CC BY
78
УДК 543.393:547.495.1:340:67
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕНСУЛТАПА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
© Шорманов В.К., Баранов Ю.Н., Терских А.П., Неврова А.Ю., Щербакова М.Н.
Кафедра фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского государственного медицинского университета, Курск
E-mail: [email protected]
Проведено сравнительное изучение изолирования бенсултапа из надземных и подземных частей лекарственных растений. Оптимальные условия извлечения бенсултапа из растительного биоматериала достигаются ацетонитрилом уже при двукратном настаивании биологического объекта с изолирующим агентом, если массовое соотношение изолирующей жидкости и биоматериала на каждом этапе настаивания > 2:1 (извлечения из подземных частей) и 4:1 (извлечения из надземных частей лекарственных растений), а продолжительность настаивания > 30 мин. Показана возможность очистки анализируемого соединения от соэкстрактивных веществ биоматериала на колонке сорбента L 40/100 мкм. Оптимальный элюент при этом - гексан-диоксан-пропанол-2 (8:3:0,6 - по объему). Для идентификации и количественного определения бенсултапа в извлечениях из растительного биоматериала применены методы ТСХ, УФ-спектрофотометрии и нормальнофазовой ВЭЖХ. Разработанная методика позволяет идентифицировать и определить 95,12-95,75% бенсултапа в извлечениях из надземных и 92,19-92,85% - из подземных органов лекарственных растений. Определяемый минимум бенсултапа - 0,1-0,4 мг в 100 г растительного биологического материала.
Ключевые слова: бенсултап, биологический материал растительного происхождения, идентификация и определение.
DETERMINATION OF BENSULTAP IN BIOLOGICAL MATERIALS OF VEGETABLE ORIGIN Shormanov V.K., Baranov Yu.N., Terskikh A.P., Nevrova A. Yu., Shcherbakova M.N.
Pharmaceutical, Toxicological and Analytical Chemistry Department of Kursk State Medical University, Kursk
The comparative study of bensultap isolation from overground and underground parts of medicinal plants has been done. The optimal conditions for bensultap extraction from vegetable biomaterial with acetonitrile can be achieved in double insulation of a biological object with an insulating agent if the weight ratio of the biomaterial and the insulating liquid at each step of the infusion is > 2: 1 (extraction from underground parts of plants) and 4: 1 (extraction from overground parts of plants), and the duration of infusion is > 30 min. The possibility of analyte purification from biomaterial co-extracted substances at the column with sorbent L 40/100 microns has been shown. The optimal eluent is hexane-dioxane-2-propanol (8: 3: 0.6 by volume). To identify and quantify bensultap in extracts from the plant biomaterial the methods of TLC, UV spectrophotometry and normal phase HPLC have been applied. The developed technique allows identifying and determining 95.12-95.75% of bensultap in extracts from the overground parts and 92.19-92.85% - from the underground parts of medicinal plants. The defined minimum of bensultap is 0.1-0.4 mg in 100 g of the vegetable biological material.
Keywords: bensultap, vegetable biological material, identification and determination.
Бе нсултап ^^' -2 -диметиламинотриметилен ди(бензотиосульфонат) или 2-диметиламино-1,3-бис-(фенилсульфонилтио)пропан) (синонимы: банкол, 2-дорицид, рубан, виктенон) - биологически активное соединение антихолинэстеразного действия, применяющееся в сельскохозяйственной практике в качестве пестицида [1, 4, 8].
По физическим свойствам бенсултап белое с кремоватым оттенком кристаллическое вещество с температурой плавления 84-85 С [4].
Его растворимость в г/кг при 25°С составляет: 25 - в метаноле, 13 - в этаноле, 0,17 - в н-гексане, более 1000 - в ацетоне, ацетонитриле, хлороформе. В подкисленном водном растворе (рН ниже 5,0) бенсултап устойчив, а в водно-щелочных растворах он быстро разлагается [3, 9].
Бенсултап токсичен для теплокровных. Его ЛД50 при внутрижелудочном введении составляет для крыс 1105-1120 мг/кг, для мышей 516-484
мг/кг, для кроликов - более 2000 мг/кг. ЛД50 для птиц 60-102,7 мг/кг. Описаны случаи отравления людей, в том числе с летальным исходом [5, 9].
