CC BY
20
Таблица 1
Значения переменных в выражении
Давность пятна, недель В0 В 400 В410 В 420
8 22,95 -1б,52 -1,40 1,б9
12 24,90 -4,98 -29,40 5,92
1б 6,54 15,7б -35,76 -3,76
20 3,83 -22,15 1,бб 10,б4
24 -18,52 33,12 -78,13 -15,94
При получении значения Р>0,95 утверждают об образовании пятна кровью живого лица, а при Р<0,95 утверждают об образовании его кровью трупа.
Расчет может быть произведен в программе обработки электронных таблиц Microsoft Excel 2007 или с помощью программы «DOA 1.0» ( Рис. 3, Рис. 4).
Заключение эксперта о возможности образования пятна кровью живого лица или трупа формируется следующим образом: «Исследованное сухое пятно на текстильном материале с вероятностью более 95% образовано кровью живого лица» или «Исследованное сухое пятно на текстильном материале с вероятностью более 95% образовано кровью трупа».
Пример: Судебно-медицинское исследование сухого пятна крови давностью 7 недель.
При проведении колориметрического исследования вытяжки из сухого пятна крови давностью 7 недель установлена оптическая плотность на длине волны 400 нм - 0,513, 410 нм - 0,618, 420 нм - 0,710. Выбраны значения коэффициентов: В0 - при давности пятна крови 0-8 недель равный 22,9 В400 - при давности пятна крови 0-8 недель равный -16,5 В410 - при давности пятна крови 0-8 недель равный -1,4; В420 - при давности пятна крови 0-8 недель равный 1,7. Производим расчет вероятности образования пятна крови от живого лица:
1
P = -
1 + eX e
1б,5х((0,513-0,51)х100) 1,4х((0,618-0,62)хЮ0) -1,7х((0,710-0,70)хЮ0)
1
- = 1
1 , -22,9 16
1 + е х е
Получено значение Р=1, что позволяет утверждать об образовании исследованного пятна кровью живого лица.
Предложенный метод имеет ряд ограничений, обуславливающих получение достоверных результатов:
1. Предмет-носитель с исследуемым пятном крови должен представлять хлопчатобумажную ткань либо три-
Рис. 3. Основное диалоговое окно программы «DOA 1.0»
Помощь
Из предмета-носителя с сухим пятном крови вырезается Фрагмент квадратной Формы с длинами сторон 1x1 см и взвешивается на аналитических весах в сравнении с аналогичным чистым Фрагментом того же материала (объект сравнения). По разнице между весом вырезанных Фрагментов высчигывается вес сухой крови. Следует добиться, чтобы вес сухой крови в объекте исследования составлял 20 мг. В последующем вырезанные Фрагменты предмета-носителя и объекта сравнения помещаются в пробирки под номером, соответствующим номеру экспертизы, и заливаются дистиллированной воды каждый. Для контроля в отдельную пробирку помещается такое же количество дистиллированной воды. Экспозиция составляет 18-часов в условиях комнатной температуры. Затем еле десятикратного интенсивного встряхивания, пробирки с вьггяжками и контролем центрифугируются в течение 5 минут при 1500 об/мин. Из поверхностных слоев надосадочной жидкости стерильным одноразовым медицинским шприцем аспирируется жидкость в количестве 1,0 мл и помещается в для изучения ее оптической плотности кювету Фотоколориметра. Измерение оптической псгтности осуществляется на длинах волн 400 нм, 410 нм, 420 нм с помощью Фотоколориметра КФК-3 и двух стандартных заводских кварцевых !Т 1,040, толщина слоя которых 1,0 мм.
Длинф. волн 400 hi
10.504 410 hi
|o,eii
420 hi
10,697
I "DOA" ver 1 0
Расчет вероятности образования
трупа колориметрическим способом
Авторы программы: Судебно-медицинский эксперт БУ 3 УР "Бюро судебно-медицинской экспертизы" МЗУР Т.В.Найденова Доцент кафедры судебной медицины ГБОУ ВПО "Ижевская государственная медицинская академия" Минздрава России д.м.н. А.Ю. Вавилов
Замечания v
Рис. 4. Дополнительные диалоговые окна программы «DOA 1.0»
котаж, шерстяную или джинсовую ткань в случае установления давности пятна крови, и хлопчатобумажную ткань при диагностике прижизненности кровотечения, которые позволяют добиться веса сухого остатка 20 мг.
