CC BY
180
Полученные результаты представлены на рис. 1.
Скорость реакции окисления ПФО осины пирокатехина за 120 секунд варьирует в пределах от 0 до 0,04687 мин-1 (рис. 1). Во всех проанализированных образцах активность ПФО вергинильной осины выше, чем генеративной. В камбии прикорневой зоны активность исследуемого фермента заметно снижена по сравнению с таковой в побегах, независимо от возрастного состояния дерева.
Достоверной зависимости между скоростью реакции окисления ПФО вергинильной осины пирокатехина и наличием поеда бобром выявить не удалось: деревья, не тронутые этим грызуном, характеризуются большей активностью ПФО. Для осины генеративного возраста наблюдается обратная зависимость - образцы с активностью ПФО, близкой к нулю, принадлежат деревьям с отсутствием поеда (рис. 1).
и, мин-1
части осины
Рис. 1. Активность ПФО вергинильной (1, 1’, 1’’) и генеративной (2, 2’, 2’’) осины: 1, 2 - не тронута бобром, 1’, 2’, 1’’, 2’’ - с поедом
ЛИТЕРАТУРА
1. Савельев А.П. Биологические особенности аборигенных и искусственно созданных популяций бобров Евразии и их значение для стратегии управления ресурсами: дис. ... д-ра биол. наук. Киров, 2003. 201 с.
2. Шубин Н.Т. Состояние численности, проблемы охраны и рацио-
нального использования охотничье-промысловых зверей Западной Сибири // Охрана и рациональное использование животных и растительных ресурсов: материалы Международной научно-
практической конференции, посвященной 55-летию факультета охотоведения Иркутской ГСХА. Иркутск, 2005. С. 358-364.
3. Нефедов А.А. Западносибирский бобр Castor fiber pohlei // Труды по исследованию охоты и дичи. Гарц (ФРГ), 2006. Т. 31. С. 237245.
4. Гревцев В.И. Бобр и его промысел // Российская охотничья газета. 2009. № 25.
5. Клочкова С.А., Папченко В.Г. Сезонная динамика активности орто-дифенолоксидазы в кормах речного бобра и ее связь с другими показателями полноценности корма // Принципы рационального планирования и пути интенсификации использования бобра: тезисы докладов VI научно-производственной конференции по бобру. Воронеж, 1980. С. 89-91.
6. Борисов Б. П. Бобр // Состояние ресурсов охотничьих животных в Российской Федерации: информационно-аналитический материал. М., 2000. С. 81-84.
7. Половникова М.Г., Воскресенская О.Л. Активность компонентов антиоксидантной защиты и полифенолоксидазы у газонных растений в онтогенезе в условиях городской среды // Физиология растений. 2008. Т. 55. № 5. С. 777-785.
8. Ермаков А.И., Арасимович В.В., Ярош Н.П. и др. Методы биохимического исследования растений. Л.: Агропромиздат, 1987. С. 43-44.
9. Чупахина Г.Н. Физиологические и биохимические методы анализа растений. Калиниград, 2000. 59 с.
Поступила в редакцию 21 декабря 2009 г.
Sinyutina S.E., Shubina A.G., Emelyanov A.V., Kireev A.A. Polyphenoloxidasa’s activity definition in the aspen (Populus tremula L.) growing on the territory of GNR “Voroninsky”.
The aspen (Populus tremula L.) of the inundated phytocenos of the Vorona river (territory of the state natural reserve “Voro-ninsky”) for the purpose of definition of polyphenoloxidasa’s activity and communication revealing between the substance of this enzyme and presence of the beaver’s gnawed on a tree is analyzed.
Key words: aspen (Populus tremula L.); beaver; polyphenoloxidasa’s activity.
УДК 581.19 (+577.164.3)
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЛАВОНОИДОВ В РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ ТАМБОВСКОЙ ОБЛАСТИ
© С.Е. Синютина, А.Г. Шубина, Е.В. Конюхова
Ключевые слова: флавоноиды; растительное сырье; анализ; хроматография; УФ-спектроскопия.
