CC BY
26
Конфликт интересов. Автор заявляет об отсутствии явного или потенциального конфликта интересов, связанного с публикацией статьи.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Литература/References
1. Гериатрия: национальное руководство / Под ред. Ткачевой О.Н., Фроловой Е.В., Яхно Н.Н. Москва, 2018. 608 с. [ТкасИеуа O.N., Его1оуа E.V., Yakhno N.N., editors. Geriatriya: Ntional leadership. Moscow; 2018. 608 p. (In Russ.)]
2. Прощаев К.И., Ильницкий А.Н., Жернакова Н.И. Основные гериатрические синдромы. Учебное пособие. М.: АНО НИМЦ «Геронтология», 2012. 228 с. [Proshchaev K.I., Il'nitskii A.N., Zhernakova N.I. Osnovnye geriatricheskie sindromy. Textbook. Moscow: ANO NIMTS «Gerontologiya»; 2012. 228 p. (In Russ.)]
3. Оленская Т.Л. и др. Ортостатические реакции в прогнозе рисков при артериальной гипертензии как компоненте метаболического синдрома // Клиническая медицина. 2014. № 10. С. 26-32. [Olenskaya T.L. et al. Orthostatic reactions in the prognosis of risks in arterial hypertension as a component of the metabolic syndrome. Klinicheskaya meditsina. 2014; 10: 26-32. (In Russ.)]
4. Яхно Н.Н., Захаров В.В., Локшина А.Б. Нарушения памяти и внимания в пожилом возрасте // Журнал неврологии и психиатрии имени С.С. Корсакова. 2006. № 106 (2). С. 58-62. [Yakhno N.N., Zakharov V.V., Lokshina. A.B. Memory and attention disorders in old age. Zhurnal nevrologii i psikhiatrii imeniS.S. Korsakova. 2006; 106 (2): 58-62. (In Russ.)]
5. WHO/ISH Hypertension Guidelines. WHO, 1999. P. 1-12.
6. Aronow W.S. et al. ACCF/AHA 2011 expert consensus document on hypertension in the elderly: a report of the American College of Cardiology Foundation Task Force on Clinical Expert Consensus Documents developed in collaboration with the American Academy of Neurology, American Geriatrics Society, American Society for Preventive Cardiology, American Society of Hypertension, American Society of Nephrology, Association of Black Cardiologists, and European Society of Hypertension. J. Am. Soc. Hypertens. 2011; 5: 259-352. DOI: 10.1016/j.jash.2011.06.001.
7. Аронов Д.М., Лупанов В.П., Рогоза А.Н. Функциональные пробы, основанные на локальных воздействиях на нервные окончания и направленном изменении венозного возврата крови. Лекция VII // Кардиология. 1996. №№ 7. С. 7782. [ Aronov D.M., Lupanov V.P., Rogoza A.N. Funktsional'nye proby, osnovannye na lokal'nykh vozdeistviyakh na nervnye okonchaniya i napravlennom izmenenii venoznogo vozvrata krovi. Lektsiya VII. Kardiologiya. 1996; 7: 77-82. (In Russ.)]
8. Боровиков В. STATISTICA: искусство анализа данных на компьютере. Для профессионалов. СПб.: Питер, 2001. 656 с. [Borovikov V. STATISTICA: iskusstvo analiza dannykh na komp'yutere. Dlya professionalov. SPb.: Piter; 2001. 656 p. (In Russ.)]
9. Наследов А. IBM SSPS Statistics 20 и AMOS: профессиональный статистический анализ данных. СПб., 2013. 412 с. [Nasledov A. IBM SSPS Statistics 20 i AMOS: professional'nyi statisticheskii analiz dannykh. St. Petersburg., 2013. 412 p. (In Russ.)]
