CC BY
70
Химия растительного сырья. 2011. №4. С. 269-271.
УДК 615.322:582.929.1:547.582.26.062:543.544.943.3
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГАЛЛОВОЙ КИСЛОТЫ В ТРАВЕ ЛОФАНТА АНИСОВОГО МЕТОДОМ ПЛАНАРНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
© В.В. Чумакова , Т.Д. Мезенова, О.И. Попова
Пятигорская государственная фармацевтическая академия, пр. Калинина,
11, Пятигорск, Ставропольский край, 357532 (Россия)
Разработана методика количественнго определения галловой кислоты в траве лофанта анисового (ЬорЬаШкт апізаШз БепґН.) методом планарной хроматографии с использованием компьютерной программы «Видеоденситометр БогЫШ». Фаза цветения является оптимальным сроком заготовки лофанта анисового, так как содержание галловой кислоты в эту фазу наибольшее и составляет 2,00-2,50%. Наибольшее содержание галловой кислоты обнаружено в листьях - 1,98%.
Ключевые слова: лофант анисовый, галловая кислота, планарная хроматография.
Введение
Сравнительно недавно в России культивируется лофант анисовый (ЬорИапЛш' апіі'аШ' БепґН.) - многолетнее травянистое растение семейства яснотковые (Ьашіасеае), родом из Северной Америки. Дикорастущим встречается на Дальнем Востоке и в Средней Азии. В Китае, Тибете, Монголии применяют лофант в медицинских целях при воспалительных процессах в желудочно-кишечном тракте, болезнях печени и мочевыводящих путей, при лечении ОРЗ, бронхитов, для восстановления сил после нервных расстройств [2]. Фармакологическую ценность лофанта анисового обуславливает его химический состав. Установлено, что лофант содержит комплекс биологически активных соединений: эфирное масло (1,84-3,32%), дубильные вещества (7,48-8,55%), флавоноиды (0,55-0,60%), кислота аскорбиновая (0,09-0,11%), свободные органические кислоты (0,80-1,00%), полисахариды (7,25-8,22%), макро- и микроэлементы (калий (30%), кальций (20%), фосфор (3%), магний (3%), кремний (2%), алюминий (1%), натрий (0,8%)). Наибольшее количество эфирного масла накапливается в фазу цветения [3]. Помимо достаточно высокого содержания эфирного масла, необходимо отметить значительное количество дубильных веществ (танинов). В траве лофанта анисового присутствуют два класса танинов - конденсированные и гидролизуемые [4]. К последнему относится галловая кислота, обладающая мощными антиоксидантным и противовоспалительным действиями [5].
Цель исследования - разработка методики количественного определения галловой кислоты в траве лофанта анисового, изучение сезонной динамики накопления кислоты по фазам вегетации и органам растения для определения оптимальных сроков заготовки сырья.
Экспериментальная часть
Объект исследования - образцы сырья травы лофанта анисового, собранные в 2008 г. на экспериментальном участке лаборатории лекарственных растений Ставропольского научно-исследовательского института сельского хозяйства (СНИИСХ) в разные фазы вегетации (стеблевания, цветения, плодоношения). Собранное сырье сушили воздушно-теневым способом.
Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито диаметром 1 мм. Около 1 г (точная навеска) помещали в коническую колбу со шлифом вместимостью 25 мл, приливали 10 мл 70% этилового спирта, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры содержимое колбы фильтровали через воронку с бумажным фильтром и доводили объем 70% этиловым спиртом до 10 мл.
* Автор, с которым следует вести переписку.
Для количественного определения галловой кислоты использовали метод планарной хроматографии. Хроматографирование проводили на пластинках марки «8огЪй1 ПТСХ-АФ-А-УФ» и «8огЪй1 ПТСХ-П-А» в следующих системах: н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (4 : 1 : 5) и н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (4 : 1 : 1). Высота подъема фронта растворителя, достаточная для полного разделения веществ, составила 12 см. В качестве «свидетеля» использовали раствор стандартного образца кислоты галловой.
Приготовление рабочего стандарта образца (РСО) галловой кислоты: 0,05 г (точная навеска) РСО помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяли в 70% этиловом спирте и доводили до метки тем же растворителем.
На хроматографическую пластинку при помощи микрошприца МШ-10 наносили 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0 мкл раствора РСО с содержание галловой кислоты 1,2; 1,8; 2,4; 3,0; 3,6 мкг соответственно и 2,0 мкл исследуемого извлечения травы лофанта анисового.