Проведены выделение и идентификация флавоноидов, содержащихся в клевере луговом, хвоще полевом, бессмертнике песчаном, химическими методами качественного анализа, с использованием тонкослойной хроматографии и УФ-спектроскопии.
Флавоноидами называется группа природных биологически активных соединений - производных бензо-у-пирона, в основе которых лежит фенилпропановый скелет, состоящий из С6-С3-С6 углеродных единиц. Эта
группа соединений широко распространена в растительном мире. Флавоноиды привлекают внимание ученых разносторонней биологической активностью и чрезвычайно низкой токсичностью. Растительные экс-
тракты, содержащие флавоноиды, широко используются как с лечебной целью, так и как биостимуляторы. Флавоноиды являются эффективными поглотителями свободных радикалов, исполняя роль сильных антиоксидантов и обеспечивая защиту от окисления и повреждения свободными радикалами, обладают желчегонным, противоязвенным, антивирусным, диуретическим, спазмолитическим, антигеморроидальным и другими действиями [1-3].
В свете сказанного выделение и идентификация флавоноидов, содержащихся в растительном сырье Тамбовской области, представляются весьма актуальными.
Объектами изучения служили надземная часть (трава) хвоща полевого, цветки бессмертника песчаного и клевера лугового, собранные в июне - июле в 2008 г. на территории Тамбовской области, сушка сырья воздушно-теневая.
Экстрагирование проводили в три этапа: 1 этап -водно-спиртовая экстракция 70 % спиртом; 2 этап -водно-спиртовая экстракция этой же травы 40 % спиртом; 3 этап - третья экстракция этой же травы дистиллированной водой.
Для качественного обнаружения флавоноидов с полученными экстрактами проводили цианидиновую пробу (проба Синода), пробу Брианта, реакции с солями железа, со спиртовым раствором гидроксида натрия, со спиртовым раствором хлорида алюминия [4].
Для идентификации флавоноидов методом тонкослойной хроматографии использовались следующие системы растворителей:
1) бутанол;
2) бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5);
3) бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:1);
4) бутанол - уксусная кислота (4:3);
5) бутанол - уксусная кислота (4:1);
6) этиловый спирт - четыреххлористый углерод (1:2).
Проявителем служил 5%-ный спиртовой раствор
хлорида алюминия. Наблюдали флуоресценцию пятен в УФ-лучах. Оптимальные результаты были получены в системе бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5).
Все 70%-ные спиртовые экстракты дали разделение на 3 пятна. По цвету свечения пятен можно предположить наличие в экстракте халконов или ауронов (красно-оранжевая флюоресценция), гликозидов флавоно-лов и агликонов флавонов (коричневая), агликонов флавонолов (желтая).
40%-ные спиртовые экстракты дают те же пятна, что и 70%-ные, но свечение пятен слабее, что позволяет предположить более низкое содержание флавонои-дов в 40%-ных экстрактах по сравнению с 70%-ными.
Полученные результаты (табл. 1) доказывают наличие в экстрактах различных групп флавоноидов.
Спектры оптического поглощения исследуемых образцов регистрировали на спектрофотометре СФ 2000 при комнатной температуре в диапазоне длин волн 100-900 нм в кюветах из кварцевого стекла толщиной 10 мм. В качестве раствора сравнения при измерении спектров экстрактов, полученных с использованием разных растворителей, брали соответственно 70%-ный водный раствор этанола, 40%-ный водный раствор этанола и дистиллированную воду. 70%-ные спиртовые экстракты были разбавлены 70%-ным этанолом: экстракты клевера красного и бессмертника песчаного - в
100 раз, хвоща полевого - в 50 раз. Для сравнения был использован раствор рутина [5, 6].
Полученные УФ-спектры (рис. 1) были обработаны с использованием компьютерной программы «Сканирование» (табл. 2).
У всех проанализированных 70%-ных спиртовых экстрактов трав наблюдаются пики при длине волны 200-210 нм, 260-270 нм, 330-340 нм. Наблюдается небольшое «плечо» в области 370-380 нм. Эти полосы поглощения являются характерными для флавоноидов. Наибольшим сходством со спектром рутина обладает спектр экстракта хвоща полевого. Вероятно, основным его компонентом группы флавоноидов является рутин.