УДК 616.36-002.2-071 DOI 10.24412/2220-7880-2021-3-72-77
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОГНОСТИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ НЕПРЯМЫХ ИНДЕКСОВ ПЕЧЕНОЧНОГО ФИБРОЗА В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
'ИскаковаА.Н., 'НурлановаГ.Н., 'АстрахановА.Р., 'ЖумагалиеваГ.Д.,12КурмангазинМ.С.
1НАО «Западно-Казахстанский медицинский университет им. М.Оспанова», г. Актобе, Республика Казахстан (030019, г. Актобе, ул. Маресьева, 68), e-mail: astrakhanov.akezhan@mail.ru
^Управление здравоохранения Актюбинской области (030010, Республика Казахстан, Актюбинская область, г. Актобе, проспект Абилкайыр-хана, 40)
Непрямые сывороточные маркеры связаны с нарушением функции печени и используются в качестве теста для определения фиброза печени. Цель исследования - определение прогностической ценности непрямых индексов печеночного фиброза в сравнении с непрямой эластографией. Проведен ретроспективный анализ 101 медицинской карты. Расчитаны непрямые индексы фиброза печени (Forns, FIB -4, APRI, MDA) в сравнении с данными непрямой эластографии, проведен статистический анализ исследования с определением коэффициента Коэна и ROC-анализа. Анализ показателей непрямых индексов печеночного фиброза не обнаружил статистически значимой связи в сравнении с результатом непрямой эластографии. Определение межрегионального согласия качественных переменных, рассчитанное к в сравнении с Fibroscan, показало, что тест APRI имеет более предпочтительную прогностическую ценность, чем другие индексы: MDA (0,12), FIB -4 (0,09), FORNS (0,04) c достаточно большим разбросом индивидуальных показателей. По данным ROC-анализа, наибольшую чувствительность показывают тесты Forns, MDA, а наибольшая специфичность отмечена в индексах APRI, FIB -4. Уровень фиброза печени по Fibroscan и рассчитанные нами индексы достоверно коррелируют с длительностью заболевания (r=0,33; p<0,05). Вышеуказанные тесты обладают незначительным уровнем специфичности и не могут полностью заменить рутинного обследования печени методом непрямой эластографии.
Ключевые слова: хронический гепатит С, непрямая эластография, фиброскан, непрямые маркеры фиброза, FORNS, FIB-4, APRI, MDA.
DETERMINING THE PROGNOSTIC VALUE OF INDIRECT LIVER FIBROSIS INDICES IN CLINICAL PRACTICE
'IskakovaA.N., 'Nurlanova G.N., 'Astrakhanov A.R., 'Zhumagaliyeva G.D., 12Kurmangazin M.S.
'Marat Ospanov West Kazakhstan Medical University, Aktobe, Republic of Kazakhstan (030019, Kazakhstan, Aktobe, Maresyev St., 68), e-mail: astrakhanov.akezhan@mail.ru
2Health Department of Aktobe region (030010, Republic of Kazakhstan, Aktobe region, Aktobe, Abilkayyr-khan Аve., 40)
Indirect serum markers are associated with impaired liver function and are used as a test to diagnose liver fibrosis. The objective of the study is to determine prognostic value of indirect indexes of hepatic fibrosis in comparison with indirect elastography. A retrospective analysis of 101 medical records was performed. Indirect liver fibrosis indices (FORNS, FIB-4, APRI, MDA) were calculated in comparison with indirect elastography indicators, statistical analysis of the study with Cohen's coefficient and ROC-analysis was performed. Analysis of indirect indexes of hepatic fibrosis did not reveal statistically significant relationship in comparison with indirect elastography results. Determination of inter-regional agreement of qualitative variables, calculated by k in comparison with Fibroscan, has shown that the APRI test has a preferable predictive value than the other indices: MDA (0.12), FIB-4 (0.09), FORNS (0.04) with a sufficiently large variation of individual indicators. According to ROC-analysis data, the highest sensitivity is shown by FORNS, MDA tests, and the highest specificity is noted in the indices APRI, FIB-4. The liver fibrosis level according to Fibroscan and the indices calculated by us reliably correlate with the disease duration (r=0.33; p<0.05). The above-mentioned tests have an insignificant level of specificity and cannot fully replace the routine liver examination by means of indirect elastography.
