CC BY
40
Сведения об авторах статьи
Нидюлин Виктор Алексеевич, к.м.н., доцент, зав.кафедрой «Физического воспитания и биологических дисциплин» КГУ. Эрдниева Баира Викторовна - врач-онколог Адрес: 358011 Элиста, Калмыкия 5 мик-он, д. 6, кв.103 Тел. ел.: 3-90-40 Тел. дом.: 3-59-39 Моб.тел.: 8-917-686-86-35.
ЛИТЕРАТУРА
1. International Agency for Research on Cancer.Cancer Incidens in five continents. JARC 1992; Publ. N.120.
2. Чиссов В.И., Старинский В.В., Петрова Г.В. Злокачественные новообразования в России 2005 году. (Заболеваемость и смертность). - М., 2007.
3. Besley R.P. Hepatitis В virus, major etiology of hepatocellular carcinoma. Cane. 1988; 61: 19421956.
4. International Agency for Reserch on Cancer. Hepatitis viruses. IARC Monogr. Eval. Carcinog. Risk. Chem. Hum. 1994.
5. Choo Q.L., Kuo G., Weingen A.J. et.al. Isolation of a cDNA clone derived for a blood-borne nonA, non-B viral hepatitis genome. Sci. 1989; 244: 359-362.
6. Dienstag J.L. Non-A, non-B hepatitis: recognition, epidemiology and clinical features. Gastroenterol. 1983; 85: 439-462.
7. Balsano C, Tagger A., Levrero M. et.al. Prevalens of anti-HCV antibodies in patient with hepato-cellul carcinom. Int. Symp. Vir. Hepat. Liv Dis. 1990; 636.
8. Verbaan H., Widell H., Lindgren S. et.al. Hepatitis С in chronic liver disease: an epidemiologic study based on 566 consecutive cases undergoing liver biopsy during 10 years period. J. Int. Med. 1992; 232:38-42.
9. Miyamura Т., Saito I., et.al. Role of hepatit. С virus in hepatocellular carcinoma. In "Viral hepatitis and liver disease". Eds. Hollinger F.B. et.al., 1991; 559-562.
10.0da F. Non-A, non-B hepatitis virus as the cause of hepatocellular carcinoma. Proc. II Intern. Symp. On vir. Hepatitis, Taiwan. 1988; 38.
11.Гарин A.M. Факты, достижения и неудачи современ. онкол. - Алма-Ата, 1980. - С 11.
12.MacSween R.N. A clinicopathological review of 100 cases of primary malignant tumours of the liver. J. Clin. Path. 1974; 27: 669-682.
13.Bruix J., Sherman M., Liovet J.M. et.al. Clinical management of hepatocellular carcinoma. Conclus. of the Barselona-2000 EASI Confer. J. Hep. 2001, 35:421.
14.Shikata F. Primary liver carcinoma and liver cirrosis. In "Hepatocellular carcinoma". Eds. Oku-da K., Peters R., 1976; 51-71.
15.Gamma С, Giunta M, et.al. Interferon and prevention of hepatocellular carcinoma in viral cirrhosis: An evidence-based approach. J. Hepat. 2001, 34:513- 602.
16.Теврюкова Н.Е., Райхман Я.Г. Эпидемиология первичного рака печени в Калмыкии: Тезисы докладов IV всероссийского съезда онкологов. - Ростов на Дону, 1995.
УДК 616-053.2-07:575
© Н.Ф. Хисамова, Л.Р. Кальметьева, З.Р. Хаматдинова, 2009
Н.Ф. Хисамова, Л.Р. Кальметьева, З.Р. Хаматдинова ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ДНК-ЦИТОМЕТРИИ В ПЕДИАТРИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
ГУЗ Республиканская детская клиническая больница, г. Уфа
Статья посвящена обсуждению результатов исследования показателей системы иммунитета и ДНК-цитометрии клеток периферической крови у детей с хроническим гломерулонефритом, получающих комплексную иммуносупрессивную терапию. Анализ полученных данных позволил выявить особенности иммунологической реактивности, плоидности клеток и кинетики клеточного цикла, которые позволяют оценить активность процесса и эффективность иммуносупрессивной терапии.
Ключевые слова: ДНК-цитометрия периферической крови, хронический гломерулонефрит, дети, иммуносупрессивная терапия.
