CC BY
12ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАРКЕРОВ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ В ОБРАЗЦАХ СЛЮНЫ.
Лабораторная диагностика вирусных гепатитов (ВГ) основана на определении специфических маркеров инфицирования в сыворотке и/или плазме крови при помощи чувствительных и специфических диагностических тест-систем. Однако забор крови связан с возможным риском заражения инфекционными заболеваниями с парентеральным путем передачи возбудителя (гепатиты В, С, G, ВИЧ). Кроме того, при обследовании детей и массовых эпидемиологических исследованиях возникают организационные и технические трудности получения материала для проведения исследований. Поэтому поиск субстрата альтернативного крови, тестирование которого позволило бы безопасно и эффективно провести исследование для обнаружения маркеров инфицирования, по-прежнему является актуальной задачей.
Слюна представляет собой смесь жидкости, выработанной слюнной железой, и десневой жидкости. Слюнная железа вырабатывает большую часть ее объема и IgA, в то время как в десневой жидкости больше IgG и IgM. Концентрация их в слюне составляет соответственно 19,4; 1,4 и 0,2 мг в 100 мл: это соотношение в сыворотке крови составляет 1/10; 1/800 и 1/400. Исследования Parry J.V. et al (1987) показали, что слюна может быть рассмотрена как транссудат плазмы, содержащей сходный диапазон иммуноглобулинов,что определяет возможность тестирования в нем специфических антител.
Parry J.V. et al (1988,1989), T.Thieme et al (1992), Чиковитова Н.М. с соавт. (1993) А.А.Асратян с соавт. (1996, 1997) продемонстрировали наличие анти-ВГА IgM в образцах слюны больных с острым или недавно перенесённым (2-4 месяца) ГА. Показали также возможность использования слюны при расследовании вспышек ГА прежде всего для диагностики безжелтушных форм заболевания, которые могут являться нераспознанными источниками инфекции в коллективе. Длительное наблюдение (вплоть до 3 лет) за лицами, перенесшими ГА, показало снижение «оральных» анти-ВГА IgM параллельно уровням сывороточных антител. Для определения маркеров ГА в образцах слюны использовали коммерческие тест-системы, выпускаемые для серологических исследований. Показано, что «сывороточные тест-системы» могут успешно применяться для тестирования антител к ВГА в «оральных образцах». При этом отмечают, что необходима лишь небольшая модификация при постановке реакции - подбор общего объема исследований и разведения образцов слюны. Разница в оптической плотности ферментативной реакции при исследовании образцов слюны и сывороток крови резко не отличается, что позволяет использовать общее отсекающее значение при учете реакций.
Впервые об обнаружения HBsAg в образцах слюны сообщили Feinman S.V et al и Heathcote J. et al в 1974 г. среди серопозитивных лиц. HBsAg в слюне удавалось выявить от 20-92,8% случаев (Ren-Aryeh H. et al, 1985; Nimadova R. E. et al, 1988; Bull A.R. et al, 1989; А.А.Асратян с соавт, 1996), а в некоторых работах Polloch J. et al (1984), T.Thieme et al (1992) отмечена 100% корреляции. Авторы также пришли к аналогичному выводу о возможности диагностики ГВ при использовании слюнных образцов для обнаружения анти-НВс IgM (Parry J.V. et al, 1988,1989; T.Thieme et al, 1992; А.А.Асратян с соавт, 1996), .
Обнаружение ДНК-вируса ГВ с помощью ПЦР в образцах слюны, положительных на HBsAg (методом ИФА), достоверно свидетельствует о присутствии в слюне вируса ГВ и о возможной ее роли как фактора естественной передачи вируса ГВ и поступления ВГВ во внешнюю среду (А.А.Асратян с соавт, 1996,1997; Жевачевский Н.Г. с соавт.1997,1999).
Обнаружение маркеров ГВ (HBsAg, HBeAg, анти-НВс IgM, ДНК ВГВ) в слюне больных острым и хроническим ГВ, носителей HBsAg, дает основание сделать вывод о возможности использования образцов слюны в эпидемиологических исследованиях (ChaitaT.M. et al, 1995; Мартов О.В. ,1997; Жевачевский Н.Г. с соавт.1997,1999).
При выявлении антител к вирусу гепатита С (ГС) в образцах слюны в разные сроки заболевания (от 1 до 5 месяцев) установлено, что они обнаруживаются с высоким индексом ИФА на протяжении всего срока наблюдения во всех образцах слюны от больных ГС (серологически подтвержденным). При постановке подтверждающего теста в образцах слюны определялись те же пептиды, что и сыворотке крови (Cor, NS3, NS4, NS5) (А.А.Асратян с соавт, 1996). McIntyre P.O. et al (1995) считают, что использование слюны для определения анти-ВГС методом ИФА удобный и безопасный метод для эпидемиологических исследований. Elsana S. et al (1998) выявляли анти-ВГС методом ИФА в слюне в 90% случаев у серопозитивных больных и считают, что слюна
может быть альтернативна сыворотке крови для обнаружения анти-ВГС. Bello P.Y. et al (1998) пришли к выводу, что слюна может быть полезной при эпидемиологических исследованиях для определения анти-ВГС (чувствительность - 94,4%, специфичность -99,1%) особенно в труднодоступных регионах мира.