Попадая в дикорастущие растения в зонах сельскохозяйственных работ, бенсултап может представлять угрозу для здоровья человека в случае использования этих растений в качестве лекарственного растительного сырья.
Широкое применение рассматриваемого вещества, его токсичность, наличие случаев летального отравления обусловливает необходимость изучения этого соединения в химикотоксикологическом отношении [2, 6].
Цель исследования - разработка методики определения бенсултапа в растительном биологическом материале (надземной и подземной частях лекарственных растений) на примере травы пас-
тушьей сумки (Capsella bursa pastoris) и корней одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объект исследования - бенсултап (S,S'-2-диметиламинотриметилен ди(бензотиосульфонат) (СОП 342-034-2003, содержание вещества > 97%)).
Изучены особенности изолирования бенсултапа из высушенного растительного биологического материала (подземной и надземной частей лекарственных растений).
В качестве модельных растительных объектов для поиска оптимальных условий изолирования бенсултапа из сухого лекарственного растительного сырья рассмотрены трава пастушьей сумки и корни одуванчика [7].
Вначале проведён поиск оптимального изолирующего агента для извлечения бенсултапа из растительного биологического материала среди ряда органических жидкостей различной химической структуры и полярности, а также воды и водных растворов.
Для этого предварительно готовили модельные смеси бенсултапа с высушенным мелкоиз-мельчённым (размер частиц 0,2-0,5 мм) растительным лекарственным сырьём (травой или корнями) из расчёта 25 мг вещества в 25 г биологической ткани. Отдельно готовили контрольные образцы растительного биологического материала, заведомо не содержащие рассматриваемое вещество. Искусственные смеси, а также контрольные образцы высушенных растительных тканей выдерживали в течение 90 минут при температуре 18-22оС. По истечении указанного времени осуществляли двукратное изолирование бенсултапа из модельных смесей (навеска 5 г) при соотношении изолирующего агента и биологического материала 2:1 (по массе). Продолжительность каждого настаивания - 45 минут. Оба извлечения, полученные из каждой модельной смеси, объединяли, точное количество объединённого извлечения наносили на пластины типа «Сорбфил» ПТСХ-П-В-УФ и хроматографировали, используя подвижную фазу гексан-диоксан (6:4 по объёму) в присутствии вещества-свидетеля. На хроматограммах в УФ свете бен-султап обнаруживался в виде тёмных пятен (Rf
0,54±0,03) на более светлом общем фоне пластины. Элюировали исследуемое вещество из сорбента этанолом (10 мл) в течение 15 минут. Оптическую плотность элюата измеряли на спектрофотометре СФ-56 при длине волны 255 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм на фоне элюата, полученного при исследовании кон-
трольного образца биоматериала. Количество бенсултапа, перешедшее в извлечение, рассчитывали, используя уравнение градуировоч ного графика, которое имело вид: А = 0,013871С+0,001098, где А - оптическая плотность, С - концентрация бенсултапа в фото-метрируемом растворе, мкг/мл.
Изучена зависимость степени извлечения от продолжительности контакта изолирующей жидкости и лекарственного растительного сырья (травы или корней). При этом порции искусственных смесей или контрольных образцов ткани растений (по 5 г каждая) двукратно настаивали с порциями ацетонитрила по 10 г каждая в течение определенного времени (15, 30, 45, 60 или 75 минут). Отдельные извлечения, полученные при одинаковой продолжительности настаивания, объединяли. В каждом случае часть объединённого извлечения наносили на линию старта пластины типа «Сорбфил», хроматографировали, обнаруживали бенсултап и определяли его по приведённой выше схеме.
Исследована зависимость степени извлечения рассматриваемого соединения из надземной (трава пастушьей сумки) и подземной (корни одуванчика) частей растений оптимальным изолирующим агентом от кратности настаивания и количественного соотношения изолирующего агента и растительной биологической ткани. При этом брали на анализ по 5 г каждой искусственной смеси или контрольного образца растительного биологического материала. Каждую искусственную смесь параллельно с контрольным образцом настаивали с той или иной массой изолирующего агента (5-20 г) четырёхкратно при оптимальной продолжительности каждого отдельного настаивания. Определенное количество каждого извлечения хроматографировали на пластинах типа «Сорбфил» и проводили определение бенсултапа после его обнаружения на хроматограммах методом УФ-спектрофотометрии в соответствии с вышеописанной методикой.