N.F. Khisamova, L.R. Kalmetieva, Z.R. Khamatdinova FIELDS OF USING OF DNA-CYTOMETRY IN PEDIATRICAL PRACTICE
This article is related to the discussion of the results of the studies of the index of immunal system and DNA-cytometry of blood cells of the children with chronical glomerulonephritis, which are under immunosuppression. Complex analysis of the data defind the peculiarities of immunologic reactivity, ploidy of cells and cellular cycle kinetics, which allow to give characteristics of the activity of process and efficacy of immunocuppressiv therapy.
Key words: DNA-cytometry of blood cells, chronical glomerulonephritis, children, immunocuppressiv therapy.
Хронический гломерулонефрит (ХГ) является важнейшей проблемой детской нефрологии, несмотря на небольшой удельный вес в общей структуре нефропатий [Н.А. Коровина и др., 1990; Л.Д. Панова и др., 2005]. Среди приобретённых заболеваний почек у детей ХГ является вторым по распространённости заболеванием после инфекции мочевыводящих путей, одной из основных причин развития хронической почечной недостаточности (ХПН), инвалидизации в детском, юношеском и молодом возрасте [В.И. Наумова, 1997; Ф.И. Руснак и др., 1997]. За последние 10-15 лет увеличилась частота латентных и хронических форм гломерулонефрита, протекающих с более ранним нарушением почечных функций, в том числе за счёт присоединения тубулоинтерстициального компонента [Сергеева К.М., 1999; Картамышева Н.Н. и др., 2005; Мотлох Л.Н. и др., 2006]. Известно, что при лечении больных ХГ патогенетически обоснованной является комплексная иммуно-супрессивная терапия. Однако, несмотря на применение современных фармакологических препаратов, оценка эффективности проводимой терапии и прогнозирование результатов лечения представляют большие трудности.
В связи с этим перспективным является использование новейших технологий для изучения процессов, протекающих в иммуноком-петентных клетках. Физиологическое состояние клеток и способность к осуществлению присущих им функций характеризуется, в частности, уровнем ДНК (плоидностью) и показателями кинетики клеточного цикла. Для объективной оценки этих параметров широкое распространение получает проточная ци-тофлуориметрия, разделом которой является ДНК-цитометрия [Saha I. et al., 2000]. По прогнозам специалистов [Шмаров Д.А., Козинец Г.И., 2004], в самом ближайшем будущем можно ожидать внедрения проточной ДНК-цитометрии в практику работы клиникодиагностических лабораторий.
Цель исследования
Определить диагностическое и прогностическое значение ДНК-цитометрии периферической крови в комплексной оценке им-
мунного статуса и функционального состояния клеток у детей с ХГ.
Материал и методы
Работа выполнена на базе отделения клинической иммунологии Республиканской детской клинической больницы (г. Уфа).
В соответствии с поставленной целью исследования проводились в несколько этапов. На первом этапе осуществлялось клинико-лабораторное обследование контрольной группы (n=30).
Следующим этапом работы было комплексное клинико-лабораторное обследование детей с хроническим гломерулонефритом (n=20) с начальными признаками нарушений детоксицирующей и выделительной функций почек (нефротическая и смешанная формы). Обследование пациентов проводили на фоне базисной терапии ХГН, которая включала прием гормонов (преднизолон) и цитостати-ков (сандиммун, азатиаприн), механизм им-муносупрессивного действия которых связан с влиянием на пролиферативную фазу иммунного ответа [Цыгин А.Н., Сергеева Т.В., 1998].
Комплексное обследование больных включало сбор анамнеза, анализ клинических данных, проведение лабораторных исследований. Иммунологическое обследование проводилось с использованием комплекса стандартизированных тестов, включающих оценку:
- клеточного звена иммунитета на проточном цитофлуориметре FACSCalibur c использованием моноклональных антител фирмы Becton Dickinson и определением относительного содержания основных популяций и субпопуляций иммунокомпетентных клеток (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+56+, CD19+, CD25+, CD95+, HLA-DR);
- плоидности и кинетики клеточного цикла клеток периферической крови методом проточной ДНК - цитометрии, основанным на связывании ДНК с флуоресцентным зондом -пропидиума йодидом, который позволяет определить долю клеток в различных фазах митотического цикла (G0/G1, S и G2+M). Образцы (не менее 20 000 клеток) анализировали на проточном цитофлуориметре, оборудованном
модулем дискриминации дуплетов в программе ModFit;
- концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов А, М, О А, ^ М, ^ О), определяемых методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини;
- уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) осаждением полиэтиленг-ликолем [Имельбаева Э.А. и др., 2006].
