CC BY
71
УДК 664.951.7:639.4
ОБОСНОВАНИЕ И РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОЛИЗАТОВ ИЗ НЕДОИСПОЛЬЗУЕМЫХ ТКАНЕЙ ТРЕПАНГА
А. Д. Перцева, Ю. М. Позднякова, Н. Н. Ковалев, Г. Н. Ким, М. Е. Гаркавец
JUSTIFICATION AND DEVELOPMENT OF TECHNOLOGY FOR OBTAINING HYDROLYSATES FROM UNUSED TISSUES OF SEA CUCUMBER
A. D. Pertseva, Yu. M. Pozdnyakova, N. N. Kovalev, G. N. Kim, M. E. Garkavets
Дальневосточный трепанг - один из наиболее ценных биоресурсов в Дальневосточном промысловом регионе. В настоящее время в пищевой промышленности используется только мускульный мешок трепанга. Неиспользуемые остатки, образующиеся при разделке сырья - венчики, с небольшими прирезями мышечной ткани поступают в отходы. Также неиспользуемой является мышечная ткань трепанга после выделения жирорастворимых компонентов с помощью органических растворителей. Целью настоящего исследования являлась разработка технологии ферментолизатов из недоиспользуемых тканей трепанга -венчиков и мышечной ткани - после спиртовой экстракции. Определено массовое количество венчиков, отделяемых при разделке, в зависимости от времени вылова трепанга. Установлены следующие рациональные параметры ферментативного гидролиза венчиков трепанга: соотношение сырье : вода - 1:3, температура реакционной смеси 480С, время гидролиза 2 ч, ферментные препараты протамекс и коллагеназа краба в концентрациях 1 и 4 ПЕ/г ткани соответственно. Проведен подбор условий ферментолиза мышечной ткани трепанга, оставшейся поле спиртовой экстракции. Установлены следующие рациональные параметры гидролиза ткани: рН от 7,8 до 8,2, температура 42 оС, соотношение сырье : вода - 1:50, ферментный препарат - коллагеназа краба. В ферментолизатах венчиков трепанга и коллагенового остатка после спиртовой экстракции определено содержание водорастворимого белка и коллагена. Показано, что содержание водорастворимого белка в ферментолизате мышечной ткани трепанга после спиртовой экстракции в 1,5 раза превышает содержание белка в ферментолизате свежемороженной мышечной ткани трепанга. Высокое содержание коллагена в водорастворимой форме в полученных ферментолизатах позволит использовать их при получении БАД и функциональных пищевых продуктов хондропротекторной направленности.
дальневосточный трепанг, коллаген, коллагеназа, ферментолиз, водорастворимый белок
Far Eastern sea cucumber is a one of the most valuable bioresources in the Far Eastern region. Currently, only muscular tissue of the sea cucumber is used in the food industry. Unused residues appearing from cutting of raw material - tentacles with small muscle tissue pass to waste. Muscle tissue of sea cucumber after separation of lipid-soluble components with organic solvents is also unused. The aim of this study is de-
velopment of technology of sea cucumber tissue fermentative hydrolysates of tentacles and muscle tissue after ethanol extraction. We determined mass quantity of tentacles, being separated during cutting, depending on the catching time of sea cucumber. The following rational parameters for enzymatic hydrolysis of sea cucumber tentacles were established: ration of raw material: water - 1: 3, the temperature of the reaction mixture-48 оС, hydrolysis time - 2 hours, enzyme preparations - protameks and crab collagenase in concentrations of 1 PU / g tissue and 4 PU/ g tissue, respectively. We carried out a selection of enzymatic hydrolysis conditions of sea cucumber muscle tissue remaining after ethanol extraction. Rational hydrolysis parameters of sea cucumber muscle tissue after ethanol extraction are: pH - from 7.8 to 8.2, temperature- 42 ° C. the ratio of raw materials: water 1:50, enzyme preparation - crabs collagenase. The content of water-soluble protein and sea cucumber tentacles collagen in hydrolysates and collagen residue after ethanol extraction was determined. It was shown that a content of water-soluble protein in the hydrolysates of sea cucumber muscle tissue after ethanol extraction is 1.5 times higher than content of protein in the hydrolysates of freshly frozen sea cucumber muscle tissue. A high content of collagen in a water-soluble form in obtained enzymatic hydrolysates will allow using them in preparation of chondroprotective nutritional supplement and functional foods.