Используя приводимую выше методику, изучали зависимость степени извлечения бенсултапа из надземной и подземной частей лекарственных растений от содержания анализируемого вещества в модельной смеси с биоматериалом.
Для очистки бенсултапа, извлечённого из растительного биологического материала, изучена возможность применения метода нормальнофазовой колоночной хроматографии (колонка размерами 490x11 мм, заполненная 10 г сорбента (силикагель L 40/100 мкм).
Для подтверждающей идентификации рассмотрена возможность применения метода электронной спектрофотометрии. Исследовались особенности поглощения бенсултапом УФ излучения
в различных растворяющих средах (прибор СФ-56, толщина рабочего слоя кюветы 10 мм).
В качестве дополнительного метода подтверждающей идентификации и количественного определения анализируемого соединения в извлечениях из растительных объектов рассмотрена высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) с использованием жидкостного хроматографа «Милихром», снабжённого УФ детектором (объединение «Научприбор», г. Орёл, Российская Федерация) и гидроксилированного сорбента «Силасорб-600», сформированного в виде колонки размерами 64x2 мм в металлическом корпусе (КАХ-1).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Результаты сравнительного изучения изолирования бенсултапа из его модельных смесей с надземными (трава пастушьей сумки) и подзем-
ными (корни одуванчика лекарственного) частями лекарственных растений представлены на рис. 1 и 2.
Как свидетельствуют полученные данные, наибольшие значения степени извлечения бен-султапа из травы и корней (соответственно 95,88% и 93,85%) достигаются при использовании в качестве изолирующего агента ацетонитрила.
Результаты изучения зависимости степени извлечения бенсултапа из его модельных смесей с надземными (трава пастушьей сумки) и подземными (корни одуванчика лекарственного) частями лекарственных растений от продолжительности настаивания представлены на рис. 3.
Проведённые исследования показали, что оптимальное время контакта растительных биообъектов (травы пастушьей сумки или корней одуванчика лекарственного) с оптимальным изолирующим агентом (ацетонитрилом) составляет 45 минут.
Рис. 1. Зависимость степени извлечения (Я, %) бенсултапа из надземных частей лекарственных растений (пастушья сумка) от природы изолирующего агента.
Рис. 2. Зависимость степени извлечения (Я, %) бенсултапа из подземных частей лекарственных растений (одуванчик лекарственный) от природы изолирующего агента.
и,0/» 100
80
60
40
20
15
30
А
45
60
80 -
60 -
40 -
20 -
75
I, мин
15
30
Б
45
60 75
мин
Рис. 3. Зависимость степени извлечения бенсултапа из надземных (пастушья сумка) (А) и подземных (одуванчик лекарственный) (Б) частей лекарственных растений ацетонитрилом от продолжительности настаивания.
Таблица 1
Зависимость степени извлечения бенсултапа из надземных (пастушья сумка) и подземных (одуванчик лекарственный) частей лекарственнных растений от содержания анализируемого вещества
в модельной смеси (п = 5; Р = 0,95)
Внесено бенсултапа, мг в 25 г биоматериала Найдено, %
в надземных частях лека зствснного растения в подземных частях лекарственного растения
X 8 8 х Ах X 8 Ах
50,0 96,15 1,38 0,62 1,71 93,48 1,51 0,68 1,88
25,0 96,26 1,49 0,67 1,85 93,52 1,64 0,73 2,04
10,0 96,08 1,66 0,74 2,06 93,37 1,79 0,80 2,23
5,0 95,92 1,90 0,85 2,36 93,11 2,03 0,91 2,52
2,5 95,71 2,28 1,02 2,84 92,89 2,40 1,07 2,98
Исследование полноты извлечения рассматриваемого вещества из высушенных надземной (трава пастушьей сумки) и подземной (корни одуванчика лекарственного) частей лекарственных растений оптимальным изолирующим агентом (ацетонитрилом) от массового соотношения изолирующего агента и растительного биоматериала, а также от кратности изолирования (п=5; Р=0,95) показало, что оптимальными условиями изолирования можно считать как минимум двукратное (каждый раз по 45 минут) настаивание биологического объекта с ацетонитрилом при соотношении масс изолирующего агента и модельной смеси 2:1. Для упрощения процесса изолирования и повышения воспроизводимости результатов настаивание высушенных надземных частей лекарственного растения с ацетонитрилом целесообразно проводить при массовом соотношении изолирующего агента и биоматериала 4:1.