Keywords: chronic hepatitis C, indirect elastography, fibroscan, indirect fibrosis markers, FORNS, FIB-4, APRI, MDA.
Введение
Инфекция, вызванная вирусом гепатита С (ВГС), является основной причиной цирроза и рака печени, поражающих, по оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), 80 миллионов пациентов с хроническим гепатитом С (ХГС) во всем мире и убивающих около 0,7 миллиона человек ежегодно [1]. В связи с высоким глобальным бременем болезней ВОЗ способствует ликвидации вирусного гепатита как основной угрозы общественному здравоохранению к 2030 году [2]. Характерной особенностью этого заболевания является его позднее выявление ввиду бессимптомной или неспецифичности клинических проявлений. Поскольку противовирусное лечение, наиболее эффективное на начальных стадиях болезни, позволяет предотвратить развитие жиздаугрожающих печень-ассоциированных состояний и коморбидности [3], ранняя и точная диагностика фиброза печени является важнейшей задачей. Точное определение стадии фиброза имеет первостепенное значение в оценке прогноза заболевания, определении терапевтической тактики и интенсивности наблюдения [4]. До недавнего времени эталонным методом диагностики фиброза считалась биопсия печени (БП) с гистологической полуколичественной оценкой биоптата. С начала 2000-х годов получили развитие неинвазивные методы диагностики фиброза, среди которых выделяют инструментальные (транзиентная эластометрия [5,6], соноэластография сдвиговой волной [6, 7] и другие) и лабораторные, или сывороточные маркеры (Фибро-тест® [6] и другие) [8]. Традиционно эффективность неинвазивных методов оценивалась в сравнении с БП. Однако выявленный ряд недостатков БП (погрешность образца, вариабельность образца, вариабельность результатов при оценке биоптата разными морфологами и одним и тем же морфологом при пересмотре) снижает ее применимость в качестве «золотого» стандарта диагностики фиброза [9, 10], в связи с чем этот метод в последние годы признан «неидеальным золотым стандартом» [11]. При неидеальном «зо-
лотом» стандарте или в отсутствие «золотого» стандарта для оценки эффективности диагностических тестов рекомендуется использовать виртуальный ре-ференсный стандарт, в роли которого может выступать экспертная оценка (ЭО) или математические методы, основанные на теории латентных переменных [12]. В мире небольшим количеством исследователей предпринимались попытки анализа сравнительной эффективности различных методов диагностики фиброза печени без использования «золотого» стандарта [13, 14, 15]. В связи с затруднением проведения эласто-метрии печени в некоторых лечебных учреждениях, а также дорогостоящие исследования, основанные на запатентованных формулах, огромный интерес представляют методы неинвазивной диагностики фиброза у пациентов с ХГС, которые могут быть выполнены в любой клинической лаборатории. Определение выраженности фиброза печени на основе непрямых маркеров фиброза позволит врачам на любом этапе оказания медицинской помощи отбирать пациентов для дообследования и своевременного проведения противовирусной терапии.
Целью исследования явилось определение прогностической ценности непрямых индексов печеночного фиброза у пациентов с циррозом (фиброзом) печени, ассоциированным гепатитом С.
Материал и методы
Проведен ретроспективный анализ 101 медицинской карты индивидуального учета больных вирусными гепатитами В и С (форма № 30 утверждена Приказом МЗ РК от 23 ноября 2010 года, № 907). Средний возраст исследуемых составил 49,2±11,9 года, по полу: мужчины 51,49% (п=52), женщины 48,51% (п=49). Средний уровень степени фиброза составил 1,0±0,9. Были интерпретированы показатели, определение которых не затруднено в учреждениях первичного звена здравоохранения, такие как тромбоциты, АЛТ, АСТ, ГГТП, общий холестерин, щелочная фосфатаза, альбумин (табл. 1).
