CC BY
136
Оптимальная дозировка препарата пробиотических лактобацилл для телят
Е.С. Петраков, к.б.н, ВНИИФБиП РАСХН; Н.С. Петракова, к.в.н., Калужский филиал РГАУ-МСХА им. К.А. Тимирязева
В последние годы, несмотря на существенное увеличение числа зарегистрированных в РФ пробиотиков, поиск штаммов бактерий, перспективных для разработки новых пробиотических препаратов, не прекращается. При этом обращается внимание не только на традиционные требования к свойствам пробиотических микроорганизмов (антагонизм,
адгезия, стимуляция неспецифической резистентности и т.д.), но и на их способность воздействовать на обменные функции в пищеварительном тракте животных и прежде всего на гидролиз полисахаридов — крахмала, инулина, ксилана и др.
В 2009 г. в лаборатории была составлена ассоциация из четырёх штаммов лактобацилл: Lactobacillus casei LBB 1/90, Lactobacillus paracasei LBB 5/90, Lactobacillus rhamnosus LBB 33/90, Lactobacillus rhamnosus LBB 44/90, выделенных из пищевари-
тельного тракта телят, которой дали рабочее название тетралактобактерин. Входящие в препарат штаммы непатогенны, обладают широким спектром антагонистической активности против бактерий родов Staphylococcus, Streptococcus, Escherichia и Salmonella, показывают высокую адгезивность и устойчивы к ряду антибиотиков, т.е. отвечают требованиям, предъявляемым к микроорганизмам — пробиотикам.
Влияние опытной партии препарата на микробиоценоз кишечника, морфо-биохимические параметры крови и рост телят-молочников изучали ранее. Установлено, что пробиотик не оказывал неблагоприятного воздействия на морфобиохимические параметры крови, стабилизировал микробиоценоз кишечника, стимулировал интенсивность роста животных, а ростостимулирующий эффект наблюдался на протяжении месяца после прекращения дачи препарата.
Встал вопрос, повторится ли пробиотическое действие опытной партии препарата лактобацилл при использовании более низких и высоких концентраций живых микробных тел в миллилитре культуры и какова наиболее оптимальная доза его введения в рацион телят для повышения неспецифической резистентности и продуктивности, что и определило цель исследования.
Материалы и методы исследования. Опыт провели в марте-апреле 2011 г. во ФГУП «Ермолино», Калужская область, в период массовых отёлов на телятах холмогорской породы. На ферме имеется родильное отделение и профилакторий для новорождённых. В 2-суточном возрасте телят переводили в индивидуальные домики, расположенные на открытом воздухе. Уход и кормление осуществляли в соответствии со схемами и требованиями, принятыми в хозяйстве. Ежедневно телята получали не менее 5 л цельного молока, на седьмые сутки начинали вводить заменитель цельного молока Кормилак, на десятые сутки и далее в рацион вводили сено, овёс и стартерный комбикорм ПК-1.
Контрольную (I гр.) и две опытные (II и III гр.) группы формировали по методу пар-аналогов по мере рождения телят [1]. В каждую группу набирали по три бычка и три тёлочки, всего по 6 гол. Для стимуляции естественных защитных сил организма новорождённым телятам II и III опытных групп выпаивали ежедневно, на протяжении первых 20 сут.
жизни, по 20 мл культуры, содержащей в среднем 108 и 1010 колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл соответственно.
Изучение микрофлоры пищеварительного тракта осуществляли путём микробиологических исследований фекалий, которые получали при акте вынужденной дефекации. Исследовали количественное содержание в химусе сальмонелл, эшерихий, протеев, грибов рода кандида, бифидо- и лактобактерий.
Производили отбор проб и анализ крови животных контрольной и опытных групп по общепринятым методикам [2—7].
Биохимический анализ крови проводили на автоматическом фотометре Screen Master LIHD 113 (Hospitex Diagnostics) с использованием наборов реагентов производства ЗАО «Диакон-ДС» (г. Пущино).
В качестве физиологических норм брали данные, приведённые в литературе [2, 3].
Результаты исследований. Изучение изменений количества микроорганизмов, населяющих кишечник телят, показало, что в то время как уровень кишечной палочки и сальмонелл у молодняка всех группах различался незначительно, количество бифидобактерий и лактобацилл у телят II и III опытных гр. превышало эти показатели у животных контрольной гр. на фоне одновременного снижения популяции протея и грибов рода кандида (табл. 1). Причём эти тенденции сохранялись и после прекращения выпойки препарата, что позволяет косвенно судить о благополучном заселении кишечника телят данными штаммами лактобацилл.
