakrishnan N., Tovey F.I. Is H. pylori infection the primary cause of duodenal ulceration or a secondary factor? A review of the evidence. Gastroenterol Res. Pract. 2013; 2013: 425840.
Выводы
Таким образом, выявлено, что Н.ру/ог/ является ведущим этиологическим фактором развития хронической гастродуоденальной патологии более чем у 80% детей. Подтверждено, что дыхательный Хелик-тест и ПЦР при диагностике инфекции H. ру/ог/ имеют одинаково высокую Se (94,8% и 93,6%), но низкую Sp (80,6% и 79,5%) и высокую вероятность хеликобактериоза при отрицательных результатах методов (19,4% и 18,4%). Поэтому, для первичной диагностики инфекции H. ру/ог/ лучше использовать комбинацию тестов (Хелик-тест и ПЦР биоптатов слизистой оболочки желудка), что уменьшит долю ложноположительных и ложноотрицательных данных, повысит Se (98,3%), Sp (93,5%), общую точность (96%), а также вероятность хеликобактериоза при положительном результате (96,6%) и уменьшит вероятность инфекции H. ру/ог/ при отрицательном ответе методов (6,4%).
Благодарности
Работа выполнена в рамках государственной программы повышения конкурентоспособности Казанского (Приволжского) федерального университета среди ведущих мировых научно-образовательных центров.
5. Kobayashi I. H. pylori genomics. Nihon Rinsho. 2013; 71(8): 1352-67.
6. Корниенко Е.А. Инфекция H. pylori у детей: руководство. Москва: ГЭОТАР-Медиа; 2011.
7. Graham D.Y., Yamaoka Y. Disease-specific H. pylori virulence factors: the unfulfilled promise. Helicobacter 2000; 5: 3-9.
8. Thiodleifsson B., Asbjorndottir H., Sigurjonsdottir R.B. et al. Seroprevalence of H. pylori and cagA antibodies in Iceland, Estonia and Sweden. Scand. J. Infect. Dis. 2007; 39: 683-9.
9. Паролова Н.И., Корниенко Е.А., Дмитриенко М.А. Сравнительная оценка эффективности современных методов диагностики инфекции Helicobacter pylori. Педиатрия 2008; 1: 4-8.
10. Барышникова Н.В. Актуальные проблемы диагностики хеликобактериоза. Экспер. Клин. Гастроэнтерол. 2009; 2: 50.
Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014
Клинический опыт
315
11. Исаева Г.Ш. Проблемы совершенствования диагностики Helicobacter pylori инфекции. Казанский медицинский журнал 2011; 92(2): 257-61.
12. Ивашкин В.Т., Мегро Ф., Лапина Т.Л. Основные принципы диагностики H. pylori. Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии. Москва: Триада-Х; 1999.
13. Сарсенбаева А.С., Игнатова Г.Л., Воропаева С.В. Методы диагностики инфекции H. pylori: учебное пособите. Челябинск; 2005.
14. Урсова Н.И. Хеликобактерная инфекция у детей: проблема, анализ обобщенных данных. Москва; 2009.
15. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. Москва: Триада-X; 1998.
16. Камалова А.А. Состояние микроэкологии желудочно-кишечного тракта у детей с хронической гастродуоденальной патологией
[диссертация]. Казань: КФУ; 2011.
17. Подусенко В.В. Распространенность и особенности течения хеликобактериоза у школьников Приморского края [диссертация]. Москва; 2006.
18. Березняк Е.А. Особенности штаммов H. pylori, циркулирующих в Ростровской области, и конструирование антигенного полимеразного хеликобактерного диагностикума [диссертация]. Ставрополь; 2010.
19. Чуков С.З., Пасечников В.Д. Определяют ли факторы вирулентности характер гастродуоденальной патологии? Рос. Журн. Гастроэнтерол., Гепатол. Колопроктол. 2001; 11(2, прил. 13): 74.
20. Шкитин В.А., Шпирна Г.Н., Старовойтов Г.Н. Роль H. pylori в патологии человека. Клин. Микробиол. Антимикроб. Химиотер. 2002; 4(2): 128-45.
Поступила: 18.08.2014
Гены & Клетки Том IX, № 3, 2014
