CC BY
7конф., посвященной 100-летию со дня рождения Е.Ц.Андр еевой-Галаниной. — 1998. — Т. 1. Вып.
33. — с. 93—95.
2. Еняков A.M. Метрологическое обеспечение ультразвукового медицинского оборудования. — М.:
ВНИИФТРИ. — 2006. — 160 с.
3. Прокопенко Л.В. Современные проблемы воздействия контактного ультразвука в медицине и других отраслях народного хозяйства // Вестн. АМН СССР.
— 1992. — №3. — С. 35—39.
Поступила 09.06.07
УДК 546.161:546.33:616.61
Л.Е. Громова, В.П. Пащенко, Н.А. Назаренко, Г.Н. Дегтева
ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДА ПЕРВИЧНЫХ ТКАНЕВЫХ КУЛЬТУР ДЛЯ ОЦЕНКИ БЕЗОПАСНОСТИ ФТОРИДА НАТРИЯ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ
Северный государственный медицинский университет, г. Архангельск
способ оценки токсичности фторида натрия, добавляемого к продуктам питания, проводят по особенностям роста культуры тканей почек (in vitro), где ингибирование роста клеточных колоний свыше 75 %, свидетельствует о выраженном токсическом действии фторида натрия, снижение роста от 63 до 74 % характеризует низкую степень, а ингибирование роста меньше 62 % говорит об очень низкой токсичности данного вещества.
Ключевые слова: микроэлемент фтор, культура ткани почек мыши.
L.E. Gromova, V.P. Pashenko, N .A. Nazarenko, G.N. Dyogteva. Justifying the use of primary tissue culture method for evaluation of sodium fluoride safety in nutrition products.
Toxicity of sodium fluoride added to nutrition products is assessed through peculiarities of kidney tissue culture growth in vitro — over 75% inhibition of cell clumps growth supports high toxic influence of sodium fluoride, the growth decrease from 63 % to 74 % signifies lower degree, the growth inhibition less than 62 % demonstrates very low toxicity of the chemical.
Key words: fluorine microelement, mouse kidney tissue culture.
аискуссnn
j
Анализ результатов исследований показывает, что многие вопросы, связанные с влиянием на человека разнообразных климатогео-графических и антропогенных физико-химических факторов, изучены еще недостаточно, и проблема адаптации, особенно в условиях Севера, еще далека от своего решения [1]. Была сделана попытка разработать и апробировать новые продукты питания (молоко), обогащенные необходимыми минеральными комплексами для северян и людей, работающих в экстремальных условиях жизнедеятельности Севера.
Одной из минеральных добавок был взят микроэлемент фтор (в виде фторида натрия). Мы исходили из следующих данных:
— подавляющее большинство населения северных регионов потребляет питьевую воду с низким содержанием фтора — 0,1—0,2 мг/л (при норме — 1,2 мг/л). Данное обстоятельство признается одной из основных причин массового распространения кариеса у жителей Севера и алиментарно-зависимых состояний [3];
— фтор оказывает бактерицидное действие в отношении микроорганизмов, появляющихся при кариесе зубов [10];
— фтор способствует повышению содержания секреторного иммуноглобулина (^А) в слюне [8];
— фтор влияет на архитектонику эритроцитов крови и скорость созревания эритроид-
ных клеток на фоне охлаждения и повышает адаптационные возможности организма [9];
— фтор совершенно необходим для нормального роста и развития организма. Его недостаток приводит к нарушению обменных процессов, анемии [2].
Цель исследования — определение токсической оценки применяемой на животных дозы фтора в 0,1 мг/кг [2], эквивалентной суточной потребности человека, путем использования метода первичных тканевых культур почек in vitro.
М а т е р и а л ы и м е т о д и к и. Методика культивирования клеток проводилась с использованием метода первичных тканевых культур почек мыши, согласно правилам работы с культурами, описанными и принятыми
Д. Полом (1963) [7].
Для эксперимента были взяты конвенциональные мыши-самцы весом 18 г. Культивирование фрагментов ткани почек осуществляли на перфорированной подложке из миллипо-ровых фильтров и полиамидной пленке методом множественных тканевых культур в пробирках [6]. На подложку из миллипоровых фильтров наносили по 45 микрофрагментов ткани, а на полиамидную — 68 микрофрагментов. Культивирование микрофрагментов ткани проводили в пробирках в 1 мл среды. Для культивирования была взята среда 199 с 15 % бычьей сывороткой и антибиотиками. В каждую пробирку на 1 мл среды вносили 0,025 мл раствора фторида натрия соответствующей концентрации.