Выпойка телятам комплекса лактобацилл Lactobacillus casei LBB 1/90, Lactobacillus paracasei LBB 5/90, Lactobacillus paraplantarum LBB 33/90, Lactobacillus rhamnosus LBB 44/90, обладающих полисахаридазной активностью, оказала благо -приятное действие на животных, но при этом наблюдались различия по ряду показателей у животных опытных групп, что позволяет говорить о явной зависимости эффективности пробиотика от количества живых микробных клеток в дозе. Так, при анализе микрофлоры дистальных отделов пищеварительного тракта было установлено, что в то время как количество кишечной палочки и сальмонелл у животных всех групп находилось
1. Микрофлора кишечника телят (X±Sx)
Группа микроорганизмов/ период жизни Количество микроорганизмов в 1 г содержимого
группа
I контрольная II опытная III опытная
2Q сут. 3Q сут. 2Q сут. 3Q сут. 2Q сут. 3Q сут.
Бифидобактерии, *108 14,1±1,3 4,6±Q,6 22,2±2,1* 2Q,5±1,6* 27,3±2,9* 1Q,3±1,2*
Лактобактерии, *108 6,8±2,9 3,6±1,1 6,2±Q,6 6,4±2,2 19,3±4,9* 6,1±Q,6
Протей, х102 18,5±2,7 8,6±1,6 8,Q±Q,3* 4,Q±Q,5* 5,4±Q,8* -
Кандида, *102 7,9±1,1 2Q,4±2,1 2,9±Q,4* 5,5±1,3* 1,8±Q,3* -
Примечание: здесь и далее *Р<0,05 по 1-критерию при сравнении с контрольной группой
2. Клинический анализ крови телят (X±Sx)
Показатель Группа
I (контрольная) II опытная III опытная
период жизни
2Q сут. 3Q сут. 2Q сут. 3Q сут. 2Q сут. 3Q сут.
Гемоглобин, г/л 1Q6±4,8 1Q4,6±5 97,6±5,l 97±3 1Q6,8±3 1Q4,2±5,5
Эритроциты, млн/мкл 5,7±Q,2 6±Q,3 5,8±Q,3 6,1±Q,1 6±Q,2 5,6±Q,1
Лейкоциты, тыс/мкл 1Q,2±1,3 11,2±Q,9 1Q,9±1,1 9,7±Q,7 12,4±Q,5 1Q,2±1,7
Лейкоцитарная формула, %
базофилы 2,Q 1,Q 1,Q 1,Q 1,Q 1,Q
эозинофилы 3,Q 3,Q 1,Q 1,Q 1,Q 1,Q
нейтрофилы
юные - - - - - 1
палочкоядерные 2 1 2 6 3 4
сегментоядерные 25 22 16 16 15 17
лимфоциты 64 64 74 7Q 74 7Q
моноциты 4,Q 12 6 6 5 6
СОЭ, мм/час 1 1 1,2 1 1 1,2
Показатели неспецифической резистентности
Бактерицидная активность, % 77,5 6Q,6 8Q,8 61,3 7Q,9 81,2*
Фагоцитарная активность, % 44,Q 5Q,2 65,7** 71,Q** 7Q,2** 68,5**
Содержание лизоцима, мкг/мл 12±1,2 13,2±Q,4 14,4±Q,5 15,2±Q,8 14,8±Q,4 14,4±Q,5
Примечание: здесь и далее *Р< 0,01, **Р<0,001 по 1-критерию при сравнении с контрольной группой
примерно на одном уровне, количество бактерий вида Proteus и грибов рода Candida различалось. У телят II гр., получавших 108 КОЕ/мл пробиотика, их количество составляло соответственно 46 и 27% от показателей в контрольной гр., у молодняка III гр., получавшего 1010 КОЕ/мл, их не было вовсе. Количество молочнокислых микроорганизмов у аналогов опытных групп увеличилось более чем в полтора раза. Снижение количества молочнокислых микроорганизмов у телят контрольной гр., вероятно, связано с особенностями питания — снижением в рационе доли молока и ЗЦМ и повышением доли концентратов и сена. Следует отметить, что после прекращения выпойки препарата количество бифидобактерий и лактобацилл в кишечнике телят опытных групп несколько снизилось с одновременным понижением темпов роста, однако эти показатели были выше, чем в контрольной группе, что свидетельствует о стимуляции развития молочнокислой микрофлоры пищеварительного тракта под действием пробиотика.
Показатели общего анализа крови молодняка всех групп были в пределах физиологической нормы и различались незначительно (табл. 2). Биохимические показатели у животных контрольной и опытных групп находились примерно на одном уровне.
