CC BY
32
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология туберкулеза Immunology of tuberculosis
Результаты. Изучение показало, что особенности иммунологических реакций при активных туберкулемах связаны со снижением фагоцитарной и функционально-метаболической активности моноцитов (р < 0,05), повышением экспрессии на них CD11b и HLA-DR (р < 0,05), увеличением количества гранулоцитов с усилением их фагоцитарной активности, повышением экспрессии CD11b и CD11c (р < 0,05). Клеточный иммунитет у больных с активной туберкулемой характеризовался увеличением популяции лимфоцитов в периферической крови (р < 0,05), повышением экспрессии CD25 и HLA-DR на Т-лимфоцитах, CD95 — на Т-хелперах, снижением числа №К-, убТ-клеток. Т-лимфоцитов. Активность туберкулемы сопряжена с увеличением количества №КТ-лимфоцитов (р < 0,05) и Тreg-клеток (р < 0,05). Гуморальный иммунитет в этой подгруппе отличался подъемом концентрации 1Ь-4, МШ и снижением уровня ЮТа (р < 0,05).
Туберкулема в фазе стихающей и умеренной активности сопровождалась снижением фагоцитарной и функционально-метаболической активности моноцитов (р < 0,05) с понижением экспрессии HLA-DR, увеличением экспрессии CD25 и СD95 на Т-лимфоцитах и Т-хелперах (р < 0,05), а также снижением экспрессии HLA-DR на Т-лимфоцитах (р < 0,05). У этих пациентов выявлено значительное снижение количества NK-кпеток и увеличение убТ-клеток (р < 0,05), сопровождаемое повышением количества Тreg-кпеток и индекса CD4+/CD8+ (р < 0,05). Цитокиновый профиль отличался увеличением концентрации ^-1р, М№ (р < 0,05), Ш-2 (более чем в 600 раз в сравнении с контролем, в 2,9 раза в сравнении с данными пациентов, имеющих активные туберкулемы, р < 0,05), снижением №N7 и ТОТа (р < 0,05).
Заключение. С учетом выявленных изменений иммунологических показателей разработаны критерии определения активной туберкулемы легкого — увеличение экспрессии CD11b, HLA-DR на моноцитах, CD11b — на ней-трофилах, туберкулемы в фазе умеренной или стихающей активности — увеличение экспрессии CD25 на Т-хелперах, снижение HLA-DR на Т-лимфоцитах и понижение продукции О22- гранулоцитами. Применение множественного регрессионного анализа позволило установить зависимость, позволяющую оценить фазу активности туберкуле-мы на основании уравнения, включающего оценку количества CD3-, CD4-, CD19-лимфоцитов, ^К-клеток, а также экспрессии HLA-DR на Т-лимфоцитах.
РОЛЬ ОКСИДА АЗОТА В ИММУНОПАТОГЕНЕЗЕ ФИБРОЗНО-КАВЕРНОЗНОГО ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ
Дьякова М.Е., Эсмедляева Д.С, Перова Т.Л.
ФГБУ«Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Оксид азота (N0) участвует в регуляции разнообразных метаболических реакций, обеспечивающих жизнеспособность и функциональную активность клеток. Оксид азота может выступать также и как модулятор иммунного ответа.
Цель. Изучить взаимосвязь уровня N0 с продукцией цитокинов у больных фиброзно-кавернозным туберкулезом легких (ФКТ).
Материалы и методы. У 29 больных ФКТ в мононукле-арах (мн) и нейтрофилах (нф) крови изучали генерацию
стабильных метаболитов NO — по концентрации общего (NO2-/NO3-) и эндогенного (NO2-) нитрита с помощью набора Total NO/Nitrite/Nitrate (R&D Systems, Канада). Уровень индуцибельной синтазы оксида азота (iNOS) — набором Human iNOS Immunoassay (USCN, КНР). Концентрацию цитокинов (IL-10, IL-17, IL-18), IFNy, TNFa — в цельной крови, индуцированных PPD и не стимулированных, определяли с использованием тест-системы производства «Вектор-Бест» (Новосибирск).
Результаты. У больных ФКТ выявлено снижение генерации общего и эндогенного нитрита мононуклеарами и ней-трофилами (р = 0,000...). Уровень экспрессии iNOS этими клетками определялся в пределах референсного диапазона.