Исследование образцов слюны серопозитивных больных на наличие РНК ВГС показало (Roy K.M. et al, 1995, 1998, 1999) их наличие только у 50% лиц. Отмечено, что в настоящее время выявление РНК ВГВ в слюне методом ПЦР недостаточно информативно для его использования в качестве диагностики при эпидемиологических исследованиях. Однако авторы получили интересные результаты при исследовании сывороток крови и образцов слюны на наличие генотипов РНК ВГС. Установлено, что в слюне и сыворотке крови иногда встречаются разные генотипы ВГС (в слюне чаще генотип 2а), На этом основании они делают вывод, что возможно слюнные железы являются альтернативным локальным источником инфекции, то есть в некоторых случаях РНК ВГС в слюне не является транссудатом крови, а вирус поступает в кровь через мембрану периодонта или поврежденную слизистую.
В работах Fabris P. et al (1999) показано, что РНК ВГС в слюне (в клеточной фракции) выявляется у большинства пациентов с высоким уровнем виремии (ВГС). Однако авторы fie отмечают связи наличия РНК ВГС с риском передачи инфекции. Sugimura H. (1995) и Kage M. et al (1997) в 36% случаев обнаруживали РНК ВГС (методом ПЦР) в слюне хронических носителей ВГС; выявление РНК ВГС в слюне зависит от тяжести и длительности дисфункции печени, поскольку РНК ВГС чаще обнаруживали у пациентов с высокими уровнями АлТ.
Caldwell S.H. et al (1996) в 24% случаев у больных с трансплантацией печени выявляли в слюне РНК ВГС в течение года после операции, когда уровень вирусемии, по всей вероятности, был максимальным. Seemayer СА. et al (1998) исследовали сыворотки крови и слюну от больных с пересаженной почкой на наличие РНК ВГО и пришли к выводу, что её наличие в слюне коррелировало и было идентичным сывороточным маркерам, но в титрах меньше в 100-1000 раз. Обнаружение РНК ВГС в слюне инфицированных лиц можно использовать для определения широты распространения этой инфекции ( Chen M. et al, 1997; Seemayer С. A. et al, 1998),
Следует отметить, что большинство исследователей для выявления маркеров ВГ в образцах слюны используют нативную слюну, однако, на практике оказалось, что у детей (а в некоторых случаях и у взрослых) возникает большая проблема с «получением» слюны, заключающаяся в невозможности отбора слюны ввиду ее «отсутствия». Для взятия образцов слюны можно использовать фильтровальные полоски, пропитанные раствором, способствующим усилению слюноотделения и адсорбции иммуноглобулинов (T.Thieme et al, 1992; А.А.Асратян и др., 1996). Авторы отмечают тождественные результаты выявления маркеров ВГ и значений оптической плотности, полученные при исследовании нативной слюны и образцов слюны с фильтровальных полос.
Для выявления маркеров ВГ в слюне имеет важное значение подбор оптимальных разведений слюны, отличных от разведений сывороток крови, поскольку концентрация иммуноглобулинов в слюне намного ниже, чем в сыворотке крови. Это в основном важно для слабых серопозитивных образцов (T.Thieme et al ,1992; А.А.Асратян и др., 1996).
Таким образом, результаты исследований позволяют рассматривать слюну как альтернативу сыворотке крови для диагностики и проведения эпидемиологических исследований, минуя парентеральное вмешательство при взятии материала для тестирования маркеров инфицирования вирусами гепатитов.
А.А. Асратян, Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН.
ГЕПАТИТ С В ДАЛЬНЕВОСТОЧНОМ РЕГИОНЕ РОССИИ.
Вирусный гепатит С по широте распространения, частоте хронизации и значимой роли в развитии гепатоцеллюлярной карциномы представляет актуальную проблему инфекционной патологии. Начиная с 1994 года -- года официальной регистрации гепатита С - заболеваемость этой инфекцией неуклонно растет. На территории Российской Федерации в 1998 г. она составила 11,6 случаев на 100 тысяч населения. В Дальневосточном (ДВ) регионе заболеваемость гепатитом С не превышала среднероссийских показателей и составляла в 1995-1998 г.г. 5,89-6,81 случаев на 100 тысяч населения. Среди территорий региона наибольшим неблагополучием по заболеваемости гепатитом С отличаются Хабаровский и Приморский края,
