CC BY
0
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
достигнут на сроке 9 месяцев после повышения дозы иматиниба до 400 мг). Неудача терапии (частичный гематологический ответ (ЧГО), а также первичная или вторичная резистентность) отмечены у трех пациентов (37,5%). ЖЕ длительности лечения имати-нибом — 7 месяцев (2—82 месяца). ЖЕ длительности наблюдения за пациентами с ПГО, продолжающими прием иматиниба, — 46 месяцев (6—82 месяца).
Заключение. Исследование методом FISH позволяет выявить структурные нарушения гена PDGFRB независимо
Таблица
от гена-партнера, что существенно повышает результаты диагностики клональных новообразований с эозинофилией. Данный анализ необходимо выполнять всем пациентам с ГЭС, предварительно исключив наличие перестроек гена PDGFRA. Исследование перестроек гена PDGFRB методом FISH требуется не только при наличии аберрации с 5(q31—33), но и при неизмененном кариотипе либо других его аномалиях. При PDGFRB-позитивных новообразованиях доза иматиниба должна составлять 400 мг в сутки.
№ п-та Пол Возраст Кариотип/метод диагностики перестроек гена PDGFRB Длительность заболевания до установления диагноза Терапия до иматиниба Доза иматиниба (мг), результат, исход заб-я
1 м 34 46,XY,t(5;17)(q33;pl3)[18]/46,XY [2]/FISH: транслокация PDGFRB/5q32-33.1 в 21% 9 месяцев .7+3», гидроксимочевина 400 ПГО,ПЦО,МО
2 м 44 46,XY,t(5;12)(q31;q24)[20]/FISH: транслокация PDGFRB/5q32 в 82% 12 месяцев Преднизолон, гидроксимочевина 400 ПГО,ПЦО,МО
3 м 17 46,XY[20]/ П5Н:делеция PDGFRB/5q32B82% 22 года Интерферон-альфа 400 ЧГО, гематологическая токсичность 3-4-й степени, перевод на дазатиниб
4 м 19 45,X,-Y[15]/46,XY[5]/ Ol-ПЦР: 2-PDGFRB 3 месяца Не было 400-600 Первичная резистентность, БК, смерть от осложнений гаплоидентичной ТГСКК
5 м 55 46,XY,t(5;13)(q33;q21)[15]/46,XY [5]/FISH: транслокация PDGFRB/5q33 в 60% 9 месяцев Не было 400 ПГО. ЦО и МО пока не оценивали
6 м 50 не исслед./01-ПЦР: E1V6-PDGFRB 2 месяца Преднизолон, интерферон-альфа 400 ЧГО. Вторичная резистентность, смерть на фоне БК
7 ж 46 46,XX[20]/FISH: транслокация PDGFRB/5q32 в 88% 3 года Не было ПГО. 100: на 48 мес. МО не получен 400: на 9 мес. МО
8 ж 59 46,XY,t(5;12)(q33;pl3)[8]/46,XX [12]/FISH: транслокация PDGFRB/5q32-33 в 83% 3.5 года Не было 400 ПГО, ПЦО на 6 мес. МО не получен (РРСГРВ/5Я32 в 1%; Е1У6-РРСГРВ+)
9 м 55 не исслед./01-ПЦР: E1V6-PDGFRB 3 года Результаты лечения неизвестны
БК — бластный криз
ТГСКК — трансплантация гемопоэтических стволовых клеток крови
Никулина Е. Е., Пшеничный А. С., Рисинская Н. В., Северина Н. А., Февралева И. С., Сидорова Ю. В., Судариков А. Б.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МУТАЦИЙ РШ И 8ТК-ПРОФИЛЯ НА МАТЕРИАЛЕ АРХИВНЫХ МАЗКОВ КОСТНОГО МОЗГА
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Для молекулярно-генетического исследования стандартно используют пунктат костного мозга (КЖ) в пробирке с ЭДТА. При недоступности материала, взятого до лечения, встает вопрос об исследовании мутаций на мазках КЖ. Особенно это касается срочных исследований, таких как STR-профилирование ДНК донора/реципиента при алло-ТКЖ, определение мутаций при острых лейкозах для стратификации пациентов на группы риска, назначения таргетных препаратов. В работе сравниваем два метода выделения ДНК из клеток, полученных из цитологических мазков КЖ, и обсуждаем возможность определения STR-профиля, мутаций, в частности тандемной дупликации FLT3 (FLT3-ITD).
