Научная статья на тему 'Обоснование применения метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени у женщин с урогенитальными заболеваниями'

Обоснование применения метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени у женщин с урогенитальными заболеваниями Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

CC BY
126
23
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
микробиоценоз влагалища / умеренно выраженный и выраженный дисбиоз / лактобациллы / условнопатогенные и патогенные анаэробные микроорганизмы / vaginal microbiocenosis / mild and moderate dysbiosis / lactobacilli / opportunistic and pathogenic anaerobic infections

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Шевченко Е. П., Мацас Е. Ю., Мулькина Е. И.

Проведен сравнительный анализ состояния биоценоза у женщин при помощи метода ПЛР в реальном времени с использованием тест-системы «Фемофлор -16» и метода микроскопии, окрашенных по Романовскому. Доказано преимущество методи ПЛР.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Шевченко Е. П., Мацас Е. Ю., Мулькина Е. И.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

REAL-TIME PCR DIAGNOSIS OF FEMALE UROGENITAL DISORDERS CAUSED BY OPPROTUNISTIC

This research was aimed to carry out the comparative analysis of vaginal biocenosis by real-time polymerase chain relation, the application of “Femoflor-16” and the microscopic study of Romanovsky-stained specimens.

Текст научной работы на тему «Обоснование применения метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени у женщин с урогенитальными заболеваниями»

Висновки

1. Застосування антиоксиданпв та iмуномо-дуляторiв позитивно впливае на кл^инний iмунi-тет пацiента.

2. Покращуються клiнiчнi, лабораторнi, рент-генолопчы показники у основно''' групи хворих, що приймали iмуномодулятори та антиоксидан-ти разом з протитуберкульозними препаратами.

Л^ература

1. Белянин И. И. «Снижение устойчивости микобакткерий к противотуберкулезным препаратам в эксперименте и клинике (ближайшие и отдаленные результаты) / И. И. Белянин, Е. И. Шмелев // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2007. -№ 2. - С. 31-38.

2. Бялик И.Б. Результати застосування ПАСК в комплекснш хiмiо-терапп хворих деструктивним, рашш неефективно лкованим, хiмiорезистентним туберкульозом легень / И.Б. Бялик, Л.М. Ци-ганкова, В.В. Давиденко, 1.В. Случ // Укра'шський пульмонолоп-чний журнал. - 2006 - № 1. - С. 56-60.

3. Голышевская В.И. Возможности диагностики туберкулеза при помощи амплификационных тест-систем. Молекулярные основы патогенеза и диагностики туберкулеза и другой легочной патологи // В.И. Голышевская, А. Л. Гинцбург, Д.Т. Леви. - М., 1995. - С. 10-11.

10.

11.

12.

13.

Демьяненко Н.В. Определение микобактериальных антигенов при туберкулезе / Н.В. Демьяненко, Н.А. Кетова // Проблемы туберкулеза. - 1995. - № 2. - С. 59.

Лечение туберкулеза // Туберкулез ; Под ред. А.Г. Хоменко. -М., 1996. - 496 с.

Мишин В.Ю. Эффективность стандартного режима химиотерапии при лечении впервые выявленных больных деструктивным туберкулезом легких с бактериовыделением / В.Ю. Мишин, В.И. Чуканов, С.В. Вылегжаник // Проблемы туберкулеза. -2001. - № 7. - С. 13-18.

Новожилова И.А. Значимость определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза для успешного лечения туберкулеза легких / И.А. Новожилова // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2004. - № 4. - С.29 - 30. Перельман М.И. Хирургия туберкулеза легких / М.И. Перель-ман // Проблемы туберкулеза. - 1998. - № 3. - С. 27-32. Петренко В.М. Современные методы лечения химиорезистент-ного туберкулеза / В.М. Петренко, С.О. Черенько.// Проблемы туберкулеза. - 2005. - № 10. - С. 1-14.

Фещенко Ю.И. Современная химиотерапия туберкулеза легких / Ю.И. Фещенко // Лкування та дiагностика. - 1996. - № 2. - С. 34 - 36.