far Eastern sea cucumber, collagen, collagenase, enzymatic hydrolysis, water-soluble protein
ВВЕДЕНИЕ
Комплексное использование водных биологических ресурсов является стратегической задачей на современном этапе развития рыбной промышленности. Дальневосточный трепанг - один из наиболее ценных акваресурсов в Дальневосточном промысловом регионе. В настоящее время в пищевой промышленности используется только мускульный мешок трепанга. Неиспользуемые остатки, образующиеся при разделке сырья - венчики, с небольшими прирезями мышечной ткани поступают в отходы. Установлено, что для кукумарии их количество составляет до 7% от массы тела [1]. По трепангу таких данных в литературе не найдено. Поскольку ткань венчиков состоит преимущественно из коллагена и содержит такие же биологически активные вещества (БАВ), как и мускульный мешок [2], то она может являться потенциальным сырьем для промпереработки. Один из способов переработки трепанга - спиртовая экстракция БАВ для выделения жирорастворимых компонентов мышечной ткани трепанга - каротиноидов, ПНЖК, фосфолипидов. Побочным продуктом такого процесса является белковый осадок, состоящий преимущественно из коллагена. Представляется, что использование вышеназванных видов сырья (венчики, коллагеновый осадок) позволит расширить ассортимент выпускаемой продукции из трепанга и повысит экономическую эффективность технологии его переработки.
Голотурии содержат уникальные по свойствам белково-углеводные комплексы, перевариваемость которых, а следовательно, и их усвояемость в организме человека, весьма затруднены [3-5]. Использование биомодификации сырья с помощью ферментативного гидролиза позволяет увеличить степень биодоступности продукта при одновременном сохранении состава биологически активных веществ [6-10].
Изучению вопроса ферментолиза тканей голотурий посвящен ряд исследований. Так, определены рациональные параметры биомодификации венчиков и щупалец кукумарии с использованием ферментов протамекса и нейтразы: соотношение сырье:вода - 1:1, рН - 6,5, концентрация фермента 1,66 ПЕ/г сырья для нейтразы и 2,02 ПЕ/г сырья для протамекса, температура среды 450С для нейтразы и 55 С для протамекса в течение 4-5 ч [2]. Исследование состава полученного гидролизата выявило присутствие в нем практически всех незаменимых аминокислот.
Анализ патентной и научной литературы показал, что, несмотря на имеющиеся разработки по использованию тканей голотурий после спиртовой экстракции, их применение ограничено производством кормовой продукции [11] либо выделением БАВ, но технологический процесс при этом отличается сложностью и многостадийностью [12]. Исследований, посвященных составу и технологии переработки венчиков трепанга, ранее не проводилось.
Однако венчики и ткани трепанга после спиртовой экстракции могут быть использованы для выделения биологически активных компонентов, разработки технологии БАД к пище и функциональных пищевых продуктов.
Целью настоящего исследования являлась разработка технологии ферментолизатов из недоиспользуемых тканей трепанга Apostichopus japonicus -венчиков и мышечной ткани после спиртовой экстракции.
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Объектом исследования служил дальневосточный трепанг, выловленный в бух. Северная (зал. Славянский) Японского моря. Для проведения ферментолиза использовали венчики трепанга и мышечную ткань после спиртовой экстракции (95 %-ный этиловый спирт, V:V= 1:5).
Для проведения ферментативного гидролиза использовали коммерческие ферментные препараты с известной удельной активностью: протамекс - 356, коллагеназу гепатопанкреаса краба - 300, мегатерин - 170 Е/г (Россия).
Протеолитическую активность ферментных препаратов определяли по методу Каверзневой [13].
Определение содержания коллагена проводили по Замараевой [14].