Общие клинические показатели крови находились в пределах физиологической нормы, но отмечалось повышение количества лейкоцитов у телят III гр. во время дачи препарата. После прекращения выпойки пробиотика их количество снизилось. Мы полагаем, что это обусловлено большим количеством поступающих в организм бактерий, создающих тем самым повышенную напряжённость для иммунной системы. Для борьбы с ними активизируется выработка повышенного
количества лимфоцитов. Это согласуется с данными, полученными в ранее проведённых опытах. О стимуляции иммунной системы лактобациллами свидетельствует и повышение неспецифического иммунитета у животных опытных групп. Так, фагоцитарная и бактерицидная активность у молодняка III гр. была выше, чем у аналогов контрольной, на 36 и 34% соответственно, II гр. — выше на 41 и 1%. Увеличилось содержание в сыворотке крови лизоцима.
Нормализация микрофлоры пищеварительного тракта под действием пробиотика, проявившаяся в увеличении количества лактобацилл и бифидобактерий с одновременным снижением количества грибов рода Candida и бактерий рода Proteus, а также стимуляция неспецифического иммунитета в совокупности привели к повышению интенсивности роста телят опытных групп. По-видимому, определённый эффект при этом оказала полиса-харидазная активность лактобацилл, входящих в состав пробиотика, улучшив переваримость таких сложных углеводов, как крахмал и инулин.
Изучение показателей продуктивности телят показало, что животные опытных групп росли интенсивнее сверстников контрольной гр. во время выпойки препарата. В то же время после прекращения дачи тетралактобактерина эта разница постепенно нивелировалась (табл. 3). Сохранность телят во всех группах составляла 100%.
Среднесуточный прирост животных II гр., получавших по 20 мл препарата с концентрацией живых микробных клеток 108 КОЕ/мл, превышал этот показатель на 22% по сравнению с контролем, а у телят III гр., получавших 20 мл препарата с концентрацией 1010 КОЕ/мл, на 33,8% (табл. 3).
Вывод. Результат от выпойки телятам комплекса лактобацилл Lactobacillus casei LBB 1/90,
3. Показатели роста телят (X+Sx)
Группа
Показатель I (контрольная) II III
Живая масса, кг:
при постановке на опыт 30±0,4 29,8±0,7 30,3±0,8
на 20-е сут. 40,3±0,7 43,3±1,4 45,5±0,96*
на 30-е сут. 52,8±1,9 52,8±1,3 54,2±1,4
Среднесуточный прирост, г.:
на 20-е сут. 517 663* 763*
% к контролю 100 122,4 133,8
на 30-е сут. 760 759 800
% к контролю 100 99,8 105,3
Lactobacillus paracasei LBB 5/90, Lactobacillus rhamnosus LBB 33/90, Lactobacillus rhamnosus LBB 44/90, обладающих полисахаридазной активностью, напрямую связан с их количеством в суточной дозе. Так, при снижении количества микроорганизмов до 10s КОЕ/мл наблюдались менее значимые изменения в микрофлоре кишечника и более низкий прирост живой массы по сравнению с введением в рацион 1010 КОЕ/мл на 1 животное. Повышение интенсивности роста телят II гр., отмеченное во время выпойки пробиотика, отсутствовало после прекращения дачи препарата, и в целом за весь
период опыта прирост живой массы у телят этой группы не отличался от прироста у контрольных животных. В то же время у молодняка III гр., получавшего наиболее высокую дозу препарата, повышение среднесуточного прироста живой массы зафиксировано также после прекращения выпойки препарата и в целом за опыт было больше этого показателя на 5% по сравнению с телятами контрольной группы. Прирост живой массы остался самым высоким в группе, получавшей наиболее высокую концентрацию лактобацилл.
Литература
1. Овсянников А. И. Основы опытного дела в животноводстве. М.: «Колос», 1976. С, 304.
2. Кариуть И.М. Гематологический атлас сельскохозяйственных животных. Минск: Ураджай, 1986. С. 108—111.
3. Метода ветеринарной клинической лабораторной диагностики: справочник/ под ред. проф. И.П. Кондрахина. М.: КолосС, 2004. С, 520.
4. Блинов Н.И. Микрометод определения фагоцитарной активности клеток крови // Фагоцитоз и иммунитет. М., 1983.
5. Емельяненко П.А. Сезонная динамика гуморальных факторов естественной резистентности сыворотки крови новорождённых телят // Доклады ВАСХНИЛ. 1977. № 10. С, 32-34.
6. Плохинский НА. Алгоритмы биометрии. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1980. С. 150.
7. Смирнова О.В., Кузьмина ТА. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом нефелометрии // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1966. № 4. С. 8-11.