Цель работы. Оценить эффективность экстракции ДНК из архивного цитологического материала разными методами; оценить возможность определения STR-профиля и мутаций FLT3-ITD.
Материалы и методы. Проанализированы 50 образцов (35 неокрашенных и 15 окрашенных мазков) КЖ пациентов с острым миелоидным лейкозом (ОЖЛ), острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), миелодиспластическим синдромом (ЖДС), наблюдавшихся в ФГБУ «НЖИЦ гематологии» на протяжении 2020—2021 гг. С цитологических мазков клетки снимали пипетированием с применением соответствующего буфера. Проводили экстракцию ДНК из смытых клеток. Жетод № 1: использовали набор реагентов для экстракции ДНК «АмплиПрайм ДНК-сорб-В» (Россия). Жетод № 2: выделение ДНК путем прямого лизиса клеток с про-теиназой К. Количество полученной ДНК измеряли на флуориметре 0ubit4.0 (США). Качество исследованной ДНК оценивали по амплификации 19 локу-сов STR длиной от 75 до 425 пар нуклеотидов при помощи наборов COrDIS Plus. Фрагментный анализ
ПЦР-продуктов для определения мутации РЬТЗЛТО выполняли на генетическом анализаторе «Нанофор-05».
Результаты и обсуждение. ДНК в концентрации более 0,1 нг/мкл была получена из 64% образцов (32 из 50) при выделении на сорбенте (метод № 1) с диапазоном концентраций от 0,16 до б нг/мкл и из 86% образцов (43 из 50) при выделении протеиназой К (метод № 2) с диапазоном концентраций от 14,8 до 1,1 нг/мкл. Качество ДНК, оцененное по определению ЭТР-профилей, выделенной на сорбенте и с протеиназой К при низких и средних концентрациях исходного материала (0,1—2,4 нг/мкл), было одинаковым: амплифицировались локусы ЭТР у разных пациентов
UHHIHJ»« 11*1-44« ■km | СОгШ$_Пш (¡3
0 100 200 ЭОО 400 »00
Е sample-mt-km mt+18bp VAF=46«!'. AR=0.8
Рис. 1. БИ^-профиль геномной ДНК у разных пациентов с одинаковыми низкими концентрациями
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2022; ТОМ 67; №2 |
от 75 до 425 п.н. (рис. 1). Мутация РЬТЗЛТО на цитологических препаратах КМ была исследованау 18 пациентов. В работу были взяты образцы ДНК с кон -центрацией от 0,2 нг/мкл и полным вТЯ-профилем. Количество образцов с мутацией составило 6, контрольная группа — 12 образцов без мутаций. Отмечено совпадение результатов при использовании обеих методик в 100% случаев. При этом ал-лельное отношение и аллельная нагрузка совпадали суже известными результатами клинических образцов пациентов (рис. 2). Различий в эффективности использования окрашенных и неокрашенных образцов КМ для выделения ДНК не наблюдалось.
Заключение. В ходе исследования показана эффективность определения мутации РЬТЗ-1ТО и аллельного отношения при использовании цитологических препаратов при отсутствии нативного биоматериала. Обе методики выделения ДНК — на сорбенте и с протеиназой К — характеризуются хорошей воспроизводимостью и подходят для решения поставленных задач.
Рис. 2. Клинический образец с мутацией в сравнении с выделенными цитологическими мазками
Никулина О. Ф., Цветаева Н. В., Чавынчак Р. Б., Авербух О. М., Захарько Е. И., Двирнык В. Н., Лукина Е. А.
ТЕРАПИЯ РЕЗИСТЕНТНЫХ ФОРМ АИГА РИТУКСИМАБОМ В РЕДУЦИРОВАННЫХ ДОЗАХ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. В 30% случаев пациенты с АИГА имеют резистентность к стандартной иммуносупрессивной терапии. У 45—85% больных с резистентной АИГА гемолиз удается купировать ритуксимабом — моноклональными антителами к С020 В-лимфоцитов. Наименьшая результативность стандартной терапии ГКС и спленэктомии наблюдается при холодовых формах АИГА. Оптимальные дозы терапии ритуксимабом не установлены. Несмотря на отсутствие избыточной популяции В-лимфоцитов при АИГА, как правило, используются дозы, указанные в инструкции по лечению хронических лимфопролифера-тивных заболеваний (375 мг/м2/день).