О степени гидролиза судили по содержанию водорастворимого белка, который определяли по методу Лоури [15].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Так как в литературе не обнаружено данных по массовому количеству венчиков трепанга, которые обычно поступают в отходы, в настоящей работе определяли их массовое содержание в разные сезоны вылова. По результатам исследования (табл. 1) установлено, что в среднем количество отходов - венчиков составляет 9,5 %. Максимально может достигать до 12,3 % от общей массы тела трепанга. Это количество позволяет использовать данный вид отходов как сырье для получения ферментативных гидролизатов.
Таблица 1. Количество венчиков трепанга, % от общей массы тела Table 1. Number of sea cucumber tentacles, % of total body mass
Сезон вылова Апрель Май Июнь Июль Август Сентябрь Октябрь
Количество венчиков трепанга, % 12,3 9,0 8,3 8,7 7 10,1 11,2
Основными параметрами ферментативного гидролиза, определяющими его эффективность, являются подбор фермента, его количества по отношению к сырью, рН реакционной смеси, гидромодуль, температура и время гидролиза.
Выбор ферментных препаратов основывался на работах, проводимых ранее на мышечной ткани трепанга, согласно которым для коллагенсодержащего сырья целесообразно применение следующих ферментных препаратов: протамекс, коллагеназа краба, мегатерин. Оптимум действия этих ферментных препаратов различается, но рациональным считается проведение гидролиза при 8,0 рН [16].
Первоначально ферментолиз проводили при температуре 37 0С с использованием различных ферментных препаратов с концентрацией 2 ПЕ/г ткани при разных гидромодулях (рис. 1).
Рис. 1. Динамика прироста содержания водорастворимого белка в экстракте при ферментолизе венчиков трепанга с различным гидромодулем Fig. 1. Growth dynamics of water-soluble protein content in the extract during enzymatic hydrolysis of the sea cucumber tentacles with different hydromodule
Результаты проведенного исследования показали, что при гидролизе венчиков наиболее эффективными являются ферменты гепатопанкреаса краба и протамекс, которые были выбраны для дальнейших исследований. При этом наибольшая концентрация растворимого белка в реакционной смеси наблюдалась при соотношении сырье:вода 1:3. Данное соотношение было использовано при подборе других параметров.
Важным фактором, влияющим на эффективность процесса гидролиза, является температура реакционной смеси. Исходя из температурных оптимумов используемых ферментных препаратов [16] ферментолиз проводили при температурах 42 и 480С. В качестве ферментного препарата использовали коллагеназу и протамекс в концентрации 2 ПЕ/г ткани.
Было установлено (рис. 2), что ферментолиз проходил эффективнее при 480С, так как в полученных при такой температуре гидролизатах содержится в 1,2-1,7 раз больше водорастворимого белка, чем при температуре 420С. Для достижения максимального содержания водорастворимого белка в гидролизатах достаточно 2 ч.
42 °С
0 12 3 4 5
Время, час
48°С
0 12 3 4 5
> протамекс — коллагеназа
Рис. 2. Динамика накопления водорастворимого белка при ферментолизе венчиков трепанга при различной температуре Fig. 2. Dynamics of accumulation of water-soluble protein during enzymatic hydrolysis of sea cucumber tentacles at different temperatures
Подбор количества вносимых в реакционную смесь ферментных препаратов показал, что рациональными оказались соотношения 1 ПЕ/г для протамекса и 4 ПЕ/г для коллагеназы (рис. 3).
Таким образом, по результатам исследований, установлены следующие рациональные параметры проведения ферментативного гидролиза венчиков трепанга: соотношение сырье:вода - 1:3, температура реакционной смеси 480С, время гидролиза 2 ч, ферментные препараты протамекс и коллагеназа краба в концентрациях 1 и 4 ПЕ/г ткани соответственно.