Проведено четыре серии опытов с разными разведениями фторида натрия, в контрольную пробу вместо раствора фторида натрия добавляли адекватное количество дистиллированной воды. После завершения культивирования (через 9 дней) культуры окрашивали гематоксилин-эозином. Площадь зоны роста (подсчет растущих колоний) производили с помощью светооптического микроскопа при увеличении X 100; X 200; X 400.
Р е з у л ь т а т ы и о б с у ж д е-н и е. Анализ структуры клеток ткани почек показал, что наблюдался рост преимущественно эпителиоподобных клеток с некоторым присутствием фибробластоподобных клеток, которые образуют отдельные включения.
При культивировании на полиамидной пленке общее количество выросших колоний в контрольной пробе — 29 (из 68 возможных) (рис. 1. Контроль-норма). В первой опытной
пробе при внесении в среду фторида натрия в концентрации 0,1 % раствора число выросших колоний равнялось 3; при концентрации 0,05 % раствора — 17; при концентрации 0,033 % раствора — 25; при концентрации 0,017 % раствора — 22 колонии. На основании проведенных исследований было установлено, что растворы фторида натрия в концентрации 0,02 % и 0,0025 % вызывали ингиби-рование роста клеточных колоний соответственно на 95,6—75 % (рис. 2), что свидетельствует о выраженном токсическом действии фторида натрия. В дозах, равных 0,00165 и 0,00085 % растворов фторида натрия, инги-
Рис. 1. Культура ткани почек на 9-й день культивирования (контроль). Упорядоченная зона роста эпителиоподобных клеток (X 400)
Рис. 2. Деградация зон роста. Видны отдельные фибробластоподобные и эпителиоподобные клетки в зоне роста (X 400)
Рис. 3. Культура ткани почек на 9-й день культивирования. Наблюдается нарушение упорядоченности зоны роста эпителиоподобных клеток (X 200)
бирование роста было минимальным, составив
63,2 и 67,6 % (р ис. 3).
Используемая в опытах доза фторида натрия, равная 0,00012 % раствора в культуре, была в 8 раз меньше последнего разведения, что говорит об очень низкой токсичности исследуемого вещества.
В ы в о д ы. 1. Оценка токсичности фторида натрия в культуре ткани почек мыши in vitro является одним из возможных тестов для заключения с достаточной степенью точности оценить токсичность исследуемого вещества и определить целесообразность использования
микроэлемента фтора в продуктах питания. 2. Данное исследование может быть полезно для лечения и профилактики в практической медицине и для научных исследований.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Авцын А.П., Жаворонков A.A., Риш М.А. Микроэлементозы человека: этиология, классификация, органопатология. — М.: Медицина, 1991.
2. Габович Р.Д., Овруцкий Г.Д. Фтор в стоматологии и гигиене. — Казань:Татарское книжное изд-
во, 1969.
3. Зеновский В.П., Токуева Л.И., Кузьмина Л.Н., Вилова Т.В. // ВНИИ отчет о НИР № 02860027746. — М., 1986. — № 3. — С. 1—24.
4. Овруцкий Г.Д., Хамитов Х.С. Фтор и иммунобиологическая реактивность организма. — М., 1976.
5. Панченко В.Ф., Маев И.В., Гуревич К.Г. Клиническая биохимия микроэлементов. — М., 2004.
6. Пащенко В.П. Устройство для посадки на подложку микрофрагментов биологических тканей (патент
№ 1785530, 1991 г.).
7. Пол Д. Культура клеток и тканей. — М., 1963.
8. Скальный А.В., Кудрин А.В. Радиация, микроэлементы, антиоксиданты и иммунитет. — М.: Лир
Макет, 2000.
9. Теддер Ю.Р. Эколого-физиологическая значимость фтора в процессе адаптации организма к холоду: Дис. ... докт. мед. наук. — Архангельск, 1992.
10. Riep B.C., Bernimolin J.P., Barnett M.L. // J. Clin. Periodontal. — 1999. — Vol. 26, N 3. — P. 164—168.
Поступила 31.05.07