Интенсивность базальной продукции цитокинов была разнонаправленной: повышение IL-18 (р = 0,0015), снижение TNFa (р = 0,04) и сохранение в пределах референсного диапазона продукции IL-10, IL-17 и IFNy. Интенсивность секреции цитокинов, индуцированных специфическим антигеном PPD, была также разнонаправленной: рост IFNy (р = 0,001) и IL-18 (р = 0,0001) наряду со снижением уровней TNFa (р = 0,048) и IL-10 (р = 0,0028). При этом уровень секреции IL-17 не отличался от рефересного.
Выявлена ассоциированность между показателями нитрозилирующего стресса и продукцией цитокинов: прямая зависимость между экспрессией iNOSн и продукцией IL-10 (r = 0,80; p = 0,01), обратная — с уровнем IL-17_PPD (r = -0,91; p = 0,0015); обратная корреляция между экспрессией iNOS мн и продукцией IL-17 (r = -0,80; p = 0,03), TNFa (r = -0,94; p = 0,005), IL-17_PPD (r = -0,78; p = 0,04) и прямая между экспрессией iNOS мн и уровнем IFNy (r = 0,79; p = 0,02); обратная связь между генерацией NO2-мн и продукцией IL-17 (r = -0,84; p = 0,004). Между базальной продукцией IFNy и TNFa выявлена обратная корреляция (r = -0,80; p = 0,03).
Заключение. Отсутствие синергизма между базальной продукцией IFNy и TNFa отражает их несостоятельность в индуцировании цитотоксического уровня NO. IFNy один может индуцировать только нецитотоксические концентрации NO. Обнаруженный дефицит продукции TNFa может отражать функциональную инертность иммуноцитов и, как следствие, хронизацию и прогрессирование туберкулезного процесса. Выявленные ассоциации между продукцией цитокинов и показателями нитрозилирующего стресса отражают их важную роль в иммунопатогенезе гиперхронического специфического процесса. Отмеченное у больных ФКТ снижение продукции эндогенного и общего нитрита может свидетельствовать об активации Th2, при которых ингибируется экспрессия iNOS и возрастает активность аргиназы, катаболизирующей субстрат для синтеза NO.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРОВНЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ
Истомина Е.В., Старшинова А.А., Чернохаева И.В., Назаренко М.М., Ланда С.Б., Филатов М.В., Яблонский П.К.
ФГБУ«Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Поиск дополнительных критериев определения активности туберкулезной инфекции является важным для возможности прогноза течения и развития
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
заболевания. Формирование эффективного противотуберкулезного иммунного ответа сопряжено с формированием иммунных комплексов, содержащих исключительно IgG3. Наличие иммунных комплексов, состоящих в основном из IgE, могут способствовать прогрессирова-нию болезни.
Цель. Определение уровня и изотипа иммуноглобулинов IgG и IgE у больных туберкулезом легких.
Материалы и методы. За период с 2015-2016 гг. на базе ФГБУ «СПбНИИФ» Министерства здравоохранения РФ обследовано 50 больных туберкулезом легких с бакте-риовыделением. Комплекс диагностики включал оценку клинической симптоматики, рентгенологические и бактериологические методы. Определение иммунных комплексов, содержащих IgE, IgG3, IgG1, IgG1 + IgG3, IgG1 + IgE (с помощью метода динамического светорассеяния). Обработка материала проводилась с использованием программы Statistica 7.0. Мы применили критерий хи-квадрат (х2). Различия считались достоверными при р < 0,05.
Результаты. Иммунные комплексы определялись у всех пациентов в рассеивании 7,25±0,34%, так же как IgG1 - 4,3±0,25% и IgE - 3,48%, в 98% (49/50) были IgG3 — 3,2%±0,37%. Фракции иммуноглобулинов G и E имели место в 88,0% (44\50) IgG1 + IgG3 — 3,76% и несколько реже в 74,0% (37/50) IgG1 + E — 5,71%, тогда как имели место только в 30,0% (15/50) IgG3 + IgE — 2,09.
Заключение. Определение в одинаковом проценте случаев IgG1 и IgG3 (100%), также как IgE (100%) может свидетельствовать о полноправном запуске аллергической реакции при туберкулезе, что может объяснять появление в IgG1 + E и IgG3 + E комплексов. Полученные данные могут объяснять запуск иного механизма, нежели только инфекционный, в развитии туберкулеза.
МНОГОПАРАМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ТЯЖЕСТЬЮ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ
Никитина И.Ю.1, Пантелеев А.В.1, Ганусов В.В.2, Лядова И.В.1
1ФГБНУ «Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза», Москва, Россия 2 Университет Теннесси, Ноксвилл, Теннесси, США
Исследования в области иммунопатогенеза туберкулеза (ТБ) являются актуальными и направлены на выяснение роли различных популяций клеток врожденного и адаптивного иммунитета в развитии противотуберкулезного ответа. Изменения соотношения между различными параметрами иммунного ответа являются факторами, влияющими на течение инфекции, и могут быть использованы для оценки активности ТБ и эффектности проводимой терапии.
В связи с этим целью исследования явился многопараметрический анализ различных популяций иммунных клеток и анализ их взаимосвязи с особенностями течения ТБ.
Материалы и методы. В исследование было включено 50 больных ТБ легких. С помощью проточной цито-метрии были получены данные о 54 иммунологических показателях: Т- и B-лимфоцитах (CD4+, CD8+, CD19+), NK-клеток (CD16/56+); лимфоцитах CD4, продуцирующих различные комбинации цитокинов IFNy, TNFa и IL-2 и других. Тяжесть ТБ определяли, оценивая фор-
му легочной патологии, уровень бактериовыделения, степень распространенности и деструкции в легких и тяжесть интоксикации.
Для статистического анализа применяли корреляционный метод, кластерный анализ, множественную линейную регрессию. Точность статистических результатов подтверждали, используя метод «ресемплинга» данных и проверки статистических гипотез на 1000 псевдовыборках (метод "bootstrapping").
Результаты. Корреляционный анализ с критическим уровнем p-value = 0,006 выявил, что основными иммунологическими коррелятами клинических параметров были популяции лейкоцитов. В частности, процент лимфоцитов обратно коррелировал со всеми клиническими проявлениями ТБ, кроме формы легочной патологии. Наиболее достоверными были прямые корреляции между процентом нейтрофилов, степенью деструкции в легких и уровнем бактериовыделения (p = 2 х 10-5 и p = 0,01 соответственно). Кластерный анализ с использованием метода "bootstrapping" подтвердил, что ассоциации между популяцией нейтрофилов, степенью деструкции легочной ткани и уровнем бактериовыделения сохраняются в псевдовыборках (70 и 50% соответственно). Множественная регрессия показала, что одним из основных факторов, влияющих на изменение числа нейтрофилов в крови является степень деструкции в легких.
Заключение. Тяжесть ТБ не определяется недостаточностью «протективного» иммунного ответа лимфоцитов Th1, а возможно зависит от патологической иммуноре-активности организма, ассоциированной с повышенным содержанием популяций нейтрофилов.
Работа поддержана грантом РНФ № 15-15-00136.
ПОПУЛЯЦИИ ЛИМФОЦИТОВ Th1, Th17, Th1/Th17 ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ
Пантелеев А.В., Никитина И.Ю., Горелова Л.А., Космиади Г.А., Лядова И.В.
ФГБНУ«Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза», Москва, Россия
Введение. Протекция против туберкулеза (ТБ) была первоначально ассоциирована с генерацией лимфоцитов Th1 и продукцией ими IFNy. Более поздние исследования показали вклад других популяций Т-лимфоцитов и продуцируемых ими цитокинов в контроль над микобактери-ями (Mtb), в частности — лимфоцитов Th17 и IL-17. При этом некоторые исследования поставили под вопрос роль и механизмы протективной активности лимфоцитов Th1 при ТБ, а при ряде других патологий были описаны популяции клеток, коэкспрессирующих цитокины типа 1 и IL-17, а также рецепторы, характерные для популяций Th1 и Th17. Роль и относительный вклад этих популяций в противотуберкулезный иммунный ответ и патологию при ТБ остается не до конца установленной.
Цель. Фенотипическая и функциональная характеристика лимфоцитов Th1, Th17 и Th1/Th17 и анализ количественных параметров их ответа при туберкулезе легких у людей.
Материалы и методы. В исследование были включены больные ТБ легких, проходящие лечение в ФГБНУ «ЦНИИТ», здоровые люди, находящиеся в контакте с больными ТБ, здоровые доноры, не имеющие установленных контактов с больными ТБ. Клетки крови стимулировали антигенами Mtb и с помощью проточной