о
s
S
а
0 m i- ■
и л а си S
1
я I
X а си ti о и
12 10 8 6 4 2
— ■•— протамекс 1 ПЕ/г
— протамекс 4 ПЕ/г —•—коллагеназа 1 ПЕ/г —■—коллагеназа 4 ПЕ/г
Время гидролиза, ч
0
0
Рис. 3. Зависимость содержания водорастворимого белка в ферментолизатах венчиков трепанга от концентрации фермента Fig. 3. Dependence of water-soluble protein content in enzymatic hydrolysates of sea cucumber tentacles on enzyme concentration
Следующим этапом работы был подбор условий ферментолиза мышечной ткани трепанга, оставшейся после спиртовой экстракции.
Для приготовления спиртового экстракта использовали мышечную ткань трепанга и 95%-ный этиловый спирт в соотношении 1:20. Такие параметры применяются при выделении жирорастворимых компонентов - каротиноидов, ПНЖК, фосфолипидов [17, 18]. Экстракцию проводили в течение 3 сут при комнатной температуре. Полученный экстракт отфильтровывали, ткань измельчали и подвергали ферментолизу.
Так как основную массу ткани после экстрагирования составляет коллаген, то подбор параметров (рН и температура) ферментного гидролиза основывался на известных характеристиках процесса, установленного для свежезамороженной мышечной ткани трепанга [2, 16, 19], согласно которым оптимальными ферментными препаратами следует считать протамекс и коллагеназу краба. рН оптимумы для выбранных ферментов находятся в щелочной области от 7,8 до 8,2 [20, 21]. Рациональная температура проведения ферментативного гидролиза тканей трепанга составляет 420С [16].
Необходимость подбора таких параметров, как гидромодуль и количество ферментного препарата, определялась различным содержанием сухих веществ в ткани после спиртовой экстракции и в свежемороженном трепанге.
На рис. 4 показана динамика ферментолиза мышечной ткани трепанга после спиртовой экстракции под действием протамекса и коллагеназы краба при соотношениях сырье:вода 1:20 и 1:50.
Результаты проведенного исследования показали, что накопление водорастворимого белка происходило быстрее при соотношении сырье : вода -1:50 с применением обоих ферментов. Однако следует отметить, что более эффективно процесс гидролиза проходил с использованием коллагеназы (рис. 4).
Рис. 4. Динамика ферментолиза мышечной ткани после спиртовой экстракции
в зависимости от гидромодуля и ферментного препарата Fig. 4. Dynamics of enzymatic hydrolysis of muscle tissue after alcohol extraction depending on hydromodule and enzyme preparation
Определение рациональной концентрации коллагеназы краба (ферменто-лиз) проводили при условиях, обоснованных выше: соотношение ткань :вода -1:50, температура реакционной смеси 420С, рН 8,0.
Согласно полученным данным (рис. 5) наибольшее количество водорастворимого белка образуется при использовании коллагеназы в концентрации 3 ПЕ/г сырья.
Рис. 5. Зависимость эффективности ферментолиза мышечной ткани трепанга от концентрации ферментного препарата Fig. 5. Dependence of efficiency of enzymatic hydrolysis of sea cucumber muscle tissue
on enzyme concentration
В ферментолизатах венчиков трепанга и коллагенового остатка после спиртовой экстракции определяли содержание водорастворимого белка и коллагена (табл. 2).
Результаты исследования показали высокое содержание водорастворимого белка в ферментолизате мышечной ткани трепанга после спиртовой экстракции, в 1,5 раза превышающее их содержание в ферментолизате свежей/свежемороженной мышечной ткани трепанга [16].
Таблица 2. Содержание белка/коллагена в ферментолизатах трепанга, %
Table 2. Protein/collagen content in enzymatic hydrolysates of sea cucumber, %
Ферментолизат Белок Коллаген
Венчики трепанга 28 9,9
Мышечная ткань после спиртовой экстракции 45,6 11,8
Предположительно это может быть связано с активацией ферментов этиловым спиртом, содержащимся в мышечной ткани трепанга после спиртовой экстракции, что согласуется с данными об активирующем эффекте этилового спирта в количестве 10-15% на объем реакционной смеси на протеолитические ферменты [19]. Высокое содержание коллагена в водорастворимой форме в полученных ферментолизатах позволяет использовать их при получении БАД и функциональных пищевых продуктов хондропротекторной направленности.