Цель работы. Оценить эффективность редуцированных доз ритуксимаба (РТМ) в лечении больных с резистентными формами АИГА.
Материалы и методы. Исследования проведены у 49 больных с АИГА, из них — 27 мужчин и 22 женщины, в возрасте от 17 до 78 лет (медиана — 49 лет). В соответствии с характеристикой аутоан-тител пациенты были разделены на 2 группы: АИГА с тепловыми аглютининами — 35 (70%) больных и АИГА с Холодовыми аутоаг-глютининами или со смешанным типом антител — 14 (30%) больных. К началу лечения ритуксимабом все больные первой группы были резистентными к 2—3 линиям терапии. У больных с Холодовым и смешанным типом антител РТМ использовали как вторую линию терапии (после ГКС-терапии). Продолжительность заболевания варьировала от 2 до 81 мес. (Ме — 28 мес.). Ритуксимаб вводили в фиксированных дозах: 42 больным — 500 мг/день и 7 больным в дозе 200 мг/день — 1 раз в неделю. Число введений определяли
в соответствии с количеством С019+/С020+ В-лимфоцитов в крови на 6-7-й день после первого введения РТМ. При снижении количества С019+/С020+ В-лимфоцитов менее 0,5% курс ограничивали двумя введениями препарата (в 1-й и 8-й дни); при количестве В-лимфоцитов более 0,5% ритуксимаб вводили4 раза с интервалом 7 дней. Эффективность лечения оценивали по динамике показателей: гемоглобин, ретикулоциты, фракции ретикулоцитов, непрямой билирубин и гаптоглобин. Депрессия С019+/С020+ В-лимфоцитов сохранялась более б месяцев.
Результаты и обсуждение. Полная ремиссия ранее резистентной АИГА была достигнута у 28 (56%) больных (НЬ >120 г/л, ретикулоциты <2%, 1ЯР и непрямой билирубин — норма); частичная — у 21 (42%). Наиболее длительный ответ отметили у б больных с тепловой формой АИГА, у которых ранее была проведена спленэктомия. Период времени от введения РТМ до развития ремиссии составил в среднем 48 дней (р<0,01). Продолжительность ремиссии варьировала от 3 до 74 месяцев (медиана — 23 мес.). При малейших признаках активации гемолиза РТМ вводили в первоначальном режиме с достижением повторного ответа, продолжительность которого увеличивалась до 12—30 месяцев. У 16 больных провели от 2 до 4 противорецидивных курсов РТМ. Безрецидивный периоду данных больных составил от 2 до 11 лет наблюдения. У всех 14 пациентов с наличием холодовых аутоан-тител исчезла непереносимость холода.
Заключение. Проведенный предварительный анализ свидетельствует об эффективности редуцированных доз ритуксимаба в лечении пациентов с резистентными формами АИГА .
Новикова А. А., Клясова Г. А., Грибанова Е. О., Рыжко В. В., Паровичникова Е. Н.
ПНЕВМОНИИ У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ТЕРАПИИ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Пневмония занимает одну из лидирующих позиций в структуре инфекционных осложнений у больных множественной миеломой (ММ) при проведении противоопухолевой терапии.
Цель работы. Изучить частоту и факторы, ассоциированные с развитием пневмонии у больных ММ в период противоопухолевой терапии.
Материалы и методы. В исследование включали больных Ре novo ММ, которым проводилось лечение с января 2013 по июль 2018 г. в НМИЦ гематологии. Диагноз пневмонии устанавливали
на основании компьютерной томографии органов грудной клетки, некоторым больным выполняли бронхоскопию с исследованием жидкости бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ).
Результаты и обсуждение. В исследование было включено 174 больных с впервые диагностированной ММ (82 мужчины, 92 женщины) в возрасте от 23 до 87 лет (медиана 61 год). Больным было проведено 1362 курса противоопухолевой терапии, из них инфекционные осложнения были зарегистрированы в период 344 (25%) курсов, а пневмония — 195 (14,3%) курсов. Число больных,