Таблица 1
Описательная статистика данных
Показатель Me Q1 Q3
Возраст 51,0 42,0 58,0
Длительность заболевания 4,0 2,0 5,0
Степень фиброза 1,0 0,0 2,0
ГГТП 44,4 29,0 71,0
Тромбоциты 210,0 179,0 268,0
Холестерин 5,1 4,4 5,5
АсАт 44,0 28,5 61,4
АлАт 48,0 30,9 73,0
Альбумин 51,4 41,7 66,3
ЩФ 74,0 55,9 89,7
В качестве параметра достоверного фиброза проводилась непрямая эластография печени на аппарате Fibroscan (производства Canada). По этим показателям были рассчитаны индексы косвенного определения печеночного фиброза: 1) Тест Forns=7,811-3,131*1п(тромбоциты) + 0,781*1п(ГГГП) + 3,467*1п(возраст) - 0,014*(холестерин, мг/дл). Значение меньше 4,2 соответствует отсутствию фиброза, больше 1 с вероятностью [16]. 2) Тест APRI: показатель АСТ больного • 100 / (верхний предел АСТ) • тромбоциты (N • 109/л). Если значение больше 1.0, то вероятность значительного фиброза велика; если меньше 0.5, то мала [17]. 3) Тест MDA: [Альбумин^/L) x 0.3 + тромбоциты (N • 109/L) x 0.05] - [щелочная фосфа-таза (IU/L)x0,014 + (АСТ/АЛТ) • 6+14]. Вероятность наличия цирроза высока, если значение меньше 0 (порядка 90%). Если значение больше 0, то велика вероятность отсутствия цирроза (порядка 90%) [18]. 4) Тест FIB-4 рассчитывается по формуле: FIB-4 = возраст (лет) • АСТ / (тромбоциты (N • 109/л) • sqrt (квадратный корень) (АЛТ). Если значение меньше 1,45, то вероятность значительного фиброза мала (порядка 90%). Если значение больше 3,25, то велика [19]. Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью пакета статистических программ STATISTICA 10, MedCalc 10.4.0.0. Был проведен описательный статистический анализ, определе-
Сопоставление по данным эластометрии и сравнение значений неин
ние коэффициента корреляции Спирмена. Для оценки качественных характеристик выборки использовался критерий согласия Пирсона (хи-квадрат). Для определения межрегионального согласия качественных (категориальных) переменных был рассчитан к (каппа) -коэффициент Коэна с использованием программы MedCalc 10.4.0.0. Производилось парное сравнение результатов оценки («каждый с каждым») с расчетом взвешенной к. Оценивали медиану от всех значений к для каждого индекса фиброза - индивидуальный показатель согласия и медиану от полученных индивидуальных показателей - генеральная взвешенная к. Оценку критерия согласия проводили согласно обще-рекомендуемым критериям [20]. Использовался ROC-анализ для оценки диагностической эффективности определенного диагностического теста.
Данное исследование одобрено локальным этическим комитетом Западно-Казахстанского медицинского университета имени Марата Оспанова, протокол № 58 от 17 января 2020 года.
Результаты и их обсуждение
Анализ показателей непрямых индексов печеночного фиброза не обнаружил достоверной статистически значимой связи в сравнении с результатом непрямой эластометрии (табл. 2).