Фещенко Ю.1. Лкування туберкульозу / [Ю.1. Фещенко, В.М. Мельник, 1.Г. 1льницький та ш.]. ; За ред. Ю.1. Фещенка. - К. : Логос, 1996. - 117 с.

Фещенко Ю.1. Хiмiорезистентний туберкульоз / Ю.1. Фещенко, В.М. Мельник, А.В. Коблянська. - К., 2003. - 136 с. Кожушко М.Ю. Антитоксична дiя А-бактерину у хворих на туберкульоз легень / М.Ю. Кожушко, С.А. Рижинко // Медичш перс-пективи. - 2003.. - №2 - С. 69-71.

Реферат

ЕФФЕКТИВНОСТЬ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЬОЗОМ З ПЕРВИЧНОЙ СТОЙКОСТЬЮ С ДОБАВЛЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ И АНТИОКСИДАНТОВ ФИлатова Е.В.

Ключовые слова: химиорезистентный туберкулез, стойкость, антиоксиданты, иммуномодуляторы.

В работе приведены результаты лечения больных химиорезистентными инфильтративными и ди-семинованым туберкулезом с первичной стойкостью к противотуберкульзным препаратом. Полученные наработки дают право рекомендовать комбинацию витаминов А и Е по 200 мг соответственно во время завтрака кроме етого больные этой трупы получали настойку эхинацеи 1 чайную ложку на S стакана воды за полчаса до завтрака каждые сутки. Курс лечения патогенной терапии 20 дней.

Summary

EFFECTIVENESS FOR THE TREATMENT OF TB-PATIENTS WITH PRIMARY RESISTANCE BY IMMUNOMODULATORS AND

ANTIOXIDANTS

Filatova O.V.

Key words: chemoresistant tuberculosis, resistance, antioxidants, immunomodulators.

This article highlights the results of the therapy of patients with chemoresistant infiltrative and disseminated TB tuberculosis who have primary resistance to antituberculous medication. Our findings allow to recommend the combination of A and E vitamins in a dose of 200 mg respectively during the breakfast. Moreover, the patients under the observation took a teaspoon of Echinacea tincture per glass of water 30 min. before breakfast daily. The course of the pathogenic therapy lasts near 20 days.

4

5

6

7

8

9

УДК 616.974-055.2

Шевченко Е.П.,Мацас Е.Ю, Мулькина Е.И., Беловол А.Н.

ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДА ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО

ВРЕМЕНИ У ЖЕНЩИН С УРОГЕНИТАЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ

Национальный медицинский университет имени А.А.Богомольца, Киев, Александровская клиническая больница, Киев Харьковский национальный медицинский университет

Проведен сравнительный анализ состояния биоценоза у женщин при помощи метода ПЛР в реальном времени с использованием тест-системы «Фемофлор -16» и метода микроскопии, окрашенных по Романовскому. Доказано преимущество методи ПЛР.

Ключевые слова: микробиоценоз влагалища, умеренно - выраженный и выраженный дисбиоз, лактобациллы, условно-патогенные и патогенные анаэробные микроорганизмы.

Известно, что урогенитальная система чело- лочки органов урогенитальной системы у здоро-веческого организма представляет собой эколо- вых женщин колонизированы достаточно боль-гическую нишу, соответствующую определенной шим количеством микроорганизмов, состав-популяции микроорганизмов. Слизистые обо- ляющих биоценоз, который характеризуется

разнообразием видов бактерий, включающий широкий спектр микроаэрофилов, факультативных и облигатных анаэробов[3,4].

В различные периоды жизни микрофлора влагалища женщины претерпевает определенные изменения. Микроэкология влагалища -сложная динамическая экосистема, количественный и качественный состав которой непосредственно зависит от гормональной перестройки (менструация, беременность, менопауза). Изменение биотопов влагалища, других отделов мочеполовой системы и желудочно-кишечного тракта могут быть связаны с целым рядом различных факторов[2,9].