2. Расчет давности образования пятна крови возможен только в том случае, когда достоверно известно (установлено следственным путем), что давность сухого пятна находится в интервале от 16-и до 40 недель, а для определения вероятности происхождения крови от живого лица или трупа в пределах от 8-и до 24-х недель
2. Предмет-носитель с исследуемым пятном должен храниться в условиях комнатной температуры (+18-22°С). Температура внешней среды ниже или выше указанных значений не позволяет достоверно высказаться в отношении решаемых вопросов.
Литература:
1. Найденова Т.В. Установление давности следов крови на вещественных доказательствах фотоколориметрическим методом: дисс... канд. мед. наук. — М., 2013. — 206 с.
2. Найденова Т.В., Вавилов А.Ю. Установление давности следов крови на вещественных доказательствах фотоколориметрическим методом. — Germany, Saarbrucken: LAMBERTAcademic Publishing, 2013. — 180 с.
3. Найденова Т.В., Вавилов А.Ю. Способ определения вероятности образования пятна крови от живого лица //Патент на изобретение № 2519187. Приоритет от 05.02.2013. Зарегистрирован 05.02.2013. Опубликовано 10.06.2014. Бюллетень № 16.
4. Найденова Т.В., Вавилов А.Ю., Лесникова О.А., Коротун В.Н. Способ определения давности пятна крови //Патент на изобретение № 2519183. Приоритет от 26.03.2013. Зарегистрирован 26.03.2013. Опубликовано 10.06.2014. Бюллетень № 16.
© Д.С. Сопин, 2016
УДК 340.67. 615.917: 543.42.061
Д.С. Сопин
ОБНАРУЖЕНИЕ АМИНОПИРАЛИДА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБРАЗЦАХ
Северо-Казахстанский филиал РГКП «Центр Судебной медицины Министерства Юстиции» Республики Казахстан (директор - М.А. Картов) В статье рассматривается метод изолирования аминопиралида и его идентификация. Ключевые слова: аминопиралид, экстракция, идентификация, ТСХ, УФ-СФМ.
AMINOPYRALID DETECTION IN BIOLOGICAL SAMPLES D.S. Sopin
In the article the method of isolation and identification of aminopyralid. Key words: aminopyralid, extraction, identification, TLC, UV-spectroscopy.
Аминопиралид (синонимы: 4-амино-3,6-дихлорпи-ридино-2-карбоновая кислота, XDE-750, XR-750, DE-750): порошок белого цвета, без запаха; молекулярная масса -207, 01416 г/моль; температура плавления - 163,5 С, (163,5165,2 С, разлагается в точке плавления [2]); растворимость в: воде (при рН 7)- 205 г/л, метаноле - 55,2 г/л, ацетоне -29,2 г/л, этилацетате - 4 г/л, 1,2-дихлорэтане - 0,189 г/л, ксилоле - 0,043 г/л, гептане - 0,010 г/л.; коэффициент перераспределения октанол-вода (при 19 °С): log Kow = -1.75 (pH 5); -2.87 (pH 7); -2.96 (pH 9); pKa = 2,56 (при 20С). [1]
В доступной литературе отсутствует информация о токсичности препарата для человека. Аминопиралид относится к веществам малоопасным по острой оральной, дермальной токсичности (LD50 для крысы - более 5000 мг/кг) и ингаляционной токсичности (LC для крысы более 5500 мг/куб. дм) [1].
Цель работы: Данная работа посвящена разработке методики качественного обнаружения аминопиралида в биологических образцах.
Экспериментальная часть.
Оборудование, реактивы, вспомогательные материалы. Спектрофотометр «Specord 205»; хроматографические пластинки «Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ»; система для твердофазной экстракции с вакуумным коллектором Vac Elut 12 «Agilent»; лабораторный встряхиватель, центрифуга, весы; мерная стеклянная посуда общего назначения. Патроны для ТФЭ «Диапак С16» (Тип-1, разъемная капсула) - 1 мл.; шприц медицинский с разъемом типа Люер, объемом 10 куб. см. Все используемые растворители и реактивы градации «х.ч.». Образец технического препарата «Ланс 240 с.е.» - гербицид системного действия, водный раствор с действующим веществом аминопиралид (240 г/л).