Таблица 2
;чени в соответствии со стадией фиброза □ивных маркеров фиброза
FORNS (p=0,624) APRI (p=0,744) MDA (p=0,412) FIB4 (p=0,388)
Степень фиброза Нет фиброза Есть фиброз Нет фиброза Средний фиброз Есть фиброз Нет фиброза Есть фиброз Нет фиброза Средний фиброз Есть фиброз
0 13 20 14 15 4 30 3 16 16 1
1 10 16 12 12 2 23 3 13 13 0
2 8 18 7 14 5 24 2 16 7 3
3 3 12 5 7 3 11 4 7 6 2
Причем непрямая эластометрия печени на аппарате Fibroscan считается наиболее достоверным качественным и количественным методом выявления фиброза печени с определением степени. А непрямые тесты печеночного фиброза FIB-4, АРЫ,
МЭА) устанавливают только качественный параметр наличия или отсутствия фиброза. Анализ сопостав-
ления положительных и отрицательных результатов тестов фиброза показал противоречивые данные: положительные результаты с результатом непрямой эластографией совпали при подсчете теста МЭА, АРЫ, тогда как наибольшее количество отрицательных значений выявлено при расчете FIB-4 и FORNS (табл. 3).
Таблица 3
Результаты сопоставления непрямых индексов фиброза с данными непрямой эластографии
Положительные (%) Отрицательные (%) Показатель взвешенной X
FORNS 43,7 56,2 0,04
FIB-4 6,2 93,7 0,09
APRI 62,5 37,5 0,2
MDA 65,6 34,4 0,12
Определение межрегионального согласия качественных переменных, рассчитанное к в сравнении с Fibroscan, показало, что тест APRI имеет более предпочтительную прогностическую ценность, чем другие непрямые индексы печеночного фиброза: MDA (0,12), FIB-4 (0,09), FORNS (0,04) c достаточно большим разбросом индивидуальных показателей. Полученные данные указывают на незначительный уровень согласованности с результатами фибросканирования и не в полной мере могут
заменить его для определения фиброза печени. Для определения вариантов наиболее эффективного метода косвенного выявления печеночного фиброза проведен ЯОС-анализ. Результаты фибросканиро-вания и показателей непрямых маркеров фиброза печени позволили составить матрицы сопряженности с вычисленными значениями чувствительности (8е - доля истинно положительных проб) в точках отсечения, взятых через один интервал в один десятичный логарифм (рис. 1).
Рис. 1. ЯОС-кривые показателей непрямых индексов печеночного фиброза в сравнении с результатом
непрямой эластометрии
По данным матриц были построены ROC-кривые, которые показывают зависимость количества верно классифицированных положительных примеров от количества неверно классифицированных отрицательных примеров. Статистически значимых результатов, указывающих на высокую прогностическую значимость данных тестов, нами не обнаружено. Если наибольшую чувствительность показывают тесты FORNS, MDA, то наибольшая специфичность отмечена в индексах APRI, FIB-4. Возможно, это объясняется малым количеством исследуемых (n=101) и относительно низким уровнем фиброза пациентов (F-1). Следует отметить, что уровень фиброза печени по Fibroscan и рассчитанные нами непрямые индексы
печеночного фиброза (Forns, FIB-4, APRI, MDA) достоверно коррелируют с длительностью заболевания (r=0,33; p<0,05).
В то же время, по данным исследования Haseltine E.L. с соавт., APRI позволяет диагностировать выраженный фиброз с точностью, не уступающей более сложным современным группам методов. В сравнении четырех тестовых систем: Fibrotest, APRI, FIB-4 и индекс FORNS - при лечении 1208 пациентов с хроническим гепатитом С телапревиром APRI показал наиболее достоверные результаты, подтвердив свою валидность [15]. Аналогично в работе Martin J. с соавт. указывается, что индекс FIB-4 сопоставим с APRI со значениями AUROC около
0,8 и 0,73 при обследовании 388 пациентов [16]. А.Ф. Шептулина с соавт. доказали у больных первичным склерозирующим холангитом, что применение индекса FIB-4 позволяет с высокой точностью (80,7%) установить у них стадию выраженного фиброза печени (F>2). В метаанализе 22 исследований медиана AUROC, полученная по индексу FORNS, составила 0,76 для выраженного фиброза и 0,87 для цирроза, аналогично тому, который был получен при APRI. Европейская ассоциация по изучению печени (EASL) в одной из публикаций указала, что «сывороточные тесты с вероятностью 90% позволяют исключить цирроз печени».