По сравнению с 70%-ными спиртовыми экстрактами интенсивность пиков в 40%-ных спиртовых экстрактах меньше, что позволяет говорить о меньшем содержании флавоноидов. В водных экстрактах четких пиков, характерных для флавоноидных соединений, не наблюдается. Плечо в области 240-260 нм, характерное для всех кривых, свидетельствует о присутствии в экстрактах флавоноидов в малых количествах.
Результаты хроматографического и спектрального анализа показывают, что флавоноиды лучше всего экстрагируются из растительного сырья 70%-ным этанолом. Однако не все флавоноиды при таком способе экстракции переходят в раствор. Поэтому дополнительное экстрагирование 40%-ным этанолом и водой можно считать оправданным.
Таблица 1
Содержание флавоноидов в полученных экстрактах
Экстракт Флавоноиды
Травы хвоща полевого флавоны, дигидроксипроизводные флавоноидов, гликозиды и агликоны флавоноидов, антоцианидины
Цветов бессмертника песчаного флавоны, гликозиды и агликоны флавоноидов, тригидроксипроиз-водные флавоноидов, флавонолы
Цветов клевера лугового гликозиды и агликоны флавоноидов, антоцианидины, флавоны, тригид-роксипроизводные флавоноидов
Таблица 2
Максимумы поглощения (Хтах нм) и оптическая плотность (Б) исследуемых 70%-ных спиртовых экстрактов
Объект ^тах Б
203,0 1,673
Раствор рутина 267,0 0,857
369,0 0,234
Экстракт цветов 209,0 3,095
бессмертника песчаного 335,0 1,526
Экстракт цветов 207,0 3,017
клевера лугового 267,0 0,773
Экстракт травы 201,0 2,249
хвоща полевого 335,0 0,378
Рис. 1. УФ-спектр раствора рутина в 70%-ном спирте (1), 70%-ных спиртовых экстрактов бессмертника песчаного (2), клевера красного (3), хвоща полевого (4). Разведение: экстракты клевера лугового и бессмертника песчаного - 1:100, хвоща полевого - 1:50
Таким образом, химическими методами качественного анализа, с помощью тонкослойной хроматографии и УФ-спектроскопии, было показано наличие в экстрактах клевера лугового, хвоща полевого, бессмертника песчаного определенных классов флавонои-дов: флавонов, гидроксипроизводных флавоноидов, гликозидов и агликонов флавоноидов, антоцианидинов. Наибольшее количество флавоноидов обнаружено в экстрактах цветов бессмертника песчаного.
ЛИТЕРАТУРА
1. Запрометов М.Н. Фенольные соединения: распространение, метаболизм и функции в растениях. М.: Наука, 1994. 240 с.
2. Бриттон Г. Биохимия природных пигментов. М.: Мир, 1986. 422 с.
3. Синтез и биологическая активность некоторых флавонов // РЖХим. 1988. № 6. С. 69.
4. Химический анализ лекарственных растений: учеб. пособие для фармацевтических вузов / Ладыгина Е.Я., Сафронич Л.Н., Отря-
шенкова В.Э. и др.; под ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. М.: Высш. школа, 1983. 176 с.
5. Цюпко Т.Г., Темердашев З.А., Воронова О.Б., Храпко Н.В. Спектрофотометрический способ определения суммарной антиокси-дантной активности пищевых продуктов // Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии: тезисы докладов II Международного симпозиума. Краснодар, 2005. С. 434.
6. Булатов М.И., Калинкин И.П. Практическое руководство по фото-колориметрическим и спектроскопическим методам анализа. Л.: Химия, 1984. 408 с.
Поступила в редакцию 21 декабря 2009 г.
Sinyutina S.E., Shubina A.G., Konyuhova E.V. Flavonoids detection in vegetative raw materials of the Tambov region.
Allocation and identification of flavonoids containing in a clover meadow, horsetail field, immortelle sandy by the chemical methods of the qualitative analysis, with use of chromatography in thin layers and UV-spectroscopy are spent.
Key words: flavonoids; vegetative raw materials; analysis; chromatography; UV-spectroscopy.
