CC BY
6
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СУБСТАНЦИИ ТРИКЛАБЕНДАЗОЛА В СУПРАМОЛЕКУЛЯРНОМ КОМПЛЕКСЕ "ТРИКЛАФАСЦИД"
Мусаев М.Б.*, Шумакович ИЛ.*, Халиков М.С.**, Миленина М.В.* *ВНИИП - филиал ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН (vigis-patent@yandex.ni) **ОСЮ «НВЦ Агроветзащита» (mhalikov@vetmag.ru)
Введение. Триклабендазол (синоним, фазинекс - 5%-ная суспензия) (С14Н9С13Ш05) является препаратом фасциолоцидного действия, разработанного фирмой «Сиба-Гейги» (Швейцария), который более активен против преимагинальных фасциол. Этот препарат, является лучшим средством терапии острого фасциолёза и может быть применятся для профилактики этого заболевания [1]. Для усовершенствования данного препарата нами применялся метод механохимической модификации субстанции триклабендазола (ТКБ), позволяющий получать твердые дисперсии ТБК, которые при их применении в жидкой фазе образуют межмолекулярные супрамолекулярные комплексы типа «гость-хозяин» с водорастворимыми полимерами.
С целью получения препарата с высокой антигельминтной и экономической эффективностью была получена лекарственная форма супрамолекулярный комплекс триклабендазола на основе природного полимера арабиногалактан /АГ/, в одну стадию без участия жидких компонентов (растворители), который представляет собой легко сыпучий порошок кремового цвета с размером частиц от 0,1 до 10 микрон под условным названием «триклафасцид [2].
Проведены клинические и доклинические испытания супрамолекулярного комплекса «триклафасцид» и установлено, что растворимость препарата возрастает (в 8 раз) и он проявляет 100%-ную эффективность в 5 раз уменьшенной терапевтической дозе. По параметрам острой токсичности, острой накожной токсичности относится к 4 классу малотоксичных веществ (по ГОСТ 12.1.007-76) и не оказывает отрицательного действия на неповрежденную кожу, обладает слабо выраженными кумулятивными свойствами. Триклафасцид не обладает иммунотоксичностью и эмбриотропными свойствами [3-8].
Для внедрения триклафасцида в ветеринарную практику необходимо разработать технические условия (ТУ), в которых необходимо описать, как проводить контроль качества препарата.
Объектом исследования является супрамолекулярный комплекс триклабендазола - триклафасцид, который рекомендован для лечения животных при фасциолёзе.
Цель работы. Разработать методику контроля качества и определения массовой доли субстанции ТКБ (ДВ) в препарате триклафасцид.
Материалы и методы. Внешний вид и цвет препарата определяют визуально в стеклянном стаканчике по ГОСТ 25336 при дневном освещении.
Подлинность препарата определяют методом ТСХ в системе растворителей.
Содержание ТКБ определяют методом ВЭЖХ. Время выхода пика исследуемой пробы должно совпадать со временем выхода пика в растворе стандартного образца.
Определение массовой доли триклабендазола в порошке
Материалы реактивы посуда и оборудование:
- триклабендазол-стандартный образец;
- ВЭЖХ высокого давления с УФ детектором;
- хроматографическая колонка «Krovasil CN», 250X4,6 мм, размер частиц 5 мкм, либо аналогичная обращённофазная колонка;
- фильтровальная установка для получения деионизированной воды (класс Milli-Q) с удельным сопротивлением 18 МОм*см (Millipore Integral 5) или аналогичная
- весы лабораторные по ГОСТ Р 53228;
- колбы мерные по ГОСТ 1770;
- стеклянные пипетки по ГОСТ 29169;
-метанол для ВЖХ;
- центрифуга;
- УЗ-ванна.
- фосфатный буфер готовят из стандарта ГОСТ 8.135-2004.
Подготовка стандартного образца триклабендазола
В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают около 10 мг (точная навеска) стандартного образца (СО) триклабендазола. Растворяют навеску в 50 мл метанола, помещая колбу на 5 минут в УЗ ванну, далее доводят объём раствора тем же растворителем до метки, перемешивают. Примерная концентрация полученного раствора 100 мг/мл. Из полученного раствора методом разбавления готовят растворы для построения калибровочной кривой.