В последние десятилетия значительно расширились представления о влиянии микрофлоры урогенитальной системы на гомеостаз организма хозяина. С микроэкологических позиций стала очевидной необходимость пересмотра представлений о вагинальных инфекциях, которые вызываются условно-патогенными микроорганизмами. Все большее значение приобретают полимикробные ассоциации с различной степенью экологической значимости ассоциантов. В этих условиях одной из первостепенных задач становится поиск своеобразных маркеров нарушения биоценозов влагалища[17].

В настоящее время инфекционно-воспалительные урогенитальные заболевания женщин занимают первое место в мире в структуре акушерско-гинекологической заболеваемости. Их частота в различных популяциях колеблется от 30 до 80%[5]. Так, в группах планирования семьи заболеваемость составляет 1719%, среди лиц находящихся на лечении в клиниках венерических болезней - 24-37%, среди пациенток с патологическими белями - 61-87%[12].

Заболевания, вызванные условно-патогенной микрофлорой, могут протекать как с клинически выраженной симптоматикой, так и бессимптомно [1]. Бессимптомное течение заболевания в ряде случаев приводит к позднему обращению больных к врачу и развитию вследствие этого серьезных осложнений. Установлено, что урогенитальные заболевания, вызванные условно-патогенными микроорганизмами, увеличивают риск возникновения инфекций, передающихся половым путем (сифилис, трихо-мониаз, гонорея, хламидиоз) и ВИЧ-инфекции [14,7,16].

Несвоевременная диагностика урогениталь-ных заболеваний, вызванных условно-патогенной микрофлорой, может стать причиной нарушения репродуктивной функции женщины. Так, воспалительные процессы в малом тазу могут нарушать нормальный транспорт ооцита, что может быть причиной трубного бесплодия [11].

Заболевания, вызванные условно-патогенной микрофлорой, могут быть причиной спонтанных абортов, преждевременных родов, а

также внутриутробного инфицирования и низкого веса плода. Своевременно не диагностированные заболевания, вызванные условно-патогенной микрофлорой, могут стать причиной осложнений после хирургических вмешательств на органах малого таза и постнатальных осложнений [10].

В настоящее время для установления диагноза дисбиоза влагалища используется комплекс клинических и лабораторных критериев, включающий жалобы пациентки (выделения, зуд), объективные клинические проявления (выделения, гиперемия) и нарушения микробиоценоза, выявляемые микроскопическим и культу-ральным методами.

Диагностика инфекций, передающихся половым путем, вызванные условно-патогенной микрофлорой, в подавляющем большинстве случаев не имеют специфических клинических симптомов. Именно поэтому клиническое обследование не позволяет установить этиологическую природу заболевания, которая выявляется исключительно с помощью лабораторных методов исследования[9].

Наиболее широко в современной медицинской практике применяется микроскопический способ диагностики инфекционно-

воспалительных урогенитальных заболеваний. Микроскопическая оценка мазков окрашенных метиленовым синим, по Граму и по Романовскому включает дифференциацию всего несколько морфотипов без возможности видовой идентификации микроорганизма.

Принципиальным недостатком метода является то, что при микроскопии можно выявить только те микроорганизмы, которые обладают размерами, достаточными для визуализации. Многие виды и роды условно-патогенных микроорганизмов имеют похожие морфотипы, тогда как их патогенные свойства и чувствительность к антибиотикам могут значительно отличаться. Кроме того, микроскопия не позволяет идентифицировать ряд этиологически значимых условно-патогенных возбудителей. Например, некоторые бактерии, такие как Atopobiumvaginae [15],которые, как известно, ассоциированы с развитием бактериальноговагиноза, не визуализируются при микроскопии, а могут выявляться только культуральным методом или методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) [13,8]. Наконец, к недостаткам метода можно отнести субъективизм и зависимость результата исследования от квалификации врачей-лаборантов.