ВЫВОДЫ
Таким образом, в результате проведенных исследований выявлены рациональные параметры проведения ферментативного гидролиза венчиков трепанга и мышечной ткани, оставшейся после спиртовой экстракции.
Ферментолиз венчиков трепанга следует проводить при следующих условиях: соотношение сырье:вода - 1:3, температура реакционной смеси 480С, время гидролиза 2 ч, ферментные препараты протамекс и коллагеназа краба в концентрациях 1 и 4 ПЕ/г ткани соответственно.
Рациональные условия проведения ферментативного гидролиза тканей трепанга после спиртовой экстракции следующие: соотношение ткань:вода - 1:50, ферментный препарат - коллагеназа краба в концентрации 3 ПЕ/г ткани, температура реакционной смеси 420С, время гидролиза 3 ч.
Предложенные технологические решения позволяют обосновать направление рационального использования дальневосточного трепанга с получением биологически активной продукции.
Полученные ферментолизаты могут использоваться в производстве БАД и функциональных пищевых продуктов за счет содержания водорастворимого низкомолекулярного коллагена.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Тимчишина, Г. Н. Обоснование технологий пищевых добавок из кукумарии (cucumaria japonica) на основе комплексного использования сырья: дис. ... канд. техн. наук: 05.18.04 / Тимчишина Галина Николаевна; ТИНРО-центр. - Владивосток, 1999. - 199 с.
2. Карлина, А. Е. Безотходная технология пищевых продуктов и биологически активных добавок из кукумарий дальневосточных морей: дис. ... канд. техн. наук: 05.18.07 / Карлина Анастасия Евгеньевна; ТИНРО-Центр. -Владивосток, 2009. - 238 с.
3. Антипова, Л. В. Полифункциональные биопродукты из вторичного мясного коллагенсодержащего сырья / Л. В. Антипова, И. А. Глотова, А. Н. Кузнецов // Мясная индустрия. - 2001. - № 6. - С. 23-26.
4. Birenheide R., Tamori M., Motokawa T., Ohtani M., Iwakoshi E., Muneoka Y., Fujita T., Minakata H., Nomoto K. Peptides controlling stifiiess of connective tissue in sea cucumbers. // Biol. Bull. - 1998.-V3.-N.9.-P. 253-256.
5. Watanabe K., Suzuki Y. Protein termostabilization by proline substitutions // J Molecular Catalysis B: Enzymatic. - 1998. - V. 4. - P. 167-180.
6. Пивненко, Т. Н. Использование протеолитических комплексных препаратов из рыбного сырья для производства питательных сред / Т. Н. Пивненко [и др.] // Изв. ТИНРО. -1992. - Т. 114.- С. 140-145.
7. Пивненко, Т. Н. Ферментативные способы приготовления белковых гидролизатов с использованием протеолитических препаратов различной специфичности / Т. Н. Пивненко [и др.] // Вопр. питания. - 1997. - № 5. - С. 34-38.
8. Пивненко, Т. Н. Протеолитические ферментные препараты при биоконверсии некондиционного белкового сырья / Т. Н. Пивненко // Известия ТИНРО. - 1995. - Т. 118. - С. 82-87.
9. Позднякова, Ю. М. Влияние ферментативного гидролиза на нуклеотидный состав молок различных видов рыб / Ю. М. Позднякова, Т. Н. Пивненко, Л. М. Эпштейн // Изв. ТИНРО. - 1999.- Т. 125.- С. 147-151.
10. Неклюдов, А. Д. Источники резервного белка для получения пищевых гидролизатов из животного сырья / А. Д. Неклюдов // Хранение и переработка сельхозсырья. - 1998. - № 3. - С. 24-25.
11. Способ получения комплекса биологически активных продуктов из голотурий: пат. 2112527 РФ: МПК А61Ю5/56 / Т. К. Лебская, В. Ф. Толмачева, Л. П. Ильина; заявитель и патентообладатель Полярный научно-исследовательский институт морского рыбного хозяйства и океанографии им. Н. М. Книповича; заявл. 06.07.1995; опубл. 10.06.1998.