Статистическую обработку результатов исследования проводили в операционной среде «Windows-XP» с использованием современных пакетов прикладных программ «8ТАТ18Т1СА 6.0». Для показателей, не имеющих нормального распределения, вычислялись медиана и интеркартильный размах (25 - 75 перцентилей). Достоверность различий оценивалась по критерию Манна-Уитни [Гланц С., 1999].
Результаты и обсуждение
Одним из условий адекватной характеристики состояния иммунной системы является чёткое представление о норме [Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин, 2001].
На начальном этапе исследования проводилась оценка ДНК-гистограмм крови 30 практически здоровых детей (контрольная группа), отвечавших следующим требованиям:
- отсутствие жалоб на состояние здоровья в момент осмотра;
- перенесших вирусные заболевания в течение года не более 2 раз;
- не имевших признаков аллергии и другой хронической патологии.
ДНК-цитометрия периферической крови в контрольной группе характеризовалась следующими особенностями: показатели клеточного цикла отличались высокой стабильностью и варьировали в сравнительно узких пределах. В 100% случаев выявлялся диплоидный тип гистограмм, причём основная масса клеток 99,89% находилась в 00/1-фазе клеточного цикла, доля клеток в стадии синтеза ДНК составляла 0,1%, в фазе 02-М - 0,02%. Коэффициент вариации составил 2,57%.
Согласно поставленной цели проведено обследование 20 детей с нефротической и смешанной формами ХГ. Пациенты посту пили в клинику в стадии обострения основного заболевания. Обследование больных детей проводилось на фоне комплексной иммуносу-прессивной терапии.
Для пациентов с нефротической формой ХГ были характерны протеинурия до 5 %о и более, гипопротеинемия до 40 г/л с преимущественным снижением альбуминовой фрак-
ции, гиперхолестеринемия до 8 ммоль/л и более, гиперфибриногенемия до 6 г/л и более.
При смешанной форме ХГ у пациентов отмечались протеинурия до 5 %о и более, гематурия, непостоянная лимфоцитурия, гипо-протеинемия, гиперхолестеринемия, гипер-фибриногенемия, ускорение СОЭ.
Анализ гуморального звена (табл. 1) выявил достоверное снижение концентрации ^О и тенденцию к повышению уровня ^М.
При иммунофенотипировании лимфоцитов установлено увеличение количества общих Т-лимфоцитов (СБ3 - клеток) и высокий уровень маркёра ранней активации (СБ25+). Обращает на себя внимание подавление активности участников противовирусного иммунитета - снижение количества ЕКК (СБ16+56+ - клеток).
Таблица 1.
Характеристика иммунологических показателей детей
с х роническим гломерулонефритом
Показатели Контрольная группа (п=30), Ме дети с ХГН (п=20), Ме
^ А, г/л 0,86 (0,75-1,09) 1,13 (0,86-1,55)
^ М, г/л 0,91 (0,70-1,44) 1,34 (0,72-3,26)
1^ О, г/л 10,00 (9,00-12,50) 7,00 (4,00-9,60)*
ЦИК, у. е. 31,00 (25,00-35,00) 37,50 (26,00-41,00)
СБ3+, % 62,00 (58,00-67,00) 70,00 (63,00-78,00)*
СБ4+, % 38,00 (33,00-39,00) 36,00 (31,00-41,00)
СБ8+,% 37,00 (31,00-41,00) 40,00 (35,00-46,00)
СБ19+, % 15,00 (12,00-17,00) 18,00 (7,00-22,00)
СБ16+56+, % 22,00 (18,00-28,00) 16,00 (7,00-18,00)**
НЬА-БЯ+ , % 9,00 (7,00-12,00) 8,00 (6,00-19,00)
СБ25+, % 17,00 (15,00-20,00) 25,00 (18,00-36,00)*
СБ95+, % 32,50 (13,00-38,00) 27,00 (17,50-41,50)
СБ4+/СБ8+ 1,00 (0,85-1,20) 0,87 (0,77-1,08)
Примечание: Различие с контролем статистически значимо:
* р<0,01; ** р<0,001.
В табл. 2 отражены показатели плоид-ности и распределения клеток периферической крови по фазам клеточного цикла в группе детей с ХГН. В 100% случаев клетки периферической крови, как и в контрольной группе, имели диплоидный набор хромосом. Достоверные различия касались лишь распределения клеток по фазам клеточного цикла.
В группе детей с ХГН доля клеток в О2-фазе составила 0,09% , в 8- фазе 0,15%, (в контрольной группе соответственно 0,02% и
0,10%). Коэффициент вариации пика 01/0 в опытной группе не превышал 3,0%.