Быстрое исполнение, простота, дешевизна обеспечили широкое распространение данного метода. В 1994 г. Кира Е. Ф. разработал оригинальную классификацию микроскопической характеристики биоценоза влагалища, в соответствии с которой выделяют четыре типа мазка (Кира Е.Ф., 2001): нормоценоз, промежуточный тип, дисбиотический тип мазка, характерный для бактериального вагиноза (БВ) и мазок, харак-

терный для вагинита. Последний может быть как специфическим (трихомонадный или канди-дозный вагинит (КВ)) и неспецифическим (НВ).

Однако, картину типичного БВ или КВ врачу-микроскописту наблюдать приходится не часто. В основном встречаются мазки с нормальной микроскопической картиной или промежуточного типа. При этом пациентки могут предъявлять жалобы, а врач-клиницист наблюдать специфическую клиническую картину. Таким образом, выявление промежуточного и нормального типа мазка у пациенток с субъективными и объективными проявлениями урогенитальных заболеваний у женщин, представляет в большинстве случаев проблему для лечащего врача, так как не позволяет установить этиологически обоснованный диагноз и назначить адекватное лечение.

Более информативным является способ диагностики урогенитальных заболеваний, вызванных условно-патогенной микрофлорой, путем микробиологического (культурального) исследования. Этот способ позволяет установить видовой состав аэробных, факультативно-анаэробных и некоторых облигатно-анаэробных бактерий и тем самым подтвердить принадлежность микроорганизмов к морфотипам, обнаруженным при микроскопии мазков.

Однако и культуральный способ диагностики не лишен ряда серьезных недостатков. Условно-патогенная микрофлора, являющаяся наиболее частой причиной урогенитальных заболеваний у женщин, представлена, главным образом, анаэробными микроорганизмами. Для обеспечения анаэробных условий культивирования таких микроорганизмов требуется специальное оснащение лаборатории дорогостоящим оборудованием, специальные селективные, питательные среды и высококвалифицированные врачи микробиологи. Подавляющее большинство лечебных учреждений практического здравоохранения в настоящее время не имеют подобных условий.

Существенными недостатками культурально-го метода являются необходимость сохранения высокой жизнеспособности микроорганизмов до момента поступления биоматериала в лабораторию, а также длительные сроки культивирования ( в среднем 5 дней).

Метод полимеразной цепной реакции широко применяется для диагностики ИППП. «Классическая» ПЦР предполагает анализ результатов реакции по «конечной точке». Применение метода ограничено задачами, в которых достаточно ответа «да» или «нет», что не позволяет определить этиологическое значение тех или иных патогенных и условно-патогенных микроорганизмов без определения их количественной характеристики.

В начале 90-х годов прошлого столетия исследователи предложили регистрировать накопление ДНК непосредственно в ходе ПЦР. К

этой идее их подтолкнуло желание использовать метод ПЦР для количественного определения исходного числа матриц, попавших в реакционную пробирку. Изобретение ПЦР в «реальном времени» существенно упростило технику измерения , сделало подход более точным, а также создало новые возможности для изучения вагинальной биоты.

Материалы и методы исследования

На базе Александровской клинической больницы г. Киева были проведены исследования тест-системы PCR Real-time «Фемофлор-16», производства Научно-производственной фирмы ДНК - Технология, Российская Федерация. В исследованиях используется прибор ДТ-322 (000 «НПО ДНК-Технология»). Результаты исследования автоматически регистрируются, данные переводятся в цифровой формат, удобный для трактовки и хранения результатов. Отдел урогенитальной патологии и отдел ДНК-технологии лаборатории Александровской клинической больницы г. Киева специализируется на диагностике инфекций передающихся половым путем. В отделе ДНК-технологии применяется «классическая» ПЦР, т.едетекция результатов по «конечной точке». В отделе урогени-тальной патологии проводится микроскопия окрашенных препаратов по Романовскому.

Были обследованы 46 женщин репродуктивного возраста, в возрасте 18-42 года. У пациенток присутствовали субъективные и объективные проявления урогенитальных заболеваний и/или выявлены патологический вариант мазка. Критериями исключения являлись наличие инфекций, вызванных облигатными патогенами (C.trachomatis, N. gonorrhoeae, M. genitalium, T. vaginalis). Для оценки биоценоза влагалища применяли микроскопический метод (окраска по Романовскому), и ПЦР - РВ («Фемофлор-16»).