Результаты изучения зависимости степени извлечения бенсултапа из объектов растительного происхождения от количества анализируемого
соединения, внесённого в модельные смеси, представлены в табл. 1.
Как свидетельствуют полученные данные, изменение содержания анализируемого вещества в модельных смесях с надземными (трава пастушьей сумки) и подземными (корни одуванчика лекарственного) частями лекарственных растений в интервале 0,01-0,2% (табл. 1) сопровождается лишь незначительным колебанием степени извлечения (95,71-96,15% для травы пастушьей сумки и 92,89-93,48% для корней одуванчика лекарственного).
Исследование возможности очистки бенсул-тапа, переходящего в извлечения из биологического материала методом адсорбционной колоночной хроматографии (сорбент - силикагель L 40/100 мкм), установлено, что при использовании подвижной фазы гексан-диоксан-пропанол-2 (8:3:0,6) анализируемое вещество обнаруживается во фракциях 11-14 (21-28 мл).
В контрольных опытах с растительными биологическими объектами, не содержащими
Таблица 2
Основные оптические характеристики электронных спектров поглощения бенсултапа
в различных растворителях
Растворитель ^шах , нм Удельный коэффициент поглощения, ^ 1% -^-'1 см Молярный коэффициент поглощения, 8
Этанол 210 358 19660
255 110 6023
Ацетонитрил 226 282 13583
258 111 5377
Этилацетат 255 108 4484
Диоксан 256 140 5066
Ацетонитрил-вода 223 285 13847
(5:5) 258 106 5148
Ацетонитрил-вода 222 305 15205
(6:4) 258 122 6090
Гексан-диоксан-пропанол-2 224 299 14034
(8:3:0,6) 255 112 5253
Гексан-диоксан-пропанол-2 224 256 12233
(8:4:0,6) 250 94 4503
бенсултап, установлено, что фоновое поглощение части элюата, соответствующего фракциям, в которых может содержаться анализируемое вещество и измеренное при 255 и 256 нм - аналитических длинах волны для определения методами спектрофотометрии и ВЭЖХ - незначительно и составляет не более 0,04 для извлечений из подземных частей растений и не более 0,05 для извлечений из надземных частей растений. Это характеризует предлагаемый вариант очистки как достаточно эффективный.
Как свидетельствуют данные табл. 2, поглощение бенсултапа в УФ области спектра в интервале длин волн 200-360 нм характеризуется наличием двух выраженных полос. Максимум коротковолновой полосы располагается в интервале 210-226 нм. Значения удельного и молярного коэффициентов поглощения, рассчитанные в точках максимумов данной полосы, составляют соответственно 256-358 и 12233-19660. Максимум длинноволновой полосы располагается в интервале 250-258 нм. Значения удельного и молярного коэффициентов поглощения, рассчитанные в точках максимумов данной полосы, составляют соответственно 94-140 и 4484-6090.
Этанол использован в качестве растворителя при идентификации и количественном определении исследуемого вещества методом УФ-спектрофотометрии. Количественное определение проводили по величине оптической плотности, измеренной в области 255 нм, используя уравнение градуировочного графика.