Хроматографирование осуществляли при температуре 20-25 °С. После окончания хроматографирования пластины высушивали на воздухе до исчезновения запаха растворителя, обрабатывали детектирующим реагентом (1% водный раствор железоаммониевых квасцов). Пластинку сканировали с помощью планшетного сканера с разрешением 100 dpi. Для цифровой обработки хроматограмм использовали компьютерную программу «Видеоденситометр 8огЪй1» (Краснодар). Количественное определение галловой кислоты проводили методом абсолютной калибровки (внешнего стандарта) с использованием градуировочной функции в координатах: площадь пятна (8) - масса (т) (линейная аппроксимация) [1].
Статистическую обработку полученных результатов осуществляли с использованием пакета про -граммного обеспечения 81аЙ8Йса 6.0.
Результаты и обсуждение
В ходе исследования были выбраны оптимальные условия проведения хроматографического процесса. 70% этиловым спиртом извлекается наибольшее количество галловой кислоты, по сравнению с 40%, что позволило выбрать его в качестве экстрагента для исследования. Из двух пластин лучшей эффективностью обладает «8огЪй1 ПТСХ-АФ-А-УФ». Система н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (4 : 1 : 1) обеспечила лучшее разделение и достаточную селективность при подъеме фронта растворителя на 12 см. После детектирования раствором железоаммониевых квасцов окраска пятен нестабильна во времени, поэтому нами рекомендуется проводить количественное определение непосредственно после обработки хроматограммы (в течение 30-40 мин). Чувствительность методики - 1 мкг галловой кислоты в пятне. Интервал концентраций прямолинейной зависимости - 1-4 мкг в пятне.
Наибольшее количество галловой кислоты, согласно данным таблицы 1, накапливается в фазу цветения. Учитывая этот факт, нами было проведено исследование по изучению динамики накопления галловой кислоты по органам растения в фазу цветения (рис.).
Правильность методики определяли методом «введено-найдено». На хроматограмме один из треков стандартного образца принимали за контрольный опыт, остальные 4 трека являлись стандартными. Результаты приведены в таблице 2.
Таблица 1. Содержание галловой кислоты в траве лофанта анисового по фазам вегетации
Номер определения Количество галловой кислоты в траве лофанта по фазам вегетации, %
фаза стеблевания фаза цветения фаза плодоношения
1 0,68 2,00 0,42
2 0,60 2,32 0,50
3 0,69 2,44 0,45
4 0,68 2,15 0,47
5 0,62 2,30 0,58
6 0,66 2,50 0,48
Метрологические Хср = 0,66 Хср = 2,28 Хср= 0,48
характеристики є = 0,01% є = 0,12% є = 0,01%
Динамика накопления галловой кислоты по органам в фазу цветения лофанта анисового
Таблица 2. Результаты количественного определения содержания галловой кислоты в зоне адсорбции контрольного трека
Нанесено, мкг Найдено, мкг Найдено, % Метрологические характеристики
1,2 1,08 90
1,2 1,14 95
1,8 1,84 102
1,8 1,93 107 Xcp.= 99,5%
2,4 2,38 99 S = 6,8
2,4 2,52 105 AX = 7,15
3,0 2,91 97 s = 7,18%
3,0 3,06 102
3,6 3,2 89
3,6 3,92 1 09
Выводы
1. Разработана методика количественного определения галловой кислоты в траве лофанта анисового (Lophanthus anisatus Benth.).
2. Заготовку травы лофанта анисового целесообразно осуществлять в фазу цветения, так как в эту фазу накапливается наибольшее количество эфирного масла (3,15-3,32%), а содержание галловой кислоты составляет 2,00-2,50%.
3. В результате изучения динамики накопления галловой кислоты по органам растения выявлено, что стебли и цветки содержат 1,02 и 0,71% соответственно, а преобладающее количество - листья (1,98%).
Список литературы
1. КрасиковВ.Д. Основыпланарной хроматографии. СПб., 2005. 232 с.
2. Фурсов Н.В. Новое растение для Астрахани и России - лофант анисовый. Астрахань, 2009. С. 16-18.
3. ЧумаковаВ.В. Изучение химического состава лофанта анисового // Свет знаний - во имя здоровья человека : матер. 61 научной студ. конф. Пятигорской государственной фармацевтической академии. Пятигорск, 2008. С. 26-28.
4. Чумакова В.В., Попова О.И. Определение содержания дубильных веществ в траве лофанта анисового // Актуальные проблемы фармацевтической науки и практикики : сб. научн. тр. Владикавказ, 2009. С. 70-73.
5. Teissedre P.L., Walzem R.L., Waterhose A.L., German J.B., Frankel E.N., Ebeler S.E., Clifford A.J. Composes phe-noliques du rasin, du vin et sante. // Revue des Oenoloques. 1996. №79. Pp. 7-14.
Поступило в редакцию 9 декабря 2010 г.