В окрашенных препаратах оценивалось наличие полиморфно-ядерных лейкоцитов и их количество, состояние эпителиоцитов и морфология микрофлоры.

Состояние соотношения микрофлоры для нормоценоза в диагностикуме «Фемафлор-16» характеризовалось следующим образом:

1.Общаябакмасса (абсолютный показатель -106 - 108).

2.Нормофлора (Lactobacillus), нормальный уровень (абсолютный показатель<106).

3. Факультативно-анаэробные и анаэробные микроорганизмы не превышают нормальный уровень (абсолютный показатель <104).

4. Микоуреаплазмы отсутствуют или присутствуют в количествах, не имеющих диагностическое значение (абсолютный показатель <104).

5.Грибы рода Candida- отсутствуют или присутствуют в количестве не имеющих диагностическое значение (абсолютный показатель <103). Изменения этих показателей соответствовали изменению состояния биоценоза влагалища.

Используя тест-систему «Фемофлор-16», необходимо уделить особое внимание забору материала. Материалом для исследования методом ПЦР в режиме РВ служит соскоб эпителиальных клеток (уретра, заднебоковой свод влагалища, цервикальный канал шейки матки). Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый материал содержал, возможно, большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови. Показателем правильного взятия биоматериала является достаточное количество геномной ДНК человека в пробе. Источником этой ДНК являются эпителиальные клетки, попадающие в пробу при правильной технике взятия биоматериала. Оптимальная величина этого показателя должна составлять не менее 105.

Показатель оценивается в абсолютных значениях. При величине показателя контроль взятия материала (КВМ) меньшей, чем 10 , результат ПЦР анализа биоты считается недостовер-

15%

ным, что требует повторного взятия биоматериала.

Результаты и их обсуждение По данным микроскопического исследования у 16 (35%) пациенток наблюдался нормоценоз, т.е. отсутствовала воспалительная реакция, в препарате преобладала палочковая флора, морфологически сходная с лактобациллами. У 19 (41%) женщин было увеличено количество лейкоцитов во влагалище и в цервикальном канале, присутствовала смешанная микрофлора с преобладанием полиморфной палочковой, что свидетельствовало об умеренно-выраженном дисбиозе и цервиците с нарушением биоты. У 7 (15%) была выявлена коккобациллярная флора с наличием «ключевых клеток» и у 4 (9%) отмечался кандидоз и наличием воспалительной реакции и полиморфизмом морфотипов бактерий (рис. 1).

□ наращшиз

35%

□ унсришыи дисЬиш, Ц^ШПЩТ

[ дисбата,

ц^вицнг

41%

дигйит_1ур|и| ил

Рис. 1. Оценка биоценоза влагалища и цервикального канала методом микроскопии окрашенного препарата по Романовскому

Применяя методику метода ПЦР в реальном времени, мы получили следующие результаты. Только у 2 (4%) пациенток в результате анализа был выявлен нормоценоз, т.е. преобладали лактобациллы в 106 - 107 с присутствием минимального количества факультативной анаэробной флоры. 7 (15%) пациенток имели выраженный дисбиоз, лактобациллы отсутствовали, доминировали как факультативно-анаэробные, так и анаэробные микроорганизмы. В 8 (17%) случаев наблюдался умеренный дисбаланс т.е. количество лактобацилл было в норме или снижено и составляло 103 - 106 с присутствием в разных количествах факультативно-анаэробных и

анаэробных бактерий, это состояние определялось как компенсированный дисбаланс и требовало дальнейшего наблюдения. У 29 (64%) наблюдалось снижение количества лактобацилл с выраженным преобладанием факультативно-анаэробных и анаэробных микроорганизмов. Это состояние определялось как анаэробный дисбаланс (рис.2). Таким образом, при исследовании биоценоза влагалища и цервикального канала методом ПЦР-РВ в 96% случаев была установлена этиология патологического процесса во влагалище и цервикальном канале.