Подготовка раствора испытуемого образца
В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают около 0,5 г (точная навеска до третьего знака после запятой) исследуемого препарата помещают в колбу на 50 мл, добавляют 30 мл метанола и обрабатывают в УЗ ванне в течение 10 минут. Затем доводят раствор до метки метанолом и тщательно перемешивают. 10 мл полученной суспензии переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 минут при 6000 об./мин. 5 мл супернатанта переносят в другую мерную колбу объёмом 50 мл и доводят до метки тем же растворителем. Концентрация триклабендазола в полученном растворе должна составлять около 100 мкг/мл.
Подготовка раствора элюента
Содержимое стеклянной капсулы стандартного буфера с рН около 6 количественно переносят в колбу объёмом 1 л, доводят очищенной водой до метки и перемешивают. В качестве элюэнта используют смесь ацетонитрила и
приготовленного фосфатного буфера в соотношении 1:1. Температура колонки 30 °С.
Проведение испытания
В устройство ввода (инжектор) жидкостного хроматографа вводят последовательно равные объёмы испытуемого и стандартного растворов.
Количество инжекций для каждого образца не менее трёх. Относительное стандартное отклонение в серии последовательных вколов не должно превышать 2%.
Условия хроматографирования:
- длина волны детектора — 245 нм;
- расход элюэнта — 1,0 мл/мин;
- объём вкола 20 мкл;
- температура термостатирования колонки 30°С;
время выхода пиков триклабендазола при данных условиях: 11,7 ± 0,5 ми
Результаты. После проведение процедуры хроматографирования определяют площади пиков триклабендазола трёх вколов стандартного и опытного образцов. Рассчитывают среднее арифметическое их значение. Показателям качества. Вычисление концентрации препарата проводят по
Где, Sp - площадь пика препарата; mst - масса навески стандарта, мг; А - содержание триклабендазола в СО; Dilp - разбавление препарата (500); Sst— площадь пика стандартного образца триклабендазола; Шр - масса навески препарата, мг; Dilst- разбавление стандартного образца.
Характеристика готового продукта
Определение растворимости триклабендазола.
50,0±1, мг препарата количественно переносят в мерную колбу на 1,0 л, добавляют очищенной воды около 0,8 л, встряхивают в течение 5 мин при комнатной температуре и доводят объём до метки водой. Препарат должен полностью раствориться.
Определение образования устойчивой суспензии
Около 0,5 г препарата помещают в пробирку с притёртой пробкой, добавляют 10,0 мл очищенной воды и встряхивают в течение 1 минуты.
Образуется суспензия, которая не должна расслаиваться в течение 1 часа и более (ГФ XI, вып.2, стр.154).
Заключение. В результате проведённых исследований были разработаны, испытаны и провалидированы методы количественного определения массовой доли субстанции триклабендазола и его метаболитов в новом отечественном супрамолекулярном комплексе триклафасцид, необходимые для разработки ТУ и контроля качества каждой партии препарата при его производстве.
Литература: 1. Архипов И. А. Антигельминтики: фармакология и применение//Монография, Москва-2009. - 406 с. 2.Архипов И.А., Халиков С.С.,
Душкин А.В. и др. Супрамолекулярные комплексы антигельминтных бензимидазольных препаратов, получение и свойства. М.: «Новые авторы», 2017. -90с. З.Миленина М.В., Курочкина К.Г., Мусаев М.Б.//Российский паразитологический журнал.- 2017. - № 1.- С. 73-77. 4.Миленина М.В., Мусаев М.Б.//С6. мат. докл. научн. конф. "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями",- М.-2016.-Вып.17. - С. 256-259. 5.Миленина М.В., Мусаев М.Б.//С6. мат. докл. научн. конф. "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями",- М. -2016.-ВЫП.17.- С. 259-261. б.Миленина М.В., Мусаев М.Б.// Российский паразитологический журнал,- 2017,- №3,- С. 266-271. 7.Мусаев М.Б., Миленина М.В., Архипов И.А.и др .//Российский паразитологический журнал.- 2017.- №3.- С. 271-277. 8.Мусаев М.Б., Миленина М.В., Джамалова А.З. и др.//Сб. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями»,- 2017,-Вып. 18,- С. 293-296.
Quantification of triclabendazole substance in supramolecular complex "triclafascid". Musayev M.B., Shumakovich I.E. Halikov M.S., Milenina M.V. All-Russian K.I. Skryabin Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants, "Agrovetzashchita".
Summary. The methods of quantitative analysis of the mass fraction of triclabendazole in the new supramolecular complex triclafascide were developed, tested and validated.