Исследования показали, что оптимальными для определения бенсултапа методом ВЭЖХ являются: подвижная фаза гексан-диоксан-
пропанол-2 (15:5:1), скорость подачи подвижной фазы 100 мкл/мин, температура колонки 20оС, аналитическая длина волны 256 нм, скорость движения диаграммной ленты - 720 мм/час, масштаб регистрации - 0,8 ед.о.п., время регистрации сигнала 0,6 сек. При этом время удерживания (%) бенсултапа составляет 6,36, объём удерживания (Ук) - 636 мкл, коэффициент ёмкости (к') - 3,04, число теоретических тарелок (К) - 2257. Открываемый минимум - 0,02 мкг в хроматографируемой пробе. Оценку количественного содержания бенсултапа методом ВЭЖХ проводили, используя уравнение градуировочного графика:
8= 2,58489-С+0,02872, где S - площадь пика, С- концентрация вещества в хроматографируемой пробе, мкг. Интервал линейности -
0,04-1,60 мкг в хроматографируемой пробе, коэффициент корреляции 0,9987.
По результатам предварительных исследований разработана схема химико-токсикологического исследования, состоящая в следующем.
И з о л и р о в а н и е. 25 г искусственной смеси или такое же количество контрольного образца биоматериала заливали 100 г ацетонитрила (извлечение из надземных - трава пастушьей сумки) или 50 г этого же растворителя (извлечение из подземных - корни одуванчика лекарственного -частей лекарственных растений), выдерживали 30 минут, периодически перемешивая. Извлече-
ние отделяли декантацией, а операцию настаивания повторяли в вышеописанных условиях. Отдельные извлечения объединяли, фильтровали через слой безводного сульфата натрия (через стеклянный фильтр диаметром 4 см со слоем безводного сульфата натрия толщиной 1-1,5 см), сульфат натрия промывали 20 г ацетонитрила. Фильтрат и промывную жидкость объединяли в выпарительной чашке, растворитель испаряли в токе воздуха при комнатной температуре.
О ч и с т к а. Остаток растворяли в 4 мл хлороформа, 2 мл полученного раствора смешивали с 1 г силикагеля Ь 40/100 мкм и испаряли остатки хлороформа из сорбента в токе воздуха.
В колонку размером 490x10 мм вносили вначале 9 г силикагеля типа Ь 40/100 мкм, а затем, поверх образующегося слоя, - 1 г силикагеля Ь 40/100 мкм, содержащего анализируемое вещество, предварительно введённое в виде хлороформного раствора. Через колонку вначале пропускали гексан, после истечения из колонки 20 мл элюата растворитель, находящийся над поверхностью столба сорбента, удаляли и начинали элюировать системой растворителей гексан - диоксан - пропанол-2 (8:3:0,6 - по объему). С момента начала подачи системы растворителей гексан -диоксан - пропанол-2 (8:3:0,6 по объему) выходящий из колонки элюат собирали отдельными фракциями по 2 мл каждая. Фракции с 11 по 14 включительно объединяли в выпарительной чашке, элюент испаряли в токе воздуха при комнатной температуре.
Остаток растворяли в 5 мл диоксана (и с х о д-н ы й д и о к с а н о в ы й р а с т в о р).
В выпарительную чашку № 1 вносили 0,2 мл «исходного диоксанового раствора» (при необходимости этот объём мог быть увеличен до 1,0 мл). В выпарительные чашки № 2 и № 3 вносили соответственно 2 мл и 1 мл «исходного диоксаново-го раствора». Порции раствора во всех чашках испаряли в токе воздуха при комнатной температуре до получения сухих остатков.
1. О п р е д е л е н и е м е т о д о м Т С Х. Остаток в чашке № 1 растворяли в незначительном количестве хлороформа и количественно переносили раствор в виде полосы на линию старта хроматографической пластины «Сорбфил» ПТСХ-П-В-УФ. Процесс хроматографирования осуществляли, применяя элюент гексан-диоксан (6:4). Исследуемое вещество идентифицировали по совпадению его значения КГ с таковым вещества-свидетеля.
2. О п р е д е л е н и е м е т о д о м УФ-с п е к т р о ф о т о м е т р и и. После предварительного хроматографирования методом ТСХ остатка из чашки № 1 участок хроматограммы с пятном анализируемого вещества вырезали из
пластины, помещали в пробирку, элюировали вещество из сорбента 95% этанолом в течение 15 минут и исследовали поглощение элюата в интервале длин волн 200-360 нм на фоне контрольного раствора. При необходимости анализируемый раствор разбавляли. Определяемое соединение идентифицировали по характерной форме спектральной кривой и положению максимумов поглощения.