Таблица 2.
Распределение клеток периферической крови по плоидности и фазам клеточного цикла у детей с ХГН и в контрольной группе
Плоидность и кинетика клет. цикла клеточногоци цикла Контрольная группа (п= 30), Ме Дети с ХГН (п= 20), Ме
Диплоидные, % 100 100
01, % 99,89 (99,83-99,90) 99,77 (99,32-99,83) **
02, % 0,02 (0,00-0,04) 0,09 (0,04-0,16) **
8, % 0,10 (0,09-0,11) 0,15 (0,09-0,37) *
С¥ 2,57 (2,29-2,83) 3,06 (2,38-3,84) **
Примечание: Различие с контролем статистически значимо:
* р<0,05, ** р<0,01.
Существует множество факторов, влияющих на плоидность и жизненный цикл клетки. Сведения об изменениях, происходящих в различных органах и системах, малочисленны и разрозненны. В связи с этим проточная ДНК-цитометрия становится ценным диагностическим методом и все чаще применяется при мониторинге заболеваний.
В нашей работе была сделана попытка изучения функционального состояния клеток периферической крови методом проточной цитофлуориметрии при таком распространённом и весьма далёком от решения проблемы в педиатрии, как хронический гломерулонефрит.
Анализ результатов проведенных исследований позволил выявить особенности плоидности клеток и кинетики клеточного цикла в группе детей с ХГН. Как известно, одним из маркёров пролиферативной активности может служить уровень клеток в фазе синтеза ДНК. По данным ДНК-цитометрии клетки периферической крови имели дипло-
идный набор хромосом, кинетика клеточного цикла характеризовалась достоверным увеличением клеток в фазах пролиферации.
Перечисленные особенности иммунологической реактивности и ДНК-цитометрии клеток периферической крови отражают реакцию организма на базисную терапию. Комплексный подход, объединяющий клиническую картину заболевания, иммунологические показатели, кинетику клеточного цикла, позволяет всесторонне оценить активность процесса и эффективность иммуносупрессив-ной терапии.
На основании анализа результатов проведенных исследований, включающих динамическое наблюдение в различные стадии заболевания, мы считаем возможным рекомендовать мониторинг показателей кинетики клеточного цикла в качестве маркера активности процесса и отчасти эффективности иммуно-супрессивной терапии при хронических гломерулонефритах.
Сведения об авторах статьи
Хисамова Назиля Фагилевна, ГУЗ Республиканская детская клиническая больница МЗ РБ, иммунологическая лаборатория с отделением клинической иммунологии
Адрес: Башкортостан, 450106, Уфа, ул. Ст. Кувыкина 98, Тел. раб.: (347) 2557344, Факс: (347) 2548884, e-mail: naz6960@jandex.ru
ЛИТЕРАТУРА
1. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. - М., 1999. - 495 с.
2. Картамышева, Н.Н. Тубулоинтерстициальные изменения при хронических заболеваниях почек у детей / Н.Н. Картамышева, О.В. Чумакова, А.Г. Кучеренко. - М.: Медицина, 2005. - 93 с.
3. Коровина, Н.А. Гломерулонефрит у детей: [монография] / Н.А. Коровина, Л.П. Гаврюшова, М. Шашинка. - М.: Медицина, 1990. - 255 с.
4. Методические указания к занятиям по иммунологии и серологии для специалистов по клинической лабораторной диагностике / сост. Э.А. Имельбаева, Р.М. Хайруллина, Ю.А. Медведев [и др.]. - Уфа, 2004. - 87 с
5. Наумова, В.И. Разработка проблем нефрологии в институте педиатрии РАМН / В.И. Наумова // Педиатрия. - 1997. - № 2. - С. 43-45.
6. Распространенность инвалидности вследствие заболеваний органов мочевой системы у детей Республики Башкортостан / Л. Д. Панова, Л.И. Вахитова, Д.Ф. Зиятдинова [и др.]. // Нефрология и диализ. - 2005. - Т. 7, № 1. - с.92-93.
7. Руснак, Ф.И. Влияние кальцитриола на иммунокомпетентные клетки у детей с хроническим гломерулонефритом в функционально-компенсированной стадии / Ф.И. Руснак // Педиатрия. -1997. - № 3. - С. 37-39.
8. Сергеева, К.М. Клинико-лабораторные критерии оценки характера течения гломерулонеф-рита у детей / К.М. Сергеева // Нефрология. - 1999. - Т. 3, № 4. - С. 66-76.