Однако нами не выявлено статистической достоверности, указывающей на полную замену непрямых индексов фиброза печени фибросканированием. Ввиду отсутствия достоверных показателей специфичности и чувствительности мы не можем рекомендовать данные тесты как альтернативу непрямой эластометрии, несмотря на данные исследователей о прогностической ценности непрямых тестов.
Заключение
Результаты данного исследования показывают, что диагностические тесты, основанные на непрямых маркерах печеночного фиброза, обладают незначительным уровнем специфичности и не могут полностью заменить обследования печени методом фибросканирования. Но в условиях ограниченных ресурсов эти тесты могут использоваться для повседневного наблюдения в динамике пациентов с выраженным фиброзом печени.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии явного или потенциального конфликта интересов, связанного с публикацией статьи.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Литература/References
1. World Health Organization. Global report on access to hepatitis C treatment: focus on overcoming barriers. Geneva. 2016. https://www.who.int/hepatitis/publications/hep-c-access-report/en/
2. World Health Organization. Global health sectors strategy on viral hepatitis 2016-2021: towards ending viral hepatitis. Geneva. 2016. https://www.who.int/hepatitis/ strategy2016-2021/ghss-hep/en/
3. Бакулин И.Г. Актуальные вопросы противовирусной терапии хронических гепатитов В и С // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2010. № 5. С. 3-9. [Bakulin I.G. Actual Issues of Antiviral Therapy of Chronic Hepatitis B and C. Eksperimentalnaia i klinicheskaia gastroenterologiia. 2010; 5: 3-9. (In Russ.)]
4. Абдурахманов Д.Т., Морозов В.Г., Никитин И.Г. и др. Безопасность и эффективность телапревира в лечении хронического гепатита С у больных российской популяции, включенных в исследование по программе раннего доступа // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2014. Т. 24 (1). С. 39-46. [Abdurakhmanov D.T., Morozov V.G., Nikitin I. G. et al. Safety and efficacy of telaprevir in the treatment of chronic hepatitis C in patients from the Russian population enrolled in the early access study. Rossiiskii zhurnal gastroenterologii, gepatologii, koloproktologii. 2014; 24: 39-46. (In Russ.)]
5. Галушко М.Ю., Бакулин И.Г., Тимохина А.И. Сравнительный анализ диагностики фиброза печени методом
M-XL-эластометрии у пациентов с хроническим гепатитом С // Фарматека. 2016. № 5. С. 40-47. [Galushko M.Yu., Bakulin I.G., Timokhina A.I. Comparative analysis of the diagnosis of liver fi brosis by M-XL-elastometry in patients with chronic hepatitis C. Farmateka. 2016; 5: 40-47. (In Russ)]
6. Galushko M., Bakulin I., Munteanu M., Kushnir V. P1322 Real-time shear-wave elastography (SWE, Aixplorer™) performances in chronic hepatitis C (CHC) patients compared to liver stiff ness measurement (LSM, FibroScan™) and FibroTest™ with liver biopsy (LB) as reference. Journal of Hepatology. 2014; 60: 536. DOI: 10.1016 / S0168-8278 (14) 61489-6.
7. Галушко М.Ю., Ищенко А. Ю., Бакулин И.Г. и др. Соноэластография сдвиговой волной в оценке фиброза печени // Профилактическая и клиническая медицина. 2019. № 2 С. 35-39. [Galushko M.Yu., Ischenko A.Yu., Bakulin I.G. et al. Shear wave sonoelastography in evaluation of liver fibrosis. Profilakticheskaia i klinicheskaia meditsina. 2019; 2: 35-39. (In Russ.)] DOI: 10.31146/1682-8658-ecg-170-10-4-11.