Рис. 2. Оценка биоценоза влагалища и цервикального канала методом ПЦР в реальном времени

Мы также проанализировали структуру биоценоза влагалища по результатам ПЦр-РВ в зависимости от микроскопического метода. Из 16 пациенток при микроскопической оценке нормо-ценоза только у 2 количественным методом ПЦР определялось значительное количество нормофлоры. У 8 женщин с применением количественной оценки определялся умеренный дисбаланс, т.е., количество лактобацилл было в норме или снижено. Однако при этом количество факультативно-анаэробных и анаэробных микроорганизмов превышало допустимые концентрации: преобладали Enterobacteriumspp., Streptococcusspp., Staphylococcusspp.,

Gardnerellavaginalis, Prevotellabivia,

Eubacteriumspp. их абсолютный показатель составлял 104,5 - 106,5. Особое внимание заслуживают пациентки с умеренным дисбалансом выраженной воспалительной реакцией во влагалище и цервикальном канале. При цитоморфо-логическом исследовании мы, как правило, наблюдаем картину увеличения воспалительных элементов и большое количество смешанной флоры с преобладанием полиморфных палочек. Методика ПЦР в РВ дает нам возможность определить не только этиологических агентов, но определить их количественный состав. У остальных 6 пациенток с нормоценозом и у 19 - с

умеренным дисбиозом, а также наличием баква-гинита и цервицита было выявлено значительное увеличение количества анаэробной микрофлоры. В микробиоценозе у этих больных преобладали не только факультативно-анаэробных и анаэробных микроорганизмы, но и микоуреа-плазмы> 106,5. Это состояние определялось как анаэробный дисбаланс и требовало последующего лечения.

Необходимо отметить, что в группе женщин с наличием умеренного и анаэробного дисбаланса, а также с увеличением количества воспалительных элементов во влагалище и цервикаль-ном канале, при использовании морфологии мазка, дрожжеподобные грибы рода Candidaspeciesне были выявлены.При использовании количественного определения Candidaspecies присутствовала в большинстве случаев в концентрации от104 и более, совместно с факультативно-анаэробными и анаэробными микроорганизмами в различной концентрации т.е. эти случаи можно рассматривать как полимикробные ассоциации. Наличие у женщин в микробном пейзаже увеличенных концентраций грибов Candidaspecies, свидетельствует о значительном снижении местных защитных механизмов и возможности хронического рецидивирующего течения заболевания.

Таблица 1

Пациентки 1 2 3 4 5 6 7

микроорганизмы

Enterobacteriaceae 1056 1038 - - 105'1 103'4 -

Streptococcusspp 104'3 - 104'7 105'1 - 1029 1038

Staphylococcusspp. - 104'7 1035 - 1036 1039 104'7

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Gardnerellavaginalis/ Prevotellabivia/ Porphyromonas spp. 104'2 - 1068 - - 104'9 1065