По величине оптической плотности, измеренной при длине волны 255 нм, определяли количественное содержание вещества, используя уравнение градуировочного графика, и пересчитывали на определённую навеску биоматериала. Результаты количественного определения рассматриваемого соединения в надземных (пастушья сумка) и подземных (одуванчик лекарственный) частях лекарственных растений методом УФ-спектрофотометрии представлены в табл. 3 и 4.
Как свидетельствуют полученные результаты, разработанные методики отличаются достаточными для химико-токсикологических исследований воспроизводимостью и правильностью.
4. О п р е д е л е н и е м е т о д о м В Э Ж Х . 1,0 мл диоксанового раствора вносили в мерную колбу вместимостью 25 мл, в колбу прибавляли 3,5 мл диоксана, 1 мл пропанола-2, 15 мл гексана и доводили содержимое колбы до метки смесью растворителей гексан-диоксан-пропанол-2 (15:5:1). 2-16 мкл полученного раствора вводили в хроматограф. Хроматографировали в колонке размерами 64x2 мм с сорбентом «Силасорб-600». Элюент - гексан-диоксан-пропанол-2 (15:5:1), скорость его подачи-100 мкл/мин, аналитическая длина волны- 256 нм.
Бенсултап идентифицировали по характерному времени удерживания, совпадающим со значением этого же параметра вещества-стандарта. Количественное содержание вещества рассчитывали по площади хроматографического пика с использованием уравнения градуировочного графика и пересчитывали на навеску, предварительно добавленную в искусственную смесь. Результаты количественного определения рассматриваемого соединения в надземных (пастушья сумка) и подземных (одуванчик лекарственный) частях лекарственных растений методом ВЭЖХ представлены в табл. 3 и 4.
Как свидетельствуют полученные результаты, разработанные методики отличаются достаточными для химико-токсикологических исследований воспроизводимостью и правильностью.
В спектрах бенсултапа, извлечённого из надземных и подземных частей лекарственных растений, положения максимумов и формы спектральных кривых в целом соответствуют таковым вещества-стандарта.
Таблица 3
Результаты количественного определения бенсултапа в надземных частях лекарственного растения (пастушья сумка) на основе изолирования ацетонитрилом и очистки методом колоночной хроматографии (п=5; Р=0,95)
Внесено бенсултапа, мг в 25 г биоматериала Найдено, %
Спектрос ютометрия ВЭЖХ
х 8 Є*- Ах: х Є 8 х Ах
50,0 95,69 1,59 0,71 1,98 95,75 1,54 0,69 1,92
25,0 95,56 1,72 0,77 2,14 95,50 1,78 0,80 2,21
10,0 95,43 1,86 0,83 2,31 95,46 1,83 0,82 2,27
5,0 95,31 2,07 0,92 2,57 95,25 2,13 0,95 2,65
2,5 95,18 2,59 1,16 3,22 95,12 2,53 1,13 3,13
Таблица 4
Результаты количественного определения бенсултапа в подземных частях лекарственного растения (одуванчик лекарственный) на основе изолирования ацетонитрилом и очистки методом колоночной хроматографии (п=5; Р=0,95)
Внесено бенсултапа, Найдено, %
Спектрос отометрия ВЭЖХ
мг в 25 г биоматериала * Є 8 х Ас х Є 8 х Ах
50,0 92,85 1,73 0,77 2,15 92,79 1,82 0,81 2,26
25,0 92,71 1,88 0,84 2,34 92,75 1,83 082 2,28
10,0 92,63 2,00 0,90 2,49 92,67 1,94 0,87 2,41
5,0 92,49 2,17 0,97 2,70 92,36 2,27 1,01 2,82
2,5 92,27 2,62 1,17 3,26 92,19 2,69 1,21 3,35
На хроматограммах анализируемого соединения, выделенного из рассматриваемых биологических объектов, полученных при использовании метода ВЭЖХ, по сравнению с хроматограммой стандарта бенсултапа не удаётся выявить дополнительные пики и заметное смещение базовой линии.