8. Castera L., Chan H.L.Y., Arrese M. et al. European Association for the Study of the Liver (EASL)-Asociación Latinoamericana para el Estudio del Hígado (ALEH) Clinical Practice Guidelines: Non-invasive tests for evaluation of liver disease severity and prognosis. Journal of Hepatology. 2015; 63: 237-264. DOI: 10.1016 / j.jhep.2015.04.006.
9. Bedossa P., Dargére D., Paradis V. Sampling variability of liver fi brosis in chronic hepatitis C. Hepatology (Baltimore, Md.). 2003; 38: 1449-1457. DOI: 10.1016 / j.hep.2003.09.022.
10. Regev A., Berho M., Jeff ers L.J. et al. Sampling error and intraobserver variation in liver biopsy in patients with chronic HCV infection. The American Journal of Gastroenterology. 2002; 97: 2614-2618.
11. Poynard T., Ingiliz P., Elkrief L. et al. Concordance in a world without a gold standard: a new non-invasive methodology for improving accuracy of fi brosis markers. PloS one. 2008; 3: 3857. DOI: 10.1371/journal. pone.0003857.
12. Reitsma J. B., Rutjes A.W.S., Khan K.S. et al. A review of solutions for diagnostic accuracy studies with an imperfect or missing reference standard. Journal of Clinical Epidemiology. 2009; 62: 797-806.
13. Poynard T., Munteanu M., Luckina E. et al. Liver fi brosis evaluation using real-time shear wave elastography: Applicability and diagnostic performance using methods without a gold standard. Journal of Hepatology. 2013; 58: 928-935.
14. Poynard T., de Ledinghen V., Zarski J.P. et al. Relative performances of FibroTest, Fibroscan, and biopsy for the assessment of the stage of liver fi brosis in patients with chronic hepatitis C: A step toward the truth in the absence of a gold standard. Journal of hepatology. 2012; 56: 541-548.
15. Fernandes F.F., Perazzo H., Andrade L.E. et al. Latent Class Analysis of Noninvasive Methods and Liver Biopsy in Chronic Hepatitis C: An Approach without a Gold Standard. BioMed Research International. 2017. article ID8252980. -8 p. DOI: 10.1155/2017/8252980.
16. Фибротесты (оценка фиброза по анализам крови) Test FORNS http://hepato.com/I52009.pdf.
17. Фибротесты (оценка фиброза по анализам крови) Test APRI http://www.natap.org/2006/HCV/020806_04.htm.
18. Фибротесты (оценка фиброза по анализам крови) Test MDA http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&list_ uids=16478676&dopt=Abstract.
19. Фибротесты (оценка фиброза по анализам крови) Test Fib-4 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&list_ uids=16729309&dopt=Abstract.
20. Мозговой С.И. и др. Российский пересмотр международной классификации хронического гастрита: оценка нового диагностического подхода методами каппа-статистики // Омский научный вестник. 2010. № 1. C. 84-88. [Mozgovoi S.I. et al. Russian Revision of the International Classification of Chronic Gastritis: Assessment of the New Diagnostic Approach by Kappa Statistics. Omskii nauchnyi vestnik. 2010; 1: 84-88. (In Russ.)]
21. Haseltine E.L., Penney M.S., George S., Kieffer T.L. Successful treatment with telaprevir-based regimens for
chronic hepatitis C results in significant improvements to serum markers of liver fibrosis. J. Viral Hepat. 2015; 22: 701-707. DOI: 10.1111/jvh.12382.
22. Martin J., Khatri G., Gopal P., Singal A.G. Accuracy of ultrasound and noninvasive markers of fibrosis to identify patients with cirrhosis. Dig. Dis. Sci. 2015; 60: 1841-1847. DOI: 10.1007/s10620-015-3531-1.
УДК 616.98:579.841.93 DOI 10.24412/2220-2021-7880-3-77-81
ПОЛУЧЕНИЕ ГИБРИДОМ, ПРОДУЦИРУЮЩИХ МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА К СТАФИЛОКОККОВЫМ ЭНТЕРОТОКСИНАМ А И В
КуклинаГ.В., Ипатов С.С., ЕремкинА.В., Подволоцкий А.Н., Горшков А.С.