12. Средство, обладающее антикоагулянтным действием, и способ его получения: пат. 2302250 РФ: МПК А 61 К 35/56, А 61 Р 7/02 / А. М. Попов, А. А. Артюков, И. А. Ли, В. П. Глазунов, Н. Н. Кофанова, Э. П. Козловская; заявитель и патентообладатель Тихоокеан. ин-т биоорган. химии ДВО РАН. -№ 2006104772/15; заявл.15.02.06; опубл. 10.07.07, бюл. № 19. - 12 c.
13. Каверзнева, Е. Д. Стандартный метод определения протеолитической активности для комплексных препаратов протеаз / Е. Д. Каверзнева // Прикладная биохимия и микробиология. - 1971. - Т. 7. - № 2. - С. 225-228.
14. Замараева, Т. В. Метод определения содержания коллагеновых белков по оксипролину / Т. В. Замараева // Современные методы в биохимии. - Москва: Медицина, 1977. - C. 262-264.
15. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. V. 193. № 1. P. 265-275.
16. Позднякова, Ю. М. Биоконверсия мышечной ткани трепанга методом ультразвуковой обработки и ферментативного гидролиза / Ю. М. Позднякова [и др.] // Вестник КрасГАУ. - 2015. - № 4. - С. 54-59.
17. Способ обогащения рыбного жира биологически активными веществами из беспозвоночных гидробионтов: пат. 2162647 РФ: МПК A23L1/325 / Т. К. Лебская, Г. М. Дубницкая, Г. Ф. Байдалова; заявитель и патентообладатель Полярный научно-исследовательский институт морского рыбного хозяйства и океанографии им. Н. М. Книповича; заявл. 04.02.1999; опубл. 10.02.2001.
18. Водка особая: пат. 2562100 РФ: МПК C12G3/06 / Г. Н. Ким, Н. Н. Ковалев, Ю. М. Позднякова, Т. Н. Пивненко, Р. В. Есипенко, Е. В. Михеев; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Дальневосточный государственный технический рыбохозяйственный университет"; заявл. 26.08.2014; опубл. 10.09.2015.
19. Давидович, В. В. Биотехнология биологически активной добавки к пище «моллюскам»: дис. ... канд. техн. наук: 05.18.07 / Давидович Валентина Владимировна; ТИНРО-Центр. - Владивосток, 2005. - 166 с.
20. Сахаров, И. Ю. Субстратная специфичность коллагенолитических протеаз из гепатопанкреаса камчатского краба / И. Ю. Сахаров, Ф. Е. Литвин // Биохимия. - 1992. - Т. 57. - № 1. - С. 61-67.
21. Dumay J., Allery M., Donnay-Moreno C., Barnathan G., Jaouen P., Carbonneau E. Optimization of hydrolysis of sardine (Sardina pilchardus) heads with Protamex: enhancement of lipid and phospholipid extraction // Journal of the Science of Food and Agriculture July 2009, Volume 89, Issue 9, Pages 1599 - 1606.
REFERENCES
1. Timchishina G. N. Obosnovanie tehnologij pishhevyh dobavok iz kukumarii (Cucumaria japonica) na osnove kompleksnogo ispol'zovanija syrja. Dis. kand. tekhn. nauk. [Substantiation of technology of food supplements from sea cucumber (Cucumaria japonica) based on the integrated use of raw materials. Dis. kand. tech. sci.]. Vladivostok, 1999, 199 p.
2. Karlina A. E. Bezothodnaja tehnologija pishhevyh produktov i biologicheski aktivnyh dobavok iz kukumarij dal'nevostochnyh morej. Dis. kand. tekhn. nauk. [Waste-free technology of food products and dietary supplements of the Far Eastern sea cucumber. Dis. kand. tech. sci.]. Vladivostok, 2009, 238 p.
3. Antipova L. V., Glotova I. A., Kuznecov A. N. Polifunkcional'nye bioprodukty iz vtorichnogo mjasnogo kollagensoderzhashhego syr'ja [Multifunctional products from secondary raw beef collagen]. Mjasnaja industrija, 2001, no. 6, pp. 23-26.