Eubacteriumspp. - - 1038 - 104'1 - 1028

Sneathia spp./Leptotrihia spp./Fusobacteriumspp 1038 - - 1035 - 1036 -

Megasphaera spp./Veilonella spp./Dialister spp. 103'2 104'5 - 103'1 - - -

Lachnobacteriumspp./ Clostridiumspp. - - 104'5 - 1039 - 1036

Mobiluncusspp./ Corynebacteriumspp. - 1053 - 104'3 104'6 - -

Peptostreptococcusspp. 1053 104'6 - - - 1038 -

Atopobiumvaginae - - 103'4 1053 1057 -

Mycoplasma hominis - - 1057 - - 1039 104'1

Ureaplasma (urealyticum + parvum) 1045 - 1038 - 1042 - -

Candidaspp. 1036 1035 1040 1038 103,4 1042 103,9

Отсутствие лактобацилл в биоценозе влагалища и цервикального канала у женщин определяется как выраженныйдисбиоз. Это состояние легко диагностируется методом окрашенных препаратов, т.е отсутствие лактобацилл и наличие коккобациллярной флоры и «ключевых» клеток. В наших исследованиях метод окрашенных препаратов и метод ПЦР в реальном времени совпали. При этом у 7 пациенток был диагностирован выраженный дисбиоз. Однако морфологически не всегда удавалось установить наличие инфекционного агента. При выраженном дисбиозе нет единого микробного фактора, хотя до недавнего времени это состояние ассоциировалось преимущественно с Gardnerellavaginalis. Среди микробных агентов, влияющих на развитие данной патологии, кромеGardnerellavaginalis, были выделены следующие микроорганизмы (табл.1): Mycoplasmahominis, Ureaplasma(urealiticum+parvum), Atopobiumvaginae, Prevotellabivia, Porhyromonasspp., Peptostreptococcusspp., Fusobacteriumspp., Eubacteriumspp., Enterocoousspp., Enterobacteriaceae, Clostridiumspp., Dialisterspp., Lachnobacteriumspp., Megasphaeraspp., Mobiluncusspp., Corynebacteriumspp., Leptotrichiaspp., Sneathiaspp., Veillonellaspp., Candidaspp., Streptococcusspp., Staphylococcusspp.

Результаты проведенных исследований позволили установить, что у ряда обследованных женщин выраженныедисбиотические изменения были ассоциированы с большим количеством разнообразной микробиоты. При этом, у 4 женщин из 7 выраженный дисбиоз был ассоциирован с Gardnerellavaginalis, а у 3 женщин доминировали трудновизуолизируемые микроорганизмы, такие как Mobiluncusspp. и Atopobiumvaginalis.

Таким образом, метод ПЦР-РВ позволил определить морфологию микроорганизмов и дать количественную оценку дисбиотического соотношения. Пример выраженного дисбаланса с наличием трудно культивируемых микроорганизмов, таких как Mobiluncusspp. и Atopobiumvaginalis. Эти микроорганизмы обладают свойством резистентности к стандартной лекарственной терапии препаратами имидазо-лового ряда. Поэтому необходимо определение не только их наличия, но и количественный состав этих микроорганизмов. Выявление дисбио-за дает возможность назначить адекватную терапию.

Выводы

Являясь высокочувствительным и высоко-

специфичным, молекулярно-биологический метод PCR Real-time позволяет выявить инфекции у женщин с субъективными и объективными проявлениями урогенитальных заболеваний.

Применение диагностикума «Фемофлор-16» дает возможность получения информации не только о спектре присутствующих микроорганизмов, но и об их количественных характеристиках.

Метод ПЦР - РВ более информативен по сравнению с микроскопическим методом и имеет высокую диагностическую чувствительность и специфичность.

Этот диагностический метод исследования помогает врачу-клиницисту ускорить постановку диагноза и разработать индивидуальную схему лечения.

Литература

1. Адаскевич В.П. Инфекции, передаваемые половым путем / Адаскевич В.П. - М. : Мед.книга, 2006. - 425 с.

2. Анкирская А.С. Опыт микробиологической диагностики оппортунистических инфекций влагалища / А.С. Анкирская, В.В. Муравьева // Акушерство и гинекология. - 2006. - С. 60-63.

3. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / [ А.С. Быков, В.В. Воробьев, В.В. Зверев В.В. и др.]. - М. : ООО «Медицинское информационное агентство», 2-е изд., 2008. - 340 с.

4. Воробьев А.А. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология / Воробьев А.А. - М. : ООО «Медицинское информационное агентство», 2006. - 704 с.

5. Дмитриев Г.А. Диагностика инфекций, передаваемых половым путем / Г.А. Дмитриев, И.И. Глазко. - М. : «Издательство БИНОМ», 2007. - 320 с.

6. Кира Е.Ф. Бактериальныйвагиноз / Кира Е.Ф. - СПб., ООО «Нева-Люкс», 2001. - 364 с.