Отбор образцов, транспортировка, хранение образцов осуществляли согласно инструкции [3].
Суть метода: Изолирование аминопиралида из биологических образцов подкисленным соляной кислотой ацетонитрилом с очисткой экстрактов методом ТФЭ. Последующая идентификация методами ТСХ и спекторо-фотометрией в УФ области.
Экстракция аминопиралида. По 30 гр. измельченных тканей органов раздельно помещали в круглодонные колбы, заливали 150 мл подкисленного концентрированной соляной кислотой до рН 1,0 ацетонитрила и помещали на механический встряхиватель на 30 мин. Объекты центрифугировали, фильтровали через бумажные фильтры и экстрагировали по 2 мин. н-гексаном 2 раза по 60 мл. Ацетонитрильные экстракты отделяли (нижний слой), фильтровали через слой безводного сульфата натрия и
выпаривали в фарфоровых чашках под током теплого воздуха до сухого остатка. К сухим остаткам добавляли по 2 мл ацетонитрила, обмывая стенки фарфоровых чашек, затем по 8 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивали (водно-ацетонитрильный экстракт).
Очистка на патроне «Диапак С16». Кондиционирование сорбента осуществляли путем последовательного пропускания через картридж 5 мл смеси ацетонитрил-во-да (1:1), затем 10 мл дистиллированной воды. На патроны вносили по 10 мл водно-ацетонитрильных экстрактов и элюировали со скоростью 1-3 мл/мин. Очищенные экстракты (элюаты) собирали в отдельные пробирки, выпаривали в токе теплого воздуха до сухого остатка. Сухие остатки растворяли в 15 мл ацетона каждый, переносили в мерные колбы и доводили объемы до 25 мл ацетоном (ацетоновые растворы из экстрактов).
Идентификация аминопиралида. Хроматография в тонком слое сорбента. Ацетоновые растворы из экстрактов концентрировали путем упаривания аликвот и проводили исследования методом ТСХ. Образец сравнения готовили из технического препарата «Ланс 240» (200 мкл препарата выпаривали, сухой остаток растворяли в 10 мл ацетона). Хроматографирование проводили в системах (насыщение 30 мин.): 96%этанол-25% аммиак (25:1), ориентировочное значение = 0,68 и хлороформ-96% этанол (9:1), ориентировочное значение = 0,76. Детектирование: в УФ-свете (254 нм) - темно-синее свечение (предел детектирования - 4,8 мкг в пятне), реактив Драгендорфа [4] - оранжевый цвет (предел детектирования - 7,2 мкг в пятне), концентрированная серная кислота - желтый цвет, переходящий в желто-зеленый цвет (предел детектирования - 24 мкг в пятне).
Спектрофотомерия в ультрафиолетовой области. Ацетоновые растворы из экстрактов упаривали досуха, остатки растворяли в 10 мл 0,1 н. раствора натрия гидрок-сида каждый. Контрольный образец готовили из технического препарата «Ланс 240»: 50 мкл препарата выпаривали, сухой остаток растворяли в 100 мл 0,1 н. раствора натрия гидроксида. Полученные растворы исследовали на приборе «8ресоЫ 205» в кюветах с толщиной слоя 1,000см. Спектральный диапазон 200-320 нм. Шаг сканирования 1 нм, скорость сканирования - 1 нм/с. В качестве раствора сравнения использовали 0,1 н. раствор натрия гидрокси-да. На спектрограммах наблюдали максимумы абсорбции: 220±3нм и 266±3нм. Предел детектирования - 0,12 мкг/мл.
Вывод: Предложен метод изолирования аминопиралида из тканей органов. Рассмотрены варианты идентификации аминопиралида методами тонкослойной хроматографии и спектрофотометрии.
Литература:
1. National Center for Biotechnology Information. PubChem Substance Databa.se; SID=213012, https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ compound/213012#section=Top (accessedMar. 15, 2016)
2. «МУК 4.1.2919-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств аминопиралида в зеленой массе, зерне и масле кукурузы, семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания».
3. Приказ министра здравоохранения Республики Казахстан от 20 мая 2010 года № 368 Об утверждении Инструкции по организа-
ции и производству судебно-медицинской экспертизы.
4. Государственная Фармакопея СССР. 10-е изд., М., Медицина, 1968.