4. Birenheide R., Tamori M., Motokawa T., Ohtani M., Iwakoshi E., Muneoka Y., Fujita T., Minakata H., Nomoto K. Peptides controlling stifiiess of connective tissue in sea cucumbers. Biol. Bull. 1998, vol. 3, no. 9, pp. 253-256.
5. Watanabe K., Suzuki Y. Protein termostabilization by proline substitutions. J Molecular Catalysis B: Enzymatic. 1998, vol. 4, pp. 167-180.
6. Pivnenko T. N., Zhdanjuk V. M., Jepshtejn L. M., Sultanov 3. 3., Kostenko L. S., Smirnova E. A. Ispol'zovanie proteoliticheskih kompleksnyh preparatov iz rybnogo syr'ja dlja proizvodstva pitatel'nyh sred [The use of proteolytic complex preparations of
fish raw material for the production of culture media]. Izv. TINRO, 1992, vol. 114, pp. 140-145.
7. Pivnenko T. N., Jepshtejn L. M., Pozdnjakova Ju. M., Davidovich V. V. Fermentativnye sposoby prigotovlenija belkovyh gidrolizatov s ispol'zovaniem proteoliticheskih preparatov razlichnoj specifichnosti [Enzymatic methods for preparing protein hydrolysates using proteolytic preparations of various specificity]. Vopr. pitanija, 1997, no. 5, pp. 34-38.
8. Pivnenko T. N. Proteoliticheskie fermentnye preparaty pri biokonversii nekondicionnogo belkovogo syr'ja [Proteolytic enzyme preparations during bioconversion of substandard raw protein]. Izv. TINRO, 1995, vol. 118, pp. 82-87.
9. Pozdnjakova Ju. M., Pivnenko T. N., Jepshtejn L. M. Vlijanie fermentativnogo gidroliza na nukleotidnyj sostav molok razlichnyh vidov ryb [Influence of enzymatic hydrolysis on the nucleotide composition of milt of different fish species]. Izv. TINRO, 1999, vol. 125, pp. 147-151.
10. Nekljudov A. D., Ivankin A. N., Baer H. A., Berdutina A. B., Dubina V. I. Istochniki rezervnogo belka dlja poluchenija pishhevyh gidrolizatov iz zhivotnogo syr'ja [Sources of reserve protein hydrolysates for food of animal raw materials]. Hranenie ipererabotka sel'hozsyr'ja, 1998, no. 3, pp. 24-25.
11. Patent RF 2112527. Sposob poluchenija kompleksa biologicheski aktivnyh produktov iz goloturij [A method for producing a complex of biologically active products of sea cucumbers]. Lebskaja T. K., Tolmacheva V. F., Il'ina L. P. Zajavl. 06.07.1995. Opubl. 10.06.1998.
12. Patent RF 2302250. Sredstvo, obladajushhee antikoaguljantnym dejstviem, i sposob ego poluchenija [Agent having anticoagulant activity, and a method of its producing]. Popov A. M., Artjukov A. A., Li I. A., Glazunov V. P., Kofanova N. N., Kozlovskaja Je. P. Zajavl. 15.02.2006. Opubl. 10.07.2007.
13. Kaverzneva E. D. Standartnyj metod opredelenija proteoliticheskoj aktivnosti dlja kompleksnyh preparatov proteaz [Standard method for determining proteolytic activity of protease complex preparations]. Prikladnaja biohimija i mikrobiologija, 1971, vol. 7, no. 2, pp. 225-228.
14. Zamaraeva T. V. Metod opredelenija soderzhanija kollagenovyh belkov po oksiprolinu [Method for determination of collagen proteins by hydroxyproline]. Sovremennye metody v biohimii, Moscow, Medicina, 1977, pp. 262-264.
15. Lowry O. H., Rosebrough N. J., Farr A. L., Randall R. J. Protein measurement with Folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 1951, vol. 193, no. 1, pp. 265-275.