Филиал ФГБУ «48-й Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации, Киров, Россия (610000, г. Киров, Октябрьский проспект, д. 119), е-mail: 23527@mil.ru
Целью работы являлось получение гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к стафилококковым энтеротоксинам А и В. В работе использованы: энтеротоксигенные штаммы Staphylococcus aureus ATCC 13565 и ATCC 14458; препараты стафилококковых энтеротоксинов А и В; мыши линии BALB/c; клетки миеломной опухоли SP2/0-Ag14 (АТСС®CRL-1581TM). Слияние спленоцитов иммунных мышей и клеток миеломной опухоли проводили по методике G.Kohler и C.Milstein в модификации De St. Fazekas и D. Scheidegger. Гибридные клеточные линии, продуцирующие специфические моно-клональные антитела, клонировали методом лимитирующих разведений. Ростовые и секреторные свойства гибридом изучались при культивировании in vitro и in vivo. Исследование специфической активности иммунных сывороток, культуральных и асцитических жидкостей гибридом, а также оценку диагностических свойств моноклональных антител проводили методом иммуноферментного анализа. В результате исследований получены гибридомы, продуцирующие моноклональные антитела к стафилококковым энтеротоксинам А и В. Исследованы диагностические свойства моноклональных антител. Установлено, что различные комбинации моноклональных антител, используемых для иммобилизации на твердой фазе и для синтеза иммунопероксидазных конъюгатов, позволяют в сэндвич-иммуно-ферментном анализе специфически выявлять стафилококковые энтеротоксины в концентрации 0,5 нг/ мл и более.
Ключевые слова: стафилококковые энтеротоксины, моноклональные антитела, иммуноферментный анализ.
OBTAINING HYBRIDOMAS PRODUCING MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST STAPHYLOCOCCAL ENTEROTOXINS A AND B
Kuklina G. V., Ipatov S.S., Eremkin A. V., Podvolotsky A.N., Gorshkov A.S.
Affiliated Branch of the Federal State Budgetary Iinstitution «48th Central Research Institute» of the Ministry of Defense of the Russian Federation (610000, Kirov, Oktyabrsky Ave., 119), е-mail: 23527@mil.ru
The objective of the study was to obtain hybridomas producing specific monoclonal antibodies against staphylococcal enterotoxins A and B. Enterotoxigenic strains of Staphylococcus aureus ATCC 13565 and ATCC 14458, staphylococcal enterotoxins A and B, BALB/c mice and SP2/0-Ag14 (ATCC®CRL-1581™) myeloma cells were used in the research. Splenocytes of immune mice and myeloma cells were fused according to G. Kohler and C. Milstein method modified by De St. Fazekas and D.Scheidegger. Hybrid cell lines producing specific monoclonal antibodies were cloned by limited dilution method. Growth and secretory characteristics of hybridomas were studied during the in vitro and in vivo cultivation. Specific activity of immune sera, cultural and ascitic fluids and assessment of diagnostic properties of monoclonal antibodies were studied by ELISA. Hybridomas producing monoclonal antibodies against staphylococcal enterotoxins A and B were obtained as a result of the study. Diagnostic properties of monoclonal antibodies were studied. Different combinations of monoclonal antibodies used as capture and enzyme-labeled antibody are able to detect 0,5 ng/ml of staphylococcal enterotoxins in «sandwich»-ELISA.
Keywords: staphylococcal enterotoxins, monoclonal antibodies, enzyme linked immunosorbent assay.
Введение являются одной из самых распространенных причин
Стафилококковые энтеротоксины (SE) входят пищевых отравлений в мире. Продуцентами являют-в семейство, включающее более 20 экзотоксинов, и ся энтеротоксигенные штаммы Staphylococcus aureus