7. Липова Е.В. Урогенитальные инфекции, обусловленные условно-патогенной биотой у женщин репродуктивного возраст. Пособие для врачей / Е.В. Липова, М.Н. Болдырева, Д.Ю. Трофимов, Ю.Г. Витвицкая. - М., 2009. - 30 с.

8. Назарова Е.К. Микробиоценоз влагалища и его нарушения / Е.К. Назарова // Клиническая лабораторная диагностика. -2003. - №2. - С. 25-32.

9. Орлова, В.С. Нормоценоз влагалища у женщин репродуктивного возраста, механизмы его регуляции и дисбиотические варианты / В.С. Орлова, Ю.И.Набережнев // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2007. - Т.7, №4. - С. 36 - 39.

10. Прилепская В.Н. Заболевания шейки матки, влагалища и вульвы / Прилепская В.Н. - М. : МЕДпресс, 2003. - 203 с.

11. Beth C.Tohill. Vaginal flora morphotypic and assessment of bacterial vaginosis in women at risk for HIV infection / C.Tohill Beth, M. Heilig Charles, S. Klein Robert, Anne Rompalo // Infectious Diseasesin Obstetricsand Gynecology. - 2004. - № 12. - P. 121.

12. Bradshaw C.S. The association of Atopobiumvaginae and Gard-nerellavaginalis with bacterial vaginosis and recurrence after oral metronidazole therapy / C.S. Bradshaw, S.N. Tabrizi, C.K. Fairley [et.al] // J Infect Dis. - 2006. - V.194. - P.828 - 836.

13. Cauci S. Vaginal immunity in bacterial vaginosis / S.Cauci // Curr Infect Dis Rep. - 2004. - V.6. - P. 450-456.

14. Ferris M. PCR assay using primers specific for A. vagine detected this organism in specimens from women with bacterial vaginosis but not from women with normal vaginal flora / M. Ferris, А. Masztal, D. Martin // JournalofClinicalMicrobiology. - 2004. - V.42. - P. 136-148.

15. McDonald J.A. Premature rupture of membranes and bacterial vaginosis / J.A. McDonald, J.I. French, K. Seo // Am J ObstetGynecol. - 1993. - V.. 169. - P. 463-466.

16. Ness R.B. Douching in relation to bacterial vaginosis, lactobacilli, and facultative bacteria in the vagina / R.B. Ness, S.L. Hillies, H.E. Richter [et al.] // Obstet Gynecol. - 2002. - V. 100. - P. 765-772.

Реферат

Д1АГНОСТИКА УРОГЕН1ТАЛЬНИХ ПОРУШЕНЬ У Ж1НОК ОБУМОВЛЕНИХ УМОВНО-ПАТОГЕННИМИ М1КРООРГАН1ЗМАМИ З ВИКОРИСТАННЯМ МЕТОДУ ПЛР В РЕЖИМ1 РЕАЛЬНОГО ЧАСУ Шевченко О.П.,.Мацас О.Ю, Мулькiна О.1., Слободянюк О.М.

Ключовi слова: мiкробiоценоз пiхви, помiрно виражений i виражений дисбiоз, лактобацили, умовно-патогенж i патогенн1 анаеробнi мiкроорганiзми.

Проведено порiвняльний аналiз стану бiоценозу шхви у жiнок за допомогою методу ПЛР в реальному час з використанням тест-системи «Фемофлор-16» та методу мiкроскопil пофарбованих за Ро-мановським. Доведена перевага методу ПЛР.

Summary

REAL-TIME PCR DIAGNOSIS OF FEMALE UROGENITAL DISORDERS CAUSED BY OPPROTUNISTIC Shevchenko E.P., Matsas E.Yu., Mulkina E.I., Slobodyanuk O.N.

Key words: vaginal microbiocenosis, mild and moderate dysbiosis, lactobacilli, opportunistic and pathogenic anaerobic infections.

This research was aimed to carry out the comparative analysis of vaginal biocenosis by real-time polymerase chain relation, the application of "Femoflor-16" and the microscopic study of Romanovsky-stained specimens.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.