16. Pozdnjakova Ju. M., Kim G. N., Kovalev N. N., Perceva A. D. Biokonversija myshechnoj tkani trepanga metodom ul'trazvukovoj obrabotki i fermentativnogo gidroliza [Bioconversion of trepang muscle tissue by ultrasonic treatment and enzymatic hydrolysis method]. VestnikKrasGAU, 2015, no. 4, pp. 54-59.
17. Patent RF 2162647. Sposob obogashhenija rybnogo zhira biologicheski aktivnymi veshhestvami iz bespozvonochnyh gidrobiontov [The process of enrichment of fish oil with biologically active substances of aquatic invertebrates]. Lebskaja T. K., Dubnickaja G. M., Bajdalova G. F. Zajavl. 04.02.1999. Opubl. 10.02.2001.
18. Patent RF 2562100. Vodka osobaja [Special vodka]. Kim G. N., Kovalev N. N., Pozdnjakova Ju. M., Pivnenko T. N., Esipenko R. V., Miheev E. V. Zajavl. 26.08.2014. Opubl. 10.09.2015.
19. Davidovich V. V. Biotehnologija biologicheski aktivnoj dobavki k pishhe "Molljuskam". Dis. kand. tekhn. nauk. [Biotechnology of dietary supplements "Mollyuskam". Dis. kand. tech. sci.]. Vladivostok, 2005, 166 p.
20. Saharov I. Ju., Litvin F. E. Substratnaja specifichnost' kollagenoliticheskih proteaz iz gepatopankreasa kamchatskogo kraba [Substrate specificity of collagenolytic proteases from hepatopancreas of king crab]. Biohimija, 1992, vol. 57, no. 1, pp. 61-67.
21. Dumay J., Allery M., Donnay-Moreno C., Barnathan G., Jaouen P., Carbonneau E. Optimization of hydrolysis of sardine (Sardina pilchardus) heads with Protamex: enhancement of lipid and phospholipid extraction. Journal of the Science of Food and Agriculture July. 2009, vol. 89, iss. 9, pp. 1599-1606.
ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ
Перцева Анна Дмитриевна - Дальневосточный государственный технический рыбохозяйственный университет, г. Владивосток; научный сотрудник НИЦ «Морские биотехнологии»; Е-mail: anyuta_50@mail.ru
Pertseva Anna Dmitrievna - Far Eastern state technical fishery university, Vladivostok; researcher of SIC «Marine biotechnology»; Е-mail: anyuta_50@mail.ru
Позднякова Юлия Михайловна - Дальневосточный государственный технический рыбохозяйственный университет, г. Владивосток; кандидат технических наук; директор НИЦ «Морские биотехнологии»; Е-mail: pozdnyakova.julia@yandex.ru
Pozdnyakova Yuliya Mihajlovna - Far Eastern state technical fishery university, Vladivostok;PhD; director of SIC «Marine biotechnology»; Е-mail: pozdnyakova.julia@yandex.ru
Ковалев Николай Николаевич - Дальневосточный государственный технический рыбохозяйственный университет, г. Владивосток; доктор биологических наук; профессор кафедры «Пищевая биотехнология»; Е-mail: kovalevnn61@yandex.ru
Kovalev Nikolaj Nikolaevich - Far Eastern state technical fishery university, Vladivostok; Doctor of Biological Sciences; professor of the department of Food biotechnology; Е-mail: kovalevnn61@yandex.ru
Ким Георгий Николаевич - Дальневосточный государственный технический рыбохозяйственный университет, г. Владивосток; доктор технических наук, профессор, ректор; Е-mail: festfu@mail.ru
Kim Georgij Nikolaevich - Far Eastern state technical fishery university, Vladivostok; Doctor of Technical Sciences, professor; rector; Е-mail: festfu@mail.ru
Гаркавец Маргарита Евгеньевна - Дальневосточный государственный технический рыбохозяйственный университет, г. Владивосток; начальник центра по индустриальному рыбоводству; Е-mail: g.ritochka@mail.ru
Garkavets Margarita Evgenjevna - Far Eastern state technical fishery university, Vladivostok; Head of the center for industrial fish farming; Е-mail: g.ritochka@mail.ru