Как свидетельствуют полученные данные, при содержании бенсултапа 2,5-50,0 мг в 25 г биоматериала предлагаемая методика позволяет определить 95,12-95,75% бенсултапа в надземных и 92,19-92,85% в подземных органах растений с достаточной для биологических исследований воспроизводимостью и правильностью. При уменьшении содержания анализируемого вещества в модельных смесях с 0,2 до 0,01% полуширина доверительного интервала возрастает с 1,92 до 3,22 (для модельных смесей с высушенным растительным лекарственным сырьем надземных органов растений) и с 2,15 до 3,35 (для модельных смесей с высушенным растительным лекарственным сырьем подземных органов растений) (п = 6; Р = 0,95).
Использование ацетонитрила в качестве изолирующего агента и предложенные условия изолирования и очистки позволяют обеспечить достаточно высокий уровень извлечения анализируемого соединения из различных растительных биологических объектов. Открываемый минимум,
достигаемый применением разработанной методики, составляет 0,1-0,4 мг бенсултапа в 100 г биологического материала. Разработанная методика отличается хорошей воспроизводимостью и достаточно проста по выполнению. Она может быть использована для контроля содержания остаточных количеств рассматриваемого соединения в лекарственном растительном сырье (надземных и подземных частях высушенных лекарственных растений).
На основании проведённых исследований можно сделать следующие выводы:
1. Показана возможность и определены оптимальные условия изолирования бенсултапа из растительного биоматериала ацетонитрилом.
2. Очистку извлекаемого из растительных объектов вещества осуществляли путём хроматографирования в колонке силикагеля L 40/100 мкм.
3. Для идентификации и количественного определения бенсултапа в биологических объектах предложены методы ТСХ, УФ-спектрофотометрии и нормальнофазовой ВЭЖХ.
4. Показана возможность применения разработанной методики для исследования надземных и подземных частей лекарственных растений.
ЛИТЕРАТУРА
1. Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации, 2012 год. - М. : Министерство сельского хозяйства Российской Федерации, 2012. - 575 с.
2. Григорьев А.М., Мельник А.А., Рудакова Л.В. Идентификация и определение производных и продуктов метаболизма банкола методами ГЖХ-МС и ВЭЖХ для целей судебно-химического и химико-токсикологического анализа // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2008. -Т. 8, № 5. - С. 766-778.
3. Григорьев А.М., Недовизина Г.В., Пирожков М.В. Определение производных и метаболитов бен-сультапа (банкола) хроматографическими методами // Судебно-медицинская экспертиза. - 2009. -Т. 52, № 5. - С. 30-35.
4. Мельников Н.Н., Новожилов К.В., Белан С.Р. Пестициды и регуляторы роста растений: справочник - М. : Химия, 1995. - 575 с.
5. Шорманов В.К., Баранов Ю.Н., Дурицын Е.П., Маслов С.В., Прониченко Е.И., Ганиев С.В. Судеб-
но-химическое определение банкола // Судебномедицинская экспертиза. - 2010. - Т. 53, № 6. -С. 39-41.
6. Шорманов В.К., Белых Е.А., Баранов Ю.Н., Терских А.П. Особенности распределения банкола в организме теплокровных животных // Судебномедицинская экспертиза. - 2013. - Т. 56, № 5. -С. 34-37.
7. Шорманов В.К., Галушкин С.Г., Терских А.П., Коваленко Е.А., Михалькова П.В. Определение кар-бофурана в биологическом материале растительного происхождения // Курский научнопрактический вестник «Человек и его здоровье». -2013. - № 3. - С. 107-113.
8. Civelek H.S., Qolak A.M. Effects of Some Plant Extracts and Bensultap on Trichoferus griseus (Fabricius, 1792) (Coleoptera: Cerambycidae) // World Journal of Agricultural Sciences. - 2008. - Vol. 4, N 6. -P. 721-725.
9. Summary of Toxity Studies on Bensultap. (Development Department, Plant Protection Research, Agro Division, Taceda Chemical Industries, Ltd.) // J. Pesticide Sci. - 1989. -Vol. 14, N 4. - P. 523-529.