9. Случай диффузного нефробластоматоза в клинической практике / Л.Н. Мотлох, С.О. Фала-леева, Т.Н. Меньшикова [и др.]. // Педиатрия. - 2006. - № 1. - С. 106-107.
10. Хаитов, Р.М. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. - 2001. - № 4. - С. 4-6.
11. Цыгин, А.Н. Лечение хронического гломерулонефрита у детей / А.Н. Цыгин, Т.В. Сергеева // Российский педиатрический журнал. - 1998. - № 2. - С. 55-57.
12. Шмаров, Д.А. Лабораторно-клиническое значение проточно-цитометрического анализа крови / Д.А. Шмаров, Г.И. Козинец. - М.: МИА, 2004. - 128 с.
13. Ormerod M.G. Consensus report of the task force on standardization of DNA flow cytometry in clinical pathology / M.G. Ormerod, B.Tribukait, W.Giarretti. http://archive.uwcm.ac.uk/uwcm/hg/hoy/dna.html., 2001.
14. Role of DNA flow cytometry and image cytometry on effusion fluid / I. Saha, P. Dey, H. Vhora, R. Nijhawan // Diagn. Cytopathol. - 2000. - Vol. 22, N 2. - P. 81-85.
УДК 613:615.327(571.54)
© А.П. Шкляр, О.А. Макаров, А.Н. Калягин, 2009
А.П. Шкляр, О.А. Макаров, А.Н. Калягин К ВОПРОСУ ОБ ИЗУЧЕНИИ ЛЕЧЕБНЫХ ФАКТОРОВ КУРОРТА «НИЛОВА ПУСТЫНЬ»
Иркутский государственный медицинский университет
В статье представлена гигиеническая оценка бальнеологических факторов, химического состава термальных вод, а также радиационного фактора водолечебницы «Нилова Пустынь» (Республика Бурятия).
Ключевые слова: водолечебница «Нилова Пустынь», химический состав воды, радиационный фактор, водные процедуры, бальнеолечение.
A.P. Shklyar, O.A. Makarov, A.N. Kalyagin MEDICAL FACTORS OF “NILOVA PUSTYN” RESORT
The hygienic evaluation of the balneological factors, chemical composition of the thermal waters, and also the radiation factor of “Nilova Pustyn” resort are represented in the article.
Key words: “Nilova Pustyn” resort, chemical composition of the waters, radiation factor, waters procedurs, balneotherapy.
В последнее время широко обсуждается тема эффективности курортного лечения в привычном климате, что определяется степенью физиологической адаптации к местным природным условиям. Известно немало случаев, когда санаторно-курортное лечение в контрастных климатических зонах не давало положительных результатов, а в ряде случаев оказывало отрицательное действие на организм. В связи с этим возрастает значение местных курортов [1, 2, 7].
Водолечебница «Нилова Пустынь» расположена в Тункинском районе Республики Бурятия. На ее территории добывается термальная минеральная вода из эксплуатационной водозаборной скважины №1. Скважина была пробурена в 1956 г. и имеет глубину 93 м. Эксплуатационный дебит скважины составляет 650 м3/сут. Скважиной вскрыты породы фундамента Тункинской впадины, представленные докембирийскими амфиболовыми гнейсами и кристаллическими сланцами. На месторождении организована санитарно-
водоохранная зона (в радиусе 100 м), на территории зоны расположен ванный корпус.
Целью настоящего исследования являлась гигиеническая оценка лечебнопрофилактических факторов курорта «Нилова Пустынь» и составление бальнеологического заключения по возможности наружного ис-
пользования его термальных минеральных вод для лечения различных патологических состоянии.
Материалы и методы Химический анализ проб воды выполнен межвузовской региональной лабораторией экологических исследований при Иркутском государственном университете (Аттестат аккредитации Госстандарта России от 21.06.2003, зарегистрирован в Государственном реестре № РОСС Ки 0001.510099) в соответствии с существующими методическими рекомендациями.
Измерение объемной активности 222Ип в воде проведено на базе радиологической лаборатории Иркутского областного центра санитарно-эпидемиологического надзора. Исследования выполнены с помощью радиометра радона РРА-01, зав. №22295, свидетельство о метрологической аттестации №48. Результаты и обсуждение Климатические условия водолечебницы «Ниловой Пустыни» во многом сходны с климатом широко известного курорта «Ар-шан», которые характеризуются резкой кон-тинентальностью с относительно суровой зимой и умеренно теплым летом. Причем замкнутость котловины защищает ее от северных ветров, создает более благоприятные условия для отдыха и лечения, поэтому зима здесь